專利名稱：血紅蛋白衍生物的測定方法、該法中使用的試劑組合物、測定試劑盒、分析設(shè)備以及分析系統(tǒng)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及血液試樣中血紅蛋白衍生物的測定方法、該法中使用 的試劑組合物、測定試劑盒、分析設(shè)備以及分析系統(tǒng)，涉及迅速而可 靠地使血紅蛋白改性的技術(shù)。
背景技術(shù)：
作為血紅蛋白衍生物之一的糖化血紅蛋白，也可作為排除通過飲 食造成的血糖值變動影響的通常的血糖水平的判定，是用于生活習(xí)慣病早期發(fā)現(xiàn)的測定項(xiàng)目。糖化血紅蛋白稱作血紅蛋白Alc，紅血球中 含有的血紅蛋白中結(jié)合了葡萄糖，用糖化血紅蛋白對血紅蛋白的存在 比例加以數(shù)值化。作為糖化血紅蛋白的測定方法，可以舉出采用免疫反應(yīng)的方法。 利用該免疫反應(yīng)的測定方法，最初，通過4吏血液試樣溶血，從紅血球 向外取出血紅蛋白，然后，判斷血紅蛋白是非糖化血紅蛋白或糖化血 紅蛋白，通過使血紅蛋白的立體結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，使血紅蛋白的蛋白質(zhì) 被糖化的部分從其立體結(jié)構(gòu)中外露(血紅蛋白改性)，另外，通過使 被糖化的部分與特異的識別抗體反應(yīng)，免疫學(xué)地測定糖化血紅蛋白量。關(guān)于該血紅蛋白的改性方法，原來的例子有例如，用鋰鹽形態(tài) 的陰離子使血紅蛋白改性的方法(參見專利文獻(xiàn)1)。詳細(xì)地說，在 測定血液試樣中特定的血紅蛋白衍生物的分析方法中，(a)用溶解/ 改性試劑處理血液試樣，溶解紅血球，把從紅血球放出的可檢出量的 上述衍生物加以改性；(b)把該結(jié)果生成的混合液，對其中存在的改 性型上述血紅蛋白衍生物的量，用免疫化驗(yàn)法進(jìn)行試驗(yàn)的方法，其特 征在于，作為上述溶血/改性試劑，采用溶解紅血球，使上述血紅蛋白 衍生物改性為鋰鹽形態(tài)的陰離子，由此，可采用不明顯妨礙免疫化驗(yàn) 工序的鋰鹽濃度，迅速完成溶血及上述血紅蛋白衍生物的改性。另外，作為另外的改性方法，可以舉出用硫氰化化合物使血紅蛋白改性的方法(參見專利文獻(xiàn)2)。詳細(xì)地說，該方法是用于測定血 液試樣中的特定血紅蛋白衍生物相對量的分析方法，其特征在于，(a) 使血液試樣在(i)試樣中達(dá)到Q. 5~6. OM的濃度，使血液試樣中實(shí)質(zhì) 存在的全部血紅蛋白改性的硫氰酸鹽、(ii)血液試樣中實(shí)質(zhì)存在的 全部血紅蛋白，用氧化劑處理，使轉(zhuǎn)化成高鐵血紅蛋白，得到改性血 紅蛋白的工序；(b)定量改性血液試樣中的高鐵血紅蛋白的工序；(c) 用免疫化驗(yàn)法，定量改性血液試樣中改性形態(tài)的特定血紅蛋白衍生物 的工序；以及(d)使從上述工序(b)及(c)得到的試驗(yàn)結(jié)果加以相 關(guān)分析的工序。另外，作為另一改性方法，可以舉出用離子性表面活性劑進(jìn)行改 性的方法等(參見專利文獻(xiàn)3)。詳細(xì)地說，該方法是血液試樣中的 血紅蛋白4汙生物含量的測定方法，其特征在于，(a)血液試樣于4 37。C的溫度，用含有具有pH5~9. 5的離子性洗滌劑的溶血試劑處理 10分鐘；然后，(b)在使血紅蛋白衍生物溶血的血液試樣中進(jìn)行免 疫學(xué)測定。專利文獻(xiàn)l:特開平3 - 51759號公報專利文獻(xiàn)2:特開平1 - 155268號公報專利文獻(xiàn)3:特開平6-11510號公報發(fā)明內(nèi)容如上所述，使血紅蛋白改性的方法很多，各種方法均有利弊。例 如，上述專利文獻(xiàn)1或?qū)＠墨I(xiàn)2中記載的使用鋰鹽或硫氰化化合物 的方法中，特別優(yōu)選的是以硫氰酸鋰為首，硫氰酸鉀或硫氰酸銨等試 劑的潮解性非常高，因此，操作時要注意。另外，這些試劑由于難以 保持干燥形態(tài)，例如，當(dāng)在設(shè)備上負(fù)載時，因濕氣而變質(zhì)的試劑必需 另外注意等，操作上受很大的制約。另外，釆用上述專利文獻(xiàn)3中記載的使用離子性表面活性劑的方 法，由于其強(qiáng)烈的蛋白質(zhì)改性效果，對血紅蛋白改性處理后的免疫反 應(yīng)體系有不良影響，所以，必需釆用把血紅蛋白改性溶液用緩沖液等 稀釋，稀釋后的血紅蛋白溶液與免疫反應(yīng)試劑混合的多段操作。這種 復(fù)雜的測定方法，不方便，另外，因稀釋偏差而使測定值產(chǎn)生誤差。 另外，當(dāng)必需進(jìn)行稀釋操作時，則難以構(gòu)建簡易的測定系統(tǒng)。本發(fā)明的目的是為了解決這些原有的課題，提供一種在測定血紅 蛋白衍生物量時，減少通過改性試劑對免疫反應(yīng)的影響，同時迅速而 可靠地進(jìn)行血紅蛋白4汙生物改性的血紅蛋白4汙生物的測定方法，該法 中使用的試劑組合物、測定試劑盒、分析設(shè)備以及分析系統(tǒng)。為了解決上述原有的課題，本發(fā)明的血紅蛋白衍生物的測定方法， 包括把含血液成分的試樣，用非離子表面活性劑與氧化劑處理，使 上述試樣中的血紅蛋白改性的工序。因此，可以得到把對免疫反應(yīng)的影響抑制到最小限度并且迅速而 可靠地得到血紅蛋白的改性效果。另外，本發(fā)明的血紅蛋白衍生物的測定方法，是用非離子表面活 性劑與氧化劑進(jìn)行處理，把改性的血紅蛋白衍生物，采用對該血紅蛋 白衍生物改性部位特異的抗體進(jìn)行免疫化驗(yàn)而檢出。由此，可以檢出血紅蛋白衍生物。另外，本發(fā)明的血紅蛋白衍生物的測定方法，其中，上述血紅蛋 白衍生物是糖化血紅蛋白，用非離子表面活性劑與氧化劑進(jìn)行處理， 把改性的糖化血紅蛋白，釆用對該糖化血紅蛋白衍生物改性部位特異 的抗體進(jìn)行免疫化驗(yàn)而檢出。由此，可以檢出糖化血紅蛋白。另外，本發(fā)明的血紅蛋白衍生物的測定方法，是把上述試樣釆用 不明顯妨礙上述免疫化驗(yàn)的上述非離子表面活性劑濃度進(jìn)行處理的方 法。因此，在改性處理后不必進(jìn)行稀釋操作，除可以防止因稀釋造成 的測定精度下降外，還可以明顯提高用戶的操作性。 另外，本發(fā)明的血紅蛋白衍生物的測定方法，還包括測定上述試 樣中含有的血紅蛋白的工序，算出上述血紅蛋白衍生物對上述血紅蛋白的存在比。因此，可以得到試樣中血紅蛋白衍生物的存在比。另外，上述血紅蛋白衍生物為糖化血紅蛋白。由此，可以得到試樣中糖化血紅蛋白衍生物的存在比。本發(fā)明的試劑組合物，是用于測定含血液成分的試樣中的血紅蛋白衍生物的試劑組合物，至少含有非離子表面活性劑與氧化劑。由此，可以提供一種把對免疫反應(yīng)的影響抑制到最小限度并且迅速而可靠地得到血紅蛋白改性效果的試劑。另外，本發(fā)明的試劑組合物，還含有對該血紅蛋白衍生物改性部位特異的抗體。因此，僅把上述試劑組合物與上述試樣混合，就可以檢出血紅蛋 白衍生物。另外，本發(fā)明的試劑組合物，其中，上述血紅蛋白衍生物為糖化 血紅蛋白，還含有對該糖化血紅蛋白衍生物改性部位特異的抗體。因此，僅把上述試劑組合物與上述試樣混合，即可以檢出糖化血 紅蛋白。另外，本發(fā)明的試劑組合物，上述非離子表面活性劑的濃度為不 明顯妨礙上述免疫化驗(yàn)的濃度。因此，改性處理后不需進(jìn)行稀釋操作，除可以防止因稀釋造成的 測定精度下降外，還可以明顯提高用戶的操作性。本發(fā)明的測定試劑盒，是由對上述血紅蛋白衍生物改性部位保持 特異的抗體所構(gòu)成的。因此，提供一種把對免疫反應(yīng)的影響抑制到最小限度并且迅速而 可靠地得到血紅蛋白改性效果的測定試劑盒。另外，本發(fā)明的測定試劑盒，是包含對上述血紅蛋白衍生物改性 部位特異的抗體的測定試劑盒。因此，用戶即使不具有專門的知識，也可以簡《更地測定血紅蛋白
衍生物。另外，本發(fā)明的測定試劑盒，上述血紅蛋白衍生物為糖化血紅蛋 白，還包含對上述糖化血紅蛋白衍生物改性部位特異的抗體。因此，用戶即使不具有專門的知識，也可以簡便地測定糖化血紅 蛋白。還有，本發(fā)明的測定試劑盒，上述非離子表面活性劑的濃度為不 明顯妨礙上述免疫化驗(yàn)的濃度。因此，改性處理后不需進(jìn)行稀釋操作，除可以防止因稀釋造成的 測定精度下降外，還可以明顯提高用戶的操作性。本發(fā)明的分析設(shè)備，是用于測定含血液成分的試樣中的血紅蛋白衍生物的分析設(shè)備，其至少包括 添力口上述試才羊的試才羊添力口部^f立；與該試樣添加部位連結(jié)的、把上述添加試樣中的血紅蛋白衍生物， 用含非離子表面活性劑與氧化劑的試劑組合物加以改性的改性部；以 及與上述改性部連結(jié)的、檢測上述改性的血紅蛋白衍生物的檢測部。 因此，提供一種更簡便而迅速地使血紅蛋白改性的分析設(shè)備。 另外，本發(fā)明的分析設(shè)備，具有對上述血紅蛋白衍生物改性部位 負(fù)載了特異抗體的免疫化驗(yàn)部，把上述試樣中的血紅蛋白衍生物通過 上述試劑組合物加以改性后，把該改性的血紅蛋白衍生物，用上述抗 體進(jìn)行免疫化驗(yàn)而檢出。因此，通過添加作為檢測對象的試樣，可以更簡4更而迅速地檢出 該試樣中的血紅蛋白4汙生物。另外，本發(fā)明的分析設(shè)備，其中，上述血紅蛋白衍生物是糖化血 紅蛋白，具有負(fù)載了對該糖化血紅蛋白改性部位特異的抗體的免疫化 驗(yàn)部，上述試樣中的糖化血紅蛋白用上述試劑組合物改性后，把該改 性的糖化血紅蛋白，用上述抗體進(jìn)行免疫化驗(yàn)而檢出。由此，通過添加作為檢測對象的試樣，可以更簡4更而迅速地檢出 該試樣中的糖化血紅蛋白。
