專利名稱：一種潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物及其制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥發(fā)明領(lǐng)域，具體涉及一種潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物及其制劑。
背景技術(shù)：
老年性皮膚瘙癢癥是皮膚科的常見(jiàn)病、多發(fā)病，在老年人群中比較常見(jiàn)，尤其冬季最為明顯，給老年人帶來(lái)極大的困擾，嚴(yán)重影響了老年人的身心健康，降低了老年人的生活質(zhì)量。西藥治療上述疾病療效一般，且停藥后容易復(fù)發(fā)，給患者的生理及心理造成嚴(yán)重影響。祖國(guó)醫(yī)學(xué)對(duì)本病的認(rèn)識(shí)，早在《諸病源候論·風(fēng)瘙癢候》既有“風(fēng)瘙癢者，是體虛受風(fēng)，風(fēng)入腠理，與氣血相搏，而俱往來(lái)在于皮膚之間。邪氣微，不能沖擊為痛，故但瘙癢也?！敝赋霰静∈且蚰昀象w虛，邪氣乘虛而入，游走在腠理之間所導(dǎo)致。所以，中醫(yī)認(rèn)為本病的病因病機(jī)主要是血虛風(fēng)燥，肌膚失養(yǎng)，外受風(fēng)邪所致。除此之外，張子福提出本病是因氣血虛弱，衛(wèi)外不固，或腎元不固，肌表失于充養(yǎng)，虛邪賊風(fēng)乘隙伏于肌表而成。高漢義認(rèn)為人到老年，陰血虛衰，不能上歸于肺，則肺失潤(rùn)澤，肺燥不能行氣血津液于皮膚，因之提出血虛肺燥之病機(jī)。楊曉海則認(rèn)為肝腎虧損，血瘀肌膚是老年性皮膚瘙癢病的主要病理環(huán)節(jié)，而且瘀血與肝腎虧損互為因果，此也是導(dǎo)致本病纏綿難愈的病理關(guān)鍵。潤(rùn)燥止癢復(fù)方是在苗族治療皮膚瘙癢驗(yàn)方基礎(chǔ)上，結(jié)合傳統(tǒng)中醫(yī)理論，改進(jìn)研制而成，該藥物是由何首烏291g，制何首烏265g，生地黃429g，桑葉291g，苦參291g，紅活麻 150g六味中藥、民族藥材組成。具有養(yǎng)血滋陰，潤(rùn)腸通便，祛風(fēng)止癢之功效；用于血虛風(fēng)燥所致的皮膚瘙癢；熱毒蘊(yùn)膚所致的痤瘡疼痛，熱結(jié)便秘。不僅適用于血虛風(fēng)燥所致的皮膚瘙癢癥，也適用于熱毒蘊(yùn)膚所致的痤瘡腫痛，熱結(jié)便秘等病。潤(rùn)燥止癢膠囊療效確切，無(wú)明顯副作用，能顯著緩解瘙癢癥狀，改善皮損，并且輔助鎮(zhèn)靜催眠，調(diào)理胃腸功能，經(jīng)過(guò)多年的臨床實(shí)踐證明，對(duì)蕁麻疹、皮炎、濕疹、結(jié)節(jié)性癢疹、瘙癢癥等伴有明顯的皮膚瘙癢癥疾病的治療已取得良好的效果，尤其是對(duì)老年性皮膚瘙癢癥療效突出，為老年性皮膚瘙癢癥的治療提供了新的選擇。處方中含生何首烏和制何首烏。何首烏為蓼科植物何首烏 (Polygonummultiflorum Thunb.)的干燥塊根。生用具有潤(rùn)腸通便的作用，制后有補(bǔ)肝腎、 強(qiáng)筋骨、烏須發(fā)的作用。何首烏浸膏或所含的蒽醌衍生物能促進(jìn)腸蠕動(dòng)而有輕度瀉下作用。 其所含蒽醌類化合物還能促進(jìn)腸蠕動(dòng).抑制膽固醇在腸道的再吸收。何首烏炮制的關(guān)鍵是降低結(jié)合型蒽醌的含量，去除其瀉下的副作用，何首烏塊蒸制后結(jié)合型蒽醌含量與瀉下作用有密切關(guān)系。制何首烏有文獻(xiàn)報(bào)道，在用黑豆制時(shí)，隨炮制時(shí)間延長(zhǎng)，何首烏中總游離蒽醌含量先升后降，總的蒽醌和總的結(jié)合蒽醌含量逐漸下降。說(shuō)明結(jié)合蒽醌在炮制過(guò)程中轉(zhuǎn)變?yōu)橛坞x蒽醌。因此說(shuō)明蒽醌類化合物中的結(jié)合性蒽醌類是該處方潤(rùn)腸通便功效的有效部位。地黃是玄參科植物地黃(Rehmannia glutinosa Libosch.)的新鮮或干燥塊根，前者習(xí)稱“鮮地黃”，后者習(xí)稱“生地黃”。生地黃性寒，味甘，能清熱涼血，養(yǎng)陰生津；用于熱病煩燥、發(fā)斑、消渴、陰虛低熱、吐血、衄血、尿血、崩漏。主要成分為苷類、糖類及氨基酸，并以苷類為主，在苷類中又以環(huán)烯醚萜苷為主。地黃多糖、地黃寡糖和環(huán)烯醚萜苷中的地黃苷D 和地黃苷A是處方中滋陰養(yǎng)血的有效部位。桑葉為?？浦参锷?Morus alba L.)的干燥葉。本品是中藥中清熱解表之要藥，具有疏散風(fēng)熱，清肝明日之功能，用于風(fēng)熱感冒，目赤腫痛，肺熱燥咳，是常用中藥之一。桑葉中的主要成分有黃酮及黃酮苷類，留類，揮發(fā)油，氨基酸，維生素，糖類，微量元素幾類成分。 具有一定的抑菌作用和抑制腸蠕動(dòng)作用。也具有較強(qiáng)的抗炎作用，與祛風(fēng)、清熱功效相符。 桑葉還具有的軟便和利尿作用有利于排出體內(nèi)過(guò)多水份和緩解浮腫。苦參為豆科植物苦參(Sophora flavescens Ait.)的干燥根。中藥苦參具有清熱燥濕、殺蟲(chóng)、利尿等功效。治熱毒血痢、腸風(fēng)帶血、赤白帶下、黃疸尿閉、疳積、皮膚瘙癢、陰瘡濕癢、燙傷、疥廨麻風(fēng)；外治滴蟲(chóng)性陰道炎等。近年從苦參中已提取分離鑒定出百余種化學(xué)成分，主要含有多種生物堿和黃酮類化合物，其次還有烷基色原酮、醌類、三萜皂甙、脂肪酸和揮發(fā)油等類成分。總生物堿是苦參的重要有效成分，其中苦參堿和氧化苦參堿又是總堿中的主要活性成分。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外較為重視苦參的研究。有報(bào)道對(duì)苦參提取物中的止癢成分進(jìn)行了篩選，苦參甲醇提取物的止癢成分為生物堿，氧化苦參堿是主要活性成分之一。紅活麻為蕁麻科植物珠芽艾麻L(zhǎng)aportea bulbifera (Sieb. etZucc. )ffedd.的新鮮或干燥全草，又名蛆兒麻、活麻草、蛇麻草，為多年生草本。為貴州省少數(shù)民族用藥，系《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》(2003年版)收載品種，具有祛風(fēng)除濕，活血化瘀的作用，民間用于風(fēng)濕麻木，跌打損傷，骨折、脾虛、消化不良。根辛，溫。分布遼寧、吉林、黑龍江、河南、貴州等地。目前，潤(rùn)燥止癢復(fù)方是以膠囊的制劑形式上市，其標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)為 WS-10029 (ZD-0029) -2002，但是并沒(méi)有公開(kāi)該膠囊的制備方法。中國(guó)專利CN02113305.0公開(kāi)了該復(fù)方的具體制備方法為制首烏粉碎，過(guò)80目篩備用；生地、苦參、桑葉、生首烏粉碎過(guò)10目篩，其中生地切薄片，和紅活麻加水煎煮三次， 第一次加水量為藥材量的8倍，第二次加水量為藥材量的6倍，第三次加水量為藥材量的4 倍，煮沸時(shí)間均為1小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濃縮至室溫下相對(duì)密度為1. 40的浸膏，與上述藥粉混勻，制粒，烘干，粉碎，填充制成1000粒膠囊。雖然潤(rùn)燥止癢膠囊在臨床上有廣泛的應(yīng)用，并取得了良好的治療效果，但是該產(chǎn)品存在部分藥材提取方式原始、工藝參數(shù)不詳細(xì)、服用劑量較大，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)水平低，產(chǎn)品質(zhì)量不能有效控制等缺點(diǎn)。為增強(qiáng)其市場(chǎng)競(jìng)爭(zhēng)力，有必要對(duì)潤(rùn)燥止癢膠囊進(jìn)行產(chǎn)品二次開(kāi)發(fā)研究，運(yùn)用現(xiàn)代科技手段對(duì)處方中的藥物進(jìn)行科學(xué)的提取、精制，并明確工藝參數(shù)，以期達(dá)到減小口服劑量的目的，這將有利于潤(rùn)燥止癢膠囊制劑水平的提高，有利于其市場(chǎng)的開(kāi)發(fā)， 具有一定的價(jià)值與應(yīng)用前景。中國(guó)專利申請(qǐng)200910067127. 4公開(kāi)了制何首烏進(jìn)行醇提的方法，具體為制何首烏用50-90%乙醇回流提取1-3次，每次加入5-18倍量的乙醇煎煮0. 5_3h，過(guò)濾、合并濾液，濃縮。中國(guó)專利申請(qǐng)200910114070. 9公開(kāi)了一種中藥制劑潤(rùn)燥止癢片中苦參堿的質(zhì)量控制方法
