專利名稱：：蜂地麻滴眼液質(zhì)量控制方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及蜂地麻滴眼液質(zhì)量控制方法，屬于制藥領域。
背景技術：
：電弧性眼外傷，如電光性眼炎、角膜上皮損傷是眼科常見病、多發(fā)病，平時常見，戰(zhàn)時多見，嚴重影響人們的生活質(zhì)量和部隊戰(zhàn)斗力，治療不及時可成為感染誘發(fā)因素。蜂地麻滴眼液為中國人民解放軍總醫(yī)院特色制劑，為戰(zhàn)傷和非戰(zhàn)時電弧性眼外傷的救治提供方便、安全、經(jīng)濟、有特效的治療藥物。該制劑以蜂蜜、鹽酸丁卡因和鹽酸麻黃堿為主要成分，為淡棕黃色粘稠澄明液體，氣芳香，味甜，微苦，有麻舌感。該制劑制備方法簡單，價格低廉，不良反應小，療效顯著。處方和制備工藝參見《復方蜂蜜滴眼液的制備和質(zhì)量控制》(徐紅等，中國人民解放軍總醫(yī)院，中國醫(yī)院藥學雜志2006年第26巻第4期)。蜂蜜中微量蜜蜂毒素作用于末梢神經(jīng)，刺激血液循環(huán)和物質(zhì)代謝，保護角膜上皮，促使?jié)冇希苎杆倬徑馓弁?，蜂蜜主要成分含果糖、葡萄糖，并含有蛋白質(zhì)、酶、有機酸、多種維生素和礦物質(zhì)，具有滲透性、保水性、吸濕性，且因其高滲性、酸性和過氧化氫、溶菌酶等因子的作用而具有顯著的抗菌作用，可防止藥品的微生物生長或污染；丁卡因?qū)俾樽韯哂衅鹦Э?、無局部刺激和血管擴張作用，對粘膜穿透力強，可止痛；麻黃堿收縮局部毛細血管，減輕充血、水腫，相互配伍起協(xié)同作用?，F(xiàn)有技術只能實現(xiàn)對該制劑進行定性質(zhì)量控制，尚無定量測定方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種定量和定性測定蜂地麻滴眼液中有效成分的質(zhì)量控制方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術方案蜂地麻滴眼液質(zhì)量控制方法，采用高效液相色譜法測定含量用十八垸基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.0為流動相A，0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.0為流動相B，進行梯度洗脫，柱溫4(TC，流速為1.0ml/min，檢測波長為218nm;其中流動相A含體積比為90:10的三乙胺-乙腈混合液，三乙胺的濃度為0.2%(ml/ml);流動相B含體積比為70:30的三乙胺-乙腈混合液，三乙胺的濃度為0.2%(ml/ml);梯度程序為流動相A在0-30分鐘內(nèi)由95%降至70%，流動相B在0-30分鐘內(nèi)由5%升至30%;流動相A和B的體積比在此后8分鐘保持不變；流動相A在第38-39分鐘內(nèi)由70%升至95%，流動相B在第38-39分鐘內(nèi)由30%降至5%;流動相A和B的體積比在此后保持不變；(參見表l)取供試品適量，加水制成每lml含鹽酸丁卡因0.25mg的溶液，用自動進樣器量取10ul注入色譜儀，記錄色譜圖；另取對照品鹽酸丁卡因和鹽酸麻黃堿適量，分別精密稱定，各加水溶解并制成每lml含0.25mg的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算；本品含鹽酸麻黃堿和鹽酸丁卡因應為標示量的90%~110%。所述蜂地麻滴眼液質(zhì)量控制方法，還包括特征鑒別和pH值檢査(一)特征鑒別(1)鹽酸丁卡因鑒別取8ml蜂地麻滴眼液供試品，加水42ml，搖勻；加碳酸鈉溶液(無水碳酸鈉10.6g，加水溶解并稀釋成100ml)5ml，搖勻，用乙醚振搖提取2次，每次50ml，合并乙醚提取液，用水20ml洗滌l次，分取乙醚層，加鹽酸乙醇溶液l-20ml，搖勻，水浴蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取鹽酸丁卡因?qū)φ掌?，加甲醇制成?ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5pl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-濃氨試液(30:5:0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(2)鹽酸麻黃堿鑒別取鹽酸麻黃堿對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；采用照薄層色譜法，吸取對照品溶液及步驟(1)中的供試品溶液各5|al，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-濃氨試液(30:5:0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，于80。