專利名稱：：抗PRRSV-N-IgY抗體的制備及在檢測(cè)PRRSV中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體涉及抗豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒(porcineproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)核衣殼蛋白(N)蛋白特異性卵黃免疫球蛋白(抗PRRSV-N-IgY抗體)的制備，及其在以間接免疫熒光檢測(cè)(IFA)方法檢測(cè)PRRSV中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：豬繁殖與呼吸綜合征(porcineproductiveandrespiratorysyndrome,PRRS)主要病原豬繁殖與呼吸障石尋綜合征病毒(porcineproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)于1987年首先發(fā)現(xiàn)于美國，在臨床上主要表現(xiàn)流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎、木乃伊、仔豬成活率逐漸下降和育成豬呼吸道癥狀等。給養(yǎng)豬業(yè)帶來了災(zāi)難性的經(jīng)濟(jì)損失。1991年Wensvoort等利用豬的肺泡巨噬細(xì)胞(PAM)首次分離出PRRS病原(Lelystad)，我國郭寶清等(1996)首次報(bào)道從流產(chǎn)胎兒中分離到PRRSV，從而證實(shí)豬繁殖與呼吸綜合征在我國的存在。我國在1995年少數(shù)豬場(chǎng)暴發(fā)該病，數(shù)月之內(nèi)迅速蔓延至全國，目前PRRS已成為我國規(guī)?；i場(chǎng)引起母豬繁殖障礙和豬呼吸道疾病的主要疫病之一。根據(jù)抗原性差異將各地PRRSV分離株分為歐洲型(原型毒株為LV)和北美洲型(原型毒株為VR-2332)，這兩種病毒有相似的生物學(xué)性質(zhì)，但是又有著明顯的血清學(xué)差異性。PRRSV屬于尼多病毒目，動(dòng)脈炎病毒科，動(dòng)脈炎病毒屬，是單股正鏈有囊膜的RNA病毒，其病毒粒子共有7種結(jié)構(gòu)蛋白，復(fù)制酶和聚合酶活性蛋白、核衣殼蛋白(N)、基質(zhì)蛋白(M)、糖基化囊膜蛋白(GP5)和3個(gè)糖基化蛋白(GP2、GP3和GP4)。0RFla和0RFlb位于基因組5'末端，占病毒基因組近3/4部分，編碼具有復(fù)制酶和聚合酶活性的蛋，0RF2-5分別編碼病毒的糖蛋白GP2-5，0RF6編碼膜蛋白(M蛋白)，0RF7編碼保守性的N蛋白。0RF7通常由123(北美洲型)或者128(歐洲型)個(gè)氨基酸組成，是一種小的高度堿性的蛋白質(zhì)，分子量約為14-15kDa。N蛋白是病毒粒子中含量最多的蛋白質(zhì)，免疫原性極強(qiáng)，通常在感染PRRSV后，首先產(chǎn)生的是針對(duì)它的抗體，并且可持續(xù)半年以上。此外，在其N末端有很多堿性氨基酸，這可能有利于與病毒基因組RNA的結(jié)合。N蛋白大部分以二硫鍵連接的同型二聚體的形式存在，并聚合形成二十面體核心結(jié)構(gòu)。N蛋白有5個(gè)抗原表位，其中4個(gè)線性表位1個(gè)構(gòu)象性表位，在其C末端的ll個(gè)氨基酸在構(gòu)象表位的形成中起著關(guān)鍵作用。另外，雖然N蛋白保守性好，但這些表位都不能引起中和抗體的產(chǎn)生。可是此蛋白具有良好的診斷學(xué)意義，現(xiàn)已建立了以重組N蛋白為基礎(chǔ)的ELISA診斷方法，特異性強(qiáng)，重復(fù)性好，成本低廉，應(yīng)用前景十分廣闊。