專利名稱：一種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑的檢驗(yàn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑的檢驗(yàn)方法，屬于中藥制劑的質(zhì)量控制檢驗(yàn)方法領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
所述一種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑其組方來(lái)源本組方系由實(shí)踐中來(lái)，是經(jīng)過(guò)多年驗(yàn)證的經(jīng)驗(yàn)方。國(guó)家級(jí)婦科主任醫(yī)師柴嵩巖自1959年以來(lái)，在臨床工作中主攻閉經(jīng)、月經(jīng)量少、月經(jīng)稀發(fā)、不孕等病。經(jīng)過(guò)近50年的治療與研究，確已取得了良好的經(jīng)驗(yàn)。尤其在近 10年中看到門診病例中多囊卵巢綜合征(PC0Q發(fā)病比例明顯增多，結(jié)合現(xiàn)代科學(xué)檢查，如盆腔B超、女性激素、基礎(chǔ)體溫等結(jié)合主要征象，在臨床治療工作中，已重點(diǎn)側(cè)重于PCOS病的有關(guān)資料的積累，相關(guān)資料的參照，加以對(duì)脾腎不足、濕濁蘊(yùn)結(jié)證的病機(jī)所引起的臨床證型，做重點(diǎn)研究。在1997年已做為專題研究，并經(jīng)過(guò)查新，尚無(wú)我們所提出通利法的有關(guān)記載，應(yīng)該說(shuō)是屬于創(chuàng)新的。如1998年北京中醫(yī)研究所碩士研究生黃玉華的畢業(yè)論文中寫到，名老中醫(yī)柴嵩巖根據(jù)多年經(jīng)驗(yàn)，認(rèn)為本病屬脾腎不足、痰濕阻遏而發(fā)病，本研究意在探討其經(jīng)驗(yàn)方，健脾益腎，養(yǎng)血通利，對(duì)脾腎陽(yáng)虛型PCOS的治療效果，并通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)初步研究其作用機(jī)理，并對(duì)31例PCOS患者治療3-6個(gè)月后，本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示療后患者血清LH 和T水平明顯下降，糖耐量實(shí)驗(yàn)恢復(fù)正常范圍，排卵率為17%，總有效率為84%。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本方具有降低血清胰島素和LGF-I水平，減輕體重，促進(jìn)排卵。病理組織學(xué)和電鏡結(jié)果提示，本方對(duì)卵巢的微循環(huán)有改善作用。在以上研究的基礎(chǔ)臨床工作中更加重了觀察和研究力度，也有深入觀察項(xiàng)目認(rèn)真參閱現(xiàn)代醫(yī)學(xué)及階段性的反復(fù)總結(jié)，并對(duì)確診為PCOS患者63例的中醫(yī)診斷，如舌、脈象的重點(diǎn)觀察及積累資料，已經(jīng)明顯地看出，無(wú)論其癥狀如何，或月經(jīng)稀發(fā)、閉經(jīng)，或出血，或肥胖，或多毛、痤瘡等不同臨床表現(xiàn)，而其脈象均為沉滑或沉細(xì)滑。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為脈之應(yīng)病，所以徵氣血之盛衰，因?yàn)槲迮K六腑之氣，無(wú)不通于血脈，不同疾病在很大程度上，脈象可以支持認(rèn)證。但是脈象又是相當(dāng)復(fù)雜的，只有在大量的同一病種中找出規(guī)律，對(duì)診斷有參考意義的客觀所見。如對(duì)PCOS患者的脈象做了初步的歸納，曾對(duì)較典型的PCOS病例的脈象如何，無(wú)論出血、閉經(jīng)、肥胖、消瘦等，其脈象均呈現(xiàn)為沉滑無(wú)力或細(xì)滑。其中年齡20-35歲55人，35 歲以上或25歲以下者8人，患稀發(fā)8人，閉經(jīng)37人，淋漓出血3人，其他癥狀者12人。其組方為當(dāng)歸6份、杜仲4份、肉蓯蓉2. 5份、川彎1.5份、薏苡仁5份、茜草3份、 車前子5份、菟絲子6份、桂枝1份采用顆粒劑制法制成。功能主治為溫腎養(yǎng)血，利溫化濁， 祛瘀調(diào)經(jīng)。用于腎陽(yáng)不足，沖任血虛，濕濁瘀阻所致之月經(jīng)后期，經(jīng)量稀少，甚或經(jīng)閉不通； 多囊卵巢綜合征見上述證候者。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑的檢驗(yàn)方法，檢驗(yàn)方法中制定了當(dāng)歸、茜草、肉蓯蓉和菟絲子的薄層色譜鑒別；采用高效液相色譜法，測(cè)定這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑中阿魏酸的含量，以克服現(xiàn)有技術(shù)的弊端，提高產(chǎn)品的質(zhì)量、療效、生物利用度，更好地滿足醫(yī)療的需要。本發(fā)明的目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑的檢驗(yàn)方法，其特征在于檢驗(yàn)方法中包含有a鑒別方法和b含量測(cè)定方法a 鑒別當(dāng)歸薄層色譜鑒別取這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑10_50g，研碎，加乙醇lO-lOOml， 超聲處理10-50分鐘，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇I-IOml溶解，作為供試品溶液，另取當(dāng)歸對(duì)照藥材l-10g，加乙醇10-50ml，超聲處理10-50分鐘，同法制成對(duì)照藥材溶液，按照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液10-30 μ 1、對(duì)照藥材溶液10-30 μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比1-10 5-15 0.5-5的甲苯-三氯甲烷-無(wú)水乙醇為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；菟絲子薄層色譜鑒別取這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑5-20g，研細(xì)，加甲醇 