專利名稱：：用于評(píng)價(jià)個(gè)體變應(yīng)原敏感性的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及監(jiān)測(cè)變應(yīng)原免疫治療效果的方法。技術(shù)背景變態(tài)反應(yīng)是免疫系統(tǒng)的功能障礙，其中個(gè)體是過敏性的，對(duì)被稱為變應(yīng)原的、典型的本質(zhì)上無害物質(zhì)產(chǎn)生免疫反應(yīng)。參與變態(tài)反應(yīng)的主要抗體是IgE。每個(gè)個(gè)體都具有不同的IgE抗體，并且每個(gè)變態(tài)反應(yīng)物質(zhì)刺激產(chǎn)生其本身特定的IgE產(chǎn)物。因此，結(jié)合定義的變應(yīng)原的IgE抗體僅僅與該變應(yīng)原產(chǎn)生反應(yīng)。IgE的恒定區(qū)(Fc區(qū)域)能夠結(jié)合特定的細(xì)胞受體，其能夠釋放組胺或者其它炎癥介質(zhì)、細(xì)胞因子和/或蛋白酶進(jìn)入周圍組織。釋放組胺的細(xì)胞主要是肥大細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞。當(dāng)結(jié)合細(xì)胞的IgE通過變應(yīng)原接觸并交聯(lián)時(shí)，就會(huì)引發(fā)釋放組胺。特別地，組胺引起主要的變態(tài)反應(yīng)。例如在鼻、眼和竇房結(jié)中釋放的組胺刺激打噴嚏、流鼻涕和眼睛發(fā)癢；在肺部釋放的組胺會(huì)引起氣道的內(nèi)層(lining)的收縮和膨脹，并引起分泌稠黏液；在皮膚釋放的組胺會(huì)引起疹或蕁麻疹；在消化系統(tǒng)釋放的組胺會(huì)引起胃痙攣和腹瀉。典型的反應(yīng)原來自植物花粉，比如黑麥草、豕草、梯牧草和白樺樹花粉、霉菌孢子，藥物比如青霉素類、磺胺嘧啶類(sulfanomides)、水楊酸鹽類和局部麻醉劑類，食物比如堅(jiān)果、海鮮，蛋類，豌豆、豆類、花生以及其他豆類、牛奶，昆蟲產(chǎn)物比如蜜蜂蟄毒、黃蜂螫毒、蟑螂和塵螨，及動(dòng)物毛發(fā)和皮屑。存在許多變態(tài)反應(yīng)的醫(yī)學(xué)治療方法。在醫(yī)學(xué)實(shí)踐中通常使用三種主要的方法化療、免疫療法以及其它的醫(yī)學(xué)方法。在化療中，拮抗藥常被用于阻斷變態(tài)反應(yīng)介質(zhì)的反應(yīng)，防止細(xì)胞活化和去顆?；^程。它們包括抗組胺劑、腎上腺皮質(zhì)素、腎上腺素(腎上腺素制劑(印in印hrine))、膽茶堿和色甘酸鈉。這些藥物有助于減輕過敏性癥狀，但是在長(zhǎng)期緩解病癥中起的作用很小。它們?cè)谀承┗加羞^敏癥的患者的急性恢復(fù)中起緊急作用。在其它藥物中，醫(yī)生們認(rèn)為許多治療方法在治療過敏癥中是有效的，尤其是傳統(tǒng)中藥。然而，這些中沒有一種得到良好的品質(zhì)證據(jù)的支持。最有前景的治療形式可能是免疫療法。在免疫療法過程中，個(gè)體逐漸接種，以抗逐漸增加劑量的相應(yīng)免疫原。這樣可以減輕過敏的嚴(yán)重行或者完全消除過敏癥。另外，可以注射單克隆的抗-IgE抗體。這些抗體結(jié)合游離的IgE，其發(fā)出用于破壞的這些信號(hào)源。但它們不會(huì)結(jié)合己經(jīng)在嗜堿粒細(xì)胞和肥大細(xì)胞上的Fc受體的IgE，因?yàn)檫@將刺激過敏性炎癥應(yīng)答。在變態(tài)反應(yīng)免疫反應(yīng)中使用的蛋白質(zhì)和糖蛋白通常是從以下物質(zhì)中提取的，比如花粉，霉菌，毛皮和昆蟲毒液。根據(jù)臨床評(píng)價(jià)，每周一次或兩次以遞增的劑量重復(fù)皮下注射引起疾病的變應(yīng)原或其衍生物的溶液，直至達(dá)到維持劑量。然后，每2到4周注射該維持劑量。為了以一種成功的方法實(shí)現(xiàn)免疫治療，必須進(jìn)行對(duì)所述療法進(jìn)程的監(jiān)測(cè)。例如，Wantke等(ClinExpAllergy23(1993)992-995)公開了監(jiān)測(cè)用于過敏性結(jié)膜炎(rhinoconjimctivitis)的免疫療法的方法。其中作者分析了自發(fā)性組胺釋放，即，在免疫治療前和免疫治療后的病人中，不加入變應(yīng)原而釋放的組胺，并且，其還顯示暴露于變應(yīng)原后的釋放進(jìn)入血液中的組胺在治療4個(gè)月后明顯減少。但是，該方法不能用于評(píng)估對(duì)某種特定的變應(yīng)原和治療的特定效果的敏感性改變。St印han等(Allergy44(1989)453-459)經(jīng)超過五年的時(shí)間通過分析變應(yīng)原誘發(fā)組胺在全血中的釋放研究了蜂毒免疫療法的效果。但是，該項(xiàng)研究的作者并沒有將組胺釋放的結(jié)果和臨床參數(shù)聯(lián)系在一起，例如，皮膚敏感性，因此也沒有數(shù)據(jù)證實(shí)使用所述試驗(yàn)可測(cè)定和反映給定變應(yīng)原的臨床敏感性。而且，在治療前后獲得的樣本也不能互相比較。Yuta等(Arerugi51(2002)634-648)研究了從嗜堿粒細(xì)胞中釋放的組胺，其用于評(píng)價(jià)過敏性鼻炎的免疫治療。作者分析了治療開始時(shí)和免疫治療6個(gè)月后的樣本，并表明了治療的積極效果。在這篇文獻(xiàn)中，分析了治療前后獲得的樣本，作者僅能夠表明該短暫記錄(rushprotocol)導(dǎo)致細(xì)胞衰竭，但并未表明組胺釋放減少。在這篇文獻(xiàn)中，其表明在免疫治療誘導(dǎo)的"封閉性抗體"之前短暫免疫治療已經(jīng)開始發(fā)揮作用，g卩，在幾小時(shí)或者幾天之后。這可以解釋為細(xì)胞的衰竭。然而，對(duì)在治療幾周后出現(xiàn)的封閉性抗體的效果評(píng)估是很重要的。因此，必須采用IgG抗體仍舊存在于例如全血中的分析測(cè)定。與此相反，在Yuta等人的文章中，細(xì)胞被清洗過，因此，不能測(cè)定此阻滯IgG的干擾。除了組胺釋放之外，用于評(píng)價(jià)嗜堿細(xì)胞和肥大細(xì)胞活性的其它方法是己知的，其包括測(cè)量leutrienes的釋放(VanRooyen&Anderson:R.J.Immunol.Methods2004，288，1-7)，纖維蛋白溶酶(TairaM等.，J.Asthma2002，39，315-322)和其它肥大細(xì)胞或嗜堿細(xì)胞產(chǎn)物的釋放，當(dāng)特異性變應(yīng)原激活肥大細(xì)胞和嗜堿細(xì)胞時(shí)，釋放這些產(chǎn)物。此外，由于個(gè)體暴露在變應(yīng)原中導(dǎo)致活性的標(biāo)記物比如CD63和CD203c的上調(diào)也可以通過流式細(xì)胞計(jì)量法測(cè)定(HauswirthA.W.等J.AllergyClin.Immunol.2002，110，102-109)。
發(fā)明內(nèi)容因此，本發(fā)明的一個(gè)目的是提供檢測(cè)個(gè)體變應(yīng)原免疫治療的可能的臨床有效性和進(jìn)程和個(gè)體變應(yīng)原敏感性的體外途徑和方法。因此，本發(fā)明提供一種評(píng)價(jià)個(gè)體變應(yīng)原敏感性和/或變應(yīng)原免疫療法的臨床有效性的方法，其包括步驟一采集至少兩個(gè)來自接受或打算接受用至少一種純的變應(yīng)原或其衍生物免疫治療個(gè)體的樣本，所述樣本選自血液或者其成分、結(jié)締組織、鼻的、支氣管的、皮膚的或者消化道的活組織檢查物質(zhì)，其中所述樣本包含對(duì)所述變應(yīng)原產(chǎn)生應(yīng)答時(shí)能夠釋放介質(zhì)的細(xì)胞，一使所述樣本與所述變應(yīng)原或其衍生物接觸，和一確定從所述樣本中釋放出的介質(zhì)含量，并且評(píng)價(jià)個(gè)體在治療前的變應(yīng)原敏感性和/或通過比較所述含量來評(píng)價(jià)免疫治療的臨床效果。為了保證有效的治療，對(duì)個(gè)體變應(yīng)原敏感性和/或臨床效果，以及變應(yīng)原免疫治療的進(jìn)程的評(píng)價(jià)是很重要的，例如，所述評(píng)價(jià)通過改變變應(yīng)原的給藥劑量和/或給藥時(shí)間間隔。因此，需要一種可靠的方法來監(jiān)測(cè)免疫治療，該方法能夠直接反應(yīng)個(gè)體在免疫治療過程中對(duì)某類型的變應(yīng)原蛋白酶?jìng)魅拘砸蜃拥拿舾行浴Ｅc變應(yīng)原特殊結(jié)合的IgE量的檢測(cè)證實(shí)其并不適于確定個(gè)體對(duì)于某種類型的變應(yīng)原的致敏性程度，因?yàn)榇嬖谟趥€(gè)體中的IgE量與從肥大細(xì)胞和嗜堿性細(xì)胞釋放出的介質(zhì)之間沒有直接的相關(guān)性。所以，包含介質(zhì)釋放細(xì)胞的個(gè)體樣本的介質(zhì)釋放是優(yōu)選的。