另外，根據(jù)最新研究表明，N蛋白對(duì)于病毒粒子的致病性和與宿主細(xì)胞受體的結(jié)合也有關(guān)系。雞卵黃免疫球蛋白(IgY)作用等同于哺乳動(dòng)物的IgG，但與其他哺乳動(dòng)物制備多克隆抗體相比，特異性IgY抗體制備有著經(jīng)濟(jì)、易操作、產(chǎn)量大等優(yōu)點(diǎn)，目前純化的IgY抗體已廣泛在免疫沉淀反應(yīng)、免疫電泳、ELISA、免疫電鏡、免疫吸附和Western-blot等診斷檢測(cè)技術(shù)和治療上應(yīng)用。本發(fā)明旨在建立抗PRRSV-N蛋白特異性IgY抗體的制備方法及基于抗PRRSV-N-IgY抗體檢測(cè)PRRSV的間接免疫熒光檢測(cè)(IFA)方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是，提供一種抗PRRSV的N蛋白特異性卵黃免疫球蛋白(抗體)的制備方法，并進(jìn)一步提供了基于抗PRRSV-N-IgY抗體的間接免疫熒光檢測(cè)(IFA)方法。為解決技術(shù)問題，本發(fā)明提供的解決技術(shù)方案為提供一種抗PRRSV-N-IgY抗體的制備方法，包括步驟[OOO9](1)抗原制備對(duì)PRRSVN蛋白基因序列PCR擴(kuò)增N基因，并引入EcoRI/HindIII酶切位點(diǎn)，將擴(kuò)增片段克隆至原核表達(dá)載體pET-30a(+)中，轉(zhuǎn)化感受態(tài)E.coliBL21(DE3)pLysS菌株，挑取單菌落經(jīng)PCR和測(cè)序鑒定；陽性克隆以lmmolL—1IPTG誘導(dǎo)4h，提取表達(dá)產(chǎn)物用SDS-PAGE檢測(cè)；Ni-NTAAgarose親和層析柱純化表達(dá)重組蛋白，Westernblot檢測(cè)免疫原性和Bradford法測(cè)定蛋白濃度，純化蛋白作為抗原備用；(2)動(dòng)物免疫以含150g重組蛋白mL乳劑—1的PRRSV-N重組蛋白與弗氏完全佐劑1:1乳劑lmL對(duì)23周齡的海蘭蛋雞進(jìn)行首免；分別間隔2周進(jìn)行二免、三免，免疫原為N重組蛋白與弗氏不完全佐劑1:1乳化后的乳化劑(含250g重組蛋白*mL乳劑—0lmL;收集首免后第8390天雞蛋，4t:保存?zhèn)溆茫?3)特異性卵黃免疫球蛋白的提取參照AkitaEM所述方法進(jìn)行卵黃抗體的粗提將收集的雞蛋以75%酒精消毒，破殼；以卵黃分離器收集卵黃，蒸餾水充分沖洗卵黃表面后在無菌濾紙上滾動(dòng)，除去殘留卵白蛋白，破卵黃膜，加卵黃液9倍體積pH5.2的蒸餾水稀釋，充分?jǐn)噭蚝?t:靜置6h以上，10000g，4。C離心25min，上清液備用;以硫酸銨分級(jí)沉淀精提卵黃抗體水稀釋法粗提的上清液分別以w/v終濃度為50%、33.3%硫酸銨鹽析，4°C靜置過夜；lOOOOg，4°C離心25min，棄上清，沉淀用少量0.01M、pH7.2的PBS緩沖液溶解，并經(jīng)截留分子量100KD的超濾膜除鹽濃縮。本發(fā)明進(jìn)一步提供了利用前述抗PRRSV-N-IgY抗體實(shí)施間接免疫熒光檢測(cè)PRRSV的方法，包括以適合Marc-145細(xì)胞的完全培養(yǎng)液將收獲的Marc-145細(xì)胞稀釋至濃度為105/mL接種96孔板，每孔50iiL，置于5%C02培養(yǎng)箱中37t:培養(yǎng)24h;待細(xì)胞長成單層后，棄去培養(yǎng)液，以按培養(yǎng)液1/10體積接種PRRSV病毒液；PRRSV病毒液滴度為1055—6°TCID5。/mL，同時(shí)設(shè)不接毒的細(xì)胞孔作為空白對(duì)照；培養(yǎng)70h后，停止培養(yǎng)；棄去培養(yǎng)液，以0.02M、pH7.2磷酸緩沖液+O.05%Tween-20的PBST洗滌3次，每次3min，用4。