專(zhuān)利名稱(chēng)：質(zhì)控微粒、其制備及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到儀器的質(zhì)量控制試劑和方法。更詳細(xì)地講涉及基于光激化學(xué)發(fā)光的分析 儀器的質(zhì)量控制試劑、其制備及質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
光激化學(xué)發(fā)光儀器可以被廣泛的應(yīng)用于生物分子的相互作用研究中，在臨床上主要用 于疾病診斷等方面。光激化學(xué)發(fā)光技術(shù)是一種以高分子微粒為基礎(chǔ)的化學(xué)發(fā)光技術(shù)，它可 以通過(guò)感光微粒和發(fā)光微粒在一定距離范圍內(nèi)結(jié)合，產(chǎn)生離子氧能量傳遞，發(fā)出光信號(hào)， 從而對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行檢測(cè)。感光微粒是填充有感光化合物的高分子微粒，發(fā)光微粒是填充 有發(fā)光化合物和鑭系元素的高分子微粒。光激化學(xué)發(fā)光技術(shù)的核心原理是能量的近距離轉(zhuǎn) 移，轉(zhuǎn)移的介質(zhì)是高能態(tài)的離子氧。當(dāng)紅色激光(670 690nm)照射感光微粒后，釋放單線(xiàn) 態(tài)氧離子(4ps)，其傳播距離為200nm左右，只有當(dāng)感光微粒和發(fā)光微粒的距離足夠接近 的情況下，感光微粒釋放的單線(xiàn)態(tài)氧離子才能到達(dá)發(fā)光微粒，從而產(chǎn)生一系列化學(xué)反應(yīng)， 發(fā)射出520 620nm高能級(jí)的光，由于反應(yīng)體系中，微粒的濃度很低，碰撞幾率非常小，因 此本底信號(hào)微弱，只有感光微粒和發(fā)光微粒通過(guò)免疫反應(yīng)結(jié)合以后，才會(huì)發(fā)射出明顯的光， 因此系統(tǒng)靈敏度很高。在疾病診斷中，常用的檢測(cè)模式包括三到四個(gè)組分包被抗原或抗 體的發(fā)光微粒、生物素或地高辛標(biāo)記的抗原或抗體、親和素或抗地高辛抗體包被的感光微 粒，中和抗原或抗體等。以上各組分與待測(cè)抗原或抗體通過(guò)兩步以上溫育反應(yīng)結(jié)合到一起， 通過(guò)化學(xué)發(fā)光量的強(qiáng)弱從而對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行定性或者定量檢測(cè)。相對(duì)于傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫分 析方法，它具有均相(免沖洗)、靈敏度高和操作簡(jiǎn)便等特點(diǎn)，并且易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化，因此 其應(yīng)用前景十分廣闊。
目前，光激化學(xué)發(fā)光儀器和一般的免疫分析儀器一樣，均采用質(zhì)控血清進(jìn)行質(zhì)控，一 方面由于涉及到生物活性物質(zhì)，因此不易大量獲得，造成其價(jià)格昂貴，而且需要針對(duì)這種 質(zhì)控血清提供相應(yīng)的配套試劑，不適用于儀器出廠(chǎng)檢驗(yàn)、校準(zhǔn)等方面；另一方面采用質(zhì)控 血清，操作步驟相對(duì)繁瑣，更容易引進(jìn)人為誤差，且需要兩步以上溫育反應(yīng)，不利于簡(jiǎn)化 操作步驟。為了保持質(zhì)控血清的生物活性，往往需要將其冷凍保存，這對(duì)于試劑的儲(chǔ)存運(yùn) 輸都有更高的要求。此外，質(zhì)控血清常采用人源性樣品混合，批與批之間差異較大，當(dāng)更換批號(hào)以后，需 要重新進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，不利于長(zhǎng)期穩(wěn)定觀(guān)察。
