專利名稱：一種毛細(xì)管電泳-化學(xué)發(fā)光檢測(cè)裝置的研制的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于新型分析儀器的研制領(lǐng)域，涉及到毛細(xì)管電泳分離和化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)的聯(lián)用 儀器的設(shè)計(jì)、構(gòu)建以及調(diào)試方面的工作。
背景技術(shù)：
毛細(xì)管電泳是20世紀(jì)80年代問世的一種新型高效分離技術(shù)，是經(jīng)典電泳技術(shù)與現(xiàn)代微 柱分離相結(jié)合的產(chǎn)物。它的出現(xiàn)受到了極大的關(guān)注，已成為分析化學(xué)最為活躍的研究方向之 一，被廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)、藥物、DNA、環(huán)境污染物等的分離分析。就毛細(xì)管電泳而言，極 細(xì)的毛細(xì)管內(nèi)徑帶來了很高的分離效能，同時(shí)也給樣品組分的檢測(cè)帶來困難。如何增加檢測(cè) 器的靈敏度，同時(shí)又不造成明顯的區(qū)帶展寬， 一直是這項(xiàng)技術(shù)發(fā)展中的一個(gè)至關(guān)重要的問題。
化學(xué)發(fā)光是產(chǎn)生于化學(xué)反應(yīng)過程中的一種光輻射。在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中，受化學(xué)能的激發(fā)， 反應(yīng)體系中的某部分形成激發(fā)態(tài)，激發(fā)態(tài)分子回到基態(tài)時(shí)便產(chǎn)生一定波長(zhǎng)的光?；瘜W(xué)發(fā)光分 析法就是借助化學(xué)發(fā)光現(xiàn)象而建立起來的一種分析方法，此方法不需要復(fù)雜的儀器，不需要 光源和色散裝置，沒有光學(xué)分析方法中常見的散射光和雜散光的干擾，因而具有簡(jiǎn)單快速、 靈敏度高、線性范圍寬的優(yōu)點(diǎn)。但是該方法選擇性較差，在一定程度上限制了其在實(shí)際分析 中的應(yīng)用。
毛細(xì)管電泳分離技術(shù)與化學(xué)發(fā)光檢測(cè)技術(shù)的聯(lián)用，能夠兼?zhèn)淝罢叩母叻蛛x效率與后者的 高檢測(cè)靈敏度的優(yōu)點(diǎn)，可以直接用于復(fù)雜樣品中微量組份的分離和測(cè)定，是一種比較理想的 分析方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明擬在現(xiàn)有文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)，研制一套毛細(xì)管電泳-化學(xué)發(fā)光檢測(cè)裝置，并對(duì) 其進(jìn)行調(diào)試，使其能夠滿足科研工作的需要。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明主要采取了以下的技術(shù)措施，其步驟如下
(1) 儀器所需部件毛細(xì)管電泳高壓電源(土30kV/0.3mA);彈性石英毛細(xì)管；聚四氟乙 烯四通接口；光電倍增管，管座型高壓電源(帶有前置信號(hào)放大器)；微量注射泵；暗箱；色 譜數(shù)據(jù)處理工作站計(jì)算機(jī)。
(2) 毛細(xì)管電泳-化學(xué)發(fā)光檢測(cè)裝置的構(gòu)建高壓電源提供分離和進(jìn)樣電壓。分離毛細(xì)管 長(zhǎng)60cm，內(nèi)徑50/tm，其前端4 cm長(zhǎng)燒去聚亞酰胺涂層、用氫氟酸刻蝕約lh后，插入內(nèi) 徑530^m的反應(yīng)毛細(xì)管中。反應(yīng)毛細(xì)管位于光電倍增管檢測(cè)窗前的一段燒去聚亞酰胺涂層 作為檢測(cè)窗，試劑管引入的發(fā)光試劑在反應(yīng)毛細(xì)管中形成環(huán)繞電泳毛細(xì)管的一段液流套，發(fā) 光反應(yīng)在電泳毛細(xì)管出口發(fā)生。毛細(xì)管由聚四氟乙烯四通接口固定?；瘜W(xué)發(fā)光試劑由兩根內(nèi) 徑320Aim的試劑毛細(xì)管加入四通接口。分離、檢測(cè)裝置封閉在暗箱中以降低噪音。產(chǎn)生的化學(xué)發(fā)光信號(hào)由色譜工作站采集、記錄，色譜工作站通過計(jì)算機(jī)控制。
(3)所研制毛細(xì)管電泳-化學(xué)發(fā)光檢測(cè)裝置的調(diào)試三(2， 2，-聯(lián)吡啶)釕(11) [Ru(bipy) +]屬 于無機(jī)化合物類化學(xué)發(fā)光試劑，其結(jié)構(gòu)如下所示
在H2S04介質(zhì)中，以Ce(IV)為氧化劑，草斷H2C204)能夠顯著增強(qiáng)Ru(bipy),的化學(xué)發(fā)光， 基于此可進(jìn)行草酸的靈敏檢測(cè)。本發(fā)明用上述的Ru(bipy)嚴(yán)-H2C2(VCe(IV)化學(xué)發(fā)光體系對(duì)所
構(gòu)建的裝置進(jìn)行了調(diào)試。在初步優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下，實(shí)現(xiàn)了 H2C204的毛細(xì)管電泳分離-化學(xué)
發(fā)光檢測(cè)。結(jié)果表明，本發(fā)明所研制的檢測(cè)裝置基本能夠滿足科研工作的要求。