另外，本發(fā)明的分析設(shè)備，上述試劑組合物中含有的上述非離子 表面活性劑的濃度為不明顯妨礙上述免疫化驗(yàn)的濃度。因此，改性處理后不需進(jìn)行稀釋操作，除可以防止因稀釋造成的 測定精度下降外，還可以明顯提高用戶的操作性。另外，本發(fā)明的分析設(shè)備，還包括與上述試樣添加部位連結(jié)的、 用于檢測上述試樣中含有的血紅蛋白的檢測部，算出上述血紅蛋白衍 生物對上述血紅蛋白的存在比。因此，通過添加作為檢測對象的試樣，可更簡便而迅速地得到血 紅蛋白衍生物的存在比。另外，上述血紅蛋白衍生物為糖化血紅蛋白。因此，通過添加作為檢測對象的試樣，可更簡便而迅速地得到糖 化血紅蛋白的存在比。本發(fā)明的分析設(shè)備，由權(quán)利要求15~權(quán)利要求18的任何一項(xiàng)記 載的分析設(shè)備；在該分析設(shè)備的檢測部位，測定被檢出的上述血紅蛋 白4汙生物量的測定部構(gòu)成。因此，難以受到用戶的測定技術(shù)的影響，可簡便而迅速地測定血 紅蛋白衍生物。發(fā)明效果按照本發(fā)明的血紅蛋白衍生物的測定方法，由于采用非離子表面 活性劑與氧化劑，進(jìn)行含血液成分的試樣中血紅蛋白的改性處理，故 可迅速地可靠地進(jìn)行該改性處理。另外，特別是上述非離子表面活性劑，在血紅蛋白衍生物用免疫 化驗(yàn)進(jìn)行測定時，由于對免疫化驗(yàn)的阻礙效果少，不需改性處理溶液 的稀釋操作，故可以排除因稀釋偏差使測定精度降低的問題。另外， 由于不必進(jìn)行稀釋操作，可以構(gòu)筑更簡便方式的免疫化驗(yàn)。另外，測定上述血紅蛋白衍生物的同時，測定上述試樣中血紅蛋 白，可以算出上述血紅蛋白衍生物對上述血紅蛋白的存在比。按照本發(fā)明的試劑組合物，由于至少含非離子表面活性劑與氧化 劑，故上述血紅蛋白的改性處理可迅速而可靠地進(jìn)行。
另外，上述試劑組合物可以是液體狀、固體狀、液體千燥狀態(tài)的 任何一種，如是固體狀態(tài)，可以以更穩(wěn)定的狀態(tài)長時間保持。按照本發(fā)明的測定試劑盒，其 一 部分保持至少含非離子表面活性 劑與氧化劑的試劑組合物，通過該試劑組合物與上述試劑的混合，使 血紅蛋白改性，故可更筒便地、迅速而可靠地進(jìn)行上述血紅蛋白的改 性處理。另外，在上述測定試劑盒內(nèi)放置血紅蛋白測定所必要的試劑、采 樣器皿、使用說明書等，即使不具有專門的知識也可以更簡便地進(jìn)行 血紅蛋白衍生物的測定。按照本發(fā)明的分析設(shè)備，提供一種其一部分至少負(fù)栽了非離子表 面活性劑與氧化劑，上述血紅蛋白的改性處理可迅速而可靠地進(jìn)行， 削減用戶煩雜作業(yè)的裝置。另外，提供一種如下的裝置，在上述分析設(shè)備的一部分上，負(fù)載 了對上述血紅蛋白衍生物的改性部位具有特異性的抗體，在上述改性 處理后，利用上述抗體進(jìn)行免疫化驗(yàn)，檢出上述血紅蛋白衍生物的減 少用戶煩雜作業(yè)的裝置。按照本發(fā)明的分析設(shè)備，由負(fù)栽了測定上述血紅蛋白衍生物所必需試劑的分析設(shè)備；與該分析設(shè)備專用的測定部構(gòu)成。不受技術(shù)水平 的影響，可以簡便而迅速地進(jìn)行血紅蛋白衍生物的測定。


圖1是本發(fā)明的實(shí)施方案4中的分析系統(tǒng)構(gòu)成圖。圖2是本發(fā)明的實(shí)施方案4中的分析設(shè)備詳細(xì)構(gòu)成圖，圖(a)為其分解立體圖，圖(b)為向該分析設(shè)備添加試劑的狀態(tài)立體圖。 圖3是本發(fā)明的實(shí)施方案4中的分析系統(tǒng)另一構(gòu)成圖。 圖4是本發(fā)明的實(shí)施方案4中的分析設(shè)備詳細(xì)構(gòu)成圖，圖(a)為其分解立體圖，圖(b) ~ (d)為該分析設(shè)備中的改性處理順序圖。 圖5是本發(fā)明的實(shí)施例1中采用來自豬的胃蛋白酶處理標(biāo)準(zhǔn)液得到的對照曲線圖。
圖6是本發(fā)明的實(shí)施例1中采用來自豬的胃蛋白酶處理血液檢體 的時間與血紅蛋白改性率的關(guān)系圖。圖7是本發(fā)明的實(shí)施例1中各非離子表面活性劑與血紅蛋白改性 率的關(guān)系圖。圖8是本發(fā)明的實(shí)施例1中各非離子表面活性劑與血紅蛋白改性 率的關(guān)系圖。圖9是本發(fā)明的實(shí)施例1中各非離子表面活性劑對CMC的濃度比 與血紅蛋白改性率的關(guān)系圖。圖10是本發(fā)明的實(shí)施例1中各種鐵氰化鉀濃度與血紅蛋白改性率 的關(guān)系圖，圖(b)是本發(fā)明的實(shí)施例1中鐵氰化鉀量對血紅蛋白量之 比與血紅蛋白改性率的關(guān)系圖。圖ll是本發(fā)明的實(shí)施例1中各種非離子表面活性劑與離子表面活 性劑，對膠乳凝集反應(yīng)的影響說明圖。圖12是本發(fā)明的實(shí)施例1中改性糖化血紅蛋白，進(jìn)行膠乳凝集阻圖13是本發(fā)明的實(shí)施例2中用血紅蛋白B試驗(yàn)睪丸制劑測定血紅 蛋白的結(jié)果說明圖。圖14是本發(fā)明的實(shí)施例2中血液檢體A、 B的血紅蛋白濃度、與 糖化血紅蛋白濃度、與糖化血紅蛋白的存在比圖。圖15是本發(fā)明的實(shí)施例2中用東V -社的自動糖化血紅蛋白分析 計的血液檢體A、 B的測定結(jié)果圖。圖16是采用本發(fā)明的實(shí)施例3中分析系統(tǒng)測定血液檢體A、 B的 結(jié)果圖。符號說明100、 300分析系統(tǒng)101、 3Q1分析設(shè)備102 光源103 測試儀104 旋轉(zhuǎn)基板105 馬達(dá) 110、 310測定部 201下基板 202粘接層 203稀釋攪拌部 204稀釋液保持部 205檢測部A 206檢測部B 207流路 208定量部A 209定量部B 210改性試劑 211膠乳試劑 212凝集試劑 213上基板 215檢體注入口 216稀釋液注入口 302a上部容器 302b下部容器 303膠乳試劑 304試劑305溶液試劑用密封墊306注入口307容器用密封墊308光源309受光部具體實(shí)施方式
下面對本發(fā)明的血紅蛋白改性方法的實(shí)施方案加以詳細(xì)說明。(實(shí)施方案1)本發(fā)明的實(shí)施方案l包括把含血液成分的試樣用非離子表面活 性劑與氧化劑進(jìn)行處理，使上述試樣中的血紅蛋白改性的工序，對血 紅蛋白衍生物的測定方法進(jìn)行說明。上述血紅蛋白(以后用"Hb"表示)，a鏈與非oc鏈(P、 y、 5鏈)的球朊與血紅素結(jié)合，會合而形成的四聚體結(jié)構(gòu)作為基本結(jié)構(gòu)， 該血紅蛋白中有約90%為HbA ( ct2p2)、約3%為HbA2 ( cx252)、約 1%為HbF ( a2y 2)。而且，在上述HbA中，有在|3鏈氨基酸末端不結(jié) 合糖的HbAO與結(jié)合糖的HbAl，另外，在該HbAl中，有HbAla、 HbAlb、 HbAlc (下面，又稱"糖化血紅蛋白")，這些結(jié)合糖的HbAl稱作血 紅蛋白衍生物。把氨基酸殘基或肽末端是否存在修飾的區(qū)域，作為決定血紅蛋白 衍生物的點(diǎn)。例如，上述HbAla， 0鏈N末端被磷酸化糖修飾，上述 HbAlb， 13鏈N末端被醛化，而上述HbAlc， (3鏈N末端被糖化。因此，本實(shí)施方案1的血紅蛋白衍生物，意指與上述血紅蛋白的 一部分區(qū)域的結(jié)構(gòu)不同的血紅蛋白。還有，在此以外，血紅蛋白衍生物還有各種，例如通過亂用醇而 得到的乙醛-血紅蛋白加成物、尿毒癥患者血液中存在的尿素-血紅 蛋白加成物、以及乙酰水揚(yáng)酸-血紅蛋白復(fù)合物或羧曱基化血紅蛋白 等，其種類很多。作為血紅蛋白衍生物，特別是血紅蛋白蛋白質(zhì)的反應(yīng)性胺基與葡 萄糖通過非酶反應(yīng)生成的糖化血紅蛋白，作為有用的測定項(xiàng)目而被舉 出，但其測定項(xiàng)目又不限于此。如上所述，血紅蛋白僅一部分區(qū)域結(jié)構(gòu)不同的本實(shí)施方案1的血 紅蛋白4汙生物在測定時，可以區(qū)別.識別該血紅蛋白衍生物的稍有不 同的區(qū)域，有必要定性.定量各種血紅蛋白衍生物。而且，該血紅蛋 白衍生物的不同部分，即血紅蛋白衍生物特異的地方，從蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu) 內(nèi)向結(jié)構(gòu)外伸出(露出)，在本實(shí)施方案1中稱作"改性"，另外， 把從該蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)內(nèi)露出的部位稱作"改性過的部位，，。