令人驚奇的是，根據(jù)本發(fā)明的方法提供了與傳統(tǒng)使用的皮膚過敏試驗(yàn)相比，如果不是相同的也是相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果。從個(gè)體采集到的樣本優(yōu)選地與免疫治療中相同的變應(yīng)原接觸。但是，也有可能用過敏原提取物進(jìn)行免疫治療，并用基本上純化的("純的")變應(yīng)原來監(jiān)測(cè)所述治療。當(dāng)然，根據(jù)本發(fā)明的方法也可以通過確定個(gè)體變應(yīng)原在治療過程中的敏感性來監(jiān)測(cè)變應(yīng)原免疫治療的進(jìn)程。根據(jù)本發(fā)明的"變應(yīng)原"是能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性抗體(IgE)的分子或分子混合物，IgE觸發(fā)介質(zhì)釋放細(xì)胞釋放介質(zhì)，且引起個(gè)體繼發(fā)的過敏應(yīng)變效應(yīng)。當(dāng)然，"變應(yīng)原"也能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生不同于IgE的抗體(例如，IgG)。然而，在根據(jù)本發(fā)明的方法中使用的變應(yīng)原優(yōu)選為純化的，即，變應(yīng)原實(shí)質(zhì)上由一種單一的變應(yīng)原分子組成，其中純度超過90%(w/w)，優(yōu)選95%(w/w)，最優(yōu)選99°/q(w/w)。由于使用了基本上純化的或者分離的變應(yīng)原，才有可能以可再現(xiàn)的方式確定和計(jì)量在免疫治療中和在根據(jù)本發(fā)明的方法中使用的變應(yīng)原。與此相反，取決于特定的純化條件，變應(yīng)原提取物包含不同濃度的特異性變應(yīng)原。此外，過敏原提取物也可以包含多于一種變應(yīng)原，其可以以不同濃度存在于提取物中(需要的變應(yīng)原的量不能以精確的方式定義)，并且可以進(jìn)一步引起交叉反應(yīng)(例如見MarthK等(2004)J.AllergyClin.Immunol.113:470-474;MarthKetal.(2004)XXIIIEAACIcongressabstractbook597181;AkkerdaasHJetal.(2003)Arb.PaulEhrlichInst.BundesamtSeraImpfstoffeFrankf.a.M.94:87-95)。此外，變應(yīng)原提取物可能含有影響所述提取物穩(wěn)定性的雜質(zhì)或其他物質(zhì)。該問題也可通過使用基本上純化的或者'純的"變應(yīng)原來避免。如在本文中使用的術(shù)語"衍生的"變應(yīng)原是指經(jīng)過修飾的變應(yīng)原(刪除、定點(diǎn)突變、截短等等)，它們?nèi)燥@示出與衍生其的天然變應(yīng)原相同的變應(yīng)原性質(zhì)和IgE結(jié)合性。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施選方式，所述介質(zhì)選自組胺、纖維蛋白溶酶、前列腺素、白三烯，尤其是半胱氨酰白三烯，嗜酸細(xì)胞陽離子蛋白、細(xì)胞因子比如白介素(IL)，特別是IL-2R、CD63、CD203c及其組合。將所述個(gè)體暴露于變應(yīng)原之后，個(gè)體的變應(yīng)性反應(yīng)主要是由肥大細(xì)胞釋放的介質(zhì)引起的。這些介質(zhì)產(chǎn)生了變應(yīng)性反應(yīng)的早期癥狀(例如噴嚏、搔癢)，且生成刺激產(chǎn)物并滲透到粒細(xì)胞循環(huán)的局部組織中(例如，嗜酸性細(xì)胞)。該介質(zhì)可由通過脫粒(組胺或蛋白酶)或重新合成所述介質(zhì)之后從細(xì)胞中釋放(QuraishiS.A等人，JA0AS叩plement5，104:S7-S15)。根據(jù)本發(fā)明，也可確定了除介質(zhì)之外的激活標(biāo)記物(例如YoshimuraC等(2002)JAllergyClinImmunol.109:817-23)。樣本是血液或其成分(例如血漿、血清)、結(jié)締組織、鼻的、支氣管的、皮膚或者消化道的活組織檢査物質(zhì)。介質(zhì)釋放細(xì)胞可以發(fā)現(xiàn)于血液及其成分、結(jié)締組織和某些其它組織中。令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)使用純的變應(yīng)原，尤其是當(dāng)使用全血時(shí)，根據(jù)本發(fā)明的方法非常精密地反映出表皮敏感性。與此相反，特異性IgE的測(cè)定與表皮的敏感性并不相關(guān)。因此，本發(fā)明所采用的樣本可以是血液樣本(優(yōu)選肝素化血(h印arinisedblood))或者結(jié)締組織。在根據(jù)本發(fā)明的方法中使用的介質(zhì)釋放細(xì)胞可以是從樣本中分離出來的。由于這種分離，可除去存在于所述樣本中的其它可能的干擾物質(zhì)。例如，特別是考慮到在樣品與變應(yīng)原接觸時(shí)測(cè)定釋放進(jìn)入樣本中的介質(zhì)量的過程中，血液可以包含能提供高背景的釋放介質(zhì)。這一問題可以通過在樣本暴露于變應(yīng)原之前，測(cè)定存在于其中的介質(zhì)量來避免。另一方面，試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示組胺釋放與皮膚敏感性之間基本上沒有相關(guān)性，例如存在。因此，根據(jù)本發(fā)明是使用的樣本在與變應(yīng)原或其衍生物接觸之前并不是分離的或洗過的。這一點(diǎn)可以通過以下事實(shí)來推導(dǎo)，當(dāng)洗滌介質(zhì)釋放細(xì)胞時(shí)，樣本中所有的抗體都被去除，包括其應(yīng)當(dāng)在變應(yīng)原治療期間誘導(dǎo)的那些IgG抗體，和其將起阻斷抗體的作用以減少IgE變應(yīng)原復(fù)合物的量(因?yàn)槠渑cIgE分子競(jìng)爭(zhēng))的那些IgG抗體(參見，例如Stahl-Skov等人(1977)Clin.Exp.Immunol.27:432-439)。優(yōu)選地，所述細(xì)胞為肥大細(xì)胞和/或嗜堿細(xì)胞和/或嗜酸細(xì)胞。肥大細(xì)胞和嗜堿細(xì)胞為當(dāng)暴露在變應(yīng)原中時(shí)釋放大多數(shù)介質(zhì)，尤其是組胺的細(xì)胞。肥大細(xì)胞存在于皮膚、肺和胃腸道的結(jié)締組織中，而嗜堿性細(xì)胞存在于血液中。這些細(xì)胞可以通過已知的方法分離，并可用于根據(jù)本發(fā)明的方法中。用于肥大細(xì)胞的分離試驗(yàn)設(shè)計(jì)參見JamurMC等(JHistochemCytochem.199745:1715-1722)，MasseyWA(JImmunol.1991147:1621-7)，用于嗜堿性細(xì)胞的分離方法參見ValentP.(Proc.Natl.Acad.SciUSA1989，86，5542-5546)。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例，所述樣本進(jìn)一步包含免疫球蛋白(Ig)，尤其是免疫球蛋白G(IgG)。所述過程優(yōu)選地用包含IgG的樣本來例如，全血樣本來進(jìn)行。在這些樣本中存在IgG是優(yōu)選的，因?yàn)槠涫沟脤⑺黾?xì)胞暴露于變應(yīng)原時(shí)能測(cè)定阻斷IgG的干擾。在變應(yīng)原免疫治療過程中，產(chǎn)生了耙向于所述變?cè)腎gGs。當(dāng)將個(gè)體與所述變應(yīng)原接觸，并阻止變應(yīng)原與IgE結(jié)合時(shí)，這些IgGs結(jié)合變應(yīng)原。因?yàn)?，變?yīng)原結(jié)合IgGs的產(chǎn)物直接參與個(gè)體對(duì)變應(yīng)原的應(yīng)答，從而，影響個(gè)體對(duì)變應(yīng)原的敏感性，因此，所述該樣本優(yōu)選地應(yīng)當(dāng)包括IgGs。為了評(píng)價(jià)個(gè)體對(duì)變應(yīng)原的敏感性或者變應(yīng)原免疫療法的臨床效果，優(yōu)選地在所述個(gè)體接受免疫治療前后采集樣本。為監(jiān)測(cè)和評(píng)價(jià)免疫治療的效果，有必要在治療前和治療過程中測(cè)定個(gè)體對(duì)于變應(yīng)原的敏感性。因此，在治療的不同階段確定介質(zhì)釋放。在治療過程中，變應(yīng)原的敏感性理想地下降。而且，在治療前的一個(gè)或多個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)定介質(zhì)釋放可能有助于在治療過程中定量所述變應(yīng)原。