照高效液相色譜法(中國(guó)藥典相應(yīng)附錄)測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以氨基鍵合硅膠為填充劑，以乙腈_甲醇磷酸溶液(85-95 2-8 2-8，優(yōu)選為90 5 5)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm ；對(duì)照品溶液的制備精密稱取苦參堿對(duì)照品，加乙腈-甲醇(80 20)制成每Iml 含50 μ g的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品適量，精密稱定，置量瓶中，加濃氨試液浸潤(rùn)，再加甲醇超聲處理，防冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取一定體積的續(xù)濾液，過(guò)中性氧化鋁柱，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(5-10 1-5)適量洗脫，收集洗脫液，回收溶劑至干，殘?jiān)舆m當(dāng)溶劑使其溶解，轉(zhuǎn)移至量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。上述提取方法的缺點(diǎn)為該方法提取后2，3，5，4’_四羥基二苯乙烯-2-0-i3_D-葡萄糖苷(C2tlH22O9)含量偏低，從而藥效不明顯。制劑的缺點(diǎn)為服用量大，質(zhì)量不能有效控制、療效不明顯等。含量的檢測(cè)方法的缺點(diǎn)該檢測(cè)方法不穩(wěn)定，不能有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量。本發(fā)明解決的技術(shù)問(wèn)題是產(chǎn)品含量偏低，療效不明顯、檢測(cè)方法質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)水平低，產(chǎn)品質(zhì)量不能有效控制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物。本發(fā)明的另一目的是提供一種含上述提取物的制劑。本發(fā)明提供的潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物，該提取物由以下重量份的中藥制成制何首烏50-300份、何首烏80-350份、生地黃300-500份、苦參80-350份、桑葉80-350份、紅活麻50-200份，其活性成分為制何首烏的醇提物，何首烏、生地黃、苦參、桑葉和紅活麻的水提物。優(yōu)選地，本發(fā)明提供的提取物，由以下方法制備1)制何首烏的醇提物制何首烏用5-10倍量的55-80%乙醇回流提取1_3次，每次 l"3h ；2)何首烏、地黃、苦參、桑葉和紅活麻的水提物何首烏、地黃、苦參、桑葉和紅活麻加水浸泡，煎煮2-3次，每次l-3h，合并煎液，濾過(guò)，離心，使用截留分子量為 30000D-100000D的中空纖維膜組件，在壓力為0. 06-0. 20MPa，料液溫度為20_50°C的條件下進(jìn)行分離純化；3)將步驟2)得到的水提物與步驟1)的醇提物混合，濃縮干燥，粉碎，即得潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物。進(jìn)一步優(yōu)選地，本發(fā)明提供的提取物是由以下方法制備的1)制何首烏的醇提物取制何首烏用乙醇提取3次，每次加6倍量60%乙醇，每次提取1. 5h ；2)何首烏、地黃、苦參、桑葉和紅活麻的水提物將何首烏、地黃、苦參、桑葉和紅活麻用水煎煮3次，每次加8倍量水，第一次先浸泡1. 5h，然后煎煮，每次煎煮1. 5h，合并煎液，濾過(guò)，離心，使用截留分子量為50000D的中空纖維膜組件，在壓力為0. 06MPa，料液溫度為35°C的條件下進(jìn)行分離純化；3)將步驟2)得到的水提物與步驟1)的醇提物混合，濃縮干燥，粉碎，即得潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物。本發(fā)明還提供了一種制備上述提取物的方法，包括以下步驟1)制何首烏用5-10倍量的55-80%乙醇回流提取1_3次，每次l_3h ；2)按配比稱取何首烏、地黃、苦參、桑葉和紅活麻，加水浸泡，煎煮2-3次，每次 l_3h，合并煎液，濾過(guò)，離心，使用截留分子量為30000D-100000D的中空纖維膜組件，在壓力為0. 06-0. 20MPa，料液溫度為20_50°C的條件下進(jìn)行分離純化；3)將步驟2)得到的水提物與步驟1)的醇提物混合，濃縮干燥，粉碎，即得潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物。本發(fā)明還提供了含上述提取物的制劑。該制劑還含有藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。所述制劑為固體制劑或液體制劑，所述固體制劑為片、膠囊、顆?；蛲鑴?；所述液體制劑為口服液或注射劑，所述注射劑為注射液、注射用凍干粉或注射用無(wú)菌粉末。所述藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體，選自填充劑、 粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、表面活性劑或矯味劑中的一種或幾種，其中其中所述填充劑選自淀粉、蔗糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纖維素或葡萄糖等。所述粘合劑選自纖維素衍生物、藻酸鹽、明膠或聚乙烯吡咯烷酮等。所述崩解劑選自微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、低取代羥丙基纖維素或交聯(lián)羧甲基纖維素鈉。所述潤(rùn)滑劑選自硬脂酸、聚乙二醇、碳酸鈣、碳酸氫鈉、二氧化硅、滑石粉或硬脂酸鎂。所述表面活性劑選自十二烷基苯磺酸鈉、硬脂酸、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物、脂肪酸山梨坦或聚山梨酯(吐溫)等。所述矯味劑選自阿斯巴甜、蔗糖素或糖精鈉。本發(fā)明的制劑優(yōu)選為膠囊劑，由潤(rùn)燥止癢提取物制成。本發(fā)明還提供了膠囊的鑒別方法1)取本品內(nèi)容物4g，加石油醚(60-90°C)50ml，超聲30分鐘，棄去石油醚液，藥渣揮干，加乙醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干。殘?jiān)訜崴?0ml，置60°C水浴上攪拌使溶解，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液。取桑葉對(duì)照藥材2g， 按照上述方法制得對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部，附錄VI B) 試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5 μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5 4 1)的上層溶液為展開(kāi)劑，置用展開(kāi)劑預(yù)飽和10 分鐘的展開(kāi)缸內(nèi)，展開(kāi)約至8cm，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。