在本實(shí)施方案1中，該改性處理采用非離子表面活性劑與氧化劑 來進(jìn)行。關(guān)于本實(shí)施方案1的改性程度，可以舉出構(gòu)成4級結(jié)構(gòu)的亞單位 結(jié)構(gòu)被解離的程度；構(gòu)成3級結(jié)構(gòu)的疏水鍵、氫鍵、范德瓦爾斯力、 離子鍵被解離的程度；使構(gòu)成2級結(jié)構(gòu)的ot -單螺旋或P位的結(jié)構(gòu)發(fā) 生變化的程度；或血紅蛋白變成直鏈狀結(jié)構(gòu)的程度的任何一種。一般情況下，蛋白質(zhì)作為生物體內(nèi)作為功能性物質(zhì)存在，這是由 于蛋白質(zhì)從這些結(jié)構(gòu)形成的精密的立體結(jié)構(gòu)被保持所致。因此，所謂 使結(jié)構(gòu)改變，意指至少蛋白質(zhì)的功能發(fā)生改變，其性質(zhì)改變。其中也 包括功能降低、或功能提高。本實(shí)施方案1中所謂非離子表面活性劑，意指由不具有電荷的疏 水性基與不具有電荷的親水性基構(gòu)成的化合物， 一般情況下，是為了 溶化蛋白質(zhì)而使用的，作為其性質(zhì)，要求其對目的蛋白質(zhì)的可溶化能 力強(qiáng)，不使該蛋白質(zhì)變性.失活，并且在免疫化驗(yàn)等活性測定體系內(nèi) 不顯示顯著的妨礙作用等。作為這種非離子表面活性劑之一例，可以舉出N， N-雙(卜D-葡糖酰氨基丙基)膽酰胺(以下用"BIGCHAP，，表示)N， N-雙(hD-葡糖酰氨基丙基)脫氧膽酰胺(以下用"脫氧 -BIGCHAP，，表示)正癸基-P-D-麥芽吡喃糖苷(以下用"正癸基-|3-D-麥芽苷，，表示)正十二烷基-P-D-麥芽吡喃糖苷(以下用"正十二烷基-P-D-麥 芽苷"表示)正庚基-P -D-硫代葡糖吡喃糖苷(以下用"正庚基-p -D-硫代葡 糖苷"表示)正辛?；?N-甲基葡糖胺(以下用"MEGA-8"表示) 正壬?；?N-甲基葡糖胺(以下用"MEGA-9"表示) 正癸酰基-N-甲基葡糖胺(以下用"MEGA-10"表示) 正壬基-P -D-硫代麥芽吡喃糖苷(以下用"正壬基-P -D-硫代麥 芽苷"表示)正辛基-P-D-葡糖吡喃糖苷(以下用"正辛基-P-D-葡糖苷"表示)正辛基-p-D-麥芽吡喃糖苷(以下用"正辛基-p-D-麥芽苷"表示)正辛基-P -D-硫代葡糖吡喃糖苷(以下用"正辛基-P -D-硫代葡 糖苷"表示)0-D-呋喃吡喃糖基-oc-D-葡糖吡喃糖苷單癸酸酯(以下用"蔗 糖單癸酸酯"表示)P -D-呋喃吡喃糖基-a -D -葡糖吡喃糖苷單月桂酸酯(以下用"蔗 糖單月桂酸酯"表示) 蔗糖單膽酸酯等。這種可溶化膜蛋白質(zhì)的非離子表面活性劑中，特別是具有不使該 蛋白質(zhì)變性 失活的特征，任何一種對蛋白質(zhì)的改性效果少。但是， 具有上述特征的非離子表面活性劑，己經(jīng)發(fā)現(xiàn)，進(jìn)一步與氧化劑組合， 并且對該組合的各種試劑通過選擇適當(dāng)?shù)臐舛龋蓪ρt蛋白可積極 地進(jìn)行改性(參見下述實(shí)施例1 (d))。但是，在本實(shí)施方案1中， 可以更有效地、迅速地、可靠地使血液檢體改性。在本實(shí)施方案l中，改性試劑有效地使血紅蛋白改性的條件，因 該非離子表面活性劑的種類而異。這是由于非離子表面活性劑的臨界 膠束濃度(下面用"CMC"表示)所致，血紅蛋白在氧化劑存在下，至 少在CMC以上，更優(yōu)選采用CMC的約2倍以上濃度，可有效地進(jìn)行改 性(參見下述實(shí)施例1 (e))。例如，當(dāng)蔗糖單月桂酸酯的CMC為0. 02%時，血紅蛋白可用0.05% 的濃度改性，當(dāng)蔗糖單癸酸酯的CMC為0. 13%時，血紅蛋白必需用0. 25% 以上的濃度。另外，關(guān)于上述氧化劑的濃度，必需是僅用于氧化全部血紅蛋白 的濃度，例如，使稀釋至500倍的血液中血紅蛋白改性時，必需采用 0. 1%以上的鐵氰化鉀(參見下述實(shí)施例1 (f))。因此，通過用氧化劑處理，提高改性效果的原因認(rèn)為是，首先通 過氧化劑是血紅蛋白高價化，由此易接受非離子表面活性劑的改性效 果所致。作為氧化劑，可從使血紅蛋白轉(zhuǎn)變成高價血紅蛋白形態(tài)的保有電荷物質(zhì)中選擇，作為其一例，除一般使用的K3Fe ( CN ) 6 (鐵氰化鉀) 以外，還可以舉出KI03、 KC103、 K2Cr04、 NaN02、 1[3(:0(卯2)6等,只要 具有氧化作用的即可而不限于此。另外，在本實(shí)施方案l中，所謂用"非離子表面活性劑與氧化劑 處理"，意指把能滿足得到所希望的改性效果的含有氧化劑的非離子 表面活性劑溶液加以調(diào)整，向含有血紅蛋白衍生物的檢體中添加，或 把能滿足得到上述所希望的改性效果條件的含有氧化劑的非離子表面 活性劑溶液，加入血液檢體。還有，把非離子表面活性劑溶液添加血 液檢體時，該非離子表面活性劑不僅有改性效果，而且必需兼有破壞 紅血球膜，溶出血紅蛋白(所謂"溶血，，)的效果。還有，采用非離子表面活性劑的處理方法，還包括把氧化劑與 非離子表面活性劑構(gòu)成的固體試劑，為了能滿足得到所希望的改性效 果的條件，往含上述血紅蛋白衍生物的檢體或向血液檢體中直接添加 的方法。另外，所謂上述"固體"，也可以是千燥物，作為干燥方法，可 以舉出風(fēng)千燥、熱干燥、真空干燥、真空冷凍干燥等。如上所述進(jìn)行操作，把含血紅蛋白衍生物的檢體或血液檢體，用 非離子表面活性劑與氧化劑進(jìn)行處理，使試樣中的血紅蛋白衍生物改 性后，釆用該被改性的血紅蛋白衍生物，進(jìn)行血紅蛋白衍生物的測定。 還有，在本實(shí)施方案l中，所謂血紅蛋白衍生物的測定方法，可以舉驗(yàn)，或與葡萄糖的順.二醇具有親和性的硼酸親合劑的方法等。在這里，本實(shí)施方案1中的血紅蛋白衍生物測定方法的大的優(yōu)點(diǎn) 是一邊把對免疫反應(yīng)的影響抑制至最小限度， 一邊采用非離子表面活 性劑及氧化劑對處理過的血紅蛋白衍生物的改性部位，采用特異的抗 體進(jìn)行免疫化驗(yàn)。即，在本實(shí)施方案l中，在血紅蛋白的改性工序， 通過釆用非離子表面活性劑， 一邊把對該免疫反應(yīng)的影響抑制至最小 限度， 一邊使決定血紅蛋白衍生物特異區(qū)域(改性部位)，伸出血紅 蛋白的結(jié)構(gòu)外，實(shí)施更特異的測定，并且在伴隨著抗原抗體反應(yīng)的復(fù) 合體形成時，由于立體障礙變小，故也可以提高抗原抗體反應(yīng)的反應(yīng) 效率。本實(shí)施方案1中所謂免疫化驗(yàn)，只要是以抗原抗體反應(yīng)作為基本的測定原理的即可， 一般已知的可以舉出免疫比濁法、免疫比模糊 法、膠乳免疫凝集法、免疫凝集阻止法、膠乳免疫凝集阻止法、熒光 免疫測定法、化學(xué)發(fā)光免疫測定法、電化學(xué)免疫測定法、熒光偏光免 疫測定法、免疫色層分離法的任何一種。另外，上述血紅蛋白衍生物中容易進(jìn)行測定的是糖化血紅蛋白， 作為其測定方法，可以釆用對糖化血紅蛋白的改性部位，即通過改性 使露出結(jié)構(gòu)外部的糖化血紅蛋白的糖化部位，利用特異的抗體的免疫 化驗(yàn)。上述所謂糖化血紅蛋白，意指HbAlc，近幾年來，作為三大成 人病之一成為問題的糖尿病患者用于管理的指標(biāo)，作為1 ~ 3個月長期 血糖控制的大致標(biāo)準(zhǔn)。具體的是，HbAlc，與非離子表面活性劑及氧化 劑作用而改性后，該HbAlc特有的13鏈N末端的氨基酸，對糖化過的 糖化部位采用特異的抗體，進(jìn)行免疫化驗(yàn)。而在一般情況下，該血紅蛋白衍生物，在臨床檢查領(lǐng)域，通過對 血紅蛋白量之比求出，故血紅蛋白衍生物的測定方法，包括測定試 樣中含有的血紅蛋白量的工序；測定該試樣中含有的血紅蛋白衍生物 量的工序；算出血紅蛋白衍生物量對該測定的血紅蛋白量之比的工序。測定試樣中含有的血紅蛋白量的工序，現(xiàn)在可以采用臨床檢查中 使用的血紅蛋白定量法，例如，除氰化高鐵血紅蛋白法或SLS-血紅 蛋白法外，還可以采用測定血紅蛋白在415nm吸收的方法。另外，這 也是對血紅蛋白采用抗體的免疫化驗(yàn)法。另外，在該工序測定的血紅蛋白量，不是通過完全溶血全部紅血
