專利名稱：判定高功能自閉癥的發(fā)病危險度的方法及標記物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本申請要求基于日本專利申請2009-236976(2009年10月14日申請)的優(yōu)先權(quán)， 將其內(nèi)容作為參照引入本說明書中。本發(fā)明涉及一種早期發(fā)現(xiàn)自閉癥者的方法。詳細而言，本發(fā)明涉及一種判定自閉癥的發(fā)病危險度的方法，所述方法包括測定從被檢者分離得到的血漿或血清中的超低密度脂蛋白的步驟。另外，涉及一種判定自閉癥的發(fā)病危險度的方法，所述方法包括測定血漿或血清中的膽固醇濃度及/或中性脂肪濃度的步驟。
背景技術(shù)：
自閉癥是由美國Karmer博士在1943年最初記載為“情緒接觸的自閉性障礙”的障礙。發(fā)病最早出現(xiàn)在3歲，以難以形成與其他人的社會關(guān)系、語言發(fā)展遲鈍、強迫性的同一性保持(興趣和關(guān)心有限、局限于特定的范圍)為主要癥狀。推測自閉癥是隨著發(fā)展過程而狀態(tài)發(fā)生變化的發(fā)展障礙，是尚無法確定的高級中樞神經(jīng)系統(tǒng)障礙。所謂高功能自閉癥，是指自閉癥中不伴有智力發(fā)展遲鈍的自閉癥。已經(jīng)報道了自閉癥的罹患率在每1萬個孩子中有7 16人，高功能自閉癥占自閉癥的約11 34% (Macintosh et al Journal of Child Psychology and Psychiatry 2004)。自閉癥的原因目前尚未明確，沒有確立根治的治療法。因此，基于早期發(fā)現(xiàn)的專家的教育介入(將其稱作療育)在自閉癥者的社會生活適應方面是重要的。開始療育的時間越早越有效，期望能在自閉癥癥狀首次出現(xiàn)的2歲左右開始。但是，由于針對自閉癥沒有客觀·生物學檢查判定基準，所以自閉癥診斷必須由醫(yī)師僅根據(jù)癥狀來進行，針對于此需要兒童精神醫(yī)學臨床的豐富經(jīng)驗。因此，在該領(lǐng)域的專家尚不充足的現(xiàn)階段，現(xiàn)狀是自閉癥者的早期發(fā)現(xiàn)非常困難。需要說明的是，目前自閉癥的診斷采用美國精神醫(yī)學會的診斷基準(DSM-IV)、世界保健機構(gòu) WHO 的 ICD-10、ADI-R(Autism Diagnostic Interview-Revised)通過會面進行。雖然自閉癥的原因目前尚不清楚，但是目前為止已經(jīng)有各種報道。例如自閉癥中確認了在出生后早期頭圍擴大，認為與該時期的神經(jīng)細胞和神經(jīng)膠質(zhì)細胞新生的增加或細胞凋亡的減少有關(guān)(McCaffery et al Progress in Neurobiology 2005)。此夕卜， Fatemi等人著眼于Reeler小鼠中觀察到的中樞神經(jīng)發(fā)展障礙，報道了 Reeler小鼠的責任基因Reelin的受體即超低密度脂蛋白受體(VLDL受體Very Low Density Lipoprotein Rec印tor)mRNA的增大見于自閉癥者死后腦的前頭葉及小腦(Fatemi et al 2005)。另一方面，Sharp等人利用蛋白質(zhì)組解析發(fā)現(xiàn)自閉癥兒中特異性的脫脂載脂蛋白B-100濃度降低(Corbett et al 2007)。VLDL原本是含有脫脂載脂蛋白B-100的蛋白質(zhì) 脂質(zhì)的復合體，預計該分子在體內(nèi)的表達變化與脂質(zhì)代謝有關(guān)。但是，目前為止沒有關(guān)于對自閉癥者的末梢血脂質(zhì)成分進行研究的報道，也沒有表明自閉癥者與血清脂質(zhì)水平的關(guān)系的報道。