C預(yù)冷甲醇固定細(xì)胞，每孔150iil，-2(TC下放置30min;同上洗滌后；加入經(jīng)含5%w/v的脫脂奶粉PBST50倍稀釋的抗PRRSV-N-IgY抗體，每孔50iU，37t:作用lh;同上洗滌后，分別加入經(jīng)含5%脫脂奶粉PBST80倍稀釋的FITC-羊抗雞IgY抗體，每孔50iU，37t:作用lh;同上洗滌后，用含50%甘油的PBS封底，并置于熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。目前，人們相繼制備了針對(duì)PRRSVN蛋白的兔源、鼠源等的多克隆抗體或單克隆抗體，但未見特異性抗PRRSV-N-IgY抗體制備。本發(fā)明的有益效果在于，本發(fā)明以重組PRRSV-N蛋白為抗原免疫蛋雞獲得了特異性的抗PRRSV-N-IgY抗體，制備的特異性抗PRRSV-N-IgY抗體可用于PRRSV間接免疫熒光(IFA)檢測(cè)。與兔源、鼠源等動(dòng)物的抗體相比，IgY具有物理性質(zhì)穩(wěn)定，具有不激活哺乳動(dòng)物補(bǔ)體，不結(jié)合哺乳動(dòng)物Fc受體或細(xì)菌，不與類風(fēng)濕因子(RF)發(fā)生非特異反應(yīng)等，可明顯降低假陽性出現(xiàn)率等優(yōu)點(diǎn)。圖1為N基因陽性克隆菌液PCR鑒定；圖中M為DNAMarker;1為陽性克隆PCR鑒定；圖2為SDS-PAGE(A)和Westernblot(B)分析原核表達(dá)重組蛋白6His_N;圖中Ml為非預(yù)染蛋白分子量Marker;1、5為空質(zhì)粒誘導(dǎo)的表達(dá)產(chǎn)物(陰性對(duì)照)；2為重組蛋白6His-N;3、4為純化后的N蛋白；M2為預(yù)染蛋白分子量Marker;圖3為IgY純化后SDS-PAGE結(jié)果；圖中M為非預(yù)染蛋白分子量marker;2為水稀釋法提取的IgY;3為硫酸銨法提取的IgY;圖4為抗N蛋白IgYWesternBlotting分析；圖中M為蛋白分子量marker;1為PRRSV感染細(xì)胞裂解物；2為純化后的重組蛋白6His-N;圖5為抗N蛋白IgY抗體的消長規(guī)律；圖中"I"為首免和再免時(shí)間圖6為抗PRRSV-N-IgY抗體檢測(cè)PRRSV病毒感染的Marc-145細(xì)胞的間接免疫熒光結(jié)果；圖中A為感染病毒的anti-PRRSVNIgY檢測(cè)；B為感染病毒的陰性IgY檢測(cè)；C為未感染病毒的anti-PRRSVNIgY檢測(cè)。"一"表示核仁產(chǎn)生特異性的熒光。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施對(duì)本發(fā)明的抗體劑制備技術(shù)和應(yīng)用作進(jìn)一步描述。1材料與方法1.1抗原制備參考《分子克隆實(shí)驗(yàn)指南》和GenBank上發(fā)表的PRRSVN蛋白基因序列(GenBank登錄號(hào)FJ175688)，PCR擴(kuò)增N基因，并引入EcoRI/HindIII酶切位點(diǎn)，將擴(kuò)增片段克隆至原核表達(dá)載體pET-30a(+)中，轉(zhuǎn)化感受態(tài)E.coliBL21(DE3)pLysS菌株，挑取單菌落經(jīng)PCR和測(cè)序鑒定；陽性克隆以lmmolL—'IPTG誘導(dǎo)4h，提取表達(dá)產(chǎn)物用SDS-PAGE檢測(cè)；Ni-NTAAgarose親和層析柱純化表達(dá)重組蛋白，Westernblot檢測(cè)免疫原性和Bradford法測(cè)定蛋白濃度，純化蛋白作為抗原備用。1.2試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)雞為23周齡的海蘭蛋雞。