球而得到的試樣中含有的全部血紅蛋白量，而是溶血一部分紅血球的 部分血紅蛋白量。血紅蛋白4汙生物，如上所述，通過對血紅蛋白量之 比算出。另外，上述血紅蛋白衍生物僅限于HbAlc時，也可采用IFCC(國 際臨床化學(xué)聯(lián)合會)基準(zhǔn)法使用的計算法。即，通過HbAlc對HbAlcO 與HbAlc之和的比例加以計算的方法。下面，對IFCC基準(zhǔn)法加以詳細(xì) 說明，首先，把血液試樣用生理鹽水洗滌后，離心分離得到血球，于 37。C進(jìn)行4小時溫育，去除不穩(wěn)定型HbAlc。然后，把血紅蛋白濃度 調(diào)至6g/dL，用端蛋白酶與醋酸銨緩沖液(pH4. 0)，于37。C處理18 小時。把該溶液注入HPLC，得到糖化6鏈肽及6鏈肽，釆用電噴霧-離子化法求出峰面積。因此，含血紅蛋白衍生物的檢體或血液檢體，如用非離子表面活 性劑與氧化劑處理，使血紅蛋白改性，則既可確保安全性，又可迅速 而可靠地進(jìn)行血紅蛋白的改性。但是，為了進(jìn)行血紅蛋白改性，當(dāng)釆用原來的酶或離子性表面活 性劑等時，由于其強(qiáng)力的蛋白質(zhì)改性效果，對抗體的影響也大，特別 是具有濃度愈高抗體活性愈低的傾向，則不能構(gòu)建穩(wěn)定的免疫化驗(yàn)體 系。因此，原來在改性處理終止后，該血紅蛋白衍生物溶液必需稀釋 至不明顯妨礙免疫化驗(yàn)的濃度。然而，在本實(shí)施方案1中，改性處理中使用的非離子表面活性劑， 由于對免疫測定的影響小(參見下述實(shí)施例1 (g)),使血紅蛋白衍 生物改性，免疫化驗(yàn)中使用的抗體不被明顯改性，結(jié)果是，在一個測 定體系內(nèi)，血紅蛋白衍生物與抗體與非離子表面活性劑共存是可能的。 因此，在本實(shí)施方案l中，不必進(jìn)行稀釋操作而可以實(shí)施1步測定， 操作性可大幅度提高。另外，上述15種非離子表面活性劑中，特別是作為對免疫反應(yīng)影 響更小的，可以舉出(參見實(shí)施例1 (g)):正癸基-麥芽苷MEGA-IO
正壬基-p-D-硫代麥芽苷蔗糖單癸酸酯蔗糖單月桂酸酯等。這5種非離子表面活性劑，特別是即使在可以充分進(jìn)行血紅蛋白 改性的濃度，對免疫反應(yīng)的影響也小，即使?jié)舛茸兓?，對免疫反?yīng)的 影響也一定，可以構(gòu)建非常穩(wěn)定的免疫測定體系。當(dāng)然，對改性處理，即使使用上述5種非離子表面活性劑以外的 非離子表面活性劑，與原來使用的離子性表面活性劑等相比，由于對 免疫測定體系的影響非常小，故可以構(gòu)建非常穩(wěn)定的免疫測定體系(參 見下述實(shí)施例1 (h))。如上所述，按照本實(shí)施方案1中的血紅蛋白衍生物的測定方法， 包括把含血液成分的試樣，采用非離子表面活性劑與氧化劑進(jìn)行處 理，使上述試樣中的血紅蛋白改性的工序，故可以迅速且可靠地進(jìn)行 改性。另外，由于上述非離子表面活性劑對免疫化驗(yàn)的阻礙效果小， 故在改性處理后，通過免疫化驗(yàn)反應(yīng)測定血紅蛋白衍生物量時，對該 改性處理后的溶液不必進(jìn)行稀釋操作，可以防止因稀釋造成的測定精 度降低，同時，用戶的操作性也可以明顯提高。另外，按照本實(shí)施方案1，含血液成分的試樣，用非離子表面活 性劑與氧化劑處理時，使用的非離子表面活性劑的濃度，在其臨界膠 束濃度以上，更優(yōu)選達(dá)到CMC的約2倍以上濃度，則血紅蛋白的改性 效果更加提高。(實(shí)施方案2)下面，在實(shí)施方案2中，對至少含非離子表面活性劑與氧化劑的， 用于測定血紅蛋白衍生物的試劑組合物進(jìn)行說明。該試劑組合物既可以是液態(tài)，也可以是固體混合物，也可是上述 液態(tài)試劑組合物進(jìn)行干燥后的狀態(tài)。該試劑組合物，僅通過與含血紅 蛋白的試樣溶液混合，即可使血紅蛋白改性。因此，含非離子表面活 性劑與氧化劑的試劑組合物，是可簡單地用于測定血紅蛋白衍生物的 最基本的要素。當(dāng)以溶液狀態(tài)使用時，通過冷藏或辟光，可更加使試劑的穩(wěn)定性 提高。還有，干燥過的試劑組合物，與一般的溶液狀態(tài)相比，保存性良 好，可長期保存。在試劑組合物干燥時，可以采用風(fēng)干燥、熱干燥、真空干燥、真 空冷凍干燥等方法，特別是進(jìn)行冷凍干燥時，因冷凍該試劑組合物的 容器的形狀，可以制成各種圖案的試劑組合物。另外，如采用真空冷 凍干燥，則可以更加提高溶解性。另外，上迷試劑組合物中含有蛋白質(zhì)時，為了提高其穩(wěn)定性，在 該試劑組合物中加糖是有效的，另外，為了促進(jìn)免疫反應(yīng)，該試劑組 合物中也可含有聚乙烯醇等免疫反應(yīng)促進(jìn)劑。另外，當(dāng)使用鐵氰化鉀作為氧化劑時，通過在避光及千燥狀態(tài)下 保存，可以制成更長時間穩(wěn)定的試劑組合物。另外，在本實(shí)施方案2中，由于采用了對免疫反應(yīng)的影響相當(dāng)小 的非離子表面活性劑，故免疫化驗(yàn)中使用的抗體與非離子表面活性劑 可在一個體系內(nèi)共存，即，試劑組合物中也可含有上述抗體。上述試劑組合物中含有抗體時的試劑組合物制造方法，即使采用 風(fēng)干燥、熱干燥，也可以確保充分的穩(wěn)定性，但使用真空冷凍干燥的 方法是最希望的，該試劑組合物可保持穩(wěn)定。特別是，由于抗體是蛋 白質(zhì)，故加糖可以提高試劑組合物的穩(wěn)定性。如上所述，按照本實(shí)施方案2用于測定血紅蛋白衍生物的試劑組 合物，由于至少含有非離子表面活性劑及氧化劑，故上述血紅蛋白的 改性處理可迅速而可靠地進(jìn)行。另外，上述試劑組合物，可以是液態(tài)、固態(tài)、液體干燥后的狀態(tài) 的任何一種，特別是固態(tài)，則可以以更穩(wěn)定的狀態(tài)長期保持。另外，上述試劑組合物，如還含有對上述血紅蛋白衍生物改性部 位特異的抗體，則通過上述試劑組合物與上述試樣的混合，即可以檢 出血紅蛋白衍生物，故可以提高用戶的操作性。 (實(shí)施方案3)在實(shí)施方案3中，對保持至少含非離子表面活性劑及氧化劑的試 劑組合物，通過該試劑組合物測定血紅蛋白衍生物的測定試劑盒加以 說明。所謂測定試劑盒，意指存放測定血紅蛋白衍生物必要的試劑及部 件的試劑盒。具體地說，存放測定血紅蛋白衍生物必要的試劑、使用 說明書、刺血針或注射器等采血用具、采血前后必要的消毒用品、用 于添加試劑的分配器及吸液玻璃管等稱量器具等部件，采用這些試劑 及部件，采集作為檢查對象的試樣，定量稀釋，進(jìn)行該試樣的改性處 理等后，用臨床用的自動測定機(jī)或分光光度計等，可以簡便地測定血 紅蛋白衍生物。采用測定試劑盒，由于把血紅蛋白衍生物的改性，以及該測定前 的方法加以順序化，故按照使用說明書即使不具有專門的知識也可以 簡便地使用。另外，所謂測定血紅蛋白衍生物必要的試劑，意指至少 含非離子表面活性劑及氧化劑的試劑，由此，可以迅速而可靠地進(jìn)行 血紅蛋白衍生物的改性。另外，上述測定試劑盒，也可以在血紅蛋白衍生物上負(fù)載特異的 抗體。即，測定試劑盒由以下構(gòu)成，即含有使血紅蛋白溶血.改性的 非離子表面活性劑及氧化劑的試劑組合物；含有用于檢測血紅蛋白衍 生物的對上述血紅蛋白衍生物改性部位特異的抗體的試劑(例如，當(dāng) 使用膠乳凝集阻止反應(yīng)時為膠乳標(biāo)識抗體與作為凝集多價抗原的凝集 試劑)。把這些試劑類分別封入各種容器，血紅蛋白衍生物的溶血及 改性操作、進(jìn)而免疫化驗(yàn)操作依次進(jìn)行，由此，可更筒便地測定血紅 蛋白衍生物。還有，在這里，以膠乳凝集阻止反應(yīng)作為一例舉出，即 按照把采用血紅蛋白改性，對該改性過的血紅蛋白衍生物量，采用對定反應(yīng)，則不限于上述那些。另外，上述測定試劑盒中保持的上述試劑組合物與上述抗體，既
可以分別保持，也可以在試劑組合物中含有該抗體而加以保持。
另外，在上述測定試劑盒中，也可把測定試樣中血紅蛋白的試劑
封入或附加入容器。由此，可以算出血紅蛋白衍生物的存在比。存在
比的計算，特別是在測定糖化血紅蛋白時有用。
作為測定血紅蛋白的方法，除利用血紅蛋白本身的吸收，測定
415nm附近的峰波長，或測定540nm附近的波長的氰化高鐵血紅蛋白 法或SLS-血紅蛋白法外，作為例子還可以舉出膠乳凝集法等。