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選地的實(shí)施方案，所述樣本是在所述個(gè)體在接受免疫治療后采集的。當(dāng)然，免疫治療也可以通過在首次給予包含一種變應(yīng)原的藥物后分析樣本來單獨(dú)評(píng)價(jià)。優(yōu)選地，至少一個(gè)樣本為在所述個(gè)體接受免疫治療后最長(zhǎng)1小時(shí)、2小時(shí)、6小日寸、12小時(shí)、24小時(shí)、5天、10天、4周、6個(gè)月、12個(gè)月、24個(gè)月和36個(gè)月后采集。被分析的樣本可以在首次給予變應(yīng)原藥物后一個(gè)確定的時(shí)間段后被采集。同時(shí)單獨(dú)確定釋放的介質(zhì)之間的時(shí)間間隔最好是在1小時(shí)、2小時(shí)、6小時(shí)，、12小時(shí)、2天、5天、l周、2周、4周、2個(gè)月、4個(gè)月、6個(gè)月、12個(gè)月、24個(gè)月之間變化。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案，所述變應(yīng)原是重組產(chǎn)生的。有效的變應(yīng)原免疫治療和精確測(cè)定介質(zhì)釋放的方法優(yōu)選地用由重組產(chǎn)生的變應(yīng)原進(jìn)行。由于基因工程很可能產(chǎn)生一種高含量的特異性變應(yīng)原，并分離所述變應(yīng)原。變應(yīng)原通常直接分離自包含變應(yīng)原的原料(例如，花粉)，并且由于所述變應(yīng)原包含在提取物中，所述變應(yīng)原通常是不同的變應(yīng)原和潛在的致敏性物質(zhì)的混合物的一部分。甚至純化的"天然的變應(yīng)原"包含各種亞型，這些亞型中的某些可能甚至是高過敏性的或非過敏性的，從而，給出錯(cuò)誤的測(cè)試結(jié)果(FerreimF.等.，J.Exp.Med.1996，183，599-609)。這一問題可以由變應(yīng)原的重組產(chǎn)品而避免。用于對(duì)個(gè)體給藥使用的變應(yīng)原也可以用于根據(jù)本發(fā)明的方法中。所述變應(yīng)原優(yōu)選地包括至少一個(gè)刪除部分，至少一個(gè)替代部分或者至少一個(gè)插入部分。在治療過程中，無論患者是否對(duì)低變應(yīng)原或者它們的衍生物變得敏感，都可使用這些低變應(yīng)原或者其衍生物。根據(jù)本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述變應(yīng)原通過基因工程重組所述變應(yīng)原片段而被修飾。優(yōu)選地，使所述樣本與不同濃度的所述變應(yīng)原接觸。從介質(zhì)釋放細(xì)胞釋放出的介質(zhì)的量取決于根據(jù)本發(fā)明的方法中應(yīng)用的變應(yīng)原的濃度。用于誘導(dǎo)不同量的介質(zhì)釋放的變應(yīng)原的濃度越高，從個(gè)體采集到的細(xì)胞的敏感性就越低，反之亦然。因此，介質(zhì)釋放量的確定需要采用不同濃度的變應(yīng)原。優(yōu)選地，所述變應(yīng)原的濃度選自lng/ml到lOOPg/ml的范圍內(nèi)，優(yōu)選lpg/ml至10Pg/ml的范圍內(nèi)。根據(jù)一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，確定包含在從個(gè)體采集的樣本中的細(xì)胞介質(zhì)總量。為了測(cè)定存在于細(xì)胞中的介質(zhì)總量，將這些細(xì)胞例如經(jīng)過幾次凍融循環(huán)而進(jìn)行裂解。確定的介質(zhì)量表明所述介質(zhì)可能通過所述細(xì)胞釋放，該值可以被用于確定細(xì)胞對(duì)于某一變應(yīng)原的細(xì)胞致敏度。細(xì)胞致敏度(degreeofcellularsensitisation)優(yōu)選地是通過確定能誘導(dǎo)10%，優(yōu)選30%的所述細(xì)胞介質(zhì)的總量的所述變應(yīng)原的濃度來定義。細(xì)胞致敏度是免疫治療進(jìn)程的指針，因?yàn)樗@示了占10%，優(yōu)選20%，25%,30%的存在于介質(zhì)釋放細(xì)胞中的介質(zhì)的總量的細(xì)胞的濃度。在一個(gè)理想的變應(yīng)原免疫治療過程中，使用的變應(yīng)原濃度將增加，因?yàn)閺乃黾?xì)胞釋放一定量介質(zhì)的高濃度的變應(yīng)原表明細(xì)該胞比先前測(cè)定的細(xì)胞敏感性低。而且，也可以評(píng)價(jià)誘導(dǎo)介質(zhì)釋放的最大劑量。這樣就產(chǎn)生了劑量響應(yīng)曲線，和用于測(cè)定所述曲線在變應(yīng)原免疫治療過程中的變化。因此，個(gè)體的變應(yīng)原敏感性和/或變應(yīng)原免疫治療的臨床效果優(yōu)選地通過觀察在所述免疫治療過程中細(xì)胞的致敏度來評(píng)價(jià)。根據(jù)本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，樣本中的介質(zhì)通過免疫法和/或色譜法來測(cè)定，優(yōu)選的方法選自放射免疫測(cè)定法(RIA)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)、高效液相色譜法(HPLC)、逆轉(zhuǎn)錄酶多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、免疫熒光流式細(xì)胞計(jì)量法及其組合。所有這些方法已經(jīng)被確定接近臨床的敏感性。然而，這些方法中沒有一種用于觀察在血清學(xué)，嗜堿細(xì)胞激活作用(basophilactivation)和皮膚敏感性中純的變應(yīng)原(例如PierkesM.等JAllergyClinImmunol.(1999)103:326-32;DiLorenzoG.等，JAllergyClinImmunol.(1997)100:832-7)。本發(fā)明使用的優(yōu)選的變應(yīng)原包括所有如在www,allergen.org/List,htm中可獲得的所有主要的蛋白質(zhì)變應(yīng)原。根據(jù)本發(fā)明特定優(yōu)選的變應(yīng)原包括大部分的變應(yīng)原，如大部分的白樺花粉變應(yīng)原，如Betv1，大部分的梯牧草花粉變應(yīng)原，如Phlp1、Phip2、Phip5和Phlp6，大部分的房塵螨變應(yīng)原，如Derp1、Derp2，大部分的貓變應(yīng)原，如Feld1，大部分的蜜蜂和黃蜂變應(yīng)原(見列表)，其它抑制蛋白，特別是Phlp12，其他的白樺變應(yīng)原，尤其是Betv4，儲(chǔ)螨(storagemite)變應(yīng)原，尤其是L印d2，和在表l中列出的變應(yīng)原。表l:本發(fā)明優(yōu)選的變應(yīng)原(包括參考實(shí)施例)變應(yīng)原物種名稱變應(yīng)原名稱生物化學(xué)ID或者舊名豚草(Ambrosiaartemisiifolia)短豕草(shortragweed)Amba1抗原EAmba2抗原KAmba3Ra3Amba5Ra5Amba6Ra6MWcDNA或者參考蛋白質(zhì)Acc.No83811510CCCCC8，208，212211，2324,25Amba7Ra712P三裂葉豚草(Ambrosiatrifida)巨型豕草(giantragweed)Ambt5Ra5G4.4C北艾(Artemisiavulgaris)艾蒿(mugwort)Artv127-29CArtv235PArtv3脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白12PArtv4抑制蛋白14C向曰葵(Heliarvthusannuus)向日葵(sunflower)Hela134Hela2抑制蛋白15.7C山靛(Mercurialisannua)Mera1抑制蛋白14-15C石竹目(Caryophyllale)灰菜(Chenopodiumalbum)藜(lamb's-quaxters)，黎(pigweed)，Chea117C白藜(whitegoosefooOChea2抑制蛋白14CChea3polcalcin10C鉀豬毛菜(Salsolakali)俄國薊草(Russian-thistle)Salk143P薔薇目(Rosales)蓰草(Humulusjaponicus)日本蛇麻草(Japanesehop)Humj4wC猶大墻草(Parietaxiajudaica)Parjl脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白115CParj2脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白2CParj3抑制蛋白C269，10，272828A532929AY15210Y13271AY049012,29BAY082337AY08233829CAY335187參考變應(yīng)原異構(gòu)體(isoallergens)的歹據(jù)參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表參考變應(yīng)原異構(gòu)ParietariaofficinalisParol脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白15體的列表29DB.