專利名稱：散發(fā)性乳腺癌用藥指導(dǎo)遺傳檢測的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，更具體的，本發(fā)明涉及一種散發(fā)性乳腺癌用 藥指導(dǎo)遺傳檢測的試劑盒。
背景技術(shù)：
乳腺癌是乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞在各種內(nèi)外致癌因素的作用下，細(xì)胞失去正常特性而 異常增生，以致超過自我修復(fù)的限度而發(fā)生癌變的疾病，臨床以乳腺腫塊為主要表現(xiàn)。乳腺 癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，有發(fā)病率高、具侵襲性、但病程進(jìn)展緩慢、自然生存期長 等特點(diǎn)。乳腺癌是主要危害婦女身體健康的疾病，男性也可患乳腺癌，但男性患乳腺癌的 機(jī)會比女性要少100倍。乳腺癌的好發(fā)部位以乳房外上占多數(shù)。早期乳腺癌可無任何自覺 癥狀，病變晚期可出現(xiàn)乳腺腫塊，質(zhì)地硬韌，邊界不甚清晰，無包膜感，推之移動(dòng)性小，多數(shù) 無明顯疼痛，乳頭出現(xiàn)回縮、偏位，乳頭溢流黃水或血水，癌性濕疹樣改變。乳腺癌的主要發(fā)生機(jī)制是雌激素促進(jìn)乳腺和子宮內(nèi)膜等增生的機(jī)制，除誘導(dǎo)多種 生長因子表達(dá)增高外，還影響細(xì)胞周期蛋白cyclin D1，從而加速細(xì)胞分裂增殖，誘發(fā)腫瘤。 細(xì)胞周期蛋白(cyclins)作為細(xì)胞周期的正調(diào)控因子，使細(xì)胞由Gl期越過S期，這種作用 尤以cyclin Dl明顯。Cyclin Dl是細(xì)胞周期蛋白成分中被證實(shí)與腫瘤有最直接關(guān)系的癌 基因。其過量表達(dá)可導(dǎo)致Gl期縮短，細(xì)胞分裂速度加快，在腫瘤的發(fā)生機(jī)制中有重要意義。 E2誘導(dǎo)的cyclin Dl表達(dá)中有多個(gè)啟動(dòng)子元件，其近端區(qū)域GC豐富區(qū)有結(jié)合SPl的位點(diǎn)。 在基因組模式下，E2活化的核內(nèi)ER-α與cyclin Dl的SPl相互作用，促進(jìn)了 cyclin Dl的 轉(zhuǎn)錄。而在非基因組模式下，雌激素介導(dǎo)的Src/PIlWO]和cAMP/PKA通路的快速活化也 可以增強(qiáng)cyclin Dl的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。乳腺癌分為家族性乳腺癌和散發(fā)性乳腺癌，散發(fā)性乳腺癌目前主要通過激素藥物 進(jìn)行治療。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種散發(fā)性乳腺癌用藥指導(dǎo)遺傳檢測試劑盒。該試劑盒包括檢測激素藥物用藥靶向位點(diǎn)COMT基因Vall58Met位點(diǎn)、GSTTl基 因I^resent/Null位點(diǎn)多態(tài)性的特異性引物對及特異性熒光探針對、Taq酶、dNTP混合液、 MgCl2溶液、反應(yīng)緩沖液、去離子水。本試劑盒中所述的特異性熒光探針對對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來說是能夠輕易 完成設(shè)計(jì)的，特異性熒光探針對可用常規(guī)的探針合成技術(shù)進(jìn)行合成。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn) 方法，通常按照常規(guī)條件，或按照廠商所建議的條件。
實(shí)施例檢測試劑盒的使用步驟1:DNA模板的抽取用硅膠吸附法抽提口腔上皮細(xì)胞的基因組DNA。步驟2 熒光定量PCR反應(yīng)使用檢測試劑盒中的熒光定量PCR套裝，進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)，反應(yīng)的體系為總 體積10 μ 1，包含濃度為20ng/ μ 1的DNA模板2 μ 1、1 μ 1 IOX熒光定量PCR反應(yīng)緩沖液、 0. 1 μ 1 25mM dNTP 混合液、0. 6 μ 1 25mMMgCl2 溶液、0. 025 μ 1 (5units/ μ 1) Taq DNA 聚合 酶、20 μ M的有義引物和反義引物各0. 225 μ 1、10 μ M的帶VIC熒光探針和帶FAM熒光探針 各0. 25μ 1，去離子水5. 325 μ 1。在PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)條件為50°C、2分鐘，95°C、10分鐘，進(jìn)行60個(gè)循環(huán) 的95°C、30秒，60°C、1分鐘。反應(yīng)結(jié)束后在熒光定量PCR儀上讀取樣品熒光量。步驟3:基因型分析根據(jù)試劑盒使用說明書標(biāo)示的基因分型圖示對SNP位點(diǎn)進(jìn)行基因型分析。熟悉熒光定量PCR技術(shù)的本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠通過辨識熒光定量PCR儀上顯示 的最終樣品熒光量，根據(jù)不同序列探針熒光信號的強(qiáng)弱即可確定所檢測的SNP位點(diǎn)的基因 型。
權(quán)利要求
1. 一種散發(fā)性乳腺癌用藥指導(dǎo)遺傳檢測試劑盒，包括特異性引物對及特異性熒光探針 對，Taq酶，dNTP混合液，MgC12溶液，熒光定量PCR反應(yīng)緩沖液和去離子水，其特征在于所 述的特異性引物對及特異性熒光探針對是針對檢測、COMT基因上Vall58Met位點(diǎn)和GSTTl 基因上I^resent/Null位點(diǎn)多態(tài)性設(shè)計(jì)的。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種散發(fā)性乳腺癌用藥指導(dǎo)遺傳檢測試劑盒，包括檢測、COMT基因上Val158Met位點(diǎn)和GSTT1基因上Present/Null位點(diǎn)多態(tài)性的特異性引物對及特異性熒光探針對、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、反應(yīng)緩沖液、去離子水。
文檔編號G01N21/64GK102108379SQ20091020048
公開日2011年6月29日 申請日期2009年12月23日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月23日
發(fā)明者馮哲民, 賀憲民, 鄒祖燁 申請人:上海主健生物工程有限公司