專利名稱：一種禽蛋或其制品中膽固醇含量的檢測方法
一種禽蛋或其制品中膽固醇含量的檢測方法技術領域
本發(fā)明屬檢測技術的技術領域，涉及一種禽蛋或其制品中膽固醇含量的檢測方法，特別涉及一種禽蛋或其制品中膽固醇含量檢測的前處理方法。
背景技術：
膽固醇(cholesterol)又稱膽甾醇。一種環(huán)戊烷多氫菲的衍生物。膽固醇作為一種營養(yǎng)素具有重要的生理功能，是構成細胞膜的重要成分，對維持生物膜的正常結構和功能有重要作用，同時是膽酸、7-脫氫膽固醇和維生素D3、性激素等重要生理活性物質的前體。但是如果長期大量攝入，可能加大患動脈粥樣硬化、高血壓和冠心病等心腦血管疾病的風險。
禽蛋營養(yǎng)全面，風味獨特，但其蛋黃中膽固醇含量較高。近年來，市面上出現(xiàn)了多種品牌的低膽固醇禽蛋或其制品。目前，在檢測禽蛋或其制品中膽固醇含量的過程中，存在樣品前處理步驟繁瑣、樣品處理時間長、溶劑用量大等缺點。
微波能具有激活化學物質、快速加熱、加速或選擇性進行化學反應等特性。常壓微波輔助回流皂化萃取實現(xiàn)了皂化與萃取的同時進行，具有操作簡便、效率高、用時短、溶劑用量少、適用廣泛等特點，適合快速檢測與大批量樣品的測定。發(fā)明內容
本發(fā)明要解決的技術問題是，提供一種禽蛋或其制品中膽固醇含量的檢測方法， 特別是提供了一種禽蛋或其制品中膽固醇含量檢測的前處理方法。本檢測方法高效省時、 操作簡便、節(jié)省溶劑、節(jié)能環(huán)保，并經(jīng)方法學驗證，證明精密度和重現(xiàn)性良好、加標回收率較尚ο
為達到上述目的，本發(fā)明的技術方案如下
—種禽蛋或其制品中膽固醇含量的檢測方法，包括如下步驟
1)將禽蛋的可食部分或禽蛋制品充分混勻后取0. 3g 5g，加入20ml 50ml無水乙醇、IOml質量分數(shù)為30% 70% KOH溶液、40ml 80ml石油醚得到樣液；
2)在微波功率為300w 900w、溫度為40°C 90°C、皂化萃取時間為^iiin Snin 的條件下，將樣液微波輔助回流皂化萃取，皂化萃取結束后，用3ml無水乙醇沖洗回流冷凝管，皂化萃取液用流水冷卻；
3)用去離子水將皂化萃取液反復水洗至中性，棄去水相；
4)收集有機相于真空干燥箱中，在真空度為0. 07MPa 0. 085MPa，溫度為40°C 60°C條件下濃縮至近干(10μ 1 200μ 1)，用5ml無水乙醇定容，并經(jīng)0. 45 μ m過濾膜制備供試樣品；
5)供試樣品采用高效液相色譜法檢測；采用紫外檢測器(檢測波長為203nm)，色譜柱為Slim-pack VP-ODS C18柱，柱溫38°C，流動相為體積比98 2的甲醇和水構成的二元體系，流速0. 8ml/min，進樣量10 μ 1 ；測定其峰面積y ；3
6)根據(jù)回歸方程y = 6421071X-239274. 6，計算供試樣品中以mg/ml為單位的膽固醇濃度χ。
本發(fā)明的一種禽蛋或其制品中膽固醇含量的檢測方法，所述的石油醚，沸程為 60 "C。
所述的微波輔助回流皂化萃取，是在常壓下進行的。
膽固醇標準曲線的制備分別吸取ang/ml膽固醇標準儲備液:3ml、細1、5ml、6ml、 7ml于IOml容量瓶中用無水乙醇定容，配制成0. 6mg/ml、0. 8mg/ml, 1. Omg/ml, 1. 2mg/ml, 1. 4mg/ml標準系列工作液。按照確定的色譜條件分別進樣，測定其峰面積，以濃度為橫坐標、峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。得到線性回歸方程為y = 6421071X-239274. 6，R2 = 0.9996。