草未草目(Poales)洋根草(Cynodondactylon)百慕大草(Bermudagrass)Cynd132C30，S83343Cynd7C31，X91256Cynd12抑制蛋白14c31a，Y08390Cynd159cAF517686Cynd22w烯醇化酶數(shù)據(jù)審理中(pending)Cynd23Cynd149cAF517685Cynd24發(fā)病機(jī)理相關(guān)的p.21p審理中鴨茅(Dactylisglomerata)野茅(orchardgrass)Dacg1AgDgl32Dacg211Dacg3Dacg531草甸羊茅(Festucapratensis)牛尾草(meadowfescue)Fesp4w60絨毛草(Holcuslanatus)天鵝絨草(velvetgrass)HoiI1黑麥草(Loliuraperenne)ryegrassLolp1groupI27Lolp2groupII11Lolp3groupIII11Lolp5LolpIX，LolplbLolp11hom:胰蛋白酶抑制劑16喜濕篛草(Phalarisaquatica)金黃草(canarygrass)PCCP3233，S4535433A,U2534334CCPP31/35CZ2708435,3637,37A，X733633834，3939APhaa1C貓尾草(Phleumpratense)梯牧草(timothy)Phipi27CPhip2CPhip4PPhip5Ag2532CPhip6CPhipll胰蛋白酶抑制劑族.20CPhip12抑制蛋白Phip13多聚半乳糖醛酸酶55-60C草地早熟禾(Poapratensis)肯塔基藍(lán)草(Kentuckybluegrass)Poap1組I33PPoap531/34C假高梁(Sorghumhalepense)石茅高梁(Johnsongrass)Sorh1C40,S80654X78813X75925，4141A42Z27082,43AF521563，43ACX77583,44AJ23884B4634，4748C.樹檳榔目(Arecales)海麥(Phoenixdactylifera)椰麥(datepalm)Phod2抑制蛋白14.3CAsturiaspc.山毛櫸目(Fagales)普通赤楊(Alnusglutinosa)紅樺(alder)Alng1白樺(Betulaverrucosa)西南樺(birch)Betv1Betv2抑制蛋白Betv317CS5089217C參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表15CM65179CX79267Betv4Betv6h:異黃酮還原酶Betv7親環(huán)蛋白歐洲鵝耳栃(Carpinusbetulus)鐵樹(hornbeam)Carb1歐洲板栗(Cast騰asativa)板栗(chestnut)Cass1Cass5甲殼酶Cass8脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白歐榛(Corylusavellana)榛樹(hazel)Cora1Cora2抑制蛋白Cora8脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白Cora911S球蛋白樣蛋白Cora10腔結(jié)合蛋白.Cora117S豌豆球蛋白樣蛋白美洲l白橡(Quercusalba)白櫟(Whiteoak)Quea18CX87153,S5481933.5C參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表18PP8153117C參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表22P529.7P5317C參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表14C9C40/CBeyerp.c.70CAJ29561748CAF44186417P54唇形目(Lamiales)木犀科(Oleaceae)歐聘(Fraxinusexcelsior)零樹(ash)Frae1普通女貞(Ligustrumvulgare)女貞子(privet)Ligv1歐盟成員國橄欖(Oleaeur叩ea)橄欖樹(olive)01ee101ee2抑制蛋白01ee320P58A，AF52629520P58A16C59,6015-18C60A9.260BOlee432Olee5超氧化劑物歧化酶Olee610Olee7Olee80&2+-結(jié)合蛋白21Olee9beta-1,3-葡聚糖酶Olee10糖基水解酶族11歐洲丁香(Syringavulgaris)紫丁香(lilac)Syrv1車前草禾斗(Plantaginaceae)長(zhǎng)葉車前(Plantagolanceolata)EnglishplantainPla1118PP8074116PP80740C60C'U86342P60D'P81430C60E,AF07867946CAF249675C60F，AY08233520P58AP84224241-45CC43松杉目(Pinales)CryptomeriajaponioasugiCryj1Cryj2Cupressusarisordca柏樹(cypress)Cupa1地中海柏木(Cupressussempervirens)線杉(commoncypress)Cupsi43CCups3w34C美國雪松(Juniperusashei)朿U柏(mountaincedar)Juna143PJuris2CJuna330P杜松木(Juniperusoxycedrus)希臘阿伯刺檜(pricklyjuniper)Juno4hom:鈣調(diào)蛋白29C55，56S7，D29772A1243570參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表refpendingP8129457A，AJ40465357B,P8129557C，AF031471香柏(mountaincedar)Juns150維吉尼亞雪松(Juniperusvirginiana)東方紅柏(easternredcedar)Junv14358P81825，58B懸鈴木禾斗(Platanaceae)二球懸鈴木(PlatanusacerifoliaLondonplanetreePlaa1Plaa2Plaa3脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白18PP8281743PP8296710PIrisp.c.D.螨(Mites)粗腳粉螨(Acarussiro)螨(mite)Acas13脂肪酸結(jié)合蛋白熱帶無爪螨(Blomiatropicalis)螨(mite)節(jié)肢動(dòng)物14*粉塵螨(Dermatophagoidesfaxinae)美洲(屋塵瞞(Americanhousedustmite)Derf1半胱氨酸蛋白酶25Derf214CCAJ006774Biot1半胱氨酸蛋白酶39CAF277840Biot3胰蛋白酶24*CCheongp，c.Biot4a淀粉酶56CCheongp.c.Bio.t5CU59102Biot6糜蛋白酶25CCheongp,c.Biot10原肌球蛋白33C61Biot11副肌球蛋白110CAF525465,61ABiot12BtllaCU27479Biot13Bt6,脂肪酸結(jié)合蛋白CU58106Biot19抗微生物肽族7.2CCheongp,c,6970，70A，參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表3024-319898Derf3胰蛋白酶Derf7Derf10原肌球蛋白Derf11副肌球蛋白Derf14mag3,載脂蛋白Derf1598k甲殼酶Derf16凝溶膠蛋白/絨毛蛋白53Derf17Ca結(jié)合EF蛋白53Derf'18w60k甲殼酶60家塵螨(Dermatophagoidesmicroceras)屋塵螨(housedustmite)Derm1半胱氨酸蛋白酶25屋塵螨(Dermatophagoidespteronyssinus歐洲屋塵螨(Europeanhousedustmite)Derp1抗原Pl，半胱氨酸蛋白酶25梅氏嗜霉螨(Euroglyphusmaynei)螨(mite)Eurm2Eurm14載脂蛋白家食舌甘螨(Glycyphagusdomesticus)儲(chǔ)螨(storagemite)GIyd2DerP214CDerP3胰蛋白酶28/30CDerP4淀粉酶60PDerP514CDerP6糜蛋白酶25PDerP722/28CDerP8谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶CDerP9溶膠原絲氨酸蛋白PDerP10原肌球蛋白36CDerP14載脂蛋白樣蛋白C177C63SW:Q26456,717272AD17686AF17877271A71A.Weberp.c.6862，參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表62A-C,參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表636465666767A67BY14906Eptonp.c.