本發(fā)明正是針對(duì)以上問(wèn)題進(jìn)行了深入的研究，開(kāi)發(fā)出了不需要質(zhì)控血清參與的質(zhì)控微 粒，簡(jiǎn)化了儀器質(zhì)控方法，儲(chǔ)藏運(yùn)輸相對(duì)簡(jiǎn)單，且便于批量生產(chǎn)，更容易實(shí)現(xiàn)批間的重復(fù) 性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種新型的質(zhì)控微粒、其應(yīng)用，以及使用該質(zhì)控微粒的一種新型 的質(zhì)控方法。
本發(fā)明的原理
利用光激化學(xué)發(fā)光技術(shù)原理，在發(fā)光微粒外包被生物素，感光微粒外包被抗生物素， 通過(guò)光激化學(xué)發(fā)光機(jī)制，對(duì)產(chǎn)生光信號(hào)的強(qiáng)弱進(jìn)行評(píng)價(jià)，從而實(shí)現(xiàn)儀器的質(zhì)量控制。 本發(fā)明的質(zhì)控模式與現(xiàn)有的疾病檢測(cè)工作模式圖不同(參見(jiàn)圖1):
在疾病診斷模式中，試劑組分相對(duì)比較復(fù)雜，包括三個(gè)或三個(gè)以上組分，以?shī)A心法為 例，試劑一般包括抗體包被的發(fā)光微粒、生物素標(biāo)記的抗體、抗生物素包被的感光微粒三 個(gè)組分，上述三個(gè)組分與待測(cè)抗原通過(guò)免疫反應(yīng)連接成一個(gè)整體，通過(guò)光激化學(xué)發(fā)光機(jī)制， 產(chǎn)生光信號(hào)，通過(guò)信號(hào)強(qiáng)弱對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行定性或者定量，整個(gè)反應(yīng)一般需要兩步以上溫育。
在本發(fā)明的質(zhì)控模式中，質(zhì)控微粒為表面帶有生物素的發(fā)光微粒，可以直接跟抗生物 素包被的感光微粒結(jié)合，與診斷模式相比，反應(yīng)條件比較簡(jiǎn)單，也不需要生物樣品參與， 且反應(yīng)只需要一步溫育，由于組分的減少使得體系更加容易控制。
本發(fā)明的技術(shù)方案
本發(fā)明一方面，公開(kāi)了一種質(zhì)控微粒，為蛋白包被的發(fā)光微粒，其中，上述蛋白被生 物素標(biāo)記。該質(zhì)控微粒與表面包被了抗生物素的感光微粒結(jié)合后，在670 690nm光激發(fā)下， 可發(fā)射出520~620nm波長(zhǎng)光子。
上述發(fā)光微粒是指填充有發(fā)光化合物和鑭系元素化合物的高分子微粒。發(fā)光化合物可 以是Dioxene (二氧雜環(huán)己烯)或thioxene (二甲基噻吩)的衍生物等，鑭系元素化合物可 以是Eu (TTA) /TOPO或Eu (TTA) 3/Phen等。
上述感光微粒是填充有感光化合物的高分子微粒。在670 690nm光激發(fā)下，可以產(chǎn)生
單線(xiàn)態(tài)氧離子，當(dāng)其與發(fā)光微粒距離足夠近的情況下，單線(xiàn)氧離子傳遞到發(fā)光微粒，與發(fā) 光微粒中的發(fā)光化合物反應(yīng)，產(chǎn)生紫外光，紫外光再進(jìn)一步激發(fā)鑭系元素化合物，產(chǎn)生 520 620nm波長(zhǎng)光子。感光化合物可以是酞菁染料等。 優(yōu)選的，上述發(fā)光微粒為醛基修飾的發(fā)光微粒。
本發(fā)明的第二方面，公開(kāi)了上述質(zhì)控微粒的制備方法，包括下列步驟 C、用生物素標(biāo)記蛋白；
d、將生物素標(biāo)記的蛋白包被醛基修飾的發(fā)光微粒。
生物素標(biāo)記蛋白為本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)的生物素標(biāo)記蛋白方式，生物素標(biāo)記的蛋白包被醛 基修飾的發(fā)光微?？刹捎帽绢I(lǐng)域中常規(guī)的抗體包被發(fā)光微粒的方式進(jìn)行。