另外，公開了下述通過測定血清樣品中特定的生長因子的量，診斷自閉癥的發(fā)明(日本特開2008-3M47)。但是，上述生長因子的動向與脂質(zhì)代謝沒有任何關(guān)系。如上所述，由于自閉癥病態(tài)的特殊性，以確立包括基于早期診斷的預防、或早期治療、社會恢復支援等的治療體系作為目標進行了研究，但尚未確立能夠進行早期診斷的自閉癥的生物學標記物。專利文獻1 日本特開2008-3M47__專禾1J文獻 1 Macintosh et al Journal of Child Psychology and Psychiatry 20042 :McCaffery et al Progress in Neurobiology 2005非專利文獻3 :Fatemi et al 2005非專利文獻4 :Corbett et al 200
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于能夠提供利用生物學標記物、客觀且簡便地判定自閉癥的發(fā)病危險度的方法，還通過利用該方法早期發(fā)現(xiàn)自閉癥者，能夠在早期對自閉癥者提供適當?shù)闹委?。為了實現(xiàn)上述目的，發(fā)明人等收集高功能自閉癥組和健康對照者組的血清，進行比較，發(fā)現(xiàn)未成年自閉癥者的超低密度脂蛋白成分中的中性脂肪濃度顯著降低，基于上述現(xiàn)象，完成了本發(fā)明。另外，本發(fā)明人等收集高功能自閉癥組和健康對照者組的血清，進行比較，發(fā)現(xiàn)未成年自閉癥者的膽固醇及中性脂肪兩者的總量顯著降低，及未成年自閉癥者的超低密度脂蛋白成分中的膽固醇濃度顯著降低，基于上述現(xiàn)象，完成了本發(fā)明。S卩，本發(fā)明涉及一種判定自閉癥的發(fā)病危險度的方法，其特征在于，包括測定從被檢者分離得到的血漿或血清中的超低密度脂蛋白的步驟，血漿或血清中的超低密度脂蛋白成分中所含的中性脂肪濃度為60mg/dl以下時，判斷自閉癥的發(fā)病危險度高。上述被檢者優(yōu)選為18歲以下。進而，上述被檢者為8歲以下、血清中的超低密度脂蛋白成分中所含的中性脂肪濃度為30mg/dl以下時，可以判斷自閉癥的發(fā)病危險度高。另外，本發(fā)明還提供一種自閉癥的發(fā)病危險度判定用試劑盒，所述試劑盒含有選自下述酶中的1種或2種以上的酶和顯色劑脂蛋白脂肪酶、甘油激酶、甘油-3-磷酸氧化酶、過氧化物酶、抗壞血酸氧化酶、丙酮酸激酶、及乳酸脫氫酶。進而，本發(fā)明還提供一種篩選方法，所述方法為篩選自閉癥治療藥的候選物質(zhì)的方法，其特征在于，包括下述步驟(a)對非人哺乳動物給與被檢物質(zhì)的步驟；(b)從非人哺乳動物中分離血漿或血清的步驟；(c)測定分離得到的血漿或血清中的超低密度脂蛋白成分中所含的中性脂肪濃度的步驟；及(d)以與給與被檢物質(zhì)之前相比血漿或血清中的超低密度脂蛋白成分中所含的中性脂肪濃度升高作為指標，判定被檢物質(zhì)為自閉癥治療藥的候選物質(zhì)的步驟。另外，本發(fā)明還提供一種判定自閉癥的發(fā)病危險度的方法，其特征在于，包括測定從被檢者分離得到的血漿或血清中的超低密度脂蛋白的步驟，血漿或血清中的超低密度脂蛋白成分中所含的膽固醇濃度低于健康者血漿或血清中的超低密度脂蛋白成分中所含的膽固醇濃度的標準值-標準誤差時，判斷自閉癥的發(fā)病危險度高。進而，本發(fā)明還提供一種判定自閉癥的發(fā)病危險度的方法，其特征在于，包括測定從被檢者分離得到的血漿或血清中的膽固醇濃度及/或中性脂肪濃度的步驟，上述膽固醇濃度低于健康者的膽固醇濃度的標準值-標準誤差時、及/或上述中性脂肪濃度低于健康者的中性脂肪濃度的標準值-標準誤差時，判斷自閉癥的發(fā)病危險度高。本發(fā)明還提供一種含有膽固醇氧化酶、過氧化物酶、及顯色劑的自閉癥的發(fā)病危險度判定用試劑盒。