參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表AF14982772B,參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表害嗜鱗螨(Xepidoglyphusdestructor)儲(chǔ)螨(storagemite)Lepd2C印d1Lepd5L印d7L印d10原肌球蛋白Lepd13腐食酪螨(Tyrophagusputrescentiae)儲(chǔ)螨(storagemite)Tyrp215CCCCC73，74，74A，參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表75,AJ25027875，AJ27105875A,AJ25009675，AJ25027975B,Y12690E.動(dòng)物Bosdomesticus牛(domesticcattle)Bosd2Ag3，lipocalin(也參考食品)2076，參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表Bosd3Ca-bindingS100hom.11CL39834Bosd4a乳清蛋白14.2CM18780Bosd5e-乳清蛋白18.3CX14712Bosd6血清白蛋白67CM73993Bosd7免疫球蛋白16077Bosd8酪蛋白20-3077犬禾斗(farailiaris)家犬(Canisdomesticus)Canf125C78，79狗(dog)Canf227C78'79Canf3白蛋白CS72946Canf418PA59491馬(Equuscaballus)馬(domestichorse)Equc1lipocalin25CU70823Equc2Equc3Equc4Equc5AgXFelisdortiesticus貓cat(唾液(saliva))lipocalinAg3-白蛋白18.5P79A，79B67C79C，X7404517P79D17PGoubranBotrosp.c.Feld1cat—138C15Feld2白蛋白C79E，X84842Feld3抑半胱氨酸11C79F,AF238996蛋白酶蛋白Feld4lipocalin22CAY497902Feld5w免疫球蛋白A■Adedoyinp.c.Feld6w免疫球蛋白MAdedoyinpc.Feld7w免疫球蛋白G150Adedoyinp.c.800-1000豚鼠(Caviaporcellus)脈鼠(guineapig)Cavp1lipocalinhomologue20PCavp2小鼠(Musmusculus)小鼠(mouse)(尿液)Musm1MUP家鼠(Rattusnorvegius)大鼠(rat)(尿液)Rstn1171917PCCSW:P83507，80SW:P8350881，81A82，83F.真菌(霉菌)1.子囊菌門(Ascomycota)1.1子囊菌綱(Dothideales)鏈格孢(Alternariaalternata)Alta1Alta2Alta3熱休克蛋白.28CU8263325C83A，U6244270CU87807,U87808Alt34prot.disulfideisomerase57CAlta6酸性核糖體蛋白P211CAlt7YCP4蛋白22cAlt10醛脫氫酶53cAlt11烯醇化酶45cAlt12酸性核糖體蛋白PI11c草本枝孢(Cladosporiumherbarum)X84217X78222,U87806X78225X78227,P42041U82437X84216Clah11383B，83CClah22383B，83CClah3核糖體脫氫酶53CX78228Clah4酸性核糖體蛋白P211CX78223Clah5YCP4蛋白22CX78224Clah6烯醇化酶46CX78226Clah12酸性核糖體蛋白PI11CX851801.2曲霉菌目(Eurotiales)黃曲霉(Aspergillusflavus)A印fl13堿性絲氨酸蛋白酶3484煙曲霉(Aspergillusfumigatus)Aspf118CM83781,S39330Aspf237CU56938Aspf3過氧化物酶體蛋白19CU20722Aspf430CAJ001732Aspf5金屬蛋白酶40CZ30424Aspf6Mn過氧化物超氧26.5CU53561化劑物歧化酶Aspf712CAJ223315Aspf8核糖體蛋白P211CAJ224333Aspf934CAJ223327Aspf10天冬氨酸蛋白酶34CX85092Aspf11肽酰-脯氨酰異構(gòu)酶2484AAspf12熱休克蛋白P9090C85Aspf13堿性絲氨酸蛋白酶3484BAspf1516CAJ002026Aspf1643Cg3643813Aspf17CAJ224865Aspf18空泡絲氨酸蛋白酶34Aspf22w烯醇化酶46CAspf23L3核糖體蛋白44C黑曲霉(Aspergillusniger)Aspn14e-木糖苷酶105CAspn18空泡絲氨酸蛋白酶34CAspn253-植酸酶B66-100Aspn85C米曲霉(Aspergillusoryzae)Aspo13堿性絲氨酸蛋白酶34CAspo21TAKA-淀粉酶A53C短密青霉(菌)(Penicilliumbrevicompactum)Penb13堿性絲氨酸蛋白酶33產(chǎn)黃青霉菌(Penicilliumchrysogenum)(formerlyP.notatum)Pench13堿性絲氨酸蛋白酶34CPench18空泡絲氨酸蛋白酶32Pench20N-acetylglucosaininiclas桔青霉(Penicilliumcitrinum)草酸青霉菌(Penicilliumoxalicum)Peno18空泡絲氨酸蛋白酶341.3肉座菌目(Hypocreales)大刀鐮刀菌(Fusariumculmorum)Fusc1核糖體蛋白P211*Fusc2硫氧還蛋白樣蛋白13*84CAF28464585A，AF464911AF10894484B85B，P34754Z84377X17561D00434，M3321886A87876887APenc3過氧化物酶體膜蛋白1886BPenc13堿性絲氨酸蛋白酶3386APenc19熱休克蛋白.P7070CU64207Penc22w烯醇化酶46CAF254643Penc24延伸因子IPCAY363911cc87BAY077706AY0777071.4散囊菌目(0nygenales)TrichophytonrubsumTrir2Trir4絲氨酸蛋白酶CC8888斷發(fā)毛癬菌(Trichophytontonsurans)Trit130PTrit4絲氨酸蛋白酶83C88A881.5酵母菌目(Saccharomycetales)白色念珠菌(Candidaalbicans)Csnda140Canda3過氧化物酶體蛋白29念珠菌(Candidaboidinii)Candb220CC89AY136739CJ04984，J049852.擔(dān)子(真)菌亞門(Basidiomycotina)2.1層菌綱(Hymenomycetes)裸蓋燕屬(Psilocybecubensis)Psic1Psic2親環(huán)蛋白毛頭鬼傘(Coprinuscomatus)shaggyc鄰Copc1亮氨酸拉鏈蛋白Copc2Copc3Copc5Copc71611C89AAJ132235AJ242791AJ242792AJ242793AJ2427942.2銹菌(Urediniomycetes)膠紅酵母RhodotorulamucilaginosaRhom1烯醇化酶47Rhom2空泡絲氨酸蛋白酶31CC89BAY5472852.3Ustilaqinomycetes糠秕馬拉色(氏)霉菌(Malasseziafurfur)Malaf2MF1，過氧化物酶體21CMalaf3MF2，過氧化物酶體20CMalaf4線粒體蘋果酸脫氫酶35C鱗斑霉屬(Malasseziasy即odialis)AB011804,90膜蛋白AB011805,90膜蛋白AF084828，90AMalasiCMalas518*CMalas617*CMalas7CMalas819*CMalas937*CMalas10熱休克蛋白.7086CMalas11Mn過氧化物超23C氧化劑物歧化酶X96486,91AJ011955AJ011956AJ011957,91AAJ011958,91AAJ011959,91AAJ428052AJ5484213.半知菌亞門(Deuteromycotina)3.l結(jié)節(jié)菌目(Tuberculariales)附球(真)菌屬(Epicoccumpurpurascens)(formerlyE.nigrum)Epip1絲氨酸蛋白酶30SW:P83340,9IBG.