1.3免疫方法首免給予PRRSV-N重組蛋白與弗氏完全佐劑1:1乳化后的乳化劑(含150yg重組蛋白mL乳劑—OlmL;分別間隔2周進(jìn)行二免、三免，免疫原為N重組蛋白與弗氏不完全佐劑1:1乳化后的乳化劑(含250g重組蛋白mL乳劑—0lmL;收集首免后第8390天雞蛋，4t:保存?zhèn)溆茫?.4卵黃抗體的制備參照AkitaEM所述方法進(jìn)行卵黃抗體的粗提，將收集的雞蛋以75%酒精消毒，破殼；以卵黃分離器收集卵黃，蒸餾水充分沖洗卵黃表面后在無菌濾紙上滾動(dòng)，除去殘留卵白蛋白，破卵黃膜，加卵黃液9倍體積的蒸餾水(pH5.2)稀釋，充分?jǐn)噭蚝?t:靜置6h以上，10000g，4。C離心25min，上清液備用。以硫酸銨分級(jí)沉淀精提卵黃抗體。方法簡述如下水稀釋法粗提的上清液分別以終濃度為50%、33.3%(w/v)硫酸銨鹽析，4t:靜置過夜；10000g，4t:離心25min，棄上清，沉淀用少量PBS緩沖液(0.OIM，pH7.2)溶解，并經(jīng)截留分子量100KD的超濾膜除鹽濃縮。在Mini-PROTEANIICell(Bio-RadLaboratorie)上進(jìn)行SDS-PAGE電泳檢測(cè)蛋白純度。1.5免疫印跡(West-Blot)分析卵黃抗體的反應(yīng)性將SDS-PAGE電泳凝膠分離的蛋白轉(zhuǎn)移至NC膜，用含5%脫脂奶粉的TBST(Tris緩沖液、0.05%吐溫20)封閉，以提純的卵黃抗體為一抗，HRP標(biāo)記的兔抗雞IgY為二抗(Promega公司)，4-氯+萘酚(4-CN)顯色并拍照。1.6ELISA檢測(cè)用PRRSV感染Marc-145細(xì)胞，48h內(nèi)出現(xiàn)細(xì)胞病變且細(xì)胞尚未脫落時(shí)，刮下單層細(xì)胞，懸浮于pH7.2的PBS緩沖液中，反復(fù)凍融3次，1000g離心10min去細(xì)胞碎片，保留上清液，-8(TC保存?zhèn)溆?。利用ELISA測(cè)定PRRS抗體進(jìn)行IgY抗體變化規(guī)律檢測(cè)。簡述如下將收獲保存的病毒上清液用0.4%甲醛滅活并用碳酸鹽緩沖液(CBS，pH9.6)稀釋后包被96孔酶標(biāo)板(Coming,美國)，37°C溫育2h后4°C過夜，PBST洗滌三次，含5%脫脂奶粉的PBST(O.02molL—1磷酸緩沖鹽溶液、0.05%吐溫20)200yL封閉2h后，PBST洗滌三次，加入l:100稀釋的水稀釋法提取的IgY(以免疫前雞蛋為陰性對(duì)照)100iiL，37t:孵育lh，PBST洗滌三次，加入1:8000的HRP標(biāo)記兔抗雞IgY100yL37。C溫育lh，PBST洗滌三次，3，3'，5，5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)顯色100yL，2MH2S04終止后，立即用酶標(biāo)儀((美國，Bio-Tek，Elx800)測(cè)定吸光值(OD45。nm)。以免疫雞IgYOD45。nm值(P)與陰性IgYOD45。nm值(<0.20)(N)之比大于2.1作為抗體陽性的判定閾值。1.7間接免疫熒光(IFA)以含4%新生牛血清的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液將Marc-145細(xì)胞稀釋至濃度為105/mL接種96孔板，每孔50L。置于5%C02培養(yǎng)箱中37t:培養(yǎng)24h;待細(xì)胞長成單層后，棄去培養(yǎng)液，以按培養(yǎng)液1/10體積接種病毒(病毒液滴度為1055—6°TCID5。/mL)，設(shè)不接毒的細(xì)胞孔作為空白對(duì)照；培養(yǎng)70h后，停止培養(yǎng)；棄去培養(yǎng)液，PBST洗滌3次，每次3min，用4。