通過(guò)調(diào)節(jié)生物素和蛋白質(zhì)比例，得到標(biāo)記比例不同的蛋白，標(biāo)記比例可以從每個(gè)蛋白 質(zhì)分子表面標(biāo)記1 20個(gè)生物素不等，不同的標(biāo)記比例得到的質(zhì)控微粒與感光微粒結(jié)合的效
率不同。也可以調(diào)整蛋白和微粒的比例，得到包被比例不同的質(zhì)控微粒，同樣可以達(dá)到類(lèi) 似的效果。
根據(jù)本發(fā)明的原理可知，質(zhì)控微粒與外包被抗生物素的感光微粒反應(yīng)并發(fā)光的根本在 于質(zhì)控微粒外包被了生物素，而與被生物素標(biāo)記的蛋白的種類(lèi)關(guān)系甚微，因此這種被生物 素標(biāo)記的蛋白可以是任何一種不影響生物素與抗生物素結(jié)合并可被生物素標(biāo)記的蛋白，從
降低成本的角度考慮，優(yōu)選牛血清Y—球蛋白(BGG)或小牛血清白蛋白(BSA)。對(duì)于本技 術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員而言，可以很容易的想到其它可被生物素標(biāo)記的蛋白來(lái)替代牛血清Y—球 蛋白制備質(zhì)控微粒。
本發(fā)明第三方面，提供了上述質(zhì)控微粒在光激化學(xué)發(fā)光分析儀質(zhì)量控制中的應(yīng)用。 上述質(zhì)量控制包括對(duì)儀器的性能檢驗(yàn)、常規(guī)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制檢驗(yàn)和儀器校準(zhǔn)等方面。
本發(fā)明第四方面，公開(kāi)了一種光激化學(xué)發(fā)光分析儀質(zhì)控參數(shù)檢測(cè)方法，包括下列步驟
在光激化學(xué)發(fā)光反應(yīng)體系中加入合適濃度的上述質(zhì)控微粒及抗生物素包被的感光微粒，在 保持感光微粒濃度不變的情況下，通過(guò)調(diào)節(jié)質(zhì)控微粒的濃度，反應(yīng)溫度以及反應(yīng)時(shí)間，來(lái) 控制反應(yīng)發(fā)射光子數(shù)的多少和信號(hào)強(qiáng)弱。
本發(fā)明第五方面，公開(kāi)了一種檢測(cè)光激化學(xué)發(fā)光分析儀最大計(jì)數(shù)率的方法，包括在檢 測(cè)板孔中分別加入不同濃度的質(zhì)控微粒，每個(gè)濃度可進(jìn)行多次重復(fù)測(cè)定，質(zhì)控微粒濃度逐 漸遞增，然后在上述板孔中分別加入抗生物素包被的感光微粒，溫育后，單位時(shí)間讀數(shù)， 當(dāng)隨著質(zhì)控微粒濃度升高，信號(hào)值不再升高或者出現(xiàn)信號(hào)溢出時(shí)，此最高信號(hào)值除以單位
時(shí)間即為儀器的最大計(jì)數(shù)率。
本發(fā)明第六方面，公開(kāi)了一種檢測(cè)光激化學(xué)發(fā)光分析儀的重復(fù)性的方法，包括在檢測(cè) 板孔中分別加入相同濃度的質(zhì)控微粒，再在上述各板孔中分別加入相同濃度的抗生物素包 被的感光微粒，設(shè)置激光強(qiáng)度和讀數(shù)時(shí)間，溫育后，單位時(shí)間讀數(shù)，記錄數(shù)據(jù)并計(jì)算CV值。
本發(fā)明第七方面，公開(kāi)了一種檢測(cè)光激化學(xué)發(fā)光分析儀儀器線(xiàn)性的方法，包括在檢測(cè) 板孔中加入不同濃度的質(zhì)控微粒，再在各板孔中加入相同濃度的抗生物素包被的感光微粒， 設(shè)置激光強(qiáng)度和讀數(shù)時(shí)間，溫育后，單位時(shí)間讀數(shù)，計(jì)算線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)r值。