昆蟲(Insects)Aedesaegyptii蚊子(mosquito)Aeda1三磷酸腺苷雙磷酸酶Aeda2蜜蜂(Apismellifera)蜜蜂(honeybee)磷脂酶A2透明質(zhì)酸酶蜂毒肽Apim1Apim2Apim4Apim6Apim7Bombuspennsylvanicus熊蜂(bumblebee)Bomp1磷脂酶Bomp4蛋白酶德國小蠊(Blattellagermanica)德國蟑螂(Germancockroach)6837164437-8CUB絲氨酸蛋白酶3916CCCCPCPPL12389M33157929394Kettnerp.c.AY1275799595Blag1Bd90kBlag2天冬氨酸蛋白酶36Blag4calycin21Blag5谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶22Blag6肌鈣蛋白C27美洲大蠊(Periplanetaaraericana)美國蟑螂(Americancockroach)Pera1Cr-PIIPera3Cr-PI72-78Pera7原肌球蛋白37搖蚊(Chironomuskiiensis)蠓(midge)CCCCCCCChik10原肌球蛋白32.5*C地方搖蚊(Chironomusthummithummi)蠓(midge)Chit1--9血紅蛋白16CChit1.01組分III16CChit1.02組分IV16CChit2.0101組分I16CChit2.0102組分IA16CChit3組分n-e16CChit4組分IIIA16CChit5組分VI16CChit6.01組分VIIA16CChit6.02組分ix16CChit7組分VI1B16CChit8組分VII116CChit9組分x16C貓界頭蚤(Ctenocephalidesfelisfelis)貓?jiān)?catflea)Ctef1Ctef2MIb27Ctef325松異帶蛾(Thaumetopoeapityocampa)pineprocessionarymothCC9697989898AY14854AJ01218499P02229P02230P02221P02221P02222P02231P02224P02226P02223P02225P02227P02228AF231352Thap1衣魚化epismasaccharina)衣魚(silverfish)L印s1原肌球蛋白36C大黃蜂(Dolichovespulamaculata)whitefacehornetDolm1磷脂酶Al35CDolm2透明質(zhì)酸酶44CDolm5抗原523C長(zhǎng)黃古月蜂(Dolichovespulaarenaria)yellowhornetDola5抗原523CPolistesannularies黃蜂waspPola1磷脂酶Al35PPola2透明質(zhì)酸酶44PPola5抗原523C胡蜂(Polistesdominulus)MediterraneanpaperwaspPold1Pold4絲氨酸蛋白酶32-34CPold5Polistesexclamans黃蜂(wasp)Pole1磷脂酶Al34PPole5抗原523C紙巢蜂(Polistesfuscatus)黃蜂(wasp)Polf5抗原523C柞蠶馬蜂(Polistesgallicus)黃蜂(wasp)Polg5抗原524C長(zhǎng)足胡蜂(Polistesraetricus)黃蜂(wasp)Polm5抗原523C10615PPIR:A59396，99AAJ309202100101102,103104105105104HoffmanpHoffmanp.P81656107104106P83377黃邊胡蜂(Vespacrabo)EuropeanhornetVespc1磷脂酶Vespc5抗原5日環(huán)古月蜂(Vespamandarina)giantasianhornetVespm1Vespm5VespulaflavopilosayellowjacketVesf5古月蜂(Vespulagermanica)yellowjacketVesg5客頁斑臉黃古月蜂(Vespulamaculifrons)yellowjacketVesm1磷脂酶AlVesm2透明質(zhì)酸酶Vesm5抗原5VespulapennsylvanicayellowjacketVesp5抗原5VespulasquamosayellowjacketVess5抗原5Vespulavidua黃蜂(wasp)Vesvi5抗原523黃古月蜂(Vespulavulgaris)yellowjacketVesv1磷脂酶AlVesv2透明質(zhì)酸酶Vesv5抗原5MyrmeciapilosulaAustralianjumperantMyrp1Myrp23423PC抗原5抗原533.544232323C354423CPC106CPC107106Hoffmanp.cP8165723C10623C106108109104106106CC105A105A104X70256S81785熱帶火蟻(Solenopsisgeminata)tropicalfireantSolg2Solg4紅火蟻(Solenopsisinvicta)fireantSoli2Soli3Soli4黑火蟻(Solenopsissaevissima)BrazilianfireantSols2TriatomaprotractaCaliforniakissingbugTriap1ProcalinHoffmanP.CHoffmanP.C13C110,11124C11013C110Hoffmanp.c.20CAF179004，111A.H.食品鱈魚(Gaduscallarias)codGadc1變應(yīng)原M大西洋鮭(Salmosalar)大西洋鮭(Atlanticsalmon)Sals1微清蛋白BosdomesticusdomesticcattleBosd4(milk)Bosd5也參考動(dòng)物(seeBosd6Bosd7Bosd8家雞(Gallusdomesticus)雞(chicken)Gald1卵類粘蛋白a乳清蛋白e-乳球蛋白alsoanimals)血清白蛋白免疫球蛋白caseins12C12C14.2C18.3C67C16020-3028C112，113X97824M18780X14712M739937777114,115Gald2卵類白蛋白44CGald3Ag22,伴清蛋白78CGald4溶菌酶14CGald5血清白蛋白69C刀額新對(duì)蟲下(Metapenaeusensis)蝦(shrimp)Mete1原肌凝蛋白褐對(duì)蟲下(Penaeusaztecus)蝦(shrimp)Pena1原肌凝蛋白Penaeusindicus蝦(shrimp)Peni1原肌凝蛋白斑節(jié)對(duì)蟲下(Penaeusmonodon)黑虎蟲下(blacktigershrimp)Penm1原肌凝蛋白38CPenm2精氨酸激酶40C太平洋褶柔魚(Todarodespacificus)squidTodp1原肌凝蛋白38P散大蝸牛(Helixaspersa)browngardensnailHelas1原肌凝蛋白36C南非鮑螺(Haliotismidae)鮑魚(abalone)Halm149食用蛙(Ranaesculenta)ediblefrogRane1微清蛋白a11.9*CRane2微清蛋白P11.7*C芥菜(Brassicajuncea)orientalmustardBraj12S白蛋白14C歐洲油菜(Brassicanapus)油菜(rapeseed)Bran12S白蛋白15P蕪菁(Brassicarapa)蕪菁(turnip)Brar2honuprohevein25114,115114,115114，115X60688CU0800836P11634C116AAF479772,117117AY14855,117B117CAJ315959AJ414730118118A,P80208P81729BMAI-Ia淀粉酶0-淀粉酶gamma-3大麥醇溶蛋白大麥(Hordeumvulgare)大麥(barley)Horv15Horv16Horv17.......Horv21gamma-3大麥醇溶蛋白34SW:P80198黑麥(Secalecereale)黑麥ryesecc20黑麥醇溶蛋白小麥(Triticumaestivum)小麥(wheat)Tria18凝集素Tria19omega-5麥醇溶蛋白65P玉米(Zeamays)玉米(maise,corn)Zeam14脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白.9P早稻(0ryzasativa)稻(rice)0rys1C旱芥(Apiumgraveolens)開菜(celery)Apig1hom:Betv116*CApig4抑制蛋白Apig555/58P古月蘿卜(Daucuscarota)胡蘿卜(carrot)Dauc1hom:Betv1Dauc4抑制蛋白歐榛(Corylusavellana)棒子(hazelnut)Cora1.04hom:Betv1Cora2Cora8抑制蛋白脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白17149CCCC15C119C119A，位基因列表PIR:A59156P19656119B，031771