專利名稱：：皮膚橋蛋白在制備檢測(cè)心力衰竭試劑盒中的應(yīng)用及檢測(cè)試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及皮膚橋蛋白(DPT)的新用途，具體地說是皮膚橋蛋白在制備檢測(cè)心力衰竭試劑盒中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：皮膚橋蛋白(dermatopontin，DPT)是廣泛存在于細(xì)胞外基質(zhì)中的一種小分子量蛋白質(zhì)，可以和核心蛋白多糖(decorin)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子P(TGF-P)，I型膠原蛋白等作用，具有細(xì)胞黏附、促進(jìn)膠原纖維形成等功能，在多種和細(xì)胞外基質(zhì)有關(guān)的生理和病理過程中發(fā)揮作用。(Dermatopontin，aNovelPlayerintheBiologyoftheExtracellularMatrix.Okamoto0，F(xiàn)ujiwaraS.ConnectiveTissueResearch,47:177-189，2006.)皮膚橋蛋白的基因定位于人染色體lql2-lq23。它是由183個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的分泌性蛋白質(zhì)，分子量為22kDa。不同哺乳動(dòng)物皮膚橋蛋白亞型的等電點(diǎn)略有不同，均在4.14.4之間，因此它是一個(gè)酸性蛋白質(zhì)。其分子結(jié)構(gòu)中富含酪氨酸殘基，且1/2被硫酸化，酪氨酸的硫酸化可能與皮膚橋蛋白對(duì)膠原纖維形成的影響和其與細(xì)胞表面受體的結(jié)合有關(guān)o(Tyrosinerichacidicmatrixprotein(TRAMP)isatyrosine-sulphatedandwidelydistributedproteinoftheextracellularmatrix.ForbesE，CronshawA，MacBeathJ，etal.FEBSLett,1994，351:433-436).皮膚橋蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu)中有五個(gè)由分子內(nèi)二硫鍵形成的環(huán)狀結(jié)構(gòu)。它的分子結(jié)構(gòu)中有三個(gè)重要的序列1)分別存在于52-57，107-112，163-168位氨基酸殘基間的D-R-E/Q-W-X-F/Y重復(fù)序列。這三個(gè)重復(fù)序列分別位于第一、三、四個(gè)環(huán)狀結(jié)構(gòu)區(qū)。雖然這三個(gè)重復(fù)序列在不同物種的DPT分子間相對(duì)保守，但尚未發(fā)現(xiàn)其具體的生物學(xué)作用；2)存在于145147位氨基酸殘基之間的N-Y-D序列，這是氧化還原輔因子topaquinone的保守序列，故DPT可能具有氨基氧化酶作用；3)存在于151154位氨基酸殘基間的R-G-A-T序列，這可會(huì)g是整合蛋白結(jié)合的一個(gè)位點(diǎn)。(Theisolationandprimarystructureofa22_kDaextracellularmatrixproteinfrombovineskin.JBiolChem，1989，264:5474-5479)基因芯片(genechip)是近年發(fā)展起來的一種新型實(shí)用的高新生物技術(shù)，已成為目前國(guó)際上生命科學(xué)研究的熱點(diǎn)之一。其突出特點(diǎn)是具有高度的并行性、多樣性、微型性和自動(dòng)化，已成為高效、快速、大規(guī)模獲取相關(guān)生物信息的重要手段。利用該技術(shù)可在數(shù)分鐘至幾小時(shí)內(nèi)完成傳統(tǒng)分子生物學(xué)方法要數(shù)月甚至數(shù)年才能完成的幾萬(wàn)次至幾十萬(wàn)次的基因分析實(shí)驗(yàn)。目前基因芯片技術(shù)已在疾病診斷、發(fā)病機(jī)制及疾病易感性研究、藥物設(shè)計(jì)與篩選、基因表達(dá)分析、基因突變及多態(tài)性分析等許多領(lǐng)域日益顯示出其重要的理論和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值及巨大的社會(huì)效益與經(jīng)濟(jì)效益基因芯片技術(shù)是利用核酸分子雜交原理與微電子技術(shù)相結(jié)合而形成的一種高新生物技術(shù)。