如上所述，按照本發(fā)明的實(shí)施方案3的測定試劑盒，由于具有把 用于測定血紅蛋白衍生物的必要試劑 一部分或全部，封入各自的容器， 故首先按照確定的順序，進(jìn)行溶血及血紅蛋白的改性，再把改性過的 血紅蛋白衍生物，釆用特異的識別試劑，測定改性的血紅蛋白量，即 使用戶不具有專門的知識，也可以更簡便地進(jìn)行血紅蛋白衍生物的測 定。更優(yōu)選的是，對上述測定試劑盒如再賦予可以測定試樣中血紅蛋 白濃度的試劑，算出血紅蛋白衍生物對血紅蛋白的存在比，則對于糖 化血紅蛋白測定時特別有用。
(實(shí)施方案4)
在實(shí)施方案4中，對用于測定血紅蛋白衍生物的分析設(shè)備加以說 明，該分析設(shè)備至少包括添加試樣的試樣添加部；用非離子表面活
改性的血紅蛋白衍生物量的檢測部。
關(guān)于分析設(shè)備，與評價該分析設(shè)備的測定裝置一起設(shè)置，形成分 析系統(tǒng)方式。通過該方式，可以簡便而迅速地測定血紅蛋白衍生物。
本實(shí)施方案4的分析設(shè)備，可以采取負(fù)載了非離子表面活性劑及 氧化劑，同時負(fù)載了對血紅蛋白衍生物的改性部位的特異試劑與凝集 試劑的方式，另外，也可以采取把這些分別在各自的地方負(fù)載的方式。
作為測定工序，首先，含有在使血液檢體與非離子表面活性劑 及氧化劑反應(yīng)的改性工序后，該改性過的血紅蛋白衍生物與對該血紅 蛋白衍生物改性部位的特異試劑，例如對血紅蛋白衍生物的特異抗體，
與在膠乳上標(biāo)識的膠乳標(biāo)識抗體及凝集試劑進(jìn)行反應(yīng)的工序。
在用非離子表面活性劑及氧化劑處理過的試樣溶液中，也可使與
上述膠乳標(biāo)識抗體及凝集試劑同時反應(yīng)，但是，也可與膠乳標(biāo)識抗體
反應(yīng)后，再與凝集試劑反應(yīng)。
而且，在使該試劑反應(yīng)后，通過測定反應(yīng)液的吸光度變化，算出
血紅蛋白衍生物的量。
另外，除算出血紅蛋白衍生物濃度以外，通過算出血紅蛋白濃度，
可以算出血紅蛋白^f汙生物對血紅蛋白的存在比。該血紅蛋白濃度的測
定，除利用血紅蛋白本身的吸收，測定415nm附近的峰波長，或測定 540nm附近的波長的氰化高鐵血紅蛋白法或SLS -血紅蛋白法外，作為 例子可以舉出膠乳凝集法等。
作為分析設(shè)備的形狀，對上述一 系列反應(yīng)及測定的順利進(jìn)行是重 要的。
作為分析設(shè)備之一例，例如，舉出利用離心力與毛細(xì)管力的設(shè)備， 通過分析設(shè)備內(nèi)形成的多個室(空間)與通過該室之間形成的流路使 液體試樣自由移送，由此，可以控制測定順序及試劑體積、反應(yīng)時間
等。而且，作為評價該結(jié)構(gòu)的分析設(shè)備的裝置之一例，可以舉出安裝 機(jī)構(gòu)的裝置。 ' 、 。、—P 、 、—、、"—
下面采用圖1、圖2，對上述分析設(shè)備及含有該分析設(shè)備的分析系 統(tǒng)之一構(gòu)成例加以it明。
圖l是分析系統(tǒng)的構(gòu)成圖。分析系統(tǒng)100的構(gòu)成包括分析設(shè)備 101;對該分析設(shè)備101，從光源102照射光，用測試儀103檢出透過 光的測定部110;該分析設(shè)備IOI，在其一部分挖通的地方加以固定的 旋轉(zhuǎn)基板104;使該旋轉(zhuǎn)基板104旋轉(zhuǎn)的馬達(dá)105。還有，圖l中，對 由馬達(dá)105的驅(qū)動機(jī)構(gòu)、光源102、測試儀103構(gòu)成的電路結(jié)構(gòu)則省略。
圖2是上述分析設(shè)備的詳細(xì)結(jié)構(gòu)圖，圖(a)為其分解立體圖，圖 (b)是添加試劑的狀態(tài)圖。
分析設(shè)備101由下基板201、上基板213、對上下兩面具有粘接效 果的粘接層202構(gòu)成，通過把這些粘接在一起而形成。上述下基板201， 釆用透明的樹脂基板，通過注射成型等，形成精度良好的各種形狀的 空間。詳細(xì)地說，在上述下基板201上具有一個凹部，用于形成使 血紅蛋白衍生物改性的作為改性部位的稀釋攪拌部203;稀釋液保持 部204;檢出添加的血紅蛋白量的檢出部A205;檢出該^皮改性的血紅 蛋白衍生物量的作為檢出部位的檢出部B206，在其上面通過注射成型 形成。另外，作為上述下基板201的樹脂原材料，只要是透過光的材 質(zhì)即可，作為一例，可以舉出聚碳酸酯或聚乙烯等塑料樹脂。
另外，粘接層202上，除形成上述稀釋攪拌部203、稀釋液保持 部204、檢出部A205、檢出部B206的圖案形狀外，還沖裁成分別與其 連接的流路207的圖案形狀。另外，檢出部A205及檢出部B206之前 的流路207，切除一部分使拓寬，由此，形成把移送至上述檢出部A205 及檢出部B206的液量進(jìn)行定量的定量部A208及定量部A209。作為獲 得粘接層202的粘接效果的材料，除粘接劑外，可以使用通過加熱可 以粘合的熱熔化片等，上述上基板213，由透明的樹脂基板構(gòu)成。
上述分析設(shè)備101，在上述下基板201與上述粘接層202貼合后， 貼合上述上基板H3前，如圖2(b)所示，在上述下基板201的稀釋 攪拌部203上，分別負(fù)載把由非離子表面活性劑及氧化劑構(gòu)成的改 性試劑210;在上述下基板201與通過粘接層202形成的定量室B209 上，把對血紅蛋白衍生物改性部位進(jìn)行特異反應(yīng)的膠乳試劑211;再 在上述檢出部B206上，把多層結(jié)合血紅蛋白衍生物的特異的抗原決定 基結(jié)構(gòu)的合成多價抗原所構(gòu)成的凝集試劑212;之后，用真空冷凍干 燥法進(jìn)行干燥，然后，把上述上基板213貼合在上述粘接層202上而 形成。另外，上述上基板213、上述粘接層202與上述下基板201通 過貼合形成的、在該粘接層202上切開的流路207的2個開口部，分 別作為檢體注入口 215與稀釋液注入口 216。
下面，對上述分析系統(tǒng)100的動作進(jìn)行說明。
在試樣分析中，例如使用分配器等，從分析設(shè)備101的檢體注入
口 215注入血液1 |i L,同時從稀釋液注入口 216注入稀釋液500 m L。 由此，血液保持在檢體注入口 215內(nèi)側(cè)的流路內(nèi)，而稀釋液保持在稀 釋液保持部204中。
其次，在上述旋轉(zhuǎn)基板104的挖通的地方，設(shè)置注入血液與稀釋 液的分析設(shè)備101，用馬達(dá)105以規(guī)定的轉(zhuǎn)數(shù)旋轉(zhuǎn)一定的時間。通過 該旋轉(zhuǎn)，稀釋液與血液被移送至上述稀釋攪拌部203并加以混合，形 成稀釋試樣，通過非離子表面活性劑及氧化劑的作用，引起溶血及血
紅蛋白衍生物的改性。
再次，通過使旋轉(zhuǎn)基板104的旋轉(zhuǎn)停止，該試樣液利用毛細(xì)管現(xiàn) 象通過流路207，移送至定量部A208與定量部B209。
移送至上迷定量部B209的試樣液，在該定量部B209中，與預(yù)先 保持的膠乳試劑211混合，膠乳試劑211與該試樣液中的血紅蛋白衍 生物結(jié)合。
然后，再度把上述旋轉(zhuǎn)基板104，通過馬達(dá)105以一定轉(zhuǎn)數(shù)旋轉(zhuǎn) 一定時間，把移送至定量部A208的試樣液移送至檢出部A205，另一 方面，把在上述定量部B209與膠乳試劑211混合的試樣液移送至檢出 部B206。
上述檢出部B206負(fù)載的凝集試劑212，和不與血紅蛋白衍生物結(jié) 合的膠乳試劑結(jié)合，根據(jù)血紅蛋白衍生物的濃度發(fā)生膠乳凝集阻止反 應(yīng)。在一定時間后，通過實(shí)施定量部B206的透過光測定，檢出膠乳凝 集阻止反應(yīng)。
同時，通過測定檢出部A205，測定血紅蛋白的吸收，算出血紅蛋 白濃度。
上述檢出部B206中的膠乳凝集阻止反應(yīng)的測定，可用550nm附近 的波長進(jìn)行測定，上述檢出部A205中的血紅蛋白的測定，可以采用測 定415nm附近的極大吸收的方法，也可以采用測定540mn附近吸收的 方法。
任何一種方法也是根據(jù)預(yù)先決定了濃度的血紅蛋白以及血紅蛋白 衍生物的測定結(jié)果，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線，利用該標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別算出血紅