方法學驗證對精密度的驗證，取已知濃度的膽固醇標準溶液，按照確定的色譜條件測定其峰面積，重復測定5次，分析計算RSD值為0. 4671% ；對重現(xiàn)性的驗證，精確稱取樣品5份，按上述前處理方法制備樣液，按照確定的色譜條件進行進樣分析，測定其峰面積， 分析計算RSD值為1.395% ；對加標回收率實驗的驗證，取已知膽固醇含量的樣品5份，分別準確加入一定量膽固醇標準溶液，按上述處理方法制備樣液，按照確定的色譜條件進行進樣分析，測定其峰面積，計算加標回收率，回收率為93. 35% 103. 26%，平均回收率為 96. 67%。
微波能具有激活化學物質、快速加熱、加速或選擇性進行化學反應等特性。本發(fā)明采用常壓微波輔助回流皂化萃取法處理樣品，實現(xiàn)了樣品皂化的同時萃取目標物。具有高效省時、操作簡便、節(jié)省溶劑、節(jié)能環(huán)保等特點。本發(fā)明適用于各類禽蛋或其制品中膽固醇含量的快速檢測與大批量樣品的測定。


圖1為膽固醇標準儲備液的標準曲線；
圖2為膽固醇lmg/ml標準儲備液的色譜圖。
具體實施方式
實施例1
將新鮮雞蛋蛋黃充分混勻后，精確稱取0. 5g樣品于三頸圓底燒瓶中，向燒瓶中加入30ml無水乙醇、IOml質量分數(shù)為30% KOH溶液、50ml石油醚(沸程60°C )；
將三頸圓底燒瓶于微波功率為800w，溫度為70°C、常壓的條件下，微波輔助回流皂化萃取anin，皂化萃取結束后，用3ml無水乙醇沖洗回流冷凝管，皂化萃取液用流水冷卻，得到皂化萃取液；
用去離子水將上步驟所得皂化萃取液反復水洗至中性，棄去水相；
收集有機相于真空干燥箱中，在真空度為0. 085MPa，溫度為50°C條件下濃縮至近干(10 μ 1 200 μ 1)，用5ml無水乙醇定容，并經(jīng)0. 45 μ m過濾膜制備供試樣品；
經(jīng)過上述前處理方法處理樣品后，供試樣品采用高效液相色譜法檢測。采用紫外檢測器(檢測波長為203nm)，色譜柱為Siim-pack VP-ODS C18柱，柱溫38°C，流動相為甲醇/水(98 2)的二元體系，流速0.8ml/min，進樣量10μ 1，測其峰面積，峰面積y為6459149，然后根據(jù)回歸方程y = 6421071x_239274. 6，計算供試樣品中膽固醇的濃度χ為 1. 04;3mg/ml，最后計算得到雞蛋中膽固醇的含量為10. 430mg/g。
實施例2
將新鮮雞蛋蛋黃充分混勻后，精確稱取0. 5g樣品于三頸圓底燒瓶中，向燒瓶中加入30ml無水乙醇、IOml質量分數(shù)為50% KOH溶液、60ml石油醚(沸程60°C )；
將三頸圓底燒瓶于微波功率為500w，溫度為50°C的條件下，微波輔助回流皂化萃取5min，微波輔助回流皂化萃取結束后，用3ml無水乙醇沖洗回流冷凝管，皂化萃取液用流水冷卻，得到皂化萃取液；
用去離子水將上步驟所得皂化萃取液反復水洗至中性，棄去水相；
收集有機相于真空干燥箱中，在真空度為0. 075MPa，溫度為60°C條件下濃縮至近干(10 μ 1 200 μ 1)，用5ml無水乙醇定容，并經(jīng)0. 45 μ m過濾膜制備供試樣品；