其制作過程實(shí)際上就是將大量已知序列的DNA探針，采用特殊方法固定在厘米見方的硅芯片或玻片上，從而獲得一高密度(目前探針密度可達(dá)6.5萬(wàn)60萬(wàn)/cm2)的DNA探針列陣。所有的基因芯片制作與檢測(cè)技術(shù)包括4個(gè)基本要點(diǎn)DNA探針列陣的構(gòu)建、待測(cè)樣品的準(zhǔn)備、雜交及雜交信號(hào)的檢測(cè)分析。其中最關(guān)鍵的是DNA探針列陣的構(gòu)建與雜交信號(hào)的檢測(cè)分析。目前DNA探針列陣的構(gòu)建方法主要有兩種策略即直接在芯片上進(jìn)行的寡核苷酸探針原位合成法(insitusynthseis)與芯片外(off-chip)的探針合成法。原位合成法又分為光蝕刻法(photolithograpgy)與壓電打印法(piezoeletricprinting)。基因芯片的雜交與檢測(cè)分析的一般步驟為將待測(cè)樣品(DNA或RNA)用熒光或其它方法標(biāo)記后作為靶分子，與基因芯片上的探針列陣雜交。由于在基因芯片列陣中某一特定位置上的核苷酸序列是已知的，所以對(duì)微列陣每一位點(diǎn)的熒光強(qiáng)度進(jìn)行檢測(cè)，即可對(duì)樣品的遺傳信息進(jìn)行定性定量分析。雜交信號(hào)常用激光共聚焦掃描顯微鏡檢測(cè)，并用專用軟件記錄分析后直接給出檢測(cè)結(jié)果。傳統(tǒng)的核酸雜交方法一次只能檢測(cè)一個(gè)或幾個(gè)樣品，一般需要一天甚至更長(zhǎng)，而基因芯片將數(shù)十萬(wàn)組探針集成在一塊縮微芯片上，故一次可對(duì)大量生物樣品信息進(jìn)行雜交檢測(cè)分析。目前雜交速度已可縮短至數(shù)分甚至幾秒，極大地提高了實(shí)驗(yàn)效率。心力衰竭是世界范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率都較高的疾病。它是一個(gè)多因素引起的疾病，內(nèi)在的分子機(jī)制還不是很清楚，但可能和潛在的基因和蛋白質(zhì)表達(dá)改變有關(guān)。利用傳統(tǒng)的分子生物學(xué)的方法一次只能對(duì)一個(gè)或幾個(gè)基因的表達(dá)進(jìn)行分析，因此檢測(cè)效率較低，也就是說用傳統(tǒng)的方法進(jìn)行檢測(cè)很難獲得心衰相關(guān)的所有的表達(dá)變化的基因。而利用基因芯片技術(shù)可以同時(shí)分析成千上萬(wàn)個(gè)基因，大大提高了研究效率。觀察比較生理和病理狀態(tài)下組織的基因表達(dá)譜的差異，對(duì)于探索心力衰竭的確切的分子機(jī)制、發(fā)現(xiàn)與心力衰竭相關(guān)的新的生物標(biāo)志物以及在心衰的診斷和治療等方面都具有重要的價(jià)值。(Globalgeneexpressioninthefailingmyocardium.Circulation,2009，73(9):1568-76.)
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提出一種皮膚橋蛋白(DPT)的新用途，并且提出一種含有該蛋白的可以高效準(zhǔn)確的檢測(cè)心力衰竭疾病的試劑盒。本發(fā)明的發(fā)明思路為本發(fā)明發(fā)明人使用基因芯片的新方法找到新型心衰生物標(biāo)記。皮膚橋蛋白的基因定位于人染色體lql2-lq23。它是由183個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的分泌性蛋白質(zhì)，分子量為22kDa。不同哺乳動(dòng)物皮膚橋蛋白亞型的等電點(diǎn)略有不同，均在4.14.4之間，因此它是一個(gè)酸性蛋白質(zhì)。其分子結(jié)構(gòu)中富含酪氨酸殘基，且1/2被硫酸化，酪氨酸的硫酸化可能與皮膚橋蛋白對(duì)膠原纖維形成的影響和其與細(xì)胞表面受體的結(jié)合有關(guān)。皮膚橋蛋白廣泛存在于細(xì)胞外基質(zhì)中，可以和核心蛋白多糖(decorin)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子13(TGF-P)，I型膠原蛋白等作用，具有細(xì)胞黏附、促進(jìn)膠原纖維形成等功能，在多種和細(xì)胞外基質(zhì)有關(guān)的生理和病理過程中發(fā)揮作用。本發(fā)明具體技術(shù)方案為皮膚橋蛋白在制備檢測(cè)心力衰竭試劑盒中的新用途。其中DPT基因?yàn)楸绢I(lǐng)域技術(shù)人員公知的基因，genbank編號(hào)NM_001937.