本發(fā)明第八方面，公開(kāi)了一種檢測(cè)光激化學(xué)發(fā)光分析儀孔間交叉率的方法，包括在檢 測(cè)板孔中選擇交叉排布的孔，加入相同濃度的質(zhì)控微粒，再在上述各板孔中分別加入相同 濃度的抗生物素包被的感光微粒，設(shè)置激光強(qiáng)度和讀數(shù)時(shí)間，溫育后，單位時(shí)間讀數(shù)，計(jì) 算孔間交叉率。
本發(fā)明公開(kāi)的質(zhì)控微粒及質(zhì)控方法，可以用于儀器的性能檢驗(yàn)、常規(guī)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制 檢驗(yàn)，如儀器的最大計(jì)數(shù)率、重復(fù)性、線(xiàn)性、斜率和靈敏度等參數(shù)的檢測(cè)，根據(jù)這些參數(shù) 對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，使得出廠(chǎng)儀器能夠保持一致性能，減少由于儀器間的差異造成的樣品檢 測(cè)差異，有利于室間質(zhì)量評(píng)價(jià)。還可以通過(guò)光信號(hào)的大小和重現(xiàn)性判斷儀器溫度和加樣系 統(tǒng)是否正常?？梢圆捎脤?duì)高信號(hào)值質(zhì)控微粒、鄰位空白孔以及遠(yuǎn)位空白孔信號(hào)值的測(cè)定來(lái) 檢測(cè)儀器的孔間交叉率，驗(yàn)證儀器是否符合質(zhì)量規(guī)范。


圖l:疾病檢測(cè)和質(zhì)控的工作模式圖解 A:疾病檢測(cè)工作模式 B:質(zhì)控工作模式 1:抗體包被的發(fā)光微粒 2:待測(cè)抗原 3:生物素標(biāo)記的抗體 4:抗生物素包被的感光微粒 5:為質(zhì)控微粒。
圖2:實(shí)例5測(cè)定孔間交叉率加樣分布圖，其分布可根據(jù)板的大小和板孔的多少進(jìn)行相應(yīng)變
化。其中S代表高值樣品(信號(hào)值在100 300萬(wàn)的質(zhì)控微粒和感光微粒)，Bl為鄰位空白 孔，B2為遠(yuǎn)位空白孔。
具體實(shí)施例方式
以下通過(guò)具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的闡述，但實(shí)施例并非限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。
實(shí)施例h生物素標(biāo)記Y—球蛋白(BGG)包被的質(zhì)控微粒制備
(1) 生物素標(biāo)記的BGG的制備
用0.1M NaCNBH3將BGG (購(gòu)自Pel—Freez Biological)配制成10mg/ml溶液，采用 DMSO (二甲基甲酰胺)配置Biotin-X-X-NHS (N-羥基琥珀酰亞胺修飾生物素，生產(chǎn)商 SIGMA,產(chǎn)品號(hào)B3295)溶液至16.172mg/ml，按照l(shuí)mg抗體加入5.4ul Biotin-X-X-NHS 的量將Biotin-X-X-NHS液加入到BGG溶液中，混合均勻并在4。C下放置過(guò)夜。采用透析 法除去游離未反應(yīng)的生物素，透析液為生物素標(biāo)記抗體透析緩沖液(O.lMTris， 0.3MNaCl， 0.005M EDTA-Na-2H20 ， pH 8.0)。透析完畢，BCA法測(cè)定蛋白濃度。
(2) 采用上述標(biāo)記蛋白包被醛基修飾的發(fā)光微粒
向10mg醛基修飾的發(fā)光微粒(博陽(yáng)生物科技(上海)有限公司)中加入6.4^1 20% 的Tween-20溶液、2mg上述(1)中透析得到的生物素標(biāo)記蛋白以及16^1的NaCNBH3 (25mg/ml， 0.05M pH6.0的MES緩沖液配制，現(xiàn)配現(xiàn)用)，補(bǔ)加0.1M pH6.0 MES至總體 積為400^1， 37。避光孵育48h。加入40^1的Gly溶液(75mg/ml， 0.05M pH6.0的MES緩沖 液配制)，37。避光旋轉(zhuǎn)反應(yīng)2h。