專(zhuān)利名稱：一種煙草中果膠含量的檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種煙草中果膠含量的檢測(cè)方法，屬煙草分析檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
果膠是煙草中細(xì)胞壁物質(zhì)的重要組成部分，約占煙葉質(zhì)量的6% 13%，對(duì)煙葉結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性及其熱解產(chǎn)物都有重要影響，其化學(xué)組成主要以α (1 — 4)鍵合的D—半乳糖醛酸為基本結(jié)構(gòu).果膠含量過(guò)高時(shí)會(huì)使煙草在燃吸時(shí)不完全并產(chǎn)生甲醇，還會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)烈的刺激性，青雜氣重的不良影響。因此準(zhǔn)確的測(cè)定煙草中果膠含量有很重要的意義。目前，果膠的測(cè)定方法主要有重量法、咔唑比色法、3，5- 二硝基水楊酸法(DNS)、 高效液相色譜法(HPLC)、流動(dòng)分析法及氣相色譜法(GC)。其中重量法操作復(fù)雜且重復(fù)性差，咔唑比色法和高效液相色譜法皆是把果膠酸解成半乳糖醛酸，但半乳糖醛酸遇酸容易形成內(nèi)酯物質(zhì)，造成測(cè)定值偏低.氣相色譜法需衍生化，操作復(fù)雜。3，5 二硝基水楊酸法、流動(dòng)分析法皆是把果膠酶解成半乳糖醛酸。3，5 二硝基水楊酸法的準(zhǔn)確精度不夠，流動(dòng)分析法儀器穩(wěn)定性不好，浪費(fèi)試劑。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)之不足，而提供一種方法簡(jiǎn)單、成本低、效率高和分析數(shù)據(jù)精確的煙草果膠含量的測(cè)定方法。本發(fā)明根據(jù)果膠酶具有很強(qiáng)的專(zhuān)一性的特點(diǎn)，運(yùn)用果膠酶對(duì)樣品進(jìn)行前處理生成了半乳糖醛酸，簡(jiǎn)化了樣品前處理的過(guò)程，同時(shí)，根據(jù)半乳糖醛酸具有還原性的特性，首次在煙草行業(yè)內(nèi)采用電位滴定方法對(duì)煙草中果膠含量進(jìn)行了測(cè)定，減少了人為誤差。本發(fā)明的煙草果膠含量的測(cè)定方法，包括標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍確定、樣品處理及果膠含量的確定步驟；具體如下(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍確定a.稱取精確到0. OOlg的半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)品1. 000g，溶解于水中，定容至IOOmL的容量瓶中，得到lmg/mL的半乳糖醛酸原液，保存于溫度為4-5°的冰箱中；b.分別移取lmg/mL的半乳糖醛酸原液:0. 5,1. 0,1. 5,2. 0,2. 5mL，分別注入IOOmL 容量瓶中，稀釋至刻度，得到一組濃度為0. 005g/mL、0. 01g/mL、0. 015g/mL、0. 02g/mL、 0. 025g/mL的半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，將上述梯度濃度的標(biāo)液采用電位滴定儀測(cè)定半乳糖醛酸，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，在濃度為0. 005g/mL 0. 025g/mL范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)為0. 9994 ；(2)樣品處理a.稱取精確到0. OOOlg的1. OOOOg煙末置于150mL平底燒瓶中，加入50mL 85% 乙醇，士80°C回流30min，沸騰開(kāi)始計(jì)時(shí)；然后過(guò)濾，待乙醇過(guò)濾完后，用蒸餾水多次洗滌殘?jiān)敝烈掖枷礈旄蓛?；b.