本發(fā)明根據(jù)上述用途提出了一種用于檢測(cè)心力衰竭的試劑盒，所述試劑盒包含有所述的皮膚橋蛋白特異性結(jié)合的抗體，抗體的制備為現(xiàn)有技術(shù)，本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知，在此4不贅述。上述用于檢測(cè)心力衰竭的試劑盒，還包含有抗原包被的微孔板，酶標(biāo)抗人IgG及其它試劑組成，應(yīng)用雙抗體夾心法ELISA原理檢測(cè)皮膚橋蛋白。試劑盒具體組分如下1.)酶聯(lián)板12X8可拆分的微孔板包被有經(jīng)過純化的人DPT特異性抗體，密封在裝有干燥劑的包裝袋內(nèi)；2.)標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)2瓶，凍干的標(biāo)準(zhǔn)品。含胎牛血清、重組DPT、10mmol/L磷酸緩沖液(pH值7.4±0.1)、0.02%硫酸慶大霉素和0.1%kathonGC防腐劑;3.)樣品稀釋液lX20ml/瓶；4.)檢測(cè)稀釋液A:1X10ml/瓶，生物素標(biāo)記抗體稀釋液；5.)檢測(cè)稀釋液B:1X10ml/瓶，辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液；6.)檢測(cè)溶液A:lX120ul/瓶，生物素標(biāo)記抗體(1:100);7.)檢測(cè)溶液B:1X120ul/瓶，辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(1:100);8.)底物溶液lX10ml/瓶，含有50mmol/L枸櫞酸鹽.磷酸鹽緩沖液(pH值3.53.8)、4%二甲基亞砜(DMS0)、0.03%3，3，，5，5，-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和O.02%H202。注意對(duì)強(qiáng)光照射敏感，應(yīng)避光保存；9.)濃洗滌液lX30ml/瓶，20X濃縮液。稀釋后的洗滌液中含有10mmol/L磷酸緩沖液(pH值7.4±0.2)、0.05%吐溫20和0.1%kathonGC防腐劑；10.)終止液lX10ml/瓶，0.3mmol/L硫酸溶液。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果本發(fā)明提出了一種皮膚橋蛋白的新用途。本發(fā)明經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證DPT可以用于檢測(cè)心力衰竭，本發(fā)明的這種用血清快速準(zhǔn)確檢測(cè)DPT來評(píng)估終末期心臟病的方法具有極大的臨床意義和推廣意義。在ARVC所致心衰組DPT的表達(dá)上調(diào)了3.5倍。本發(fā)明DPT制備的檢測(cè)心力衰竭的試劑盒優(yōu)勢(shì)有敏感度和特異性高，血清稀釋比例高，與現(xiàn)有檢測(cè)心衰的方法相比較，成本低、效率高、使用方便等?，F(xiàn)有技術(shù)也有用血清學(xué)檢測(cè)的，但是敏感性等不甚理術(shù)巨圖1為蘇木素伊紅(HE)染色光鏡所見(左上圖及右上圖)和使用多克隆抗體免疫組化DPT(左下圖及右下圖)；圖2為基因芯片和實(shí)時(shí)RT-PCR檢測(cè)心衰組織DPT相對(duì)于非心衰組織的表達(dá)變化；圖3為ROC曲線分析DPT檢測(cè)心衰的敏感性和特異性；圖4為用試劑盒檢測(cè)終末期心衰組和正常組的血清DPT的表達(dá)。具體實(shí)施例方式本發(fā)明所用實(shí)驗(yàn)樣本和設(shè)備來源心臟標(biāo)本來源5例患致心律失常型右室心臟病(ARVC)心衰終末期接受心臟移植的心臟標(biāo)本和5例非心衰的對(duì)照心臟標(biāo)本。所有終末期心衰的患者都達(dá)到心衰紐約分級(jí)(NYHA)的III-IV，平均射血分?jǐn)?shù)(EF)25.4±7.9%，無(wú)合并其他重要臟器疾病。心衰和非心衰患者的臨床和血流動(dòng)力學(xué)資料見表1。非心衰對(duì)照組是5例由于意外事故死亡而捐獻(xiàn)的心臟。根據(jù)病例記錄，所有非心衰對(duì)照的心臟捐獻(xiàn)個(gè)體在死亡前都是健康的，沒有檢測(cè)他們相應(yīng)的臨床和血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)。