lO-lOOml，超聲處理10-50分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇I-IOml溶解，濾過(guò)，濾液濃縮至I-IOml，作為供試品溶液，另取菟絲子對(duì)照藥材l-10g，研碎，加甲醇l-50ml，超聲處理1-50分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇溶解，濾過(guò)，濾液濃縮至l_15ml，作為對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5-20 μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比1-10 1-10 1-10的甲苯-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；肉蓯蓉薄層色譜鑒別取這種溫腎養(yǎng)血、利溫化濁，祛瘀調(diào)經(jīng)的中藥制劑10-30g， 研細(xì)，加甲醇lO-lOOml，超聲處理10-50分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇I-IOml溶解，作為供試品溶液，另取麥角甾苷對(duì)照品，加乙醇制成每Iml含l-5mg的溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各1_50μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G 薄層板上，以體積比5-50 1-10 1-5的乙酸乙酯-甲醇-體積比濃度9%醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以l-10wt%三氯化鐵乙醇溶液，在90-150°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰， 供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；茜草薄層色譜鑒別取這種溫腎養(yǎng)血、利溫化濁，祛瘀調(diào)經(jīng)的中藥制劑10_30g，研細(xì)，加甲醇lO-lOOml，超聲處理10-50分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄槿芙?，濾過(guò)，濾液濃縮至l_5ml，作為供試品溶液，另取茜草對(duì)照藥材0. 5-5g，研碎，加甲醇l_30ml，超聲處理10-50分鐘，同法制成對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各1-20 μ 1， 分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比1-20 1-10的 60 90°C石油醚-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；b含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以 10-50 10-100的甲醇-體積比濃度5% HAC為流動(dòng)相；流速1-lOml/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)為 300-400nm，理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ；
對(duì)照品溶液的制備取阿魏酸對(duì)照品，精密稱定，置棕色容量瓶中，加體積比 1-5 1-10的甲醇體積比濃度5% HAC的溶液制成每Iml含阿魏酸1-20. OOyg的溶液， 作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備取這種溫腎養(yǎng)血，利溫化濁，祛瘀調(diào)經(jīng)的中藥制劑，研細(xì)，取 l_5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加體積比1-10 5-20的甲醇體積比濃度5% HAC 混合溶液10-50ml，稱重，超聲處理10-60分鐘，放冷，再稱重，用以上溶劑補(bǔ)充減失的重量， 濾過(guò)，取續(xù)濾液經(jīng)微孔濾膜濾過(guò)，即得；測(cè)定法精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各10-20 μ 1，分別注入液相色譜儀， 測(cè)定，即得；每袋含當(dāng)歸與川芎以阿魏酸CiqHiqO4計(jì)，暫定不得少于0. 5-1. Omg0本發(fā)明的有益效果本發(fā)明經(jīng)過(guò)多次試驗(yàn)，檢驗(yàn)方法中制定了當(dāng)歸、肉蓯蓉、菟絲子和茜草的薄層色譜鑒別；采用高效相色譜法，測(cè)定這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑中阿魏酸的含量。通過(guò)建立明確專屬性強(qiáng)的鑒別及重現(xiàn)性、穩(wěn)定性及精密度良好的含量測(cè)定方法，能夠有效控制這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑的質(zhì)量，使其質(zhì)量達(dá)到穩(wěn)定、可控、高效及安全，是對(duì)產(chǎn)品的投料要求及質(zhì)量控制嚴(yán)格，克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提高產(chǎn)品的質(zhì)量、療效、生物利用度， 產(chǎn)品質(zhì)量高，能保證產(chǎn)品療效，更好地滿足醫(yī)療的需要。經(jīng)含量測(cè)定方法學(xué)研究結(jié)果表明， 該方法專屬性強(qiáng)，其它組分不干擾阿魏酸的測(cè)定；精密度測(cè)定、重復(fù)性測(cè)定、溶液的穩(wěn)定性和加樣回收率均符合《中藥新藥研究的技術(shù)要求》。