2)取成品4g，加濃氨試液飽和的三氯甲烷50ml，放置過(guò)夜，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?. 5ml使溶解，作為供試品溶液。取苦參堿對(duì)照品、槐定堿，加乙醇制成每Iml各含0. 2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；取苦參對(duì)照藥材0. 5g，按照上述方法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各4 μ 1，分別點(diǎn)于同一用2%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-甲醇(8 3 0.5)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，展距約8cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(2 4 2 1) 10°C 以下放置后的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，依次噴以碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉乙醇試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙色斑點(diǎn)。本發(fā)明的膠囊中含2，3，5，4’ -四羥基二苯乙烯-2-0-β -D-葡萄糖苷(C2tlH22O9)， 不得少于0. 10mg/g;含總蒽醌以大黃素(C15H10O5)和大黃素甲醚(C16H12O5)計(jì)應(yīng)不低于 0. 10mg/g，含苦參堿(C15H24N2O)應(yīng)不低于 0. 52mg/g。具體檢測(cè)方法為照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2010年版一部附錄VI D)測(cè)定。1)2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷(簡(jiǎn)稱二苯乙烯苷)含量測(cè)
定色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水 (25 75)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為320nm。理論塔板數(shù)按2，3，5，4’ -四羥基二苯乙烯-2-0-β -D-葡萄糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。對(duì)照品溶液制備精密稱取2，3，5，4’ -四羥基二苯乙烯-2_0_ β-D-葡萄糖苷對(duì)照品適量，加稀乙醇制成每Iml含0. 05mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取0. lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率25kHz)0. 5 小時(shí)，取出，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減少的重量，搖勻，濾過(guò)，濾液用微孔濾膜 (0. 45 μ m)濾過(guò)，即得。測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。2)總蒽醌含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-0. 磷酸溶液(85 15)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。理論板數(shù)按大黃素計(jì)算不低于3000。對(duì)照品溶液制備精密稱取大黃素和大黃素甲醚對(duì)照品適量，加甲醇分別制成大黃素(C1 = 0. 08448mg/ml)和大黃素甲醚(C2 = 0. 04176mg/ml)混合對(duì)照品溶液；分別精密量取上述混合對(duì)照品溶液2ml至IOml容量瓶中，加甲醇定容，即得。(每Iml中分別含大黃素16. 896 μ g和大黃素甲醚8. 352 μ g的對(duì)照品混合溶液)供試品溶液的制備游離蒽醌取成品內(nèi)容物0.8g，精密稱定，精密加入50ml甲醇，稱定重量，加熱回流1小時(shí)，冷卻，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，即得?？傒祯芰咳∩鲜隼m(xù)濾液25ml，置錐形瓶中，揮去溶劑，加8%鹽酸溶液20ml， 超聲處理5分鐘溶解，再加三氯甲烷20ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次 15ml，合并三氯甲烷液，揮干溶劑，殘?jiān)蛹状际谷芙猓D(zhuǎn)移至20ml量瓶中，加甲醇至刻度， 搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。3)苦參堿含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0. 2%磷酸溶液-三乙胺(1 100 0. 03)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。理論板數(shù)按苦參堿峰計(jì)算不低于3000。對(duì)照品溶液制備精精密稱取苦參堿對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成苦參堿(C = 0. 0738mg/ml)對(duì)照品溶液，即得。供試品溶液的制備精密稱取成品內(nèi)容物0. lg，加入Ig中性氧化鋁(100-200 目)，加鹽酸(5 — 200)約6滴，攪拌均勻，置水浴上蒸干，上中性氧化鋁柱(100-200目，4g， 內(nèi)徑lcm)，用石油醚20ml洗脫，棄去洗液，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7 3)各 20ml洗脫，收集洗脫液，回收溶劑至干，殘?jiān)恿鲃?dòng)相適量使溶解，并轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中， 加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得；測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。本發(fā)明還提供了上述潤(rùn)燥止癢復(fù)方提取物及其制劑在制備治療血虛風(fēng)燥所致的皮膚瘙癢，熱毒蘊(yùn)膚所致的痤瘡腫痛，熱結(jié)便秘的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物具有以下優(yōu)點(diǎn)1、提取方法有以下改進(jìn)1)明確了制何首烏的提取方法何首烏為蓼科植物何首烏(Polygonum multiflorum Thunb.)的干燥塊根。何首烏主要含有二苯乙烯苷、蒽醌和磷脂等三大類成分，其中二苯乙烯苷是一類具有多種生理活性的天然成分，2,3,5,4'-四羥基二苯乙烯-2-0- β -D葡萄糖苷含量高，活性明確，是藥典對(duì)何首烏進(jìn)行質(zhì)量控制的指標(biāo)性成分；蒽醌則是蓼科植物共有的成分，何首烏蒽醌主要有大黃素、大黃素甲醚以及少量的大黃酚和大黃酸等。此外，何首烏中還含有磷脂類成分， 已發(fā)現(xiàn)的有卵磷脂、肌醇磷脂等。除以上幾類活性成分外，何首烏中還含有淀粉、粗脂肪和多種微量元素。何首烏用黑豆煮汁拌蒸后曬干入藥為制何首烏。黑豆性昧甘平.主含植物蛋白、 脂肪、維生素、淀粉等，是人體必須的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，而何首烏經(jīng)黑豆制后，色變黑.引藥入腎， 增強(qiáng)配合何首烏滋補(bǔ)肝的功效。何首烏經(jīng)加熱蒸制后可使有致瀉作用的結(jié)合蒽醌衍生物水解成無(wú)致瀉作用的游離蒽醌衍生物，緩和瀉下的副作用，卵磷脂及還原糖、總糖量增加，能使饑餓動(dòng)物肝糖元升高，故制首烏昧甘厚入陰，能增強(qiáng)其滋陰補(bǔ)腎，養(yǎng)肝益血的功能。