C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；(二)pH值檢查應為3.04.5。本發(fā)明方法簡單，克服了現(xiàn)有技術的不足。由于本制劑含大量蜂蜜，樣品直接堿化用有機溶劑提取時乳化嚴重，不易分層，故本法采用將樣品稀釋后，再堿化，用乙醚將生物堿提取，水洗除去水溶性雜質(zhì)，加鹽酸乙醇使生物堿成鹽酸鹽，再用薄層分離鑒別，可檢出鹽酸丁卡因橙紅色特征斑點，但鹽酸麻黃堿斑點顯色不明顯。通過陰性對照試驗及三批樣品的實驗觀察，表明本法成立，因鹽酸丁卡因為方中主要有效成分，故將其鑒別試驗收入質(zhì)量控制方法。由于鹽酸麻黃堿在鑒別鹽酸丁卡因的系統(tǒng)中斑點顯色不明顯，故采用茚三酮試液為顯色劑，可檢出鹽酸麻黃堿紫紅色特征斑點。但此條件下，鹽酸丁卡因斑點顯色不明顯，因此采取分別鑒別的方法。通過陰性對照試驗及三批樣品的實驗觀察，表明本法成立，因鹽酸麻黃堿為方中主要有效成分，故將其鑒別試驗收入質(zhì)量控制方法。pH值測定為常規(guī)方法。經(jīng)對本制劑多批次測定，pH值均在3.04.5范圍內(nèi)，故確定本品pH值為3.04.5。發(fā)明人曾試對方中主要成分鹽酸丁卡因和鹽酸麻黃堿進行含量測定，樣品稀釋、堿化后，用有機溶劑提取，用高效液相色譜法進行定量，但回收率低于卯％;后將樣品稀釋后用反相高效液相梯度洗脫法進行定量，試驗表明方法簡便可行，重現(xiàn)性良好。因鹽酸丁卡因和鹽酸麻黃堿為方中主要有效成分，故將其含量測定列入質(zhì)量控制方法。本發(fā)明的優(yōu)點在于克服了蜂蜜造成的乳化現(xiàn)象，不影響所鑒定物質(zhì)的顯色；能夠準確定量，并能同時測定兩個主要成分的含量；測定中運用梯度洗脫法，所測物質(zhì)可分離完全，并縮短測定時間、節(jié)省流動相；操作簡便，重現(xiàn)性好。下面結合附圖和較佳實施方式對本發(fā)明做進一步說明，以使公眾對
發(fā)明內(nèi)容有整體和充分的了解，而并非對本發(fā)明保護范圍的限定。前述部分已經(jīng)充分公開了本發(fā)明可以實施的保護范圍，因此凡依照本發(fā)明公開內(nèi)容進行的任何本領域公知的等同替換，均屬于對本發(fā)明的侵犯。圖1-1為系統(tǒng)適用性液相色譜圖鹽酸麻黃堿的保留值約為5.4min左右。圖1-2為系統(tǒng)適用性液相色譜圖鹽酸丁卡因的保留值約為32.4min左右。圖l-3為空白輔料的液相色譜圖。圖2-1為鹽酸麻黃堿線性回歸圖。圖2-2為鹽酸丁卡因線性回歸圖。具體實施例方式實施例l:蜂地麻滴眼液質(zhì)量控制方法一.材料和儀器Agilent1090A高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)乙腈(色譜純，北京化工廠，批號20040926)三乙胺(分析純)磷酸二氫鈉(分析純)蜂地麻滴眼液(自制，批號20060828、20061128、20061204)鹽酸麻黃堿(赤峰艾克制藥科技有限公司，批號040404)鹽酸丁卡因(北京市燕京制藥廠，批號060401)二.方法(一)特征鑒別1.鹽酸丁卡因鑒別取8ml蜂地麻滴眼液供試品，加水42ml，搖勻；加碳酸鈉溶液(無水碳酸鈉10.6g，加水溶解并稀釋成100ml)5ml，搖勻，用乙醚振搖提取2次，每次50ml，合并乙醚提取液，用水20ml洗滌l次，分取乙醚層，加鹽酸乙醇溶液l-20ml，搖勻，水浴蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取鹽酸丁卡因?qū)φ掌?，加甲醇制成?ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；釆用薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5)nl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-濃氨試液(30:5:0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液。2.鹽酸麻黃堿鑒別取鹽酸麻黃堿對照品，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；采用照薄層色譜法，吸取對照品溶液及步驟(1)中的供試品溶液各5nl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-濃氨試液(30:5:0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，于80。C加熱至斑點顯色清晰。(二)pH值測定取樣品5瓶，混勻，以磷酸鹽標準緩沖液作為pH值測定緩沖液，用精密pH計進行測定。(三)含量測定1.樣品供試液的制備取滴眼液適量，加水溶解并制成每lml約含鹽酸麻黃堿0.25mg的溶液，搖勻，即得。2.