上述自閉癥可以為高功能自閉癥。根據(jù)本發(fā)明，首次確定了生物學性的高功能自閉癥的發(fā)病危險度判定基準。另外， 本發(fā)明可以通過采集末梢血之類簡便且將被檢者的負擔抑制到最低限度的方法來進行。根據(jù)本發(fā)明，目前為止較大程度上取決于醫(yī)師主觀的自閉癥的診斷變?yōu)閷肓松飳W基準的診斷，因此可以預見診斷技術(shù)的提高。另外，自閉癥者的療育越早越能夠期待其效果，而本發(fā)明法適用于幼兒和兒童，使早期發(fā)現(xiàn)、早期療育成為可能。這對自閉癥者將來從事社會生活方面非常有效。另外，在關(guān)注自閉癥者所引起的事件的現(xiàn)在，從應對上述問題的觀點來看社會效果明顯。根據(jù)本發(fā)明，能夠早期、簡便且具有可靠性地診斷自閉癥。特別是通過分2步測定人血液試樣中的中性脂肪VLDL成分濃度，可以容易地進行自閉癥的診斷輔助。


[圖1]圖1表示未成年的高功能自閉癥者組和未成年的健康對照者組中的、血清中脂質(zhì)的脂蛋白成分濃度平均值。[圖2]圖2表示自閉癥者和健康對照者的、VLDL成分中的膽固醇濃度與年齡的關(guān)系。[圖3]圖3表示自閉癥者和健康對照者的、VLDL成分中的中性脂肪濃度與年齡的關(guān)系、及判定高功能自閉癥者的截斷值(cut off value) 0
具體實施例方式本發(fā)明涉及一種早期發(fā)現(xiàn)自閉癥者的方法。詳細而言，本發(fā)明涉及一種判定自閉癥的發(fā)病危險度的方法，所述方法包括測定從被檢者分離得到的血清中的超低密度脂蛋白的步驟。1.定義“自閉癥”是在小兒期被診斷的廣泛性發(fā)展障礙之一，作為主要癥狀，到3歲為止表現(xiàn)為交流障礙、社會相互作用障礙、局限的興趣和行動、知覺過敏及多動傾向。所謂“高功能自閉癥”，是指上述自閉癥中不伴有智力發(fā)展遲鈍的自閉癥。本申請發(fā)明中，所謂“自閉癥的發(fā)病危險度”，是指用于判斷被檢者是否會患有自閉癥、或自閉癥是否正在發(fā)病的、自閉癥的檢查判定基準。自閉癥的發(fā)病危險度越高判斷自閉癥發(fā)病的可能性越高或為自閉癥者，自閉癥的發(fā)病危險度越低判斷發(fā)病的可能性越低或為健康者?！俺兔芏戎鞍?very low-density lipoprotein :VLDL) ”為血液中的脂蛋白之一。脂蛋白根據(jù)利用離心分離測定得到的密度進行分類，除此之外，還包括乳糜微粒(CM)、 中間密度脂蛋白(IDL)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)。上述脂蛋白在由蛋白質(zhì)、中性脂肪、游離膽固醇、膽固醇酯、及磷脂形成的方面是共通的，但是在分別含有特征性脫輔基蛋白質(zhì)、脂質(zhì)組成不同的方面是不同的。所謂“超低密度脂蛋白成分”或“VLDL成分”，是指將血漿或血清離心分離得到的、 密度為0. 950 1. 006g/ml的成分。同樣地所謂“乳糜微粒成分”或“CM成分”，是指將血漿或血清離心分離得到的、密度<0. 95g/ml的成分，所謂“低密度脂蛋白成分”或“LDL成分”，是指將血漿或血清離心分離得到的、密度為1. 019 1. 063g/ml的成分，所謂“高密度脂蛋白成分”或“HDL成分”，是指將血漿或血清離心分離得到的、密度為1.063 1.210g/ ml的成分。“中性脂肪”、“三酰甘油”或“TG”是脂肪酸和甘油形成的三酯化合物本發(fā)明中所謂“未成年”或“兒童”，是指18歲以下的人。所謂“截斷值”，是指著眼于某一物質(zhì)判定目標疾病組和非疾病組時規(guī)定的值。判定目標疾病和非疾病時，如果為截斷值以下則為陰性，如果為截斷值以上則為陽性，或如果為截斷值以下則為陽性，如果為截斷值以上則為陰性，從而可以判定疾病。