蛋白與血紅蛋白衍生物的濃度，或算出與該血紅蛋白及血紅蛋白衍生 物的濃度有關(guān)的血紅蛋白衍生物的存在比。在這里，作為一例可以舉出，由于分析設(shè)備101為芯片狀，故可利用離心力與毛細(xì)管力進(jìn)行液體移送，控制測定體系的順序及試劑量、 反應(yīng)時間等的分析系統(tǒng)，只要是測定體系的順序及試劑量、反應(yīng)時間 等是可以控制的形狀即可，對其構(gòu)成及方法未作限定，關(guān)于液體移送， 例加，用泵通過壓力移送液體的方法等是十分可能的。另外，上述分 析設(shè)備，例如，既可以是色層柱形態(tài)，更單純地說，也可以是長方體 的塑料制造的池形態(tài)，采用試劑的負(fù)栽方法。下面，采用圖3及圖4，對更簡單的構(gòu)成的分析設(shè)備及采用該分 析設(shè)備的分析系統(tǒng)加以說明。圖3是本實(shí)施方案4中的分析系統(tǒng)另一結(jié)構(gòu)圖。分析系統(tǒng)300, 對該分析設(shè)備301，從光源308照射光，在受光部309具有檢出透過 光的測定部310。還有，圖3中由光源308、受光部309連接的電路結(jié) 構(gòu)，或該分析設(shè)備301安裝在上述分析系統(tǒng)中的結(jié)構(gòu)則省略。圖4是上述分析設(shè)備301的詳細(xì)結(jié)構(gòu)圖，圖(a)是其分解立體圖， 圖(b) ~ (d)是上述分析設(shè)備301中的試劑改性處理順序圖。分析設(shè)備301由具有注入血液檢體的注入口 306的下部盒302b; 用于密閉該下部盒302b開放的底面的溶液試劑用密封墊305;上部盒 302a;用于密閉上述注入口 306的盒用密封墊307構(gòu)成，上述上部盒 302a與下部盒302b互相開放的底面，用粘接劑貼合形成。上述下部盒302b，為底面開放的塑料制長方體盒，如圖4(b)所 示，在由非離子表面活性劑及氧化劑構(gòu)成的試劑中，添加對上述血紅 蛋白衍生物改性部位特異的抗體的試劑304，用試劑用密封墊305加 以密封保持。上述上部盒302a，是與上述下部盒302b形狀大致相同的底面開 放的塑料制長方體盒，在其上端，如圖4(b)所示，負(fù)載了真空冷凍 干燥的、與血紅蛋白衍生物進(jìn)行特異反應(yīng)的膠乳試劑303。下面，對上述分析系統(tǒng)300的動作加以說明。 在試樣的分析中，例如，使用分配器等，向下部盒302b注入含非 離子表面活性劑、氧化劑及凝集試劑的試劑304,采用上述試劑用密 封墊305密封該下部盒302b后，如圖4(b)所示，該下部盒302b與 負(fù)栽了上述膠乳試劑的上部盒302a，用粘合劑進(jìn)行貼合。上述溶液試 劑用密封墊305被剝離后，例如，用分配器等，從上述注入口 306注 入血液檢體O. 5juL，如圖4(c)所示，采用盒用密封墊307,密閉上 述注入口 306。而且，上述上部盒302a的上端負(fù)載的膠乳試劑303上， 穩(wěn)定混合與上述試劑304不同的上述血液檢體與試劑304,放置規(guī)定 時間。還有，在計算血紅蛋白濃度時，此時，上述分析設(shè)備301如圖 3所示設(shè)置在分析系統(tǒng)300中，通過測定部310測定540nm的吸光度。其次，如圖4(d)所示，使上述分析設(shè)備301的下部盒302b處 于上方，上述膠乳試劑303混合在添加了血液檢體的試劑304中，放 置規(guī)定時間。經(jīng)過規(guī)定時間后，上述分析設(shè)備301，如圖3所示，設(shè)置在分析 系統(tǒng)300中，通過測定部310測定550nm的吸光度，由此可以算出血 紅蛋白衍生物的濃度。如上所述，按照本發(fā)明的實(shí)施方案4，設(shè)計出負(fù)載了血紅蛋白衍 生物測定時必要的試劑的分析設(shè)備，同時，構(gòu)筑與該分析設(shè)備專用的 測定部組合的分析系統(tǒng)，故不受技術(shù)的影響，簡便而迅速地進(jìn)行血紅 蛋白衍生物的測定。實(shí)施例1下面，血紅蛋白衍生物是以糖化血紅蛋白為代表性的檢查項(xiàng)目 HbAlc，與非離子表面活性劑一起添加的氧化劑，作為一例舉出鐵氰化 鉀，對各種非離子表面活性劑的改性效果加以檢驗(yàn)。(a)糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)液的制作(對照液的制作) 測定糖化血紅蛋白值的試劑類， 一律使用從口；工.夕'47夕'乂 只f1 4少夕只抹式會it購買的3^義試劑HbAlc。
首先，為了確認(rèn)膠乳凝集試劑對糖化血紅蛋白的響應(yīng)特性，對試劑盒同時封入的24. 6jjM的糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)液，制成xl倍、x2 倍、x4倍、x8倍、xl6倍、x32倍、x64倍、x 128倍的稀釋系 列。(b )通過膠乳凝集阻止反應(yīng)的糖化血紅蛋白濃度與吸光度變化量 的關(guān)系在上述(a)中制作的各濃度的糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)液2juL，添加 100niL的100kU/L來自豬的胃蛋白酶溶液(稀釋51倍)后，處理3 分鐘。然后，取該反應(yīng)液102jaL中的14jiL，添加至光路長lcm的塑 料池中，該池中放入可與560 p L糖化血紅蛋白的糖化部位特異結(jié)合的 膠乳試劑溶液，使反應(yīng)4分鐘。另外，往該反應(yīng)液中添加0. 5 y g/mL 的合成多價糖化血紅蛋白抗原112juL， 3分鐘后，測定550nm的吸光 度變化量。圖5是橫軸為糖化血紅蛋白濃度，縱軸為吸光度變化量的曲線圖。 還有，為了把糖化血紅蛋白濃度從摩爾變成mg/dL，血紅蛋白分子量 以64500進(jìn)行計算。(c )對照測定法中血紅蛋白改性所需處理時間的確認(rèn) 采用來自豬的胃蛋白酶處理3分鐘的方法，為了血液中的糖化血 紅蛋白全部被改性，^皮測定出，己被確認(rèn)，對血液檢體進(jìn)行最長25 分鐘的改性處理，測定膠乳凝集阻止反應(yīng)中的吸光度值。該操作采用 與上述(b)中記栽的同樣方法來進(jìn)行。圖6是橫軸為改性處理時間，縱軸為血紅蛋白改性率的曲線圖。 還有，各處理時間的血紅蛋白改性率，血液檢體采用來自豬的胃蛋白 酶，處理25分鐘時算出的糖化血紅蛋白濃度作為100%進(jìn)行計算。如圖6所示，處理時間3分鐘以上時，算出的糖化血紅蛋白的濃 度的變化基本上未被確認(rèn)，故可判斷3分鐘全部血紅蛋白己被分解處 理。因此，采用來自豬的胃蛋白酶處理3分鐘，可檢出全部糖化血紅
蛋白，故作為血紅蛋白改性試驗(yàn)的對照處理法。(d)多種非離子表面活性劑中，血液中的血紅蛋白改性效果的確認(rèn)對下面示出的IO種非離子表面活性劑，確認(rèn)各自的血紅蛋白改性效果正癸基-P-D-麥芽苷 正十二烷基-P-D-麥芽苷 正庚基-P-D-硫代葡糖苷 MEGA - 8 MEGA - 9 MEGA- 10正壬基-13-D-硫代麥芽苷 正辛基-p-D-葡糖苷 蔗糖單癸酸酯 蔗糖單月桂酸酯等改性方法，制作含0. 1 ~ 9%濃度的上述10種類的非離子表面活性 劑與0. 25%鐵氰化鉀(氧化劑)的水溶液100 m L，添加2 p L血液檢體 (稀釋至51倍)后，于25。C放置3分鐘。然后，把反應(yīng)液102yL中 的14y L，與用糖化血紅蛋白抗體標(biāo)識的膠乳試劑溶液560juL反應(yīng)4 分鐘。然后，與112juL凝集試劑反應(yīng)，3分鐘后測定560nm吸光度的 變化量。改性的確認(rèn)，首先，從用來自豬的胰蛋白酶處理過的相同的血液檢體的膠乳凝集阻止反應(yīng)時的吸光度值，算出血液檢體中的糖化血紅蛋白濃度(對照值)，然后，從用上述IO種類的非離子表面活性劑處理同樣的血液檢體時的膠乳凝集阻止反應(yīng)時的吸光度值，求出血液中的糖化血紅蛋白濃度。另外，對上述胰蛋白酶處理過的對照，用上述非離子表面活性劑處理過的血液檢體，求出百分之幾的糖化血紅蛋白， 將其作為血紅蛋白的改性比例。
圖7橫軸為非離子表面活性劑濃度，縱軸為改性比例的曲線圖。 從圖7可以確認(rèn)取決于非離子表面活性劑種類，改性效果高的非離子表面活性劑濃度有所不同，但任何一種與作為對照的胰蛋白酶處理具有同等的血紅蛋白改性效果。(e )非離子表面活性劑可有效地使血液中的血紅蛋白改性的非離 子表面活性劑的濃度確認(rèn)下面示出5種類的非離子表面活性劑各自的血紅蛋白改性效果的 確認(rèn)。蔗糖單癸酸酯蔗糖單桂酸酯正壬基-p-d-硫代麥芽苷正癸基-P-d-麥芽苷改性方法，制作含0. 05 ~ 5%濃度的上述5種類的非離子表面活性 劑與0. 25%鐵氰化鉀(氧化劑)的水溶液lmL，添加2 p L血液檢體(稀 釋至501倍)后，于25。C放置3分鐘。然后，把反應(yīng)液1002 mL中的 140jaL,與用糖化血紅蛋白抗體標(biāo)識的膠乳試劑溶液560liL反應(yīng)4 分鐘。然后，與112 iaL凝集試劑反應(yīng)，3分鐘后在550nm測定吸光度 的變化量。改性的確認(rèn)，與上述(d)同樣，首先，從用來自豬的胰蛋 白酶處理過的相同的血液檢體的膠乳凝集阻止反應(yīng)時的吸光度值，算 出血液檢體中的糖化血紅蛋白濃度(對照值)，然后，從用上述10 種類的非離子表面活性劑處理同樣的血液檢體時的膠乳凝集阻止反應(yīng) 時的吸光度值，求出血液中的糖化血紅蛋白濃度，把上述胰蛋白酶處 理過的作為對照，求出各非離子表面活性劑的改性率。圖8橫軸為非離子表面活性劑濃度，縱軸為糖化血紅蛋白改性比 例的曲線圖。圖9橫軸為非離子表面活性劑的cmc (臨界膠束濃度) 與該非離子表面活性劑濃度之比，縱軸為糖化血紅蛋白改性比例的曲 線圖。圖8與圖7同樣，血紅蛋白改性效果高的非離子表面活性劑濃度