炮制后，二苯乙烯苷的含量下降，結(jié)合蒽醌逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)橛坞x蒽醌，但總蒽醌含量變化不大。生、制首烏性昧相同，功效、主治不同。生首烏能解毒，消癰，潤(rùn)腸通便。主治瘰瘍瘡癰，風(fēng)疹瘙癢，腸燥便秘。制首烏功能補(bǔ)肝腎，益精血，烏須發(fā)，強(qiáng)筋骨。主治血虛萎黃，眩暈耳鳴，須發(fā)早白，腰膝酸軟，肢體麻木，崩漏帶下，久瘧體虛?，F(xiàn)代藥理研究報(bào)道何首烏提取物主要有以下幾方面的藥理活性降血脂、抗動(dòng)脈硬化；保護(hù)肝臟作用；抗氧化、抗衰老；防輻射、抗自由基；增強(qiáng)機(jī)體免疫作用；改善記憶力、保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞和益智作用；抗菌、抗炎、 鎮(zhèn)痛作用。何首烏浸膏或所含的蒽醌衍生物能促進(jìn)腸蠕動(dòng)而有輕度瀉下作用。因此發(fā)明人對(duì)制何首烏進(jìn)行醇提，該醇提方法得到的提取物中二苯乙烯苷、游離蒽醌、總蒽醌、結(jié)合蒽醌等含量較高。2、明確了何首烏、地黃、苦參、桑葉和紅活麻等水提取的次數(shù)、時(shí)間及水的用量，混合提取得到的產(chǎn)物2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷、總蒽醌和苦參堿的含量較高，且易干燥；為了使有效成分高度富集，減少用藥劑量，將中藥制成品質(zhì)精良、療效顯著的現(xiàn)代制劑，通過(guò)膜分離技術(shù)處理后得膏率高，且2，3，5，4’ -四羥基二苯乙烯-2-0- β -D-葡萄糖苷、總蒽醌和苦參堿含量增加，治療血虛、抗瘙癢作用及治療便秘作用增強(qiáng)。對(duì)何首烏等五味藥材水提取液進(jìn)行分離純化，主要是使藥液澄清，除去微粒、細(xì)菌、大分子雜質(zhì)(如膠質(zhì)、鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)、多糖)或脫色等。3、與現(xiàn)有技術(shù)，尤其是中國(guó)專利申請(qǐng)02113305. 0相比，本發(fā)明提供的潤(rùn)燥止癢復(fù)方提取物及其制劑在止癢、通便和補(bǔ)血方面效果顯著。4、關(guān)于含量的檢測(cè)方法按照君、臣藥及與適應(yīng)癥相關(guān)的組分必須建立質(zhì)量控制方法為原則，對(duì)苦參、桑葉和地黃三味藥材進(jìn)行了專屬性較強(qiáng)的薄層色譜鑒別。通過(guò)試驗(yàn)摸索找到了苦參和桑葉的薄層層析條件，二者都能夠得到很好的分離。而地黃的薄層層析中沒(méi)有與梓醇對(duì)照品相對(duì)應(yīng)的斑點(diǎn)存在，這可能是因?yàn)榈攸S中梓醇受熱易分解的原因。因此，建立了苦參的薄層鑒別項(xiàng)，設(shè)立苦參堿、氧化苦參堿和苦參對(duì)照藥材進(jìn)行對(duì)照，同時(shí)制備缺苦參的陰性樣品考察其專屬性；建立了桑葉的薄層鑒別項(xiàng)，設(shè)立桑葉對(duì)照藥材進(jìn)行對(duì)照，同時(shí)制備缺桑葉的陰性樣品考察其專屬性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，上述兩個(gè)新增加的薄層鑒別專屬性好，重復(fù)性好。本發(fā)明中的制何首烏和何首烏中都含有蒽醌類成分，其中主要含大黃素和大黃素甲醚，故可通過(guò)測(cè)定制何首烏和何首烏中大黃素和大黃素甲醚的含量來(lái)控制其質(zhì)量。含量測(cè)定參考了《中國(guó)藥典》2010版一部大黃藥材項(xiàng)下的含量測(cè)定方法，采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)提取方法和色譜條件進(jìn)行了優(yōu)化。檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，流動(dòng)相為甲醇-0. 磷酸溶液(85 15)能夠獲得較好的分離，通過(guò)方法學(xué)考察，證實(shí)了以上含量測(cè)定方法準(zhǔn)確， 簡(jiǎn)便，重復(fù)性好。本發(fā)明的提取方法通過(guò)純化后得到的粉末是水溶性成分，原計(jì)劃測(cè)定苦參中的苦參堿和氧化苦參堿的含量來(lái)控制其質(zhì)量，而通過(guò)試驗(yàn)，只檢測(cè)出苦參堿峰。原因可能是在提取純化的過(guò)程中苦參堿和氧化苦參堿發(fā)生了相互轉(zhuǎn)化。故通過(guò)測(cè)定苦參中的苦參堿含量控制其質(zhì)量。含量測(cè)定參考了現(xiàn)有技術(shù)的方法，采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定，并對(duì)提取方法和色譜條件進(jìn)行了篩選。檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，流動(dòng)相為乙腈-0. 2%磷酸溶液-三乙胺 (1 100 0.03)能獲得很好分離，通過(guò)方法學(xué)考察，證實(shí)了該含量測(cè)定方法準(zhǔn)確，簡(jiǎn)便，重復(fù)性好。通過(guò)對(duì)復(fù)方制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的全面研究，增加了桑葉和苦參兩個(gè)薄層鑒別；2，3，5， 4’_四羥基二苯乙烯-2-0- β -D-葡萄糖苷、蒽醌類成分和苦參堿的含量測(cè)定；進(jìn)行了水分、 裝量差異、崩解時(shí)限、微生物限度、總灰分、酸不溶性灰分、重金屬和砷鹽檢查。水分、裝量差異、崩解時(shí)限、微生物限度等常規(guī)檢查符合藥典規(guī)定，能夠有效的控制該產(chǎn)品的質(zhì)量。通過(guò)對(duì)本發(fā)明產(chǎn)品的重金屬和砷鹽檢查，證明本發(fā)明提供的產(chǎn)品中重金屬含量小于百萬(wàn)分之十，砷鹽含量小于百萬(wàn)分之二。
含量測(cè)定采用高效液相色譜法對(duì)本樣品中2，3，5，4’ -四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷、蒽醌類成分和苦參堿進(jìn)行了含量測(cè)定。經(jīng)過(guò)方法學(xué)考察及三批樣品測(cè)定，三種成分的測(cè)定方法重復(fù)性良好，回收率符合要求，整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程可操作性強(qiáng)，能客觀準(zhǔn)確地控制本發(fā)明含量，并能很好地排除處方中其它成分的干擾。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提供的定性和定量檢測(cè)方法，能有效的檢測(cè)各項(xiàng)指標(biāo)，很好的控制了產(chǎn)品的質(zhì)量。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。其中何首烏為蓼科植物何首烏(Polygonum multifiorum Thunb.)的干燥塊根； 制何首烏為用黑豆汁拌何首烏片上籠蒸后曬干而成；地黃為玄參科植物地黃(Rehmarmia glutinosa Libosch.)的新鮮或干燥塊根；桑葉為?？浦参锷?Morus alba L.)的干燥葉； 苦參為豆科植物苦參(Sophoraflavescens Ait.)的干燥根；紅活麻為蕁麻科植物珠芽艾白勺全草。倍量的含義是指藥材的重量比。實(shí)施例1 潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物1、組方制何首烏265g、何首烏291g、生地黃429g、苦參291g、桑葉291g和紅活麻 150g。