Z48967AF129423P8194316CU7D，參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表AF456482參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表AF327622AF329829蘋果(Malusdomestica)蘋果(鄰ple)Maid1Maid2hom:竹芋蛋白Maid3脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白hom:Betv1C9Cc,1814C內(nèi)切殼多糖酶9Maid4抑制蛋白梨(Pyruscommunis)梨(pear)Pyrc1hom:Betv1Pyrc4抑制蛋白Pyrc5hom:異黃酮還原酶33.5魚萼梨(Perseaamericana)酪梨(avocado)Persa1杏(Pnmusarmeniaca)杏(鄰ricot)Pruar1hom:Betv1Pruar3脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白甜櫻桃(Prunusavium)甜櫻桃(sweetcherry)Pruav1hom:Betv1Pruav2hom:竹芋蛋白Pruav3脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白Pruav4抑制蛋白Prunusdoinestics歐李(Europeanplum)Prud3脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白桃(Prunuspersica)桃(peach)Prup3脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白10prup4抑制蛋白14戸弊(Asparagusofficinalis)戸等(Asparagus)Aspaol脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白9P番紅花(Crocussativus)14.4*10159CPCCCCC參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表A243427Pastorellop.C參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表CAF05730CAF129424AF07147732CZ78202U93165U66076U32440AF221501AF129425119CPP81402C參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表119D番紅花(saffroncrocus)萵苣(Xactucasativa)萵苣(lettuce)Lacs1脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白葡萄(Vitisvinifera)葡萄(gr即e)Vitv1脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白香蕉(Musaxparadisiaca)香蕉(banana)Musxp1鳳梨(Ananascomosus)鳳梨(pineapple)Anac1抑制蛋白Anac2菠蘿蛋白酶擰檬(Citrusliraon)擰檬(lemon)Cit13脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白橙(Citrussinensis)舌甘橙(sweetorange)Cits1germin樣蛋白Cits2抑制蛋白Cits3脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白蒸枝(Xitchichinensis)蕩枝(litchi)Litc1抑制蛋白白芥(Sinapisalba)黑芥子(yellowmustard)Sina12S白蛋白大豆(Glycinemax)大豆(soybean)Glym1Glym2Glym3抑制蛋白Glym4(SAM22)PR-10綠豆(Vignaradiata)綠豆(mungbean)Cros121VarastehA_Rp.c.9Viethsp.c.9PP80274抑制蛋白15CAF37794815CAF37794922.8*C119E-G,D140599PTorrejonp.c.23PTorrejonp.c.14PTorrejonp.c.9PTorrejonp.c.15CAY04901314C120HPS7P120A8PA5710614C參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表prot.17CX60043,120BVigr1PR-10蛋白15CAY792956花生(Arachishypogaea)花生(peanut)Arah1豌豆球蛋白63.5CL34402Amh2羽扇豆球蛋白17CL77197Arah3大豆球蛋白60CAF093541Arah4大豆球蛋白37CAF086821Arah5抑制蛋白15CAF059616Arah6hom:羽扇豆球蛋白15CAF092846Arah7hom:羽扇豆球蛋白15CAF091737Arah8PR-10蛋白17CAY328088扁豆(Xensculinaxis)扁豆(lentil)Lenc1豌豆球蛋白47Lenc2種子生物素酰化的蛋白66Pisumsavitura豌豆(pea)Piss1豌豆球蛋白44Piss2convicilin63中華獼猴桃(Actinidiachinensis)奇異果(kiwi)Actc1半胱氨酸蛋白酶30Actc2竹芋蛋白樣蛋白24辣椒(Capsicumanriuum)bellpepperCapalwosmotin樣蛋白23C即a2抑制蛋白14番莉(Lycopersiconesculentum)番茄(tomato)Lyce1抑制蛋白14Lyce2b-呋喃果糖苷酶50Lyce3脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白.6CPPCCCC參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表120C參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表審理中P00785SW:P81370，121AJ297410AJ417552AJ417553參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表U81996馬鈴薯(Solariumtuberosum)馬鈴薯(potato)Solat1pateitin43Solat2組織蛋白酶D抑制劑21Solat3半胱氨酸蛋白酶抑制劑21Solat4天冬氨酸蛋白酶抑制劑16+4巴西堅(jiān)果(Bertholletiaexcelsa)巴西堅(jiān)果(Brazilnut)Bere12S白蛋白9Bere211S球蛋白種子貯存蛋白29東部黑核桃(Juglansnigra)黑核桃(blackwalnut)Jugn12S白蛋白19*Jugn2豌豆球蛋白-樣蛋白56*胡桃(Juglansregia)EnglishwalnutJugr12S白蛋白Jugr2豌豆球蛋白44Jugr3脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白9腰果(Anacardiumoccidentale)腰果(Cashew)Anao1豌豆球蛋白樣蛋白Anao2豆球蛋白樣蛋白Anao32S白蛋白蓖麻(Ricinuscommunis)蓖麻(CastorbearORicc12S白蛋白芝麻(Sesamumindicum)芝麻(sesame)Sesi12S白蛋白Sesi22S白蛋白sesi37S豌豆球蛋白樣球蛋白Sesi4油質(zhì)蛋白Sesi5油質(zhì)蛋白505514PPPPCCCCCCPCCCCC451715P15476P16348P20347P30941P04403,M17146AY221641AY102930AY102931U66866AF066055Pastorello參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表AF453947AY081853P0簡(jiǎn)9121A，AF240005AF091841CAF240006CAAG23840CAAD42942甜瓜(Cucumismelo)甜瓜(muskmelon)Cuem1絲氨酸蛋白酶66CD32206Cuem2抑制蛋白14CAY271295Cuem3pathogenesis-relp.PR-I16*PP83834I.