C預(yù)冷甲醇固定細(xì)胞，每孔150iiL，-2(TC下放置30min;洗滌同上，抗PRRSV全病毒和抗N蛋白IgY抗體的純化產(chǎn)物分別加入以含5%脫脂奶粉PBST按l:50稀釋，陰性IgY抗體作為陰性對(duì)照，每孔50iiL，37t:作用lh;洗滌同上，分別加入含5^脫脂奶粉PBST按l:80稀釋的FITC-羊抗雞IgG抗體，每孔50iiL，37t:作用lh;洗滌同上，用含50%甘油的PBS封底，并置于熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。2結(jié)果2.1N重組蛋白表達(dá)和純化圖1顯示pET30a-N陽性克隆PCR結(jié)果，并對(duì)其測(cè)序鑒定分析后，全長387bp的N基因與載體上的His標(biāo)簽融合，且閱讀框正確。含重組質(zhì)粒pET30a-N的E.coliBL21(DE3)誘導(dǎo)表達(dá)的SDS-PAGE結(jié)果(圖2，A)，融合蛋白6His_N相對(duì)分子量約為20.6kDa，與理論推測(cè)結(jié)果一致，表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)Ni-NTAAgarose親和層析后純度較高。經(jīng)Bradford法測(cè)定濃度，推算出每升重組菌可純化得到目的蛋白60.2mg.。Westernblot分析顯示，在轉(zhuǎn)印膜目的蛋白處出現(xiàn)特異性反應(yīng)條帶，表明融合表達(dá)產(chǎn)物對(duì)豬PRRSV陽性血清具有良好的免疫反應(yīng)性(圖2，B)。2.2抗N蛋白特異性卵黃抗體提取和純化經(jīng)15%SDS-PAGE電泳顯示(圖3)，硫酸銨分級(jí)沉淀提取的IgY抗體純度較高，幾乎不含雜蛋白，可見Mr為67KDa重鏈和27KDa輕鏈。2.3WesternBlotting檢測(cè)圖4顯示抗N蛋白IgYWesternblotting分析結(jié)果，融合表達(dá)產(chǎn)物與制備的卵黃抗體具有良好的免疫反應(yīng)性，且以PRRSV感染Marc-145后的細(xì)胞裂解物對(duì)照，在14kDa左右出現(xiàn)特異性的N蛋白條帶。2.4抗N蛋白IgY抗體效價(jià)及其消長規(guī)律抗N蛋白IgY抗體消長規(guī)律ELISA檢測(cè)結(jié)果見圖5。三次免疫后，抗N蛋白IgY抗體的P/N值呈明顯的增長趨勢(shì)；首免后6周可檢測(cè)到抗體(P/N=2.44)，83d時(shí)達(dá)到最高(P/N=5.63)，此時(shí)滴度達(dá)到1:640(表l)，至120d試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，P/N值仍達(dá)3.57。為此收集免疫后83-90d雞蛋提取純化特異性抗體后用于IFA檢測(cè)的研究。表1第83天免疫雞卵黃中特異性IgY抗體滴度<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>2.5特異性抗PRRSV-N-IgY抗體IFA檢測(cè)PRRSV圖6為抗PRRSV-N-IgY抗體檢測(cè)PRRSV病毒感染的Marc-145細(xì)胞的間接免疫熒光結(jié)果。以5%脫脂奶粉作抗體稀釋液和封閉液時(shí)效果較好，顯著降低了反應(yīng)背景，抗PRRSV-N-IgY能夠?qū)RRSV感染的細(xì)胞產(chǎn)生特異性的核仁染色，陰性IgY抗體對(duì)照及空細(xì)胞對(duì)照均未出現(xiàn)特異性熒光。