作為出于評價截斷值的臨床有用性的目的而使用的指標，可以舉出靈敏度和特異度。利用截斷值判定某一母集團，在疾病患者中，判定為陽性的表示為a(真陽性)，為疾病患者且判定為陰性的表示為b(假陰性)，雖然不是疾病患者但是判定為陽性的表示為 c(假陽性)，不是疾病患者且判定為陰性的表示為d(真陰性)，在上述情況下，可以將a/ (a+b)表示的值表示為靈敏度(真陽性率)，將d/(c+d)表示的值表示為特異度(真陰性率)。目標疾病組和非疾病組的測定值的分布通常一部分重復。因此，通過使截斷值上下變化，靈敏度和特異度發(fā)生變化。通過降低截斷值，靈敏度變高，但特異度降低，通過升高截斷值，靈敏度變低，但特異度升高。作為判定方法，優(yōu)選靈敏度和特異度兩者的值高的方法。另外，確認了靈敏度和特異度的值不超過0. 5的判定方法是沒有用的。2.判定自閉癥的發(fā)病危險度的方法本發(fā)明涉及一種判定自閉癥的發(fā)病危險度的方法，所述方法包括測定從被檢者分離得到的血漿或血清中的超低密度脂蛋白的步驟。(1)分離步驟對于本發(fā)明中測定的試樣，由通常從被檢者中采集的血液制備血漿或血清進行使用。本發(fā)明可以使用末梢血作為試樣。作為制備血漿或血清的方法，可以采用本領(lǐng)域中公知的方法。取得的血漿或血清可以冷凍保存直至測定。(2)測定步驟本發(fā)明中，測定步驟可以如下進行，即，利用超離心法或凝膠過濾等本領(lǐng)域中公知的方法，將從被檢者分離得到的血漿或血清分離，得到各成分，然后測定成分中的中性脂肪濃度或膽固醇濃度。使用凝膠過濾HPLC法時，可以將血清分離后對各成分進行檢測及定量。血漿中及血清中，脂質(zhì)濃度不存在差別。如上所述，血漿或血清中的脂蛋白根據(jù)其密度分為乳糜微粒、IDL、VLDL、LDL、HDL。 可以按照凝膠過濾HPLC法等公知的方法對血清中的各成分進行分離、定量。(i)中性脂肪濃度的測定本發(fā)明中，可以直接測定VLDL中的中性脂肪濃度，判定自閉癥的發(fā)病危險度；或者也可以進行下述2步測定，即，首先測定血漿或血清中的中性脂肪的總量，中性脂肪的總量小于一定值時測定VLDL成分的中性脂肪濃度，判定自閉癥的發(fā)病危險度。進行2步測定時，優(yōu)選下述方案，即，中性脂肪的總量小于80mg/dl、優(yōu)選小于70mg/dl、較優(yōu)選小于60mg/ dl時，測定VLDL成分的中性脂肪濃度，判定自閉癥的發(fā)病危險度。如上所述通過將測定分為2步，可以容易地進行自閉癥的診斷輔助。中性脂肪的濃度可以基于測定通過脂蛋白脂肪酶(LPL)由甘油三酯生成的甘油的方法，利用甘油激酶(GK)-甘油-3-磷酸氧化酶(GPO)法、甘油氧化酶(GOD)法、甘油脫氫酶(GDH)法等測定。例如在GPO-DAOS法中，利用DAOS對使用脂蛋白脂肪酶(LPL)、甘油激酶(GK)、甘油-3-磷酸氧化酶(GPO)、過氧化物酶(POD)生成的過氧化氫進行定量，由此可以測定中性脂肪量。具體而言，GPO-DAOS法包括以下步驟1)利用脂蛋白脂肪酶(LPL)的作用將試樣中的中性脂肪分解為甘油和脂肪酸；2)在ATP存在下、利用甘油激酶(GK)的作用使生成的甘油形成甘油_3_磷酸；3)利用甘油-3-磷酸氧化酶(GPO)的作用，使生成的甘油_3_磷酸氧化，同時生成過氧化氫；4)利用過氧化物酶(POD)的作用，使生成的過氧化氫與N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3，5_ 二甲氧基苯胺鈉鹽(DA0Q和4-氨基安替比林定量地氧化縮合，生成藍色色素；及5)通過測定生成的藍色色素的吸光度，算出樣品中的中性脂肪濃度。同樣地在“NAD”法中，對使用脂蛋白脂肪酶(LPL)、甘油激酶(GK)、丙酮酸激酶、及乳酸脫氫酶生成的過氧化氫進行定量。