圖1是本發(fā)明當(dāng)歸的薄層鑒別圖；圖2是本發(fā)明肉蓯蓉的薄層鑒別圖；圖3是本發(fā)明菟絲子的薄層鑒別圖；圖4是本發(fā)明茜草的薄層鑒別圖；圖5是本發(fā)明阿魏酸對(duì)照品的高效液相圖；圖6是本發(fā)明這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑高效液相色譜圖譜；圖7是本發(fā)明陰性對(duì)照溶液的液相色譜圖譜。在圖1-4中，1、2、3均為供試品，4為對(duì)照品溶液，5為陰性對(duì)照溶液。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1 a 鑒別當(dāng)歸的薄層色譜鑒別取這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑20g，研碎，加乙醇80ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取當(dāng)歸對(duì)照藥材lg，加乙醇10ml，超聲處理30分鐘，同法制成對(duì)照藥材溶液；按照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液15 μ 1、對(duì)照藥材溶液10 μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比6 9 1的甲苯-三氯甲烷-無(wú)水乙醇為展開劑，展開，取出、晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；
菟絲子的薄層色譜鑒別取這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑10g，研細(xì)，加甲醇60ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇溶解，濾過(guò)，濾液濃縮至1 aiil，作為供試品溶液；另取菟絲子對(duì)照藥材lg，研碎，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇溶解，濾過(guò)，濾液濃縮至1 ani，作為對(duì)照藥材溶液；按照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比5 5 3的甲苯-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；肉蓯蓉的薄層色譜鑒別取這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑15g，研細(xì)，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1 2ml使溶解，作為供試品溶液；另取麥角甾苷對(duì)照品，加乙醇制成每Iml含2. 5mg麥角甾苷的溶液；按照薄層色譜法(中國(guó)藥典 2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比20 3 2的乙酸乙酯-甲醇-體積比濃度9% 醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5wt%三氯化鐵乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；茜草的薄層色譜鑒別取這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑15g，研細(xì)，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄槿芙?，濾過(guò)，濾液濃縮至1 aiil，作為供試品溶液；另取茜草對(duì)照藥材lg，研碎，加甲醇10ml，超聲處理30分鐘，同法制成對(duì)照藥材溶液； 按照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μ1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比4 1的60 90°C石油醚-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；b含量測(cè)定按照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2005年版一部附錄VID)測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以體積比 20 80的甲醇-體積比濃度5% HAC為流動(dòng)相，流速lml/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)為323nm ；理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ；對(duì)照品溶液的制備取阿魏酸對(duì)照品，置棕色容量瓶中，按體積比1 4加甲醇-體積比濃度5% HAC的溶液制成每Iml含阿魏酸10. OOyg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備取這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑，研細(xì)，取1.4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，按體積比1 4精密加甲醇-體積比濃度5% HAC的混合溶液25ml，稱重，超聲處理40分鐘，放冷，再稱重，用以上溶劑補(bǔ)充減失的重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液經(jīng)0. 45 μ m的微孔濾膜濾過(guò)，即得；測(cè)定法精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各20 μ 1，分別注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。經(jīng)測(cè)定后控制每袋含當(dāng)歸與川芎以阿魏酸(CltlHltlO4)計(jì)，暫定不得少于0. Smg0實(shí)施例2 a 鑒別當(dāng)歸薄層色譜鑒別取這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑10g，研細(xì)，加乙酸乙酯-甲酸 9.5 0.5 50ml，超聲40分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，作為供試品溶液，另取阿魏酸對(duì)照品，加甲醇制成每Iml含0. 