圖1為應(yīng)用本發(fā)明所研制的裝置對(duì)草酸進(jìn)行三次分離的電泳圖譜。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明所研制的毛細(xì)管電泳-化學(xué)發(fā)光檢測(cè)裝置主要有下列兩個(gè)方面的技術(shù)要點(diǎn)
1. 采用自行加工的聚四氟乙烯四通接口固定毛細(xì)管，將接地電極插入第四個(gè)口，接口方式為 柱后套管式。電極接口的螺絲口盡量密封，以減少擴(kuò)散作用對(duì)重現(xiàn)性的影響。柱后的廢液 由一根玻璃棒導(dǎo)入廢液杯。這種接口方式節(jié)約電泳緩沖溶液，給操作帶來了很大的便利。
2. 采用微量注射泵將柱后化學(xué)發(fā)光試劑推進(jìn)接口。該注射泵可以連續(xù)、無脈沖的輸送微量溶 液，這就給操作帶來了很大的方便。發(fā)光試劑的流速對(duì)于毛細(xì)管電泳-化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法是 一個(gè)十分重要的實(shí)驗(yàn)參數(shù)，微量注射泵的使用有利于選擇合適的試劑流速，而且避免了將 氣泡引入柱后，使實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性有了很大的提高。
用化(1^力32+-112(:204《6(^)化學(xué)發(fā)光體系對(duì)所研制的裝置進(jìn)行調(diào)試
采用20 mmol L" pH值7.0的KH2P04電泳緩沖溶液，加入5 mmol L"溴代十六烷基吡 啶(CPB)以反轉(zhuǎn)電滲流，分離電壓16kV,進(jìn)樣電壓10kV，進(jìn)樣10 s，進(jìn)行l(wèi)(T3mol L"H2C204 的毛細(xì)管電泳分離?；瘜W(xué)發(fā)光反應(yīng)由1 mmol L"Ru(bipy)32—溶液和5 mmol L" Ce(IV)溶液 (含0.1 mol I/1 H2S04)產(chǎn)生，試劑流速20ML'min"; 112(:204增強(qiáng)該反應(yīng)的發(fā)光，加入Tween 40以敏化發(fā)光。每次使用前，分離毛細(xì)管依次用二次水、電泳緩沖溶液沖洗15 min，再用電 泳緩沖溶液平衡2h;樣品測(cè)定間隙，用電泳緩沖溶液沖洗5min;用來加入Ce(IV)溶液的試 劑毛細(xì)管及反應(yīng)毛細(xì)管用0.5 mol L'1 H2S04溶液沖洗10 min。
權(quán)利要求
1.本發(fā)明所研制的毛細(xì)管電泳-化學(xué)發(fā)光檢測(cè)裝置主要有下列兩個(gè)方面的技術(shù)要點(diǎn)(a)采用自行加工的聚四氟乙烯四通接口固定毛細(xì)管，將接地電極插入第四個(gè)口，接口方式為柱后套管式。電極接口的螺絲口盡量密封，以減少擴(kuò)散作用對(duì)重現(xiàn)性的影響。柱后的廢液由一根玻璃棒導(dǎo)入廢液杯。這種接口方式節(jié)約電泳緩沖溶液，給操作帶來了很大的便利。(b)采用微量注射泵將柱后化學(xué)發(fā)光試劑推進(jìn)接口。該注射泵可以連續(xù)、無脈沖的輸送微量溶液，這就給操作帶來了很大的方便。發(fā)光試劑的流速對(duì)于毛細(xì)管電泳-化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法是一個(gè)十分重要的實(shí)驗(yàn)參數(shù)，微量注射泵的使用有利于選擇合適的試劑流速，而且避免了將氣泡引入柱后，使實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性有了很大的提高。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的毛細(xì)管電泳-化學(xué)發(fā)光檢測(cè)裝置，其特征在于采用自行加工的聚四氟乙烯四通接口固定毛細(xì)管。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的毛細(xì)管電泳-化學(xué)發(fā)光檢測(cè)裝置，其特征在于采用微量注射 泵將柱后化學(xué)發(fā)光試劑推進(jìn)接口 。
全文摘要
本發(fā)明屬于新型分析儀器的研制領(lǐng)域，涉及到毛細(xì)管電泳分離和化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)的聯(lián)用儀器的設(shè)計(jì)、構(gòu)建以及調(diào)試方面的工作。本發(fā)明所研制的毛細(xì)管電泳-化學(xué)發(fā)光檢測(cè)裝置主要有下列兩個(gè)方面的技術(shù)要點(diǎn)1.采用自行加工的聚四氟乙烯四通接口固定毛細(xì)管，接口方式為柱后套管式；2.采用微量注射泵將柱后化學(xué)發(fā)光試劑推進(jìn)接口。該裝置操作便利、重現(xiàn)性好，采用三(2，2’-聯(lián)吡啶)釕(II)[Ru(bipy)₃²⁺]-H₂C₂O₄-Ce(IV)化學(xué)發(fā)光體系對(duì)其進(jìn)行了調(diào)試。在初步優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下，實(shí)現(xiàn)了H₂C₂O₄的毛細(xì)管電泳分離-化學(xué)發(fā)光檢測(cè)。結(jié)果表明，本發(fā)明所研制的檢測(cè)裝置基本能夠滿足科研工作的要求。
文檔編號(hào)G01N27/447GK101614694SQ20081015010
公開日2009年12月30日 申請(qǐng)日期2008年6月23日 優(yōu)先權(quán)日2008年6月23日
發(fā)明者樊丙安, 娟 郗, 魏春龍 申請(qǐng)人:郗 娟;樊丙安;魏春龍