力f] 250nl BSA(200mg/ml, 0.05M pH6.0的MES緩沖液配制) 溶液。37。避光旋轉(zhuǎn)反應(yīng)16h。 4°C 13000g離心30分鐘。棄上清，用lml pH6.0的MES 緩沖液再洗兩次。用lml 0.05M pH8.0的HEPES緩沖液(50mM HEPES，300mM NaCl，25mM EDTA-Na-2H20, 1.6% BSA, 0.1%Dextran, 0.1% Tween-20, 0.3745% TritonX-405， 0.01% 慶大霉素，0.05%Proclin)懸浮(其終濃度為10mg/ml)。
包被完成的質(zhì)控微粒，測(cè)定固含量，取小量稀釋到20嗎/ml， 30^1稀釋液加入60pl 40嗎/ml感光微粒(AlphaScreenTMStreptavidin-coated Donor Beads,產(chǎn)品號(hào)6760002S,生 產(chǎn)商Perkin Elmer),在LiCAHT光激化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)(上海博陽(yáng)醫(yī)療儀器有限公司)中溫
育15min，激光激發(fā)ls，讀數(shù)ls，光信號(hào)>1800000，認(rèn)為包被成功。
(3)質(zhì)控微粒工作液配制
根據(jù)工作需要，采用0.05M pH8.0的HEPES緩沖液將(2)中懸液稀釋到相應(yīng)濃度， 分裝保存。
實(shí)施例2:生物素標(biāo)記小牛血清白蛋白(BSA)包被的質(zhì)控微粒制備
(1) 生物素標(biāo)記小牛血清白蛋白(BSA)的制備
用0.1M NaCNBH3將BSA (購(gòu)自EQUITECH-BIO INC)配制成10mg/ml溶液，采用 DMSO (二甲基甲酰胺)配置Biotin-X-X-NHS (N-羥基琥珀酰亞胺修飾生物素,生產(chǎn)商 SIGMA，產(chǎn)品號(hào)B3295)溶液至16.172mg/ml，按照l(shuí)mg抗體加入13.5ul Biotin-X-X-NHS 的量將Biotin-X-X-NHS液加入到BSA溶液中，混合均勻并在4。C下放置過(guò)夜。采用透析法 除去游離未反應(yīng)的生物素，透析液為生物素標(biāo)記抗體透析緩沖液(O.lMTris， 0.3MNaCl， 0.005M EDTA-Na-2H20 ， pH8.0)。透析完畢，BCA法測(cè)定蛋白濃度。
(2) 采用上述標(biāo)記蛋白包被醛基修飾的發(fā)光微粒 包被方法與實(shí)例1中(2)同。
(3) 質(zhì)控微粒工作液配制 配制方法與實(shí)例1中(3)同。
同理，還可以采用生物素標(biāo)記其他蛋白包被發(fā)光微粒來(lái)制備質(zhì)控微粒。以下實(shí)例我們采 用生物素標(biāo)記BGG包被的質(zhì)控微粒進(jìn)行儀器檢測(cè)及質(zhì)控。
實(shí)施例3:采用質(zhì)控微粒檢測(cè)儀器最大計(jì)數(shù)率
在儀器加入不同濃度的質(zhì)控微粒，每個(gè)濃度可進(jìn)行多次重復(fù)測(cè)定，質(zhì)控微粒濃度逐漸 遞增，然后在上述孔中加入抗生物素包被的感光微粒，溫育15min，單位時(shí)間讀數(shù)，當(dāng)隨著 質(zhì)控微粒濃度升高，信號(hào)值不再升高或者出現(xiàn)信號(hào)溢出，此最高信號(hào)值除以單位時(shí)間即為 儀器的最大計(jì)數(shù)率。
采用上述方法，我們采用實(shí)例1中生物素標(biāo)記BGG包被的質(zhì)控微粒對(duì)LiCA HT光激 化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)(上海博陽(yáng)醫(yī)療儀器有限公司)的最大計(jì)數(shù)率進(jìn)行了檢測(cè)，質(zhì)控微粒濃度分 別為20、 40、 60、 80|iig/ml，在微孔板中每孔加入3(^1，每個(gè)濃度5孔，然后由儀器自動(dòng)加入6(V1 40嗎/ml感光微粒，在儀器內(nèi)部37'C溫育15min，設(shè)置激光激發(fā)ls，讀數(shù)ls，記 錄各孔信號(hào)值。經(jīng)測(cè)定，各濃度信號(hào)均值分別為2181668、 4354769、 5135782、 51552478， 從上面數(shù)據(jù)可以看出當(dāng)質(zhì)控微粒濃度升高到60昭/ml以后，儀器信號(hào)不再提高，因此可以得