5mg的溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各ΙΟμΙ，分別點(diǎn)于同一羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比 8:2: 0.2的苯-乙酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視， 供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；菟絲子薄層色譜鑒別取這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑10g，研細(xì)，加甲醇60ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇溶解，濾過(guò)，濾液濃縮至1 aiil，作為供試品溶液，另取菟絲子對(duì)照藥材lg，研碎，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇溶解，濾過(guò)，濾液濃縮至1 ani，作為對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各 ο μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比5 5 3的甲苯-乙酸乙酯-甲醇為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；肉蓯蓉薄層色譜鑒別取這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑15g，研細(xì)，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1 2ml溶解，作為供試品溶液，另取麥角甾苷對(duì)照品，加乙醇制成每Iml含2. 5mg的溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各 ΙΟμΙ，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比20 :3:2 的乙酸乙酯-甲醇-體積比濃度9%醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5wt%三氯化鐵乙醇溶液，在105°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；茜草薄層色譜鑒別取這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑15g，研細(xì)，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄槿芙?，濾過(guò)，濾液濃縮至1 aiil，作為供試品溶液，另取茜草對(duì)照藥材lg，研碎，加甲醇10ml，超聲處理30分鐘，同法制成對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比4 1的60 90°C石油醚-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；b含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以體積比 20 80的甲醇-體積比濃度5% HAC為流動(dòng)相；流速lml/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)為323nm ；理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ；對(duì)照品溶液的制備取阿魏酸對(duì)照品，精密稱定，置棕色容量瓶中，加體積比1 4 的甲醇體積比濃度5% HAC的溶液制成每Iml含阿魏酸10. OOyg的溶液，作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備取這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑，研細(xì)，取1. 4g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加體積比1 4的甲醇體積比濃度5% HAC混合溶液25ml，稱重，超聲處理40分鐘，放冷，再稱重，用以上溶劑補(bǔ)充減失的重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液經(jīng)微孔濾膜濾過(guò)，即得；測(cè)定法精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各20 μ 1，分別注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；每袋含當(dāng)歸與川芎以阿魏酸CiqHiqO4計(jì)，暫定不得少于0. Smg0
實(shí)施例3 1.當(dāng)歸的薄層色譜鑒別取這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑20g，研碎，加乙醇80ml，超聲處理30分鐘，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇Iml使溶解，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸對(duì)照藥材lg，加乙醇10ml，超聲處理30分鐘，同法制成對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取供試品溶液15 μ 1、對(duì)照藥材溶液10 μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以甲苯-三氯甲烷-無(wú)水乙醇(體積比6 9 1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中， 在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。參照有關(guān)文獻(xiàn)資料，結(jié)合本制劑的劑型及工藝特點(diǎn)，以當(dāng)歸為對(duì)照藥材，并隨行陰性(棄去當(dāng)歸)對(duì)照，鑒別這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑中的當(dāng)歸。結(jié)果表明供試品色譜中在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上呈現(xiàn)相同的藍(lán)色熒光斑點(diǎn)。按同工藝制備的不含當(dāng)歸的陰性對(duì)照液，同供試品方法提取、展開、顯色，結(jié)果在與供試品及對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，無(wú)斑點(diǎn)出現(xiàn)，證明方中其它味藥無(wú)干擾、斑點(diǎn)清晰、專屬性強(qiáng)，方法可行(見圖1)。