2、制備方法1)制何首烏純提取物制何首烏用乙醇提取3次，每次加6倍量60%乙醇，每次提取1. 5h，回收乙醇至無(wú)醇味，得制何首烏的醇提液；2)何首烏、生地黃、苦參、桑葉和紅活麻的水提物將何首烏、生地黃、苦參、桑葉和紅活麻用睡煎煮3次，每次加8倍量水，第一次先浸泡1. 5h，然后再煎煮，每次煎煮1. 5h， 合并煎液，濾過(guò)，離心，使用截留分子量為50000D的中空纖維膜組件，在壓力為0. 06MPa，料液溫度為35°C的條件下進(jìn)行分離純化，得純化液；3)將步驟2)得到的純化液與步驟1)的制何首烏提取液混合，濃縮干燥，粉碎，即得潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物(浸膏收率是16. 11%).3、提取物的鑒別具體鑒別方法如下1)取本品內(nèi)容物4g，加石油醚(60-90°C)50ml，超聲30分鐘，棄去石油醚液，藥渣揮干，加乙醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干。殘?jiān)訜崴?0ml，置60°C水浴上攪拌使溶解，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液。取桑葉對(duì)照藥材2g， 按照上述方法制得對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部，附錄VI B) 試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5 μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5 4 1)的上層溶液為展開(kāi)劑，置用展開(kāi)劑預(yù)飽和10 分鐘的展開(kāi)缸內(nèi)，展開(kāi)約至8cm，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。2)取成品4g，加濃氨試液飽和的三氯甲烷50ml，放置過(guò)夜，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?. 5ml使溶解，作為供試品溶液。取苦參堿對(duì)照品、槐定堿，加乙醇制成每Iml各含0. 2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；取苦參對(duì)照藥材0. 5g，按照上述方法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(《中國(guó)藥典》附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各4 μ 1，分別點(diǎn)于同一用2%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-甲醇(8 3 0.5)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，展距約8cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(2 4 2 1) 10°C 以下放置后的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，依次噴以碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉乙醇試液。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙色斑點(diǎn)。結(jié)果顯示供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)和橙色斑點(diǎn)。4、提取物的含量測(cè)定及結(jié)果1)2,3,5,4'-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷(C2tlH22O9)(簡(jiǎn)稱為二苯乙烯苷)色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水 (25 75)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為320nm。理論塔板數(shù)按2，3，5，4’ -四羥基二苯乙烯-2-0- β -D-葡萄糖苷峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。對(duì)照品溶液制備精密稱取2，3，5，4’ -四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品適量，加稀乙醇制成每Iml含0. 05mg的溶液，即得。供試品溶液的制備取提取物，取0. lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，稱定重量，超聲處理(功率250W，頻率25kHz) 0. 5小時(shí)，取出，放冷，再稱定重量， 用稀乙醇補(bǔ)足減少的重量，搖勻，濾過(guò)，濾液用微孔濾膜(0.45μπι)濾過(guò)，即得。測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。2)總蒽醌色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-0. 磷酸溶液(85 15)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。理論板數(shù)按大黃素計(jì)算不低于3000。對(duì)照品溶液制備精密稱取大黃素和大黃素甲醚對(duì)照品適量，加甲醇分別制成大黃素(C1 = 0. 08448mg/ml)和大黃素甲醚(C2 = 0. 04176mg/ml)混合對(duì)照品溶液；分別精密量取上述混合對(duì)照品溶液2ml至IOml容量瓶中，加甲醇定容，即得。(每Iml中分別含大黃素16. 896 μ g和大黃素甲醚8. 352 μ g的對(duì)照品混合溶液)供試品溶液的制備游離蒽醌取提取物0. 8g，精密稱定，精密加入50ml甲醇，稱定重量，加熱回流1小時(shí)，冷卻，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，即得?？傒祯芰咳∩鲜隼m(xù)濾液25ml，置錐形瓶中，揮去溶劑，加8%鹽酸溶液20ml， 超聲處理5分鐘溶解，再加三氯甲烷20ml，加熱回流1小時(shí)，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3次，每次 15ml，合并三氯甲烷液，揮干溶劑，殘?jiān)蛹状际谷芙?，轉(zhuǎn)移至20ml量瓶中，加甲醇至刻度， 搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。3)苦參堿的檢測(cè)方法色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0. 2%磷酸溶液-三乙胺(1 100 0. 03)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm。理論板數(shù)按苦參堿峰計(jì)算不低于3000。對(duì)照品溶液制備精精密稱取苦參堿對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成苦參堿(C = 0. 0738mg/ml)對(duì)照品溶液，即得。供試品溶液的制備精密稱取提取物0. lg，加入Ig中性氧化鋁(100-200目)，加鹽酸(5 — 200)約6滴，攪拌均勻，置水浴上蒸干，上中性氧化鋁柱(100-200目，4g，內(nèi)徑 lcm)，用石油醚20ml洗脫，棄去洗液，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7 3)各20ml洗脫，收集洗脫液，回收溶劑至干，殘?jiān)恿鲃?dòng)相適量使溶解，并轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得。