(ii)膽固醇濃度的測定本發(fā)明中，可以直接測定VLDL中的膽固醇濃度，判定自閉癥的發(fā)病危險度；或者也可以進行下述2步測定，即，首先測定血漿或血清中的膽固醇的總量，膽固醇的總量小于一定值時測定VLDL成分的膽固醇濃度，判定自閉癥的發(fā)病危險度。如上所述通過將測定分為2步，可以容易地進行自閉癥的診斷輔助。膽固醇濃度的測定可以通過膽固醇氧化酶· DAOS法等測定。例如膽固醇氧化酶*DA0S法中，利用DAOS對使用膽固醇氧化酶生成的過氧化氫進行定量，由此可以測定膽固醇量。具體而言，膽固醇氧化酶· DAOS法包括以下步驟1)利用膽固醇氧化酶的作用使試樣中的膽固醇氧化，生成酮體和過氧化氫；2)利用過氧化物酶的作用，使生成的過氧化氫與N-乙基-N-(2-羥基-3-磺丙基)-3，5_ 二甲氧基苯胺鈉鹽(DA0Q和4-氨基安替比林定量地氧化縮合，生成藍色色素； 及3)通過測定生成的藍色色素的吸光度，算出樣品中的膽固醇濃度。
本發(fā)明的其他方案中，測定步驟可以如下進行，即，測定從被檢者分離得到的血漿或血清中的中性脂肪的總量或膽固醇的總量。(3)判定步驟發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)在健康者中無論年齡如何基本恒定的VLDL成分中的中性脂肪濃度在自閉癥者中則年少時低，隨著年齡增長而增加?；谏鲜霭l(fā)現(xiàn)，本發(fā)明中，通過上述方法測定的VLDL成分中的中性脂肪濃度低于健康者的標準值-標準誤差時，判斷被檢者的自閉癥的發(fā)病危險度高。具體而言，中性脂肪濃度為60mg/dl以下、優(yōu)選為50mg/dl以下時，判斷被檢者的自閉癥的發(fā)病危險度高。優(yōu)選在18歲以下的被檢者中，VLDL成分中的中性脂肪濃度為50mg/dl以下、優(yōu)選為40mg/dl以下時，判斷自閉癥的發(fā)病危險度高。較優(yōu)選在8歲以下的被檢者中，VLDL成分中的中性脂肪濃度為40mg/dl以下、優(yōu)選為30mg/dl以下時，判斷自閉癥的發(fā)病危險度高。另外，本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)與健康者相比，自閉癥者的超低密度脂蛋白成分中的膽固醇濃度顯著降低。基于上述發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明中，通過上述方法測定的VLDL成分中的膽固醇濃度低于健康者的標準值-標準誤差時，判斷被檢者的自閉癥的發(fā)病危險度高。具體而言，膽固醇濃度為20mg/dl以下、優(yōu)選為15mg/dl以下時，判斷被檢者的自閉癥的發(fā)病危險度高。進而，本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)與健康者相比，自閉癥者的膽固醇及中性脂肪兩者的總量顯著降低?；谏鲜霭l(fā)現(xiàn)，本發(fā)明中，通過上述方法測定的血漿或血清中的中性脂肪濃度或膽固醇濃度低于健康者的標準值-標準誤差時，判斷被檢者的自閉癥的發(fā)病危險度高。具體而言，膽固醇濃度為160mg/dl以下、優(yōu)選為150mg/dl以下時，或中性脂肪濃度為80mg/dl 以下、優(yōu)選為60mg/dl以下時，判斷被檢者的自閉癥的發(fā)病危險度高。根據(jù)本發(fā)明，通過利用末梢血的簡便的方法，可以在早期以高的正確診斷率判定高功能自閉癥的發(fā)病危險度。3.自閉癥的發(fā)病危險度判定用試劑盒本發(fā)明的試劑盒只要用于實施判定上述2.欄中說明的自閉癥的發(fā)病危險度的方法即可，對其中包含的具體的結(jié)構(gòu)、材料、儀器等沒有特別限定。