權(quán)利要求一種抗PRRSV-N-IgY抗體的制備方法，包括步驟(1)抗原制備對(duì)PRRSVN蛋白基因序列PCR擴(kuò)增N基因，并引入EcoRI/HindIII酶切位點(diǎn)，將擴(kuò)增片段克隆至原核表達(dá)載體pET-30a(+)中，轉(zhuǎn)化感受態(tài)E.coliBL21(DE3)pLysS菌株，挑取單菌落經(jīng)PCR和測(cè)序鑒定；陽性克隆以1mmol·L-1IPTG誘導(dǎo)4h，提取表達(dá)產(chǎn)物用SDS-PAGE檢測(cè)；Ni-NTAAgarose親和層析柱純化表達(dá)重組蛋白，Westernblot檢測(cè)免疫原性和Bradford法測(cè)定蛋白濃度，純化蛋白作為抗原備用；(2)動(dòng)物免疫以含150μg重組蛋白·mL乳劑-1的PRRSV-N重組蛋白與弗氏完全佐劑1∶1乳劑1mL對(duì)23周齡的海蘭蛋雞進(jìn)行首免；分別間隔2周進(jìn)行二免、三免，免疫原為N重組蛋白與弗氏不完全佐劑1∶1乳化后的乳化劑1mL，含250μg重組蛋白·mL乳劑-1；收集首免后第83～90天雞蛋，4℃保存?zhèn)溆茫?3)特異性卵黃免疫球蛋白的提取參照AkitaEM所述方法進(jìn)行卵黃抗體的粗提將收集的雞蛋以75％酒精消毒，破殼；以卵黃分離器收集卵黃，蒸餾水充分沖洗卵黃表面后在無菌濾紙上滾動(dòng)，除去殘留卵白蛋白，破卵黃膜，加卵黃液9倍體積pH5.2的蒸餾水稀釋，充分?jǐn)噭蚝?℃靜置6h以上，10000g，4℃離心25min，上清液備用；以硫酸銨分級(jí)沉淀精提卵黃抗體水稀釋法粗提的上清液分別以w/v終濃度為50％、33.3％硫酸銨鹽析，4℃靜置過夜；10000g，4℃離心25min，棄上清，沉淀用少量0.01M、pH7.2的PBS緩沖液溶解，并經(jīng)截留分子量100KDa的超濾膜除鹽濃縮。2.—種利用權(quán)利要求l中所述抗PRRSV-N-IgY抗體實(shí)施間接免疫熒光檢測(cè)PRRSV的方法，包括以適合Marc-145細(xì)胞的完全培養(yǎng)液將收獲的Marc_145細(xì)胞稀釋至濃度為105/mL接種96孔板，每孔50iiL，置于5%C02培養(yǎng)箱中37t:培養(yǎng)24h;待細(xì)胞長成單層后，棄去培養(yǎng)液，以按培養(yǎng)液1/10體積接種PRRSV病毒液；PRRSV病毒液滴度為1058—6°TCID5。/mL，同時(shí)設(shè)不接毒的細(xì)胞孔作為空白對(duì)照；培養(yǎng)70h后，停止培養(yǎng)；棄去培養(yǎng)液，以0.02M、pH7.2磷酸緩沖液+0.05%Tween-20的PBST洗滌3次，每次3min，用4。C預(yù)冷甲醇固定細(xì)胞，每孔150iil，-2(TC下放置30min;同上洗滌后；加入經(jīng)含5%w/v的脫脂奶粉PBST50倍稀釋的抗PRRSV-N-IgY抗體，每孔50ii1，37t:作用lh;同上洗滌后，分別加入經(jīng)含5%脫脂奶粉PBSTSO倍稀釋的FITC-羊抗雞IgY抗體，每孔50iU，37t:作用lh;同上洗滌后，用含50%甘油的PBS封底，并置于熒光顯微鏡下觀察結(jié)果。全文摘要本發(fā)明涉及病毒抗體研究，旨在提供一種抗PRRSV-N-IgY抗體的制備及在檢測(cè)PRRSV中的應(yīng)用。該抗體的制備包括對(duì)PRRSVN蛋白基因序列PCR擴(kuò)增N基因從而進(jìn)行抗原制備、動(dòng)物免疫、特異性卵黃免疫球蛋白的提取的步驟。本發(fā)明以重組PRRSV-N蛋白為抗原免疫蛋雞獲得了特異性的抗PRRSV-N-IgY抗體，制備的特異性抗PRRSV-N-IgY抗體可用于PRRSV間接免疫熒光(IFA)檢測(cè)。與兔源、鼠源等動(dòng)物的抗體相比，IgY具有物理性質(zhì)穩(wěn)定，具有不激活哺乳動(dòng)物補(bǔ)體，不結(jié)合哺乳動(dòng)物Fc受體或細(xì)菌，不與類風(fēng)濕因子(RF)發(fā)生非特異反應(yīng)等，可明顯降低假陽性出現(xiàn)率等優(yōu)點(diǎn)。文檔編號(hào)G01N33/569GK101717446SQ20091015389公開日2010年6月2日申請(qǐng)日期2009年11月17日優(yōu)先權(quán)日2009年11月17日發(fā)明者方維煥,李肖梁申請(qǐng)人:浙江大學(xué)