測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。2)結(jié)果本實(shí)施例的提取物含2，3，5，4’ -四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷 (C20H22O9)為 0. 92mg/g、總蒽醌 095mg/g、苦參堿 4. 36mg/g。實(shí)施例2 潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物1、組成同實(shí)施例1;2、制備方法1)取制何首烏用乙醇回流提取2次，每次加8倍量60%乙醇，每次提取2h，回收乙醇至無(wú)醇味，得制何首烏的醇提液；2)將何首烏、生地黃、苦參、桑葉和紅活麻用睡煎煮3次，每次加8倍量水，第一次先浸泡1. 5h，然后煎煮，每次煎煮1. 5h，合并煎液，濾過(guò)，離心，使用截留分子量為60000D的中空纖維膜組件，在壓力為0. lOMPa，料液溫度為35°C的條件下進(jìn)行分離純化，得純化液；3)將步驟2)得到的純化液與步驟1)的制何首烏提取液混合，濃縮干燥，粉碎，即得潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物(收率是16. 32% )。3、鑒別及含量檢測(cè)檢測(cè)方法見(jiàn)實(shí)施例1，結(jié)果為供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)和橙色斑點(diǎn)；本實(shí)施例的提取物含2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2_0_β -D-葡萄糖苷(C2tlH22O9) 為 0. 90mg/g、總蒽醌 0. 94mg/g、苦參堿 4. 32mg/g。實(shí)施例3 潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物1、組成同實(shí)施例1;2、制備方法1)制何首烏用乙醇回流提取2次，每次加6倍量80%乙醇，每次提取lh，回收乙醇至無(wú)醇味，得制何首烏的醇提液；2)將何首烏、生地黃、苦參、桑葉和紅活麻用水提取3次，每次加15倍量水，第一次先浸泡2小時(shí)，然后煎煮每次煎煮2h，合并煎液，濾過(guò)，離心，使用截留分子量為50000D的中空纖維膜組件，在壓力為0. 05MPa，料液溫度為45°C的條件下進(jìn)行分離純化，得純化液；3)將步驟2)得到的純化液與步驟1)的制何首烏的醇提液混合，濃縮干燥，粉碎， 即得潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物，收率是16. 36%。3、鑒別及含量檢測(cè)檢測(cè)方法見(jiàn)實(shí)施例1，結(jié)果為供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)和橙色斑點(diǎn)。本實(shí)施例的提取物含2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2_0_β -D-葡萄糖苷(C2tlH22O9) 為 0. 88mg/g、總蒽醌 0. 92mg/g、苦參堿 4. 37mg/g。實(shí)施例4 潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物1、組成同實(shí)施例1;2、制備方法1)制何首烏用乙醇回流提取3次，每次加9倍量70%乙醇，每次提取2h，回收乙醇至無(wú)醇味，得制何首烏的醇提液；2)將何首烏、生地黃、苦參、桑葉和紅活麻用水提取3次，每次加12倍量水，第一次先浸泡2h，然后煎煮，每次煎煮2h，合并煎液，濾過(guò)，離心，使用截留分子量為80000D的中空纖維膜組件，在壓力為0. 05MPa，料液溫度為30°C的條件下進(jìn)行分離純化，得純化液；3)將步驟2)得到的純化液與步驟1)的制何首烏的醇提液混合，濃縮干燥，粉碎， 即得潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物，收率是16. 48%。3、鑒別及含量檢測(cè)檢測(cè)方法見(jiàn)實(shí)施例1，結(jié)果為供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)和橙色斑點(diǎn)。本實(shí)施例的提取物含2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-0-β -D-葡萄糖苷(C2tlH22O9) 為 0. 90mg/g、總蒽醌 0. 89mg/g、苦參堿 4. 36mg/g。實(shí)施例5 潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物1、組方，同實(shí)施例1;2、制備方法1)制何首烏用乙醇回流提取3次，每次加6倍量50%乙醇，每次提取2. 5h，回收乙醇至無(wú)醇味，得制何首烏的醇提液；2)將何首烏、生地黃、苦參、桑葉和紅活麻用水提取3次，每次加10倍量水，第一次先浸泡lh，然后煎煮，每次煎煮2h，合并煎液，濾過(guò)，離心，使用截留分子量為70000D的中空纖維膜組件，在壓力為0. 05MPa，料液溫度為25°C的條件下進(jìn)行分離純化，得純化液；3)將步驟2)得到的純化液與步驟1)的制何首烏的醇提液混合，濃縮干燥，粉碎， 即得潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物，收率是16. 52%。3、鑒別及含量檢測(cè)檢測(cè)方法見(jiàn)實(shí)施例1，結(jié)果為供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)和橙色斑點(diǎn)；本實(shí)施例的提取物含2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-0-β -D-葡萄糖苷(C2tlH22O9) 為 0. 87mg/g、總蒽醌 0. 90mg/g、苦參堿 4. 33mg/g。實(shí)施例6 潤(rùn)燥止癢膠囊(劑量及輔料的使用，請(qǐng)補(bǔ)充)實(shí)施例1的提取物裝入膠囊，即得本申請(qǐng)的膠囊劑。規(guī)格每粒裝0. 3g。鑒別及含量檢測(cè)檢測(cè)方法見(jiàn)實(shí)施例1，結(jié)果為供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)和橙色斑點(diǎn)。
本實(shí)施例的制劑含2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷(C2tlH22O9)為 0. 78mg/g、總蒽醌 0. 80mg/g、苦參堿 4. 18mg/g。實(shí)施例7 潤(rùn)燥止癢膠囊實(shí)施例2的提取物裝入膠囊，即得。規(guī)格每粒裝0. 3g。鑒別及含量檢測(cè)檢測(cè)方法見(jiàn)實(shí)施例1，結(jié)果為供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)和橙色斑點(diǎn)。本實(shí)施例的制劑含2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷(C2tlH22O9)為 0. 76mg/g、總蒽醌 0. 79mg/g、苦參堿 4. 15mg/g。實(shí)施例8:潤(rùn)燥止癢片1、實(shí)施例4的提取物，壓片，即得。2、規(guī)格每片 0. 3g。3、鑒別及含量檢測(cè)檢測(cè)方法見(jiàn)實(shí)施例1，結(jié)果為供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)和橙色斑點(diǎn)。本實(shí)施例的制劑含2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷(C2tlH22O9)為 0. 75mg/g、總蒽醌 0. 76mg/g、苦參堿 4. 12mg/g。