故收入標(biāo)準(zhǔn)部分。當(dāng)歸對(duì)照藥材購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)120927_200613。2.菟絲子的薄層色譜鑒別。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，菟絲子主含化學(xué)成分為黃酮類、香豆精類等。參照文獻(xiàn)資料，結(jié)合本制劑的劑型及工藝特點(diǎn)，以菟絲子為對(duì)照藥材，隨行陰性對(duì)照 (棄去菟絲子)鑒別這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑中的菟絲子。結(jié)果表明供試品色譜中在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上呈現(xiàn)相同的藍(lán)色熒光斑點(diǎn)。按同工藝制備的不含菟絲子的陰性對(duì)照液，同供試品方法提供，展開，顯色，結(jié)果在與供試品及對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，無(wú)斑點(diǎn)出現(xiàn)。證明方中其它藥味無(wú)干擾，斑點(diǎn)清晰，分離度好，專屬性強(qiáng)，方法可行。見圖2。菟絲子對(duì)照藥材購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。批號(hào)121232-2004013.肉蓯蓉的薄層色譜鑒別。肉蓯蓉為本方中的主要組成藥物。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，肉蓯蓉所含的主要化學(xué)成分為多糖類、萜類及麥角留苷(毛蕊花糖苷)及甜菜堿類等。參照文獻(xiàn)資料及《中國(guó)藥典》2005年版一部肉蓯蓉項(xiàng)下麥角留苷的薄層色譜鑒別方法及條件，以麥角甾苷為對(duì)照品，并設(shè)陰性對(duì)照(去掉肉蓯蓉)。經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究證明供試品色譜中在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置呈現(xiàn)相同藍(lán)紫色斑點(diǎn)。按同工藝制備的不含肉蓯蓉的陰性對(duì)照液，同供試品方法提取，展開，顯色，結(jié)果在與供試品及對(duì)照品相應(yīng)的位置上，無(wú)斑點(diǎn)出現(xiàn)。證明方中其它藥味無(wú)干擾。薄層分離好，斑點(diǎn)清晰，方法可行。見圖3。麥角甾苷由中國(guó)藥品生物制品鑒定所提供。批號(hào)111530-2004044.茜草的薄層色譜鑒別。茜草已知含有蒽醌類成分，茜草素類等。參照有關(guān)文獻(xiàn)資料，并經(jīng)實(shí)驗(yàn)反復(fù)摸索，以茜草為對(duì)照藥材，并隨行陰性對(duì)照(去掉茜草)，鑒別這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑中的茜草。結(jié)果表明供試品色譜中在與對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上呈現(xiàn)相同的熒光斑點(diǎn)。按同工藝制備的不含茜草的陰性對(duì)照液，同供試品方法提取，展開，顯色，結(jié)果在與供試品及對(duì)照藥材相應(yīng)的位置上，無(wú)斑點(diǎn)出現(xiàn)。證明方中其它藥味無(wú)干擾。斑點(diǎn)清楚， 方法可行。見圖4。茜草對(duì)照藥材購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。批號(hào)121049-03015.含量測(cè)定這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑是由當(dāng)歸等九味中藥組成的復(fù)方制劑。經(jīng)提取方中組成藥物的主要活性成分制成的顆粒劑。當(dāng)歸為本方中的君藥，當(dāng)歸主含補(bǔ)血活血的有效成分為阿魏酸，成分明確，有關(guān)阿魏酸的分析檢測(cè)方法技術(shù)成熟。故選擇方中君藥當(dāng)歸與方中另一組成藥物川芎兩者共含的主要有效成分-阿魏酸為檢測(cè)指標(biāo)，以高效液相色譜法測(cè)定其在這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑中的含量。經(jīng)方法學(xué)考查證明方法靈敏，專屬性強(qiáng)，結(jié)果滿意， 方法可行。1)、儀器與試藥(1)儀器島津SCL-10AVP液相色譜儀(日本)，配有柱溫箱，SPD-10AVP檢測(cè)器， Class-VP工作站。(2)試劑與試藥甲醇為色譜純?cè)噭?，水為雙重蒸餾水，其它試劑均為分析純。阿魏酸對(duì)照品，購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110773-99102)、實(shí)驗(yàn)條件的選擇(1)色譜條件的選擇色譜柱Kromasil 5u 100A C18 柱(250X4. 6mm, 5 μ m)；流動(dòng)相甲醇-5%醋酸(20 80)；流速lml/min ；柱溫35°C ；檢測(cè)波長(zhǎng):323歷。在上述選定的色譜條件下，阿魏酸與其它組分色譜峰可達(dá)到基線分離，分離度符合規(guī)定，理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)在10000以上。且陰性樣品無(wú)干擾。對(duì)照品、供試品及陰性樣品色譜圖見圖5、圖6、圖7。在選擇流動(dòng)相時(shí)，曾參照文獻(xiàn)試驗(yàn)了甲醇與不同濃度的醋酸(5%和2% )的不同比例以及甲醇與0. 磷酸的不同比例，結(jié)果表明，本法所確定的以甲醇-5%醋酸 (20 80)效果最佳。(2)提取條件的選擇為增加阿魏酸的穩(wěn)定性，選擇甲醇5%HAC(1 4)混合溶劑作為提取溶劑。提取方法分別試驗(yàn)了超聲處理法和回流提取法。結(jié)果見表1。表1不同提取方法阿魏酸測(cè)定結(jié)果
權(quán)利要求