經(jīng)過上述前處理方法處理樣品后，供試樣品采用高效液相色譜法檢測。采用紫外檢測器(檢測波長為203nm)，色譜柱為Siim-pack VP-ODS C18柱，柱溫38 °C，流動相為甲醇/水(98 2)的二元體系，流速0.8ml/min，進樣量10μ 1，測其峰面積，峰面積y為 8005060，然后根據(jù)回歸方程y = 6421071x_239274. 6，計算供試樣品中膽固醇的濃度χ為 1. ^^ig/ml，最后計算得到雞蛋中膽固醇的含量為12. 840mg/g。
實施例3
將新鮮雞蛋蛋黃充分混勻后，精確稱取0. 5g樣品于三頸圓底燒瓶中，向燒瓶中加入20ml無水乙醇、IOml質量分數(shù)為60% KOH溶液、40ml石油醚(沸程60°C )；
將三頸圓底燒瓶于微波功率為300w，溫度為60°C、常壓的條件下，微波輔助回流皂化萃取7min，微波輔助回流皂化萃取結束后，用3ml無水乙醇沖洗回流冷凝管，皂化萃取液用流水冷卻，得到皂化萃取液；
用去離子水將上步驟所得皂化萃取液反復水洗至中性，棄去水相；
收集有機相于真空干燥箱中，在真空度為0. 085MPa，溫度為60°C條件下濃縮至近干(10 μ 1 200 μ 1)，用5ml無水乙醇定容，并經(jīng)0. 45 μ m過濾膜制備供試樣品；
經(jīng)過上述前處理方法處理樣品后，供試樣品采用高效液相色譜法檢測。采用紫外檢測器(檢測波長為203nm)，色譜柱為Siim-pack VP-ODS C18柱，柱溫38 °C，流動相為甲醇/水(98 2)的二元體系，流速0.8ml/min，進樣量10μ 1，測其峰面積，峰面積y為 8392057，然后根據(jù)回歸方程y = 6421071x_239274. 6，計算供試樣品中膽固醇的濃度χ為 1. 3Mmg/ml，最后計算得到雞蛋中膽固醇的含量13. 442mg/go
實施例4
將新鮮鴨蛋蛋黃充分混勻后，精確稱取0. 5g樣品于三頸圓底燒瓶中，向燒瓶中加入20ml無水乙醇、IOml質量分數(shù)為60% KOH溶液、70ml石油醚(沸程60°C )；
將三頸圓底燒瓶于微波功率為600w，溫度為70°C的條件下，微波輔助回流皂化萃取5min，微波輔助回流皂化萃取結束后，用3ml無水乙醇沖洗回流冷凝管，皂化萃取液用流水冷卻，得到皂化萃取液；
用去離子水將上步驟所得皂化萃取液反復水洗至中性，棄去水相；
收集有機相于真空干燥箱中，在真空度為O.OSMPa，溫度為60°C條件下濃縮至 10 μ 1 200 μ 1，用5ml無水乙醇定容，并經(jīng)0. 45 μ m過濾膜制備供試樣品；
經(jīng)過上述前處理方法處理樣品后，供試樣品采用高效液相色譜法檢測。采用紫外檢測器(檢測波長為203nm)，色譜柱為Siim-pack VP-ODS C18柱，柱溫38 °C，流動相為甲醇/水(98 2)的二元體系，流速0.8ml/min，進樣量10μ 1，測其峰面積，峰面積y為 6971588，然后根據(jù)回歸方程y = 6421071x_239274. 6，計算供試樣品中膽固醇的濃度χ為 1. 123mg/ml，最后計算得到雞蛋中膽固醇的含量11. 23mg/g。
此實施例的方法對其他禽蛋或禽蛋蛋黃同樣適用。
實施例5
直接精確稱取鴨蛋制品-鴨蛋黃粉0. 3g于三頸圓底燒瓶中，向燒瓶中加入30ml 無水乙醇，在磁力攪拌器下攪拌均勻，然后加入IOml質量分數(shù)為60% KOH溶液、80ml石油醚(沸程60°C)；
將三頸圓底燒瓶于微波功率為800w，溫度為60°C、常壓的條件下，微波輔助回流皂化萃取5min，微波輔助回流皂化萃取結束后，用3ml無水乙醇沖洗回流冷凝管，皂化萃取液用流水冷卻，得到皂化萃取液；