出本儀器的最大計(jì)數(shù)率為sooooooS—1 。此結(jié)果與儀器采用的光子計(jì)數(shù)器出廠(chǎng)說(shuō)明相一致。
實(shí)施例4:采用質(zhì)控微粒檢測(cè)儀器的重復(fù)性
選擇相應(yīng)板孔位，依次加入30)li1的高中低濃度質(zhì)控微粒。進(jìn)板后，再在各孔中加入60)nl 的感光微粒(40嗎/ml)，設(shè)置激光強(qiáng)度和讀數(shù)時(shí)間，溫育15min，儀器開(kāi)始運(yùn)行，讀取光子 數(shù)。將數(shù)值代入下述公式，求得CV值。
CV=100 (S/巧 (CV為變異系數(shù)，S為標(biāo)準(zhǔn)差，7為信號(hào)均值) X = ^X,/n (X,為第i次實(shí)驗(yàn)測(cè)定信號(hào)值，n為測(cè)定次數(shù))
我們分別采用AFP質(zhì)控血清和質(zhì)控微粒檢測(cè)LiCAHT光激化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)精密度。AFP 質(zhì)控血清分高中低3個(gè)濃度；質(zhì)控微粒也采用3個(gè)濃度，分別為20、 5、 lpg/ml。兩種方法 每個(gè)濃度各測(cè)定20孔，AFP質(zhì)控血清測(cè)定方法參照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)(胎兒甲種球蛋白檢 測(cè)試劑盒(光激化學(xué)發(fā)光法)，博陽(yáng)生物科技(上海)有限公司)，質(zhì)控微粒測(cè)定方法與實(shí)例 3同。根據(jù)上述公式計(jì)算各濃度樣品精密度。AFP質(zhì)控血清高中低三個(gè)濃度測(cè)定結(jié)果分別為 3.25% 、 3.58%、 3.47%;而采用質(zhì)控微粒三個(gè)濃度測(cè)定結(jié)果分別為1.27%、 1.89%、 2.04%。 與傳統(tǒng)的質(zhì)控血清模式檢測(cè)相比，質(zhì)控微粒方式試劑成分和操作歩驟更加簡(jiǎn)單，更容易減 少試劑和人為操作等因素，因此也更能反應(yīng)出儀器的真實(shí)情況。從上述檢測(cè)中我們也可以 看出采用質(zhì)控微粒得到的結(jié)果要優(yōu)于質(zhì)控血清測(cè)定結(jié)果。
上述實(shí)驗(yàn)僅對(duì)儀器的板內(nèi)精密度進(jìn)行了測(cè)定，采用類(lèi)似的方法我們也可以對(duì)儀器的板間 和天間重復(fù)性進(jìn)行考察。
實(shí)施例5:采用質(zhì)控微粒檢測(cè)儀器線(xiàn)性
選擇相應(yīng)板孔位，依次加入30(al多個(gè)濃度的質(zhì)控微粒。進(jìn)板后,再在各孔中加入60)al 的感光微粒(4(Vg/ml)，設(shè)置激光強(qiáng)度和讀數(shù)時(shí)間，溫育15min，儀器開(kāi)始運(yùn)行，讀取光子 數(shù)。以濃度值為X，光信號(hào)值為Y，將數(shù)值代入下述公式,求得兩組數(shù)據(jù)的線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)r值。
力((x,-S)(y;— )) —
r= "1 — "—(X,為第i個(gè)樣品濃度，i為濃度均值，Y,為第i個(gè)樣品的
t(x,-對(duì)力(x- )2