因種類而異，如圖9所示，非離子表面活性劑濃度與各非離子表面活 性劑的CMC比較，可以確認(rèn)對任何一種CMC，在2倍以上的濃度，改 性效果高。(f )血紅蛋白改性的必要的氧化劑(鐵氰化鉀)的濃度確認(rèn) 作為非離子表面活性劑的蔗糖單癸酸酯，用鐵氰化鉀改性效果的 確認(rèn)。改性方法，對0. 5%的蔗糖單癸酸酯，制作含0、 0. 01、 0. 05、 0. 1、 0. 25、 0. 5%的鐵氰化鉀的水溶液lmL，添加2 y L血液檢體(稀釋至501 倍)后，于25。C放置3分鐘。然后，把反應(yīng)液1002 jjL中的140/aL，與用糖化血紅蛋白抗體標(biāo) 識的膠乳試劑溶液560juL反應(yīng)4分鐘。然后，與112juL凝集試劑反 應(yīng)，3分鐘后在550nm測定吸光度的變化量。還有，在該試驗(yàn)中，血 液檢體的血細(xì)胞比容值(Hct )調(diào)整至20、 45、 70%后使用。改性的確認(rèn)，與上述(d)同樣，首先，從用來自豬的胰蛋白酶處 理過的相同的血液檢體的膠乳凝集阻止反應(yīng)時的吸光度值(對照值)， 算出血液檢體中的糖化血紅蛋白濃度，然后，從用非離子表面活性劑 處理同樣的血液檢體時的膠乳凝集阻止反應(yīng)時的吸光度值，求出血液 中的糖化血紅蛋白濃度。而且，把上述胰蛋白酶處理過的作為對照， 用上述非離子表面活性劑處理的血液檢體，求出被檢出的百分之幾的 糖化血紅蛋白，將其作為血紅蛋白的改性比例。圖10 (a)，橫軸為鐵氰化鉀濃度，縱軸為血紅蛋白改性比例的 曲線圖，圖10 (b)是橫軸為鐵氰化鉀量與血紅蛋白量之比，縱軸為 血紅蛋白改性比例的曲線圖。按照圖10(a)可知，單獨(dú)采用非離子表面活性劑時，血紅蛋白 改性效果低，與非離子表面活性劑同時采用0. 1%以上的鐵氰化鉀同時 進(jìn)行處理，即〗吏血細(xì)胞比容值達(dá)到70%的血液檢體也可以充分改性。按照圖10 (b)可知，鐵氰化鉀量對血紅蛋白量如達(dá)到2倍以上， 血液中的血紅蛋白全部被改性，鐵氰化鉀的存在對血紅蛋白被改性的影響大。(g)非離子表面活性劑對膠乳凝集反應(yīng)(免疫化驗(yàn)反應(yīng))的影響確認(rèn)下面示出的9種類的非離子表面活性劑對膠乳凝集反應(yīng)的影響確認(rèn)。正癸基-p-D-麥芽苷 正庚基-P -D-疏代葡糖苷 MEGA - 8 MEGA - 9 MEGA -10正壬基-l3-D-硫代麥芽苷 正辛基-p-D-葡糖苷 蔗糖單癸酸酯 蔗糖單月桂酸酯等改性方法，往上述膠乳試劑溶液中添加各種非離子表面活性劑后， 添加凝集試劑，3分鐘后測定550nm吸光度的變化量。對免疫化驗(yàn)反應(yīng)的影響確認(rèn)，添加非離子表面活性劑使最終濃度 達(dá)到0. 25~ 1.4%左右時的膠乳凝集反應(yīng)的吸光度變化量與不添加非 離子表面活性劑時的膠乳凝集反應(yīng)的吸光度變化量進(jìn)行比較。另外，同時采用與上述同樣的方法，對專利文獻(xiàn)3中記載的非離 子表面活性劑的月桂基硫酸鈉(SLS)，在0. 1%與0. 25%濃度，確認(rèn)對 膠乳凝集反應(yīng)的影響。圖11是橫軸為表面活性劑濃度，縱軸為對照的吸光度變化量作為 100%時的各非離子表面活性劑的吸光度變化量的曲線圖。按照圖11，涉及離子性表面活性劑的月桂基疏酸鈉(SLS)，可 知由于濃度加大而產(chǎn)生的極端膠乳凝集反應(yīng)的降低傾向，而非離子表 面活性劑對膠乳凝集反應(yīng)的影響緩慢。另外，非離子表面活性劑中，特別是正癸基-p-D-麥芽苷、正庚
基-P-D-硫代葡糖苷、MEGA-10、蔗糖單癸酸酯、蔗糖單月桂酸酯等， 即使在具有充分的血紅蛋白改性效果的濃度，己確認(rèn)對膠乳凝集反應(yīng) 的影響小。這是由于血紅蛋白改性溶液，即使作為原樣的膠乳凝集反 應(yīng)或膠乳凝集阻止反應(yīng)中的反應(yīng)用試劑組成，也可以充分使用。(h )非離子表面活性劑存在下的膠乳凝集阻止反應(yīng)(免疫化驗(yàn)反 應(yīng))的效果確認(rèn)準(zhǔn)備糖化血紅蛋白濃度不同的3種類的血液檢體。 首先，在血液2mL中，添加IOOjjL的100kU/L來自豬的胃蛋白 酶溶液(稀釋501倍)后，處理3分鐘，取該反應(yīng)液102yL中的14 jaL，添加至光路長lcm的塑料池中，該池中放入可與560 pL糖化血 紅蛋白的糖化部位特異結(jié)合的膠乳標(biāo)識抗體溶液，使反應(yīng)4分鐘。另 外，往該反應(yīng)液中添加0. 5|ag/mL的合成多價糖化血紅蛋白抗原112 ML， 3分鐘后，測定550nm的吸光度變化量。對各濃度的血液檢體也 進(jìn)行同樣試驗(yàn)。其次，在血液2jjL中，添加100 jaL的0. 5。/。的蔗糖單癸酸酯及 0. 25%的4失氰化鉀溶液，處理3分鐘，取該反應(yīng)液102yL中的14mL， 添加至光路長lcm的塑料池中，該池中放入可與560juL糖化血紅蛋白 的糖化部位特異結(jié)合的膠乳試劑及0. 5%的蔗糖單癸酸酯及0. 25%的鐵 氰化鉀溶液，使反應(yīng)4分鐘。另外，往該反應(yīng)液中添加0. 5pg/mL的 合成多價糖化血紅蛋白抗原112jnL， 3分鐘后，測定550nm的吸光度 變化量。與胰蛋白酶的場合同樣，對各濃度的血液檢體也進(jìn)行同樣實(shí) 驗(yàn)。圖12橫軸為糖化血紅蛋白濃度，縱軸為吸光度變化量的曲線圖。 按照圖12,由于可以得到根據(jù)糖化血紅蛋白濃度的吸光度，故采 用0. 5%的蔗糖單癸酸酯及0. 25%的鐵氰化鉀溶液進(jìn)行血紅蛋白衍生物 的改性反應(yīng)，并且，在含該改性試劑組成的狀態(tài)下進(jìn)行膠乳凝集阻止 反應(yīng)。 實(shí)施例2下面對測定血紅蛋白4汙生物的存在比的方法加以-沈明。(a) 血紅蛋白濃度的對照測定血紅蛋白的測定，使用從和光純藥工業(yè)林式會社購買的"血紅蛋 白B-測試和光( 乇夕'口 O B-:f久卜！7 - -)，，。將其采用SLS-血 紅蛋白法檢出血紅蛋白的方法。首先，按下列順序進(jìn)行血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作。 制作對3. 5mM月桂基硫酸鈉溶液5mL，把5g/dL、 10 g/dL、 15. Og/dL的血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)液分別各添加2Q(aL的反應(yīng)液與添加 15. 0g/dL血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)液40fiL,在光路長lcm的池內(nèi)測定540nm的 吸光度。圖13是15. Og/dL的血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)液添加40y L的反應(yīng)液血 紅蛋白濃度作為30g/dL，橫軸為血紅蛋白濃度，縱軸為吸光度的曲線 圖，將其作為血紅蛋白濃度測定的對照。(b) 糖化血紅蛋白存在比的計算其次，作為測定對象的血液檢體A、 B各20jliL，添加至3. 5mM月 桂基硫酸鈉溶液5mL。測定該反應(yīng)液在540nm的吸光度，從相對于圖 13己知的血紅蛋白濃度的吸光度數(shù)據(jù)，求出上述血液檢體A、 B的血 紅蛋白濃度。然后，在0. 5%的蔗糖單癸酸酯/0. 25%的鐵氰化鉀溶液100 pL中添加上述2 pL的血液檢體A、 B，放置3分鐘。然后，取該反應(yīng) 液102jliL中的14jLiL，與用糖化血紅蛋白抗體標(biāo)識的膠乳溶液560 mL 反應(yīng)4分鐘。然后，與112ML凝集試劑反應(yīng)，3分鐘后測定吸光度的 變化量。圖14為血液檢體A、 B的血紅蛋白濃度、糖化血紅蛋白濃度、以 及全部血紅蛋白中糖化血紅蛋白占有的比例圖。圖15是上述血液檢體A、 B，釆用作為糖化血紅蛋白測定標(biāo)準(zhǔn)法 的東乂社的自動糖化血紅蛋白分析計(HLC-723GHbV),測定糖化血紅 蛋白占有比例的結(jié)果。把圖14與圖15進(jìn)行比較，顯示相關(guān)性非常高的結(jié)果。對其采用 0. 