用去離子水將上步驟所得皂化萃取液反復水洗至中性，棄去水相；
收集有機相于真空干燥箱中，在真空度為0.085MPa，溫度為60°C條件下濃縮至 10 μ 1 200 μ 1，用5ml無水乙醇定容，并經(jīng)0. 45 μ m過濾膜制備供試樣品；
經(jīng)過上述前處理方法處理樣品后，供試樣品采用高效液相色譜法檢測。采用紫外檢測器(檢測波長為203nm)，色譜柱為Siim-pack VP-ODS C18柱，柱溫38 °C，流動相為甲醇/水(98 2)的二元體系，流速0.8ml/min，進樣量10μ 1，測其峰面積，峰面積y為 8391801，然后根據(jù)回歸方程y = 6421071x_239274. 6，計算供試樣品中膽固醇的濃度χ為 1. 3Mmg/ml，最后計算得到鴨蛋黃粉中膽固醇的含量22. 403mg/go
此實施例的方法對其他禽蛋粉同樣適用。
權利要求
1.一種禽蛋或其制品中膽固醇含量的檢測方法，包括如下步驟1)將禽蛋的可食部分或禽蛋制品充分混勻后取0.3g 5g，加入20ml 50ml無水乙醇、IOml質量分數(shù)為30% 70% KOH溶液、40ml 80ml石油醚得到樣液；2)在微波功率為300w 900w、溫度為40°C 90°C、皂化萃取時間為^iin 8min的條件下，將樣液微波輔助回流皂化萃取，皂化萃取結束后，用3ml無水乙醇沖洗回流冷凝管， 皂化萃取液用流水冷卻；3)用去離子水將皂化萃取液反復水洗至中性，棄去水相；4)收集有機相于真空干燥箱中，在真空度為0.07MPa 0. 085MPa，溫度為40°C 60°C 條件下濃縮至10 μ 1 200 μ 1，用5ml無水乙醇定容，并經(jīng)0. 45 μ m過濾膜制備供試樣品；5)供試樣品采用高效液相色譜法檢測；采用紫外檢測器，色譜柱為Siim-packVP-ODS C18柱，柱溫38°C，流動相為體積比98 2的甲醇和水構成的二元體系，流速0. 8ml/min,進樣量10 μ 1 ；測定其峰面積y;6)根據(jù)回歸方程y= 6421071X-239274.6，計算供試樣品中以mg/ml為單位的膽固醇濃度X。
2.根據(jù)權利要求1所述的禽蛋或其制品中膽固醇含量的檢測方法，其特征在于，所述的石油醚，沸程為60°C。
3.根據(jù)權利要求1或2所述的禽蛋或其制品中膽固醇含量的檢測方法，其特征在于，所述的微波輔助回流皂化萃取，是在常壓下進行的。
全文摘要
本發(fā)明的一種禽蛋或其制品中膽固醇含量的檢測方法屬于檢測技術的領域。采用常壓微波輔助回流皂化萃取-高效液相色譜法，操作如下1)將禽蛋可食部分或其制品充分混勻后，向其中加入無水乙醇、KOH溶液、石油醚；2)將樣液微波輔助回流皂化萃取，所得樣液用流水冷卻；3)用去離子水將皂化萃取液反復水洗至中性，棄去水相；4)將有機相在真空條件下濃縮至近干，用無水乙醇定容制備供試樣品；5)采用高效液相色譜法檢測。本發(fā)明的樣品前處理方法，實現(xiàn)了樣品皂化的同時對目標物的萃取，具有高效省時、操作簡便、節(jié)省溶劑等特點。本檢測方法精密度和重現(xiàn)性良好、加標回收率較高。
文檔編號G01N30/02GK102507791SQ20111036579
公開日2012年6月20日 申請日期2011年11月17日 優(yōu)先權日2011年11月17日
發(fā)明者劉靜波, 安曉寧, 宮新統(tǒng) 申請人:吉林大學