對照品溶液的制備取對照品鹽酸丁卡因和鹽酸麻黃堿各25mg，精密稱定，分別置10ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，精密量取各溶液lml置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得對照品供試液，濃度為0.25mg/ml。3.空白輔料供試液的制備量取蜂蜜適量，加水制成與樣品同濃度的溶液作為空白輔料供試液。4.測定(1)系統(tǒng)適用性照高效液相色譜法(中國藥典2005版二部附錄VD)，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相A泵為0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液(含0.2W三乙胺)-乙腈(90:10，磷酸調(diào)pH至4.0)，B泵為0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液-乙腈(70:30，磷酸調(diào)pH至4.0)，檢測波長218nm，柱溫40°C，流速為1.0ml/min，按下述梯度洗脫表l:梯度程序<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>(2)溶液穩(wěn)定性試驗取滴眼液樣品按上述方法配制樣品供試液，在不同的時間進樣，記錄峰面積，計算。(3)精密度試驗取批號20061128的樣品5瓶，按上述方法配制樣品供試液，連續(xù)進樣6次，以峰面積計算其含量。(4)線性與范圍分別取鹽酸丁卡因、鹽酸麻黃堿對照品適量，精密稱定，按處方比例加入輔料，加水配成每lml中含鹽酸丁卡因0.25mg,鹽酸麻黃堿0.25mg的溶液，作為貯備液。分別精密量取貯備液0.2、0.5、1、2、3ml置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，依次進樣，記錄峰面積。以鹽酸丁卡因和鹽酸麻黃堿的濃度C和吸收值A做線性回歸。(5)回收率試驗精密稱取9份處方量蜂蜜，分別按對照品溶液濃度的80%、100%、120%的量加入對照品，置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得樣品供試液。照含量測定方法測定其加入量，每個濃度平行3份。(6)含量測定取三批樣品制成供試品溶液，照含量測定方法測定其含量。三.結果(一)特征鑒別1.鹽酸丁卡因鑒別供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。2.鹽酸麻黃堿鑒別供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。(二)pH值測定本制劑三批次樣品的的pH值均在3.04.5范圍內(nèi)。(三)含量測定1.系統(tǒng)適用性在上述的液相色譜條件下，鹽酸麻黃堿的保留值約為5.4min左右，見附圖l-l;鹽酸丁卡因的保留值約為32.4min左右，見附圖1-2，兩者的分離度符合要求?？瞻纵o料的液相色譜圖見附圖1-3。從圖中可知，空白輔料對含量測定沒有干擾。在此液相色譜條件下色譜柱的理論塔板數(shù)按鹽酸丁卡因峰計算為142451(本方法要求理論塔板數(shù)按鹽酸丁卡因峰計算應不低于2000)。2.溶液穩(wěn)定性試驗見表2，結果表明本品含量測定的供試液在20小時內(nèi)基本穩(wěn)定。表2:溶液穩(wěn)定性結果時間_峰面積_(小時)鹽酸麻黃堿鹽酸丁卡因0744.5271302.7134729.7511310.42310725.2621317.67420737.0831303.3293.精密度試驗鹽酸麻黃堿為標示量的100.85%，102.40%，99.93%，101.63%，99.21%，100.15%,平均值為100.70。/0，RSD-1.16。/o(n-6)，鹽酸丁卡因為標示量的94.85%，95.31%,95.40%，97.46%，94.96%,94.29%，平均值為95.37%，RSD=1.15%(n=6)，表明本方法重復性較好。4.線性與范圍結果見圖2-1和圖2-2。從曲線可知，本法在測定50.26753.9ug/ml濃度的鹽酸丁卡因、51.38770.7yg/ml濃度的鹽酸麻黃堿時有良好的線性關系。5.回收率試驗結果如表3所示。_表3:回收率試驗結果_鹽酸丁卡因鹽酸麻黃堿回收平均回回收平均回加入量測得量率收率RSD加入量測得量率收率RSD(mg)(mg)(%)(%)(%)(mg)(mg)(%)(%)(%)20.2320.4310120.720.6799.8780%19,6719,4498.8221.0920.898.6220.1220.23100.520.3220.38100.325.6925.89100.824.5924.5799.94100%25.6925.89跳8100.250,7526.3326.199.1399.570.9124.6824,79100.525.3825.65101.130.6430.4199.2629.0929.0699.89120%30.6730.6599.9529.6429.0798.0930.430,61100.730.1729.9299.186.