所有病人和對(duì)照組對(duì)這個(gè)研究均簽有書面的知情同意書，并且經(jīng)中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院阜外心血管病醫(yī)院倫理學(xué)術(shù)委員會(huì)的同意，符合赫爾辛基宣言中的條約。表1心衰和非心衰患者的臨床和血流動(dòng)力學(xué)資料groupSexAge(years)NYHAClassCIPAPPVRCVPPAWPLVEl.ARVCM54m2.7630/13(18)125910242.ARVCM52IV1.9553/23(33)370416243.ARVCM50m2.3376/40(52)4631525374.ARVCM37IV1.4667/44(52)810928275.ARVCM16IV2.5024/15(8)641515156.NFM527.NFM488.NFM429.NFM3710.NFM23ARVC:致右室心律失常性型心肌病，NF:正常心臟，NYHAClass:紐約心力衰竭分級(jí)，CI:心臟指數(shù)，PAP:肺動(dòng)脈壓力，PVR:肺血管阻力，CVP:中心靜脈壓，PAWP:肺毛細(xì)血管契壓，LVEF:左室射血分?jǐn)?shù)。2.主要儀器來源ScanArrayExpress掃描儀(ParckardBioscience公司)，GenePixPro4.0圖像分析軟件(AxonInstruments公司)，PCR擴(kuò)增儀等。[OO38]實(shí)施例1DPT與心力衰竭關(guān)系實(shí)驗(yàn)致心律失常型右室心臟病(ARVC)目前病因尚不明確，主要特點(diǎn)是由于右心室心肌被纖維脂肪組織取代引起反復(fù)的室性心律失常。我們的5例ARVC的心衰患者主要表現(xiàn)為左心室功能不全，并且病理證實(shí)左室游離壁被纖維脂肪組織取代。每個(gè)標(biāo)本取自心臟移植后心衰心臟的左室游離壁和非心衰捐獻(xiàn)心臟。部分標(biāo)本立即冷凍保存于液氮中，供基因芯片、實(shí)時(shí)PCR分析，其余標(biāo)本固定于10%福爾馬林供病理檢查和免疫組織化學(xué)分析。1.具體步驟1)基因芯片使用基因芯片檢測(cè)ARVC心衰患者和健康對(duì)照組的心肌組織差異表達(dá)的基因。使用C即italBio公司的70-mer寡核苷酸芯片，購(gòu)自QIAGEN公司的35000個(gè)人類基因印于氨基硅烷玻片上。根據(jù)說明書，分別用5iig來自ARVC心衰心臟和非心衰心臟的RNA合成雙鏈cDNA，并用PCR純化試劑盒對(duì)cDNA進(jìn)行純化。熒光染料(Cy5和Cy3)標(biāo)記cDNA，加入到芯片中，42t:過夜，然后用兩個(gè)連續(xù)的洗滌溶液洗滌，根據(jù)說明書分析基因的表達(dá)情況。ScanArrayExpress掃描儀獲取圖片，使用GenePixPro4.0軟件分析，把圖像信號(hào)轉(zhuǎn)化為數(shù)字信號(hào)。依據(jù)LOWESS程序，設(shè)計(jì)了時(shí)間和空間依賴性的陽(yáng)性對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照信號(hào)用來確認(rèn)趨勢(shì)和幫助標(biāo)準(zhǔn)化不同芯片的結(jié)果。2)免疫組織化學(xué)左心室組織用10%福爾馬林固定。使用酒精和二甲苯脫水，石蠟包埋，5m的切片用蘇木素和伊紅染色，來評(píng)估心衰和非心衰組織的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)。切片用4%多聚甲醛固定，0.2X三重氫核X-100透化處理5min，用5%BSA阻斷。切片用DPT兔抗人多克隆抗體(產(chǎn)品目錄編號(hào)10537-1-AP，ProteinTechGroup)室溫孵化1小時(shí)，用PBS緩沖液洗10min。然后切片用IgG過氧化物酶結(jié)合的第二抗體(Sigma，St.Louis，MO，USA)室溫孵化1小時(shí)，用PBS緩沖液洗lOmin，O.5mg/mlDAB和0.05%H202孵化，陰性對(duì)照組只和第二抗體孵化。所有切片用蘇木素染色、脫水、封片，然后光鏡下閱片。3)實(shí)時(shí)RT-PCR:為了證實(shí)基因芯片檢測(cè)的結(jié)果，用提取的RNA對(duì)DPT進(jìn)行了實(shí)時(shí)RT-PCR檢測(cè)。用QIAGEN公司生產(chǎn)的RNeasy試劑盒對(duì)RNA進(jìn)行純化。將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，用于實(shí)時(shí)RT-PCR的DPT特異上游引物序列為CAGCAAGAAGGAAGGTTCTGACA，下游引物序列為GGTTCCCCGAGGCTCTGT。