5%的蔗糖單癸酸酯/0. 25%的鐵氰化鉀溶液處理血液檢體，進(jìn)行充分 的血紅蛋白改性，可以算出糖化血紅蛋白的濃度。還有，在這里示出，非離子表面活性劑僅是蔗糖單癸酸酯時的實(shí) 驗(yàn)結(jié)果，而具有改性效果的其他非離子表面活性劑也顯示同樣的結(jié)果。實(shí)施例3下面對釆用圖3所示分析系統(tǒng)測定血紅蛋白衍生物進(jìn)行說明。 (a) 分析設(shè)備的制造首先，在圖4 (a)所示底面開放的，長0. 5cmx寬0. Scmx高lcm 的塑料制的上部盒302a的上端，如圖4 (b)所示，把含有在糖化血 紅蛋白上可特異結(jié)合的膠乳試劑與5%蔗糖的溶液構(gòu)成的膠乳試劑 303，采用真空冷凍千燥加以負(fù)載。其次，與圖4 (a)所示的上述上部盒302a同樣形狀的塑料制的 下部盒302b上，如圖4(b)所示，注入作為試劑304的0. 5%的蔗糖 單癸酸酯及0. 25%的4失氰化鉀構(gòu)成的溶液0. 2mL,以及合成多價糖化血 紅蛋白抗原，用溶液試劑用密封墊305密封后，把上述上部盒301與 上述下部盒302，用粘合劑貼合使與互相開放的底面吻合，形成分析 設(shè)備301。(b ) 分析首先，剝?nèi)ト芤涸噭┯妹芊鈮|305，從分析設(shè)備301的注入口 306 注入0. 5 ijL的血液檢體，如圖4(c)所示，在該注入口306貼合盒 用密封墊307，使分析設(shè)備301密閉。其次，上述上部盒302a中負(fù)載的膠乳試劑303上，穩(wěn)定地混入試 劑304,于該狀態(tài)放置3分鐘后，如圖3所示，把分析設(shè)備301安裝 在分析系統(tǒng)300內(nèi)，采用上述測定部310測定540nm的吸光度。其次，如圖4(d)所示，使分析設(shè)備301反轉(zhuǎn)，使上述上部盒302a 的膠乳試劑303與試劑304混合溶解后，放置3分鐘后，如圖3所示， 把上述分析設(shè)備301安裝在分析系統(tǒng)300中，上述膠乳試劑303溶解 3分鐘后，用測定部310測定540nm的吸光度。
對測定部310的詳細(xì)說明省略，從光源308向分析設(shè)備301照射 光，在受光部309檢出透過光。還有，作為測定部310之一例，如采 用分光光度計的功能，則可以充分使用，詳細(xì)說明省略。還有，在這 里，通過540nm測定氰化高鐵血紅蛋白，通過550mn測定膠乳凝集。 該一系列測定動作，對上述血液檢體A及B進(jìn)行。其后，采用上述分析系統(tǒng)300，利用己知濃度的血紅蛋白溶液及 糖化血紅蛋白溶液，預(yù)先作成氰化高鐵血紅蛋白的標(biāo)準(zhǔn)曲線，以及糖 化血紅蛋白的膠乳凝集阻止反應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，代入上述得到的吸光度 值，求出上述血液檢體A、 B的血紅蛋白濃度及糖化血紅蛋白濃度。圖16是分別表示血液檢體A、 B的糖化血紅蛋白濃度及血紅蛋白 濃度以及糖化血紅蛋白的存在比。按照圖16，采用本分析系統(tǒng)300,測定糖化血紅蛋白的存在比的 結(jié)果表明，首先與釆用東/社的自動糖化血紅蛋白分析計 (HLC-723GHbV)測定糖化血紅蛋白占有比例(參見圖15)非常近， 釆用本分析系統(tǒng)，可以正確測定糖化血紅蛋白濃度。產(chǎn)業(yè)上利用的可能性按照本發(fā)明，可以迅速并且可靠地使試樣液中的血紅蛋白改性， 故可正確測定血紅蛋白4汙生物的濃度。
權(quán)利要求
1.血紅蛋白衍生物的測定方法，其特征在于，其中包括把含血液成分的試樣，用非離子表面活性劑與氧化劑處理，使上述試樣中的血紅蛋白改性的工序。
2. 按照權(quán)利要求1記載的血紅蛋白衍生物的測定方法，其特征在 于，把用上述非離子表面活性劑與氧化劑處理而改性的血紅蛋白衍生檢出。
， 、 P 、. "
3. 按照權(quán)利要求2記載的血紅蛋白衍生物的測定方法，其特征在 于，上述血紅蛋白衍生物為糖化血紅蛋白，把用上述非離子表面活性 劑與氧化劑處理而改性的糖化血紅蛋白，采用對該糖化血紅蛋白的改 性部位特異的抗體進(jìn)行免疫化驗(yàn)而檢出。
4. 按照權(quán)利要求2或權(quán)利要求3記載的血紅蛋白衍生物的測定方 法，其特征在于，采用不明顯妨礙上述免疫化驗(yàn)的上述非離子表面活 性劑濃度處理上述試樣。
5. 按照權(quán)利要求1~權(quán)利要求4中任何一項(xiàng)記載的血紅蛋白衍生 物的測定方法，其特征在于，還包括測定上述試樣中含有的血紅蛋 白的工序，算出上述血紅蛋白衍生物對上述血紅蛋白的存在比。
6. 按照權(quán)利要求5記載的血紅蛋白衍生物的測定方法，其特征在 于，上述血紅蛋白衍生物為糖化血紅蛋白。
7. 試劑組合物，其是用于測定含血液成分的試樣中血紅蛋白衍生 物的試劑組合物，其特征在于，至少含非離子表面活性劑與氧化劑。
8. 按照權(quán)利要求7記載的試劑組合物，其特征在于，上述試劑組 合物還含有對上述血紅蛋白衍生物改性部位特異的抗體。
9. 按照權(quán)利要求7記載的試劑組合物，其特征在于，上述血紅蛋 白衍生物為糖化血紅蛋白，還含有對上述糖化血紅蛋白改性部位特異 的抗體。
10. 按照權(quán)利要求8或權(quán)利要求9記載的試劑組合物，其特征在于， 上述非離子表面活性劑濃度為不明顯妨礙上述免疫化驗(yàn)的濃度。
11. 測定試劑盒，其是用于測定含血液成分的試樣中血紅蛋白衍生 物的測定試劑盒，其特征在于，包含至少含有非離子表面活性劑與氧 化劑的試劑組合物。
12. 按照權(quán)利要求11記載的測定試劑盒，其特征在于，還包含上 述血紅蛋白衍生物改性部位特異的抗體。
13. 按照權(quán)利要求12記載的測定試劑盒，其特征在于，上述血紅 蛋白衍生物為糖化血紅蛋白，還包含對上述糖化血紅蛋白改性部位特 異的抗體。
14. 按照權(quán)利要求12或權(quán)利要求13記載的測定試劑盒，其特征在 于，上述非離子表面活性劑濃度為不明顯妨礙上述免疫化驗(yàn)的濃度。
15. 分析設(shè)備，其是用于測定含血液成分的試樣中血紅蛋白衍生物 的分析設(shè)備，其特征在于，至少包括添加上述試樣的試樣添加部位；與該試樣添加部位連結(jié)的、把上述添加了的試樣中的血紅蛋白4汴 生物，用含非離子表面活性劑與氧化劑的試劑組合物加以改性的改性 部；以及與上述改性部連結(jié)的、檢測上述改性的血紅蛋白衍生物的檢測部。
16. 按照權(quán)利要求15記載的分析設(shè)備，其特征在于，具有對上述 血紅蛋白衍生物改性部位負(fù)載了特異抗體的免疫化驗(yàn)部，把上述試樣 中的血紅蛋白衍生物通過上述試劑組合物加以改性后，再把該改性的 血紅蛋白衍生物，用上述抗體進(jìn)行免疫化驗(yàn)而檢出。
17. 按照權(quán)利要求15記栽的分析設(shè)備，其特征在于，上述血紅蛋 白衍生物為糖化血紅蛋白，具有對上述糖化血紅蛋白的改性部位負(fù)載 了特異抗體的免疫化驗(yàn)部，把上述試樣中的糖化血紅蛋白通過上述試 劑組合物加以改性后，再把該改性的血紅蛋白衍生物，用上述抗體進(jìn) 行免疫化驗(yàn)而檢出。
18. 按照權(quán)利要求16或權(quán)利要求17記載的分析設(shè)備，其特征在于， 上述試劑組合物中含有的上述非離子表面活性劑濃度為不明顯妨礙上 述免疫化驗(yàn)的濃度。
19. 按照權(quán)利要求15~權(quán)利要求18中任何一項(xiàng)記載的分析設(shè)備， 其特征在于，還包括與上述試樣添加部位連結(jié)的、檢出上述試樣中 含有的血紅蛋白的檢出部，算出上述血紅蛋白衍生物對上述血紅蛋白的存在比。
20. 按照權(quán)利要求19記栽的分析設(shè)備，其特征在于，上述血紅蛋 白衍生物為糖化血紅蛋白。2L分析系統(tǒng)，其包括權(quán)利要求15 ~權(quán)利要求18中任何一項(xiàng)記載的分析設(shè)備；與 對在該分析i殳備的檢出部位檢出的上述血紅蛋白衍生物量加以測 定的測定部。
全文摘要
本發(fā)明用非離子表面活性劑與氧化劑構(gòu)成的改性試劑處理含血液成分的試樣溶液，使該試樣溶液中的血紅蛋白衍生物改性后，利用對該血紅蛋白衍生物改性部位特異的抗體進(jìn)行免疫化驗(yàn)，測定上述試樣中的血紅蛋白衍生物量。由此，進(jìn)行血紅蛋白衍生物測定時，把改性試劑對免疫反應(yīng)的影響抑制至最低限度，迅速而且可靠地進(jìn)行血紅蛋白的改性。
文檔編號G01N33/53GK101160527SQ200680012119
公開日2008年4月9日 申請日期2006年4月12日 優(yōu)先權(quán)日2005年4月14日
發(fā)明者北脇文久, 田中宏橋, 田中正教 申請人:松下電器產(chǎn)業(yè)株式會社