含量測定結果測定結果如表4所示。3批樣品鹽酸丁卡因的含量分別為標示量的96.09%,95.37%，95.37%;鹽酸麻黃堿的含量分別為標示量的99.48%,100.7%，99.01%。_表4:三批樣品的含量測定結果_批號鹽酸丁卡因標示含量(％)鹽酸麻黃堿標示含量(％)2006082896.0999.482006112895.37畫.72006120494.8399.011029.9299.186.含量測定結果測定結果如表4所示。3批樣品鹽酸丁卡因的含量分別為標示量的96.09%,95.37%，95.37%;鹽酸麻黃堿的含量分別為標示量的99.48%,100.7%，99.01%。_表4:三批樣品的含量測定結果_批號鹽酸丁卡因標示含量(％)鹽酸麻黃堿標示含量(％)2006082896.0999.482006112895.37畫.72006120494.8399.0權利要求1.蜂地麻滴眼液質(zhì)量控制方法，其特征在于，采用高效液相色譜法測定含量用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.0為流動相A，0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.0為流動相B，進行梯度洗脫，柱溫40℃，流速為1.0ml/min，檢測波長為218nm；其中流動相A含體積比為9010的三乙胺-乙腈混合液，三乙胺的濃度為0.2％(ml/ml)；流動相B含體積比為7030的三乙胺-乙腈混合液，三乙胺的濃度為0.2％(ml/ml)；梯度程序為流動相A在0-30分鐘內(nèi)由95％降至70％，流動相B在0-30分鐘內(nèi)由5％升至30％；流動相A和B的體積比在此后8分鐘保持不變；流動相A在第38-39分鐘內(nèi)由70％升至95％，流動相B在第38-39分鐘內(nèi)由30％降至5％；流動相A和B的體積比在此后保持不變；取供試品適量，加水制成每1ml含鹽酸丁卡因0.25mg的溶液，用自動進樣器量取10μl注入色譜儀，記錄色譜圖；另取對照品鹽酸丁卡因和鹽酸麻黃堿適量，分別精密稱定，各加水溶解并制成每1ml含0.25mg的溶液，同法測定；按外標法以峰面積計算。2.根據(jù)權利要求1所述的蜂地麻滴眼液質(zhì)量控制方法，其特征在于，還包括特征鑒別和pH值檢查(一)特征鑒別(1)鹽酸丁卡因鑒別取8ml蜂地麻滴眼液供試品，加水42ml，搖勻；加碳酸鈉溶液5ml，搖勻，用乙醚振搖提取2次，每次50ml，合并乙醚提取液，用水20ml洗滌1次，分取乙醚層，加鹽酸乙醇溶液l-20ml，搖勻，水浴蒸干，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取鹽酸丁卡因?qū)φ掌?，加甲醇制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液；采用薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5pl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-濃氨試液為展開劑，三者體積比為30:5:0.5,展開，取出，晾干，噴以改良碘化鉍鉀試液；(2)鹽酸麻黃堿鑒別取鹽酸麻黃堿對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；采用照薄層色譜法，吸取對照品溶液及步驟(1)中的供試品溶液各5pi,分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-濃氨試液為展開劑，三者體積比為30:5:0.5，展開，取出，晾干，噴以茚三酮試液，于80。C加熱至斑點顯色清晰；(二)pH值檢査測定pH值。3.根據(jù)權利要求1所述的蜂地麻滴眼液質(zhì)量控制方法，其特征在于所述pH值檢査的方法為取樣品，混勻，以磷酸鹽標準緩沖液作為pH值測定緩沖液，用精密pH計進行測定。全文摘要本發(fā)明公開了一種蜂地麻滴眼液質(zhì)量控制方法，屬于制藥領域。蜂地麻滴眼液質(zhì)量控制方法包括特征鑒別、pH值檢查和定量測定。本發(fā)明的優(yōu)點在于克服了蜂蜜造成的乳化現(xiàn)象，不影響所鑒定物質(zhì)的顯色；能夠準確定量，并能同時測定兩個主要成分的含量；測定中運用梯度洗脫法，所測物質(zhì)可分離完全，并縮短測定時間、節(jié)省流動相；操作簡便，重現(xiàn)性好。文檔編號G01N30/00GK101377482SQ200710120839公開日2009年3月4日申請日期2007年8月27日優(yōu)先權日2007年8月27日發(fā)明者鯤萬,劉皈陽,艷孫,欒復新,郭代紅,靳守東申請人:中國人民解放軍總醫(yī)院