實(shí)施例9 潤(rùn)燥止癢顆粒1、實(shí)施例5的提取物，制粒，干燥，整粒，即得。2、規(guī)格每袋裝3g;3、鑒別及含量檢測(cè)檢測(cè)方法見(jiàn)實(shí)施例1，結(jié)果為供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)和橙色斑點(diǎn)。本實(shí)施例的制劑含2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷(C2tlH22O9)為 0. 76mg/g、總蒽醌 0. 77mg/g、苦參堿 4. 15mg/g。實(shí)施例10 潤(rùn)燥止癢膠囊1、實(shí)施例3的提取物裝入膠囊，即得。2、規(guī)格每粒裝0. 30g。3、鑒別及含量檢測(cè)檢測(cè)方法見(jiàn)實(shí)施例1，結(jié)果為供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)和橙色斑點(diǎn)。本實(shí)施例的制劑含2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷(C2tlH22O9)為 0. 80mg/g、總蒽醌 0. 81mg/g、苦參堿 4. 20mg/g。對(duì)比例1 潤(rùn)燥止癢膠囊(參考專利02113305. 0)1、制首烏粉碎，過(guò)80目篩備用；2、生地、苦參、桑葉、生首烏粉碎過(guò)10目篩，其中生地切薄片，和紅活麻加水煎煮三次，第一次加水量為藥材量的8倍，第二次加水量為藥材量的6倍，第三次加水量為藥材量的4倍，煮沸時(shí)間均為1小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濃縮至室溫下相對(duì)密度為1.40的浸膏，與上述藥粉混勻，制粒，烘干，粉碎，填充制成1000粒膠囊。
3、提取物及制劑的鑒別及含量檢測(cè)方法及結(jié)果檢測(cè)方法見(jiàn)實(shí)施例1，結(jié)果為供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)和橙色斑點(diǎn)。本實(shí)施例的提取物含2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2_0_β -D-葡萄糖苷(C2tlH22O9) 為 0. 55mg/g、總蒽醌 0. 65mg/g、苦參堿 3. 59mg/g本實(shí)施例的制劑含2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷(C2tlH22O9)為 0. 50mg/g、總蒽醌 0. 60mg/g、苦參堿 2. 76mg/g。實(shí)驗(yàn)例1 含量的檢測(cè)1、對(duì)實(shí)施例1-5和對(duì)比例1的提取物進(jìn)行含量和雜質(zhì)的檢測(cè)，其中含量檢測(cè)方法見(jiàn)實(shí)施例1，雜質(zhì)檢測(cè)方法為1)鞣質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)如含鞣質(zhì)溶液反應(yīng)呈不同程度的紫色(反應(yīng)程度用A+表示)檢測(cè)方法取提取物0. 5g，加水溶解成2ml，加三氯化鐵試劑0. 2g，攪勻，3分鐘后觀察。2)蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)如含蛋白質(zhì)溶液反應(yīng)呈不同程度的紫紅色，(反應(yīng)程度用A+表示，無(wú)反應(yīng)用 A-表示)檢測(cè)方法取提取物0. 5g，加水溶解成2ml，加雙縮脲試劑2滴，攪勻，3分鐘后觀察。3)多糖取提取物0. 5g，加水溶解成2ml，加Molish試劑2滴，攪勻，3分鐘后觀察，結(jié)果見(jiàn)表 1、2 表1 提取物含量檢測(cè)結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物，其特征在于，該提取物由以下重量份的中藥制成制何首烏50-300份、何首烏80-350份、生地黃300-500份、苦參80-350份、桑葉80-350份、 紅活麻50-200份，其活性成分為制何首烏的醇提物，何首烏、生地黃、苦參、桑葉和紅活麻的水提物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取物，其特征在于，該提取物的制備方法包括以下步驟1)制何首烏的醇提物用5-10倍量的55-80%的乙醇回流提取1-3次，每次l_3h；2)何首烏、生地黃、苦參、桑葉和紅活麻的水提物將何首烏、生地黃、苦參、桑葉和紅活麻加水浸泡，煎煮2-3次，每次l-3h，合并煎液，濾過(guò)，離心，使用截留分子量為 30000D-100000D的中空纖維膜組件，在壓力為0. 06-0. 20MPa，料液溫度為20_50°C的條件下進(jìn)行分離純化；3)將步驟2)得到的水提物與步驟1)的醇提物混合，濃縮干燥，粉碎，即得潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的提取物，其特征在于，該提取物的制備方法包括以下步驟1)制何首烏醇提物取制何首烏用乙醇提取3次，每次加6倍量60%乙醇，每次提取 1. 5h ；2)何首烏、生地黃、苦參、桑葉和紅活麻的水提物將何首烏、生地黃、苦參、桑葉和紅活麻用水煎煮3次，每次加8倍量水，第一次先浸泡1. 5h，然后煎煮，每次煎煮1. 5h，合并煎液，濾過(guò)，離心，使用截留分子量為50000D的中空纖維膜組件，在壓力為0. 06MPa，料液溫度為35°C的條件下進(jìn)行分離純化；3)將步驟2)得到的水提物與步驟1)的醇提物混合，濃縮干燥，粉碎，即得潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物。
4.一種制備權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述提取物的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟1)制何首烏用5-10倍量的55-80%乙醇回流提取1-3次，每次l_3h；2)按配比稱取何首烏、地黃、苦參、桑葉和紅活麻，加水浸泡，煎煮2-3次，每次l-3h， 合并煎液，濾過(guò)，離心，使用截留分子量為30000D-100000D的中空纖維膜組件，在壓力為 0. 06-0. 20MPa，料液溫度為20_50°C的條件下進(jìn)行分離純化；3)將步驟2)得到的水提物與步驟1)的醇提物混合，濃縮干燥，粉碎，即得潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物。
5.含有權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的提取物的制劑，其特征在于，所述制劑為固體制劑或液體制劑，所述固體制劑為片、膠囊、顆?；蛲鑴?；所述液體制劑為口服液或注射劑，所述注射劑為注射液、注射用凍干粉針或注射用無(wú)菌粉末。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制劑，其特征在于，所述制劑為膠囊劑，該膠囊劑由潤(rùn)燥止癢提取物制成。