信號(hào)值，？為信號(hào)均值，n為樣品數(shù)量)
我們采用20、 10、 5、 1、 0.1嗎/ml五個(gè)濃度質(zhì)控微粒檢測(cè)LiCA HT光激化學(xué)發(fā)光系統(tǒng) 線(xiàn)性，測(cè)定方法與實(shí)例3同。測(cè)得5個(gè)濃度光信號(hào)均值分別為2263479、 1119518、 634659、 134023、 13238，計(jì)算得到儀器濃度與信號(hào)的線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)r為0.999。
采用圖1排列方式進(jìn)行加樣。在標(biāo)示S的孔中加入3(^1質(zhì)控微粒(20嗎/ml)，進(jìn)板。 用儀器在標(biāo)示S的孔中加入60pd感光微粒(40pig/ml)。溫育15min。記錄標(biāo)示有S、 Bl、 B2各孔讀數(shù)。
孔間交叉率=(5-^)/§ (m為圖2中標(biāo)記Bl各孔測(cè)定信號(hào)均值，^為B2圖2中標(biāo)記B2 各孔測(cè)定信號(hào)均值)
在LiCAHT光激化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)上的檢測(cè)結(jié)果為§1=88.2、 &=53.0、 §=2277496，經(jīng) 計(jì)算得到儀器的孔間交叉率為1.54xl0—5。
采用AFP高濃度質(zhì)控血清檢測(cè)，方法與實(shí)例4同，得到il -76.3 、 =51.0、 § -16524108， 儀器的孔間交叉率為1.53x10—5。 兩種方法得到的結(jié)果基本一致。
上述實(shí)例加入的試劑量、濃度和反應(yīng)時(shí)間等都可根據(jù)儀器型號(hào)以及規(guī)格進(jìn)行相應(yīng)調(diào)整。
實(shí)施例6:采用質(zhì)控微粒檢測(cè)儀器的孔間交叉率以上按照特定模式對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了說(shuō)明，但本領(lǐng)域技術(shù)人員自明的變形和改良也都包 括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種質(zhì)控微粒，其特征在于，所述質(zhì)控微粒為蛋白包被的發(fā)光微粒，其中，所述蛋白被生物素標(biāo)記。
2. 如權(quán)利要求1所述質(zhì)控微粒，其特征在于，所述質(zhì)控微粒與表面包被了抗生物素的感光 微粒結(jié)合后，在670 690nm光激發(fā)下，發(fā)射出520~620nm波長(zhǎng)光子。
3. 如權(quán)利要求1所述質(zhì)控微粒，其特征在于，所述蛋白為牛血清Y—球蛋白(BGG)或小牛 血清白蛋白(BSA)。
4. 如權(quán)利要求1或2或3所述質(zhì)控微粒，其特征在于，所述發(fā)光微粒是指填充有發(fā)光化合 物和鑭系元素化合物的高分子微粒。
5. 如權(quán)利要求4所述質(zhì)控微粒，其特征在于，所述發(fā)光化合物選自二氧雜環(huán)己烯、二甲基 噻吩或者它們的衍生物中的一種或多種。
6. 如權(quán)利要求4所述質(zhì)控微粒，其特征在于，所述鑭系元素化合物選自Eu (TTA)/TOPO 或Eu (TTA) 3/Phen。
7. 如權(quán)利要求1或2或3所述質(zhì)控微粒，其特征在于，所述發(fā)光微粒為醛基修飾的發(fā)光微 粒。
8. 如權(quán)利要求1一7中任一權(quán)利要求所述質(zhì)控微粒的制備方法，包括下列步驟a、 用生物素標(biāo)記蛋白；b、 將生物素標(biāo)記的蛋白包被醛基修飾的發(fā)光微粒。
9. 將權(quán)利要求l一7中任一權(quán)利要求所述質(zhì)控微粒用于光激化學(xué)發(fā)光分析儀的質(zhì)量控制。