依據(jù)說明書，用SYBRgreenI試劑盒和LighteCycler進(jìn)行實(shí)時(shí)PCT。3磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)作為內(nèi)參與目的基因同時(shí)擴(kuò)增。結(jié)果的分析用3.5版本的LightCycler軟件。分別利用溶解曲線和1.2%的瓊脂糖凝膠電泳對(duì)實(shí)時(shí)PCR的產(chǎn)物進(jìn)行分析，比較心衰組和非心衰組產(chǎn)物量的變化。2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果本發(fā)明第一次涉及DPT在終末期心衰中的表達(dá)情況，我們發(fā)明的這種用血清快速準(zhǔn)確檢測(cè)DPT來評(píng)估終末期心臟病的方法具有極大的臨床意義和推廣意義。1)相比于非心衰組，在ARVC所致心衰組有77個(gè)基因普遍和持續(xù)的表達(dá)改變至少1.5倍，其中有35個(gè)基因表達(dá)上調(diào)、42個(gè)基因表達(dá)下調(diào)。DPT表達(dá)上調(diào)3.5倍，見表2。表2.ARVC所致心衰組表達(dá)上調(diào)的基因-Functionalcategories:功能分類；AccessionNo.:人類基因組編號(hào)；GeneSymbol:基因縮寫；FoldIncrease:增加倍數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>2)免疫組織化學(xué)和光鏡檢查可見ARVC心肌組織不同程度的被纖維脂肪組織取代，這是診斷ARVC的特異性表現(xiàn)之一。在免疫組織化學(xué)中可見ARVC心衰組有大量的DPT免疫反應(yīng)，表現(xiàn)為殘余心肌組織中細(xì)小顆粒樣物，如圖1所示。圖1蘇木素伊紅(HE)染色光鏡所見(上面兩圖)和使用多克隆抗體免疫組化DPT(下面兩圖)。ARVC-HF:致心律失常性右室心肌病所致心衰組；NF:正常非心衰對(duì)照組。3)通過實(shí)時(shí)RT-PCR證實(shí)，DPT的mRNA在ARVC所致的心衰患者心肌中的含量是非心衰心肌中含量的1.59倍，基因芯片的結(jié)果則顯示心衰心肌組織中的含量是非心衰心肌中的3.5倍，如圖2所示，圖2為基因芯片和實(shí)時(shí)RT-PCR檢測(cè)心衰組織DPT相對(duì)于非心衰組織DPT的表達(dá)變化。基因芯片檢測(cè)的結(jié)果顯示心衰組織中DPT的含量是非心衰組織中含量的3.5倍，RT-PCR的結(jié)果顯示心衰組織中DPT的含量是非心衰組織中的1.59倍。這兩種方式檢測(cè)的結(jié)果是一致的，都說明心衰組織比非心衰組織中DPT的含量升高。實(shí)施例2用本發(fā)明試劑盒檢測(cè)終末期心衰組和正常組血清DPT的表達(dá)終末期心衰96例，健康對(duì)照100例，用試劑盒檢測(cè)終末期心衰組和正常組血清DPT的表達(dá)，并用SPSS17.0軟件ROC曲線分析DPT檢測(cè)心力衰竭的敏感性和特異性。1.具體步驟DPT用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)評(píng)估。根據(jù)商用DPT的ELISA試劑盒(產(chǎn)品目錄)說明書進(jìn)行。分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100iU，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ia，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37t:反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。棄去液體，甩干，每孔加檢測(cè)溶液A工作液100ia(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制)，酶標(biāo)板加上覆膜，37。C反應(yīng)60分鐘。棄去孔內(nèi)液體，甩干，PBS洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約350iU/每孔，甩干，每孔加檢測(cè)溶液B工作液100ii1，酶標(biāo)板加上覆膜37t:反應(yīng)60分鐘后棄去孔內(nèi)液體，甩干，PBS洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350iU/每孔，甩干。