7.權(quán)利要求6所述的制劑的鑒別方法，其特征在于，該方法包括以下步驟1)取本品內(nèi)容物l_4g，加石油醚(60-90°C )50-70ml，超聲15-30分鐘，棄去石油醚液， 藥渣揮干，加乙醇20-50ml，超聲處理15-30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜崴?0_20ml，置 30-60°C水浴上攪拌使溶解，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状糏ml使溶解，作為供試品溶液，取桑葉對(duì)照藥材2g，按照上述方法制得對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述三種溶液各5 μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5 4 1)的上層溶液為展開(kāi)劑，置用展開(kāi)劑預(yù)飽和10分鐘的展開(kāi)缸內(nèi)，展開(kāi)約至8cm，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。2)取成品l_4g，加濃氨試液飽和的三氯甲烷50-70ml，放置過(guò)夜，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄?. 5ml使溶解，作為供試品溶液；取苦參堿對(duì)照品、槐定堿，加乙醇制成每Iml各含0. 2mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液；取苦參對(duì)照藥材0. 5g，按照上述方法制成對(duì)照藥材溶液；照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各4 μ 1，分別點(diǎn)于同一用2%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以甲苯-丙酮-甲醇(8 3 0.5)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，展距約8cm，取出，晾干，再以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-水(2 4 2 1)10°C以下放置后的上層溶液為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，依次噴以碘化鉍鉀試液和亞硝酸鈉乙醇試液，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的橙色斑點(diǎn)。
8.權(quán)利要求6所述的制劑，其中含2，3，5，4’-四羥基二苯乙烯-2-0-β -D-葡萄糖苷， 不得少于0. 10mg/g ；含總蒽醌以大黃素和大黃素甲醚計(jì)，不低于0. 10mg/g，含苦參堿不低于 0. 52mg/g。
9.權(quán)利要求8所述的制劑的含量的檢測(cè)方法，其特征在于，所述檢測(cè)方法具體為1)2,3,5,4'-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水(25 75) 為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為320nm;理論塔板數(shù)按2，3，5，4’ -四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷峰計(jì)算不低于2000 ；對(duì)照品溶液制備精密稱取2，3，5，4’ -四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷對(duì)照品適量，加稀乙醇制成每Iml含0. 05mg的溶液，即得；供試品溶液的制備取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，取0. 1-0. 5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇15-25ml，稱定重量，超聲處理0. 5-1小時(shí)，取出，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減少的重量，搖勻，濾過(guò)，濾液用0. 45 μ m的微孔濾膜濾過(guò)，即得；測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定， 即得；2)總蒽醌含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；甲醇-0. 磷酸溶液(85 15)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm ；理論板數(shù)按大黃素計(jì)算不低于3000 ；對(duì)照品溶液制備精密稱取大黃素和大黃素甲醚對(duì)照品適量，加甲醇分別制成大黃素和大黃素甲醚混合對(duì)照品溶液；分別精密量取上述混合對(duì)照品溶液2ml至IOml容量瓶中， 加甲醇定容，即得；供試品溶液的制備游離蒽醌取成品內(nèi)容物0. 3-0. 8g，精密稱定，精密加入40-50ml 甲醇，稱定重量，加熱回流0. 5-1小時(shí)，冷卻，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，即得；總蒽醌精密量取上述續(xù)濾液10_25ml，置錐形瓶中，揮去溶劑，加5-8%鹽酸溶液 10-20ml，超聲處理5-10分鐘溶解，再加三氯甲烷10-20ml，加熱回流0. 5_1小時(shí)，放冷，置分液漏斗中，用少量三氯甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液再用三氯甲烷提取3-5次，每次15ml，合并三氯甲烷液，揮干溶劑，殘?jiān)蛹状际谷芙猓D(zhuǎn)移至20ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得；測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定， 即得；3)苦參堿含量測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-0. 2%磷酸溶液-三乙胺(1 100 0. 03)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm;理論板數(shù)按苦參堿峰計(jì)算不低于3000 ；對(duì)照品溶液制備精精密稱取苦參堿對(duì)照品適量，加流動(dòng)相制成苦參堿(C = 0. 0738mg/ml)對(duì)照品溶液，即得；供試品溶液的制備精密稱取成品內(nèi)容物0. 1-0. 3g，加入l-3g中性氧化鋁(100-200 目)，加鹽酸(5 — 200)約6-10滴，攪拌均勻，置水浴上蒸干，上中性氧化鋁柱，用石油醚 10-20ml洗脫，棄去洗液，依次以三氯甲烷、三氯甲烷-甲醇(7 3)各20ml洗脫，收集洗脫液，回收溶劑至干，殘?jiān)恿鲃?dòng)相適量使溶解，并轉(zhuǎn)移至IOml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得；測(cè)定方法分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10 μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定， 即得。
10.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的提取物或權(quán)利要求4-6任一項(xiàng)所述的制劑在制備治療血虛風(fēng)燥所致的皮膚瘙癢，熱毒蘊(yùn)膚所致的痤瘡腫痛，熱結(jié)便秘的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種潤(rùn)燥止癢復(fù)方的提取物及其制劑，該提取物由以下重量份的中藥制成制何首烏50-300份、何首烏80-350份、生地黃300-500份、苦參80-350份、桑葉80-350份、紅活麻50-200份，其活性成分為制何首烏的醇提物，何首烏、生地黃、苦參、桑葉和紅活麻的水提物。本發(fā)明提供的提取物及其制劑在止癢、通便、補(bǔ)血方面的效果明顯優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)。
文檔編號(hào)G01N21/33GK102349956SQ20111031788
公開(kāi)日2012年2月15日 申請(qǐng)日期2011年10月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月18日
發(fā)明者馮澤熹, 周寧, 左鼎, 曾香蘭, 王尉, 王德甫, 王曉春, 茅向軍, 許乾麗, 鮑家科 申請(qǐng)人:貴州同濟(jì)堂制藥有限公司