1. 一種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑的檢驗(yàn)方法，其特征在于檢驗(yàn)方法中包含有a鑒別方法和b含量測(cè)定方法 a鑒別當(dāng)歸薄層色譜鑒別取這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑10-50g，研碎，加乙醇lO-lOOml，超聲處理10-50分鐘，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇I-IOml溶解，作為供試品溶液，另取當(dāng)歸對(duì)照藥材l-10g，加乙醇10-50ml，超聲處理10-50分鐘，同法制成對(duì)照藥材溶液，按照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液10-30 μ 1、對(duì)照藥材溶液10-30μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比1-10 5-15 0.5-5的甲苯-三氯甲烷-無(wú)水乙醇為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；菟絲子薄層色譜鑒別取這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑5-20g，研細(xì)，加甲醇lO-lOOml， 超聲處理10-50分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇I-IOml溶解，濾過(guò)，濾液濃縮至 I-IOml，作為供試品溶液，另取菟絲子對(duì)照藥材l-10g，研碎，加甲醇l-50ml，超聲處理1_50 分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇溶解，濾過(guò)，濾液濃縮至l_15ml，作為對(duì)照藥材溶液， 照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5-20μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比1-10 1-10 1-10的甲苯-乙酸乙酯-甲醇為展開劑， 展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)；肉蓯蓉薄層色譜鑒別取這種溫腎養(yǎng)血、利溫化濁，祛瘀調(diào)經(jīng)的中藥制劑10-30g，研細(xì)，加甲醇lO-lOOml，超聲處理10-50分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇I-IOml溶解， 作為供試品溶液，另取麥角甾苷對(duì)照品，加乙醇制成每Iml含l_5mg的溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各1_50μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比5-50 1-10 1-5的乙酸乙酯-甲醇-體積比濃度9%醋酸為展開劑， 展開，取出，晾干，噴以l-10wt%三氯化鐵乙醇溶液，在90-150°C加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；茜草薄層色譜鑒別取這種溫腎養(yǎng)血、利溫化濁，祛瘀調(diào)經(jīng)的中藥制劑10-30g，研細(xì)， 加甲醇lO-lOOml，超聲處理10-50分鐘，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)尤燃淄槿芙?，濾過(guò)，濾液濃縮至l_5ml，作為供試品溶液，另取茜草對(duì)照藥材0. 5-5g，研碎，加甲醇l_30ml，超聲處理 10-50分鐘，同法制成對(duì)照藥材溶液，照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各1-20 μ 1，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以體積比1-20 1-10的60 90°C石油醚-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈365nm下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)； b含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定色譜條件和系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以10-50 10-100的甲醇-體積比濃度5% HAC為流動(dòng)相；流速1-lOml/min ；檢測(cè)波長(zhǎng)為300-400nm，理論板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3000 ；對(duì)照品溶液的制備取阿魏酸對(duì)照品，精密稱定，置棕色容量瓶中，加體積比 1-5 1-10的甲醇體積比濃度5% HAC的溶液制成每Iml含阿魏酸1-20. OOyg的溶液， 作為對(duì)照品溶液；供試品溶液的制備取這種溫腎養(yǎng)血，利溫化濁，祛瘀調(diào)經(jīng)的中藥制劑，研細(xì)，取l_5g， 精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加體積比1-10 5-20的甲醇體積比濃度5% HAC混合溶液10-50ml，稱重，超聲處理10-60分鐘，放冷，再稱重，用以上溶劑補(bǔ)充減失的重量，濾過(guò)，取續(xù)濾液經(jīng)微孔濾膜濾過(guò)，即得；測(cè)定法精密吸取供試品溶液與對(duì)照品溶液各10-20 μ 1，分別注入液相色譜儀，測(cè)定， 即得。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑的檢驗(yàn)方法，其特征在于檢驗(yàn)方法中制定了當(dāng)歸、茜草、肉蓯蓉和菟絲子的薄層色譜鑒別；采用高效液相色譜法，測(cè)定這種溫腎調(diào)經(jīng)的中藥制劑中阿魏酸的含量。其優(yōu)點(diǎn)是專屬性高，檢驗(yàn)方法穩(wěn)定，通過(guò)對(duì)藥物中的有效成分的精確檢驗(yàn)和測(cè)定，能夠有效的控制產(chǎn)品的質(zhì)量。
文檔編號(hào)G01N30/02GK102279242SQ20111011626
公開日2011年12月14日 申請(qǐng)日期2011年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月26日
發(fā)明者楊麗, 賈金良 申請(qǐng)人:包頭中藥有限責(zé)任公司