依序每孔加底物溶液90iU，酶標(biāo)板加上覆膜37t:避光顯色，30分鐘后每孔加終止溶液50ia，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。用酶聯(lián)儀在450nm處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔光密度(OD)值。2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果SPSS軟件中ROC曲線分析可對(duì)不同的檢驗(yàn)方法進(jìn)行科學(xué)評(píng)價(jià)，把方法的敏感性與特異性結(jié)合起來分析，而不僅側(cè)重于其敏感性或特異性，又能表示為該法"曲線下的面積越大其診斷試驗(yàn)效果越好"，既全面又直觀。通過改變?cè)\斷界點(diǎn)，獲得多對(duì)TPR與FPR值，以1-特異性為橫坐標(biāo)，敏感性為縱坐標(biāo)，繪制ROC曲線，計(jì)算與比較ROC曲線下面積，以此反映診斷試驗(yàn)的診斷價(jià)值。SPSS17.0分析DPT檢測(cè)心力衰竭的ROC曲線下面積為0.709。如圖3所示。另如圖4所示，用試劑盒檢測(cè)終末期心衰組和正常組血清DPT的表達(dá)，結(jié)果在終末期心衰組中血清DPT的表達(dá)比正常對(duì)照組高，p<0.Ol，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。綜上所述，由以上實(shí)例可清楚的得知，本發(fā)明所述DPT在制備診斷心力衰竭試劑盒的應(yīng)用具有很好的效果，組織和血清學(xué)檢測(cè)均具有良好的敏感性、特異性和準(zhǔn)確性。具有很好的應(yīng)用價(jià)值和市場(chǎng)前景。9權(quán)利要求皮膚橋蛋白在制備檢測(cè)心力衰竭試劑盒中的用途。2.—種檢測(cè)心力衰竭的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒含有皮膚橋蛋白特異性結(jié)合的抗體。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種用于檢測(cè)心力衰竭的試劑盒，其特征在于，該試劑盒包括純化抗體包被的微孔板，酶標(biāo)抗人IgG及其它試劑。4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的用于檢測(cè)心力衰竭的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒組成為1)酶聯(lián)板包被有經(jīng)過純化的人DPT特異性抗體；2)標(biāo)準(zhǔn)品胎牛血清、重組DPT、10mmol/L磷酸緩沖液、0.02%硫酸慶大霉素和0.11%kathonGC防腐劑；3)生物素標(biāo)記抗體稀釋液；4)辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液；5)生物素標(biāo)記抗體；6)含有50mmol/L枸櫞酸鹽、磷酸鹽緩沖液、4X二甲基亞砜、0.03%3，3'，5，5'-四甲基聯(lián)苯胺和0.02%H202;7)洗滌液:10,1/L磷酸緩沖液、0.05%吐溫20和0.1%kathonGC防腐劑;8)終止液0.3mmol/L硫酸溶液。全文摘要本發(fā)明公開了皮膚橋蛋白在制備檢測(cè)心力衰竭試劑盒中的新用途及檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證DPT可以用于檢測(cè)心力衰竭，本發(fā)明的這種用血清快速準(zhǔn)確檢測(cè)DPT來評(píng)估終末期心臟病的方法具有極大的臨床意義和推廣意義。在ARVC所致心衰組DPT的表達(dá)上調(diào)了3.5倍。本發(fā)明DPT制備的檢測(cè)心力衰竭的試劑盒優(yōu)勢(shì)有敏感度和特異性高，血清稀釋比例高，與現(xiàn)有檢測(cè)心衰的方法相比較，成本低、效率高、使用方便等。文檔編號(hào)G01N33/68GK101782583SQ201010110940公開日2010年7月21日申請(qǐng)日期2010年2月10日優(yōu)先權(quán)日2010年2月10日發(fā)明者劉曉艷,張曉玲,張浩,張芃,胡盛壽,鄭哲,魏英杰,黃潔申請(qǐng)人:中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院阜外心血管病醫(yī)院