將殘?jiān)D(zhuǎn)移至200mL燒杯中，準(zhǔn)確加入15mL pH = 4檸檬酸三鈉/檸檬酸緩沖溶液和果膠酶溶液，在58°C水浴中水解池，分別加入菲林試劑A、B液各25mL，使其發(fā)生反應(yīng)生成Cu2O,用H2SO4和NH4Fe (SO4) 212H20溶液溶解；其中菲林試劑A液取硫酸銅結(jié)晶34. 69g，加適量水溶解，加硫酸0. 5mL，再加水稀釋至 500mL，用精制石棉過(guò)濾，貯存于具有橡皮塞的玻璃瓶?jī)?nèi)；菲林試劑B液取酒石酸鉀鈉173g與氫氧化鈉50g，加水溶解，稀釋至500mL，用精制石棉過(guò)濾，貯存于具有橡皮塞的玻璃瓶?jī)?nèi)；(3)果膠含量的確定用電位滴定儀測(cè)定半乳糖醛酸含量，按常規(guī)方法用標(biāo)準(zhǔn)曲線求取果膠的百分含量。本發(fā)明的特點(diǎn)在于用酶解-電位滴定分析方法測(cè)定煙葉中果膠含量，消除了濃硫酸對(duì)顯色反應(yīng)的影響，操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，回收率高，設(shè)備投資小，能滿足煙草中果膠含量的批量測(cè)定。


附圖為標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。
具體實(shí)施例方式本方法采用的設(shè)備均為市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)。方法的具體操作步驟如下1.酶解-電位滴定分析方法標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍a.準(zhǔn)確稱取半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)品1. OOOg (精確到0. OOlg)置于IOOmL容量瓶中，定容，保存于溫度為4-5°的冰箱中。b.分別移取lmg/mL的半乳糖醛酸原液0. 5、1.0、1.5、2.0、2. 5mL，分別注入 IOOmL容量瓶中，稀釋至刻度，得到一組濃度為0. 005g/mL、0. 01g/mL、0. 015g/mL、0. 02g/ mL、0. 025g/mL的半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，將上述梯度濃度的標(biāo)液采用電位滴定儀測(cè)定半乳糖醛酸，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(附圖所示)，在濃度為0. 005g/mL 0. 025g/mL范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)為 0.9994。2.樣品處理a.準(zhǔn)確稱取1. OOOOg煙末(精確到0. OOOlg)置于150mL平底燒瓶中，加入 50mL85%乙醇，士80°C回流30min，沸騰開(kāi)始計(jì)時(shí)。然后過(guò)濾，待乙醇過(guò)濾完后，用蒸餾水多次洗滌殘?jiān)?，直至乙醇洗滌干凈。b.將殘?jiān)D(zhuǎn)移至200mL燒杯中，準(zhǔn)確加入15mL pH = 4檸檬酸三鈉/檸檬酸緩沖溶液和果膠酶溶液，在58°C水浴中水解池，分別加入菲林試劑A、B液各25mL，使其發(fā)生反應(yīng)生成Cu2O,用H2SO4和NH4Fe (SO4) 212H20溶液溶解。其中菲林試劑A液取硫酸銅結(jié)晶34. 69g，加適量水溶解，加硫酸0. 5mL，再加水稀釋至 500mL，用精制石棉過(guò)濾，貯存于具有橡皮塞的玻璃瓶?jī)?nèi)。菲林試劑B液取酒石酸鉀鈉173g與氫氧化鈉50g，加水溶解，稀釋至500mL，用精制石棉過(guò)濾，貯存于具有橡皮塞的玻璃瓶?jī)?nèi)。3、果膠含量的確定用電位滴定儀測(cè)定半乳糖醛酸含量，按常規(guī)方法用標(biāo)準(zhǔn)曲線求取果膠的百分含量。
4、對(duì)比實(shí)驗(yàn)酶解-電位滴定分析方法和用比色法測(cè)定果膠含量(以半乳糖醛酸計(jì))，能夠得到酶解-電位滴定分析方法，重復(fù)性較好。煙樣果膠的分析結(jié)果
權(quán)利要求