本發(fā)明的試劑盒不限定于此，例如含有用于測定分離得到的末梢血漿或末梢血清中、或末梢血VLDL中的中性脂肪的試劑選自脂蛋白脂肪酶(LPL)、甘油激酶(GK)、甘油-3-磷酸氧化酶(GPO)、甘油氧化酶(GOD)、甘油脫氫酶(GDH)、丙酮酸激酶、乳酸脫氫酶、 過氧化物酶等酶中的1種或2種以上、及DAOS、FDAOS等顯色試劑。進而，還可以含有測定中必需的緩沖液。例如利用GPO-DAOS法測定中性脂肪濃度時，本發(fā)明的試劑盒可以含有選自甘油、 緩沖液(PIPES pH 6. 5)、脂蛋白脂肪酶、腺苷-5’ -磷酸二鈉鹽三水合物(ATP)、甘油激酶、 甘油-3-磷酸氧化酶(GPO)、過氧化物酶、N-乙基-N- (2’ -羥基-3’ -磺丙基)-3，5- 二甲氧基苯胺鈉(DAOS)、4_氨基安替比林、及抗壞血酸氧化酶中的1種或2種以上。另外，本發(fā)明的試劑盒不限定于此，例如可以含有用于測定分離得到的末梢血漿或末梢血清中、或末梢血VLDL中的膽固醇的試劑膽固醇氧化酶、過氧化物酶、及顯色試劑。可以使用上述試劑盒判定高功能自閉癥的發(fā)病危險度。進而，本發(fā)明的自閉癥的發(fā)病危險度判定用試劑盒還可以作為用于下述篩選自閉癥治療藥的候選物質(zhì)的方法的試劑盒使用。4.篩選自閉癥治療藥的候選物質(zhì)的方法本發(fā)明的判定方法和判定試劑盒可以應用于使用了非人哺乳類動物的自閉癥治療藥的候選物質(zhì)的篩選方法。作為非人哺乳類動物，只要為除人之外的哺乳動物即可，例如可以使用小鼠、大鼠、及猴子等。本發(fā)明提供一種篩選方法，所述方法為篩選自閉癥治療藥的候選物質(zhì)的方法，其特征在于，包括下述步驟(a)對非人哺乳動物給與被檢物質(zhì)的步驟；(b)從非人哺乳動物中分離血漿或血清的步驟；(c)測定分離得到的血漿或血清中的超低密度脂蛋白成分中所含的中性脂肪濃度的步驟；及(d)以與給與被檢物質(zhì)之前相比血漿或血清中的超低密度脂蛋白成分中所含的中性脂肪濃度升高作為指標，判定被檢物質(zhì)為自閉癥治療藥的候選物質(zhì)的步驟。本發(fā)明的其他方案中，也可以以末梢血漿或末梢血清中的中性脂肪濃度、膽固醇濃度、或末梢血漿或末梢血清中的超低密度脂蛋白成分中所含的膽固醇濃度升高作為指標，篩選自閉癥治療藥的候選物質(zhì)?？梢允褂蒙鲜龊Y選方法選擇高功能自閉癥治療藥的候選物質(zhì)。以下給出實施例更詳細地說明本發(fā)明，但這些實施例不限制本發(fā)明。實施例1.受試者選擇高功能自閉癥男性106名〔平均年齡14. 7歲(標準偏差5. 9)、年齡范圍6 歲 30歲〕作為受試者，以及選擇同一年齡層的健康者112名〔平均年齡15. 1歲(標準偏差6. 2)、年齡范圍6歲 30歲〕作為健康對照的受試者。全部患者按照高功能自閉癥的診斷基準 ADI-R(Autism Diagnostic Interview-Revised)進行診斷。2.實驗方法采集受試者的血清樣品，在-80°C下保存直至測定。通過HPLC法測定比較膽固醇和中性脂肪的脂質(zhì)成分。VLDL成分的中性脂肪濃度委托給Skylight-Biotech公司，利用凝膠過濾HPLC法進行測定。3.統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)用平均值表示。用t檢驗解析2組間的統(tǒng)計分析。ρ值小于0. 01的情況為統(tǒng)計學有意義。4.結(jié)果(1)自閉癥者中的血清中脂質(zhì)濃度的降低健康對照的未成年受試者及高功能自閉癥的未成年受試者中血清中脂質(zhì)的脂蛋白成分濃度平均值示于表1及圖1。[表1]
權(quán)利要求
1.一種判定自閉癥的發(fā)病危險度的方法，其特征在于，包括測定從被檢者分離得到的血漿或血清中的超低密度脂蛋白的步驟，血漿或血清中的超低密度脂蛋白成分中所含的中性脂肪濃度為60mg/dl以下時，判斷自閉癥的發(fā)病危險度高。