10. 如權(quán)利要求9所述用途，其特征在于，所述質(zhì)量控制包括儀器的性能檢驗(yàn)、常規(guī)實(shí)驗(yàn)室 質(zhì)量控制檢驗(yàn)和儀器校準(zhǔn)中的任一項(xiàng)目。
11.—種光激化學(xué)發(fā)光分析儀質(zhì)控參數(shù)檢測(cè)方法，包括下列步驟在光激化學(xué)反應(yīng)體系中加 入合適濃度的權(quán)利要求l一7中任一權(quán)利要求所述質(zhì)控微粒及抗生物素包被的感光微粒， 在保持感光微粒濃度不變的情況下，通過(guò)調(diào)節(jié)質(zhì)控微粒的濃度，反應(yīng)溫度以及反應(yīng)時(shí)間， 來(lái)控制反應(yīng)發(fā)射光子數(shù)的多少和信號(hào)強(qiáng)弱。
12. —種檢測(cè)光激化學(xué)發(fā)光分析儀最大計(jì)數(shù)率的方法，包括下列步驟在檢測(cè)板孔中分別加 入不同濃度的權(quán)利要求l一7中任一權(quán)利要求所述的質(zhì)控微粒，每個(gè)濃度進(jìn)行多次重復(fù) 測(cè)定，質(zhì)控微粒濃度逐漸遞增，然后在上述板孔中分別加入抗生物素包被的感光微粒， 溫育后，單位時(shí)間讀數(shù)，當(dāng)隨著質(zhì)控微粒濃度升高，信號(hào)值不再升高或者出現(xiàn)信號(hào)溢出 時(shí)，此最高信號(hào)值除以單位時(shí)間即為儀器的最大計(jì)數(shù)率。
13. —種檢測(cè)光激化學(xué)發(fā)光分析儀重復(fù)性的方法，包括下列步驟在檢測(cè)板孔中分別加入相 同濃度的權(quán)利要求l一7中任一權(quán)利要求所述的質(zhì)控微粒，再在上述各板孔中分別加入 相同濃度的抗生物素包被的感光微粒，設(shè)置激光強(qiáng)度和讀數(shù)時(shí)間，溫育后，單位時(shí)間讀 數(shù)，記錄數(shù)據(jù)并計(jì)算CV值。
14. 一種檢測(cè)光激化學(xué)發(fā)光分析儀儀器線(xiàn)性的方法，包括下列步驟在檢測(cè)板孔中加入不同 濃度的權(quán)利要求l一7中任一權(quán)利要求所述的質(zhì)控微粒，再在各板孔中加入相同濃度的 抗生物素包被的感光微粒，設(shè)置激光強(qiáng)度和讀數(shù)時(shí)間，溫育后，單位時(shí)間讀數(shù)，計(jì)算線(xiàn) 性相關(guān)系數(shù)r值。
15. —種檢測(cè)光激化學(xué)發(fā)光分析儀孔間交叉率的方法，包括下列步驟在檢測(cè)板孔中選擇交 叉排布的孔，加入相同濃度的權(quán)利要求l一7中任一權(quán)利要求所述的質(zhì)控微粒，再在上 述各板孔中分別加入相同濃度的抗生物素包被的感光微粒，設(shè)置激光強(qiáng)度和讀數(shù)時(shí)間， 溫育后，單位時(shí)間讀數(shù)，計(jì)算孔間交叉率。
全文摘要
本發(fā)明涉及儀器的質(zhì)量控制試劑和質(zhì)量控制方法。公開(kāi)了一種質(zhì)控微粒，所述質(zhì)控微粒為生物素標(biāo)記的蛋白包被的發(fā)光微粒。本發(fā)明還進(jìn)一步提供了上述質(zhì)控微粒的制備方法及利用該質(zhì)控微粒的質(zhì)控方法。本發(fā)明公開(kāi)的質(zhì)控微粒及質(zhì)控方法可用于光激化學(xué)發(fā)光儀器的性能檢驗(yàn)、常規(guī)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制檢驗(yàn)和儀器校準(zhǔn)。
文檔編號(hào)G01N21/63GK101183073SQ200710047908
公開(kāi)日2008年5月21日 申請(qǐng)日期2007年11月7日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月7日
發(fā)明者張向輝, 石曉強(qiáng), 趙衛(wèi)國(guó) 申請(qǐng)人:博陽(yáng)生物科技(上海)有限公司