1. 一種煙草中果膠含量的檢測(cè)方法，其特征在于該檢測(cè)方法包括標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍確定、樣品處理及果膠含量的確定步驟；具體如下(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍確定a.稱取精確到0.OOlg的半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)品1. 000g，溶解于水中，定容至IOOmL的容量瓶中，得到lmg/mL的半乳糖醛酸原液，保存于溫度為4-5°的冰箱中保存；b.分別移取lmg/mL的半乳糖醛酸原液0.5,1. 0,1. 5,2. 0,2. 5ML，分別注入IOOmL容量瓶中，稀釋至刻度，得到一組濃度為 0. 005g/mL、0. 01g/mL、0. 015g/mL、0. 02g/mL、0. 025g/ mL的半乳糖醛酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，將上述梯度濃度的標(biāo)液采用電位滴定儀測(cè)定半乳糖醛酸，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，在濃度為0. 005g/mL 0. 025g/mL范圍內(nèi)相關(guān)系數(shù)為0. 9994 ；(2)樣品處理a.稱取精確到0.OOOlg的l.OOOOg煙末置于150mL平底燒瓶中，加入50mL 85%乙醇， 士80°C回流30min，沸騰開(kāi)始計(jì)時(shí)；然后過(guò)濾，待乙醇過(guò)濾完后，用蒸餾水多次洗滌殘?jiān)?，直至乙醇洗滌干凈；b.將殘?jiān)D(zhuǎn)移至200mL燒杯中，準(zhǔn)確加入15mLpH = 4檸檬酸三鈉/檸檬酸緩沖溶液和果膠酶溶液，在58°C水浴中水解池，分別加入菲林試劑A、B液各25mL，使其發(fā)生反應(yīng)生成 Cu2O,用 H2SO4 和 NH4Fe (SO4) 212H20 溶液溶解；其中菲林試劑A液取硫酸銅結(jié)晶34. 69g，加適量水溶解，加硫酸0. 5mL，再加水稀釋至 500mL，用精制石棉過(guò)濾，貯存于具有橡皮塞的玻璃瓶?jī)?nèi)；菲林試劑B液取酒石酸鉀鈉173g與氫氧化鈉50g，加水溶解，稀釋至500mL，用精制石棉過(guò)濾，貯存于具有橡皮塞的玻璃瓶?jī)?nèi)；(3)果膠含量的確定用電位滴定儀測(cè)定半乳糖醛酸含量，用標(biāo)準(zhǔn)曲線求取果膠的百分含量。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種煙草中果膠含量的檢測(cè)方法，屬煙草分析檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的煙草果膠含量的測(cè)定方法，根據(jù)果膠酶具有很強(qiáng)的專(zhuān)一性的特點(diǎn)，運(yùn)用果膠酶對(duì)樣品進(jìn)行前處理生成了半乳糖醛酸，簡(jiǎn)化了樣品前處理的過(guò)程，同時(shí)，根據(jù)半乳糖醛酸具有還原性的特性，采用電位滴定方法對(duì)煙草中果膠含量進(jìn)行了測(cè)定，減少了人為誤差。本發(fā)明的煙草果膠含量的測(cè)定方法，包括標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍確定、樣品處理及果膠含量的確定步驟。本發(fā)明的特點(diǎn)在于用酶解-電位滴定分析方法測(cè)定煙葉中果膠含量，消除了濃硫酸對(duì)顯色反應(yīng)的影響，操作簡(jiǎn)單，重復(fù)性好，回收率高，設(shè)備投資小，能滿足煙草中果膠含量的批量測(cè)定。
文檔編號(hào)G01N27/42GK102323319SQ201110129600
公開(kāi)日2012年1月18日 申請(qǐng)日期2011年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月18日
發(fā)明者馮文, 孫桂芬, 廖臻, 徐世濤, 曹紅云, 楊帥, 王嵐, 納丹, 芮曉東, 蔣次清, 馬燕 申請(qǐng)人:云南煙草科學(xué)研究院