2.如權(quán)利要求1所述的判定自閉癥的發(fā)病危險度的方法，其特征在于，在18歲以下的被檢者中，血漿或血清中的超低密度脂蛋白成分中所含的中性脂肪濃度為60mg/dl以下時，判斷自閉癥的發(fā)病危險度高。
3.如權(quán)利要求1所述的判定自閉癥的發(fā)病危險度的方法，其特征在于，在8歲以下的被檢者中，血漿或血清中的超低密度脂蛋白成分中所含的中性脂肪濃度為30mg/dl以下時， 判斷自閉癥的發(fā)病危險度高。
4.如權(quán)利要求1 3中任一項所述的方法，其中，自閉癥為高功能自閉癥。
5.一種自閉癥的發(fā)病危險度判定用試劑盒，所述試劑盒含有選自下述酶中的1種或2 種以上的酶和顯色劑脂蛋白脂肪酶、甘油激酶、甘油-3-磷酸氧化酶、過氧化物酶、抗壞血酸氧化酶、丙酮酸激酶、及乳酸脫氫酶。
6.如權(quán)利要求5所述的試劑盒，其中，自閉癥為高功能自閉癥。
7.一種篩選方法，所述方法為篩選自閉癥治療藥的候選物質(zhì)的方法，其特征在于，包括下述步驟(a)對非人哺乳動物給與被檢物質(zhì)的步驟；(b)從非人哺乳動物中分離血漿或血清的步驟；(c)測定分離得到的血漿或血清中的超低密度脂蛋白成分中所含的中性脂肪濃度的步驟；及(d)以與給與被檢物質(zhì)之前相比血漿或血清中的超低密度脂蛋白成分中所含的中性脂肪濃度升高作為指標，判定被檢物質(zhì)為自閉癥治療藥的候選物質(zhì)的步驟。
8.如權(quán)利要求7所述的篩選方法，其中，自閉癥為高功能自閉癥。
9.一種判定自閉癥的發(fā)病危險度的方法，其特征在于，包括測定從被檢者分離得到的血漿或血清中的超低密度脂蛋白的步驟，血漿或血清中的超低密度脂蛋白成分中所含的膽固醇濃度低于健康者血漿或血清中的超低密度脂蛋白成分中所含的膽固醇濃度的標準值-標準誤差時，判斷自閉癥的發(fā)病危險度高。
10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中，自閉癥為高功能自閉癥。
11.一種判定自閉癥的發(fā)病危險度的方法，其特征在于，包括測定從被檢者分離得到的血漿或血清中的膽固醇濃度及/或中性脂肪濃度的步驟，所述膽固醇濃度低于健康者的膽固醇濃度的標準值-標準誤差時、及/或所述中性脂肪濃度低于健康者的中性脂肪濃度的標準值-標準誤差時，判斷自閉癥的發(fā)病危險度高。
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其中，自閉癥為高功能自閉癥。
13.一種自閉癥的發(fā)病危險度判定用試劑盒，其中，含有膽固醇氧化酶、過氧化物酶、及顯色劑。
14.如權(quán)利要求13所述的試劑盒，其中，自閉癥為高功能自閉癥。
全文摘要
本發(fā)明的目的在于能夠提供利用生物學標記物、客觀且簡便地判定自閉癥的發(fā)病危險度的方法，還通過利用該方法早期發(fā)現(xiàn)自閉癥者，能夠在早期對自閉癥者提供適當?shù)闹委?。本發(fā)明涉及一種判定自閉癥的發(fā)病危險度的方法，所述方法包括測定從被檢者分離得到的血漿或血清中的超低密度脂蛋白成分中所含的中性脂肪濃度或膽固醇濃度、或血漿或血清中的中性脂肪濃度或膽固醇濃度的步驟。進而，本發(fā)明還提供一種利用該方法、用于判定自閉癥的發(fā)病危險度的試劑盒、及使用非人哺乳類動物的自閉癥治療藥的候選物質(zhì)的篩選方法。
文檔編號G01N33/92GK102597781SQ201080046519
公開日2012年7月18日 申請日期2010年10月14日 優(yōu)先權(quán)日2009年10月14日
發(fā)明者中村和彥, 土屋賢治, 巖田圭子, 松崎秀夫, 森則夫, 鈴木勝昭 申請人:國立大學法人浜松醫(yī)科大學