其它的海獸胃線蟲(Anisakissimplex)線蟲(nematode)AniS1AniS2副肌球蛋白AniS3原肌凝蛋白A(niS4軟蜱禾斗(Argasreflexus)鴿壁虱(pigeontick)Argr1豬蛔蟲wormAscs1番木瓜(Caricap邵ayeO番木瓜(p鄰aya)Carp3wpapainDendron印hthyanipponicasoftcoralDenn1巴西橡膠樹(Heveabrasiliensis)rubber(latex)24974191710PCCP23.4*C53121B，A59069AF173004121C,Y19221P83885AJ697694122122A,M15203122BHevb1延長(zhǎng)因子58P123，124Hevb21,3-葡聚糖酶34/36C125Hevb324P126，127Hevb4微螺旋復(fù)合物100-115P128的組分Hevb516CU42640Hevb6.01hevein前體20CM36986,p02877Hevb6.02hevein5CM36986,p02877Hevb6.03c-末端片斷14CM36986,p02877Hevb7.01hom:patatin42CfromB-serumHevb7.02hom:patatinfromC—serum44CCCCHevb8抑制蛋白14Hevb9烯醇化酶51Hevb10Mn過氧化物超氧26化劑物歧化酶Hevb11class1甲殼酶Hevb12脂質(zhì)轉(zhuǎn)移蛋白9.3CHevb13酯酶42P人類人自體變應(yīng)原Hornsi73*CHorns210.3*CHorns320.1*CHorns436*CHorns542,6*C非洲白木(Triplochxtonscleroxylon)歐斐切木(obeche)Trips11型甲殼酶38.5PU80598AJ223038參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表AJ132580參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表參考變應(yīng)原異構(gòu)體的列表AY057860P83269Y14314X80909X89985Y17711P02538Kespohlp.c.參考文獻(xiàn)1Marsh，D.G.，andL.R.Freidhoff.1992.ALBE,anallergendatabase.IUIS，Baltimore,MD，Edition1.0.2Marsh，D.G.etal.1986.Allergennomenclature.BullWHO64:767-770.3King,T.P.etal.1964.Biochemistry3:458—468.4Lowenstein，H.1980.Allergy35:188-191.5Aukrust，L.l進(jìn)Allergy35:206-207.6Demerec，M.etal.1966.Genetics54:61-75.7Bodmer，J.G.etal.1991.Immunogenetics33:301-309.8Griffith,I.J.etal.1991.Int.Arch.AllergyAppl.Immunol.96:296-304.9Roebber，M.etal.1985.J.Immunol.134:3062—3069.10Metzler,W.J.etal.1992.Biochemistry31:5117-5127.11Metzler，W.J.etal.1992.Biochemistry31:8697-8705.12Goodfriend,L.etal.1979.Fed.Proc.38:1415.13Ekramoddoullah，A.K.M.etal.1982.Mol.Immunol.19:1527-1534.14Ansari，A.A.etal.1987.J".AllergyClin.Immunol.80:229-235.15Morgenstern，J.P.etal.1991.Proc.Natl.Acad.Sci.USA88:9690-9694.16Griffith,I.J.etal.1992.Gene113:263-268.17Weber，A.etal,1986.Biochem.Physiol.83B:321-324.18Weber，A.etal.1987.Allergy42:464—470.19Stanworth，D.R.etal.1990.BulletinWHO68:109—111.20Rafnar，T.etal.1991.J.Biol.Chem.266:1229-1236.21Rogers，B.L.etal.1991.J.Immunol.147:2547-2552.22Klapper，D.G.etal.1980.Biochemistry19:5729-5734.23Ghosh，B.etal.1993.J.Immunol.150:5391—5399.24Roebber,M.etal.1983.J.Immunol.131:706—711.25Ubahn，B.，andD.G.Klapper.1993.丄AllergyClin.Immunol.91:338.26Roebber,M.，andD.G.Marsh.1991.丄AllergyClin.Immunol.87:324.27GoodfriendL.etal.MolImmunol22:899-906，1985.28HimlyM.etal.FASEBJ"17:106-108，2003.28ANilsen，B.M.etal.1991.丄Biol.Chem.266:2660-2668.29WopfnerN.etal.BiolChem383:1779—1789，2002.29AJimenezA.etal.1994.IntArchAllergyImmunol105:297-307.29BBarderasR.etal.IntArchAllergyImmunol127:47-54，2002.29CCarnesJ.etal.Allergy56，Supplement68:274，2001.29DGiulianiA.etal.Allergy42:434-440，1987.30Smith,P.M.etal,1996.J.AllergyClin.Immunol.98:331-343.31Suphioglu,C.etal.1997.FEBSLett.402:167-172.31aAsturiasJ".A.etal.1997.ClinExpAllergy27:1307-1313.32Mecheri，S.etal.1985.AllergyAppl.Immunol.78:283-289.33Roberts，A.M.etal.1993.Allergy48:615—623.33aGuerin-Marchand，C.etal.1996.MoLImmunol.33:797-806,34Klysner,S.etal.1992.Clin.Exp.Allergy22:491—497.35Perez，M.etal,1990.J".Biol.Chem.265:16210-16215.36Griffith,I.J.etal.1991.FEBSLetters279:210-215.37A歸ri，A.A.etal.1989.工Biol.Chem.264:11181-11185.37aSidoli，A.etal.1993.J.Biol.Chem.268:21819-21825.38Ansari，A.A.etal.1989.Biochemistry28:8665-8670.39Singh，M.B.etal.1991.Proc.Natl.Acad.Sci.88:1384-1388.39avanReeR.etal.1995.JAllergyClinImmunol95:970-978.40Suphioglu,C.andSingh，M.B.1995.Clin.Exp.Allergy25:853—865.41Dolecek,C.etal.1993.FEBSLett.335:299—304.41AFischerS.etal.1996.JAllergyClinImmunol98:189-198.42Matthiesen,F.，andH.Lowenstein.1991.Clin.Exp.Allergy21:297-307.43Petersen,A.etal.1995.Int.Arch.AllergyImmunol.108:55-59.43AMarknellDeWittA.etal.ClinExpAllergy32:1329-1340，2002.44Valenta，R.etal.1994.Biochem.Biophys.Res.Commun.199:106-118.46Esch，R.E.，andD.G.Klapper.1989.Mol.Immunol.26:557-561.47Olsen，E.etal.1991.J.Immunol.147:205-211.48Avjioglu，A.etal.1993.J.AllergyClin.Immunol.91:340.52KosT.etal.1993.BiochemBiophysResCommun196:1086-92.53Diaz-PeralesA.etal.2000.ClinExpAllergy'30:1403-1410.54Ipsen，H.，and0.C.Hansen.1991.Mol.Immunol.28:1279-1288.55Taniai，M.etal.1988.FEBSLett.239:329-332.56Griffith,I.丄etal.1993.J.AllergyClin.Immunol.91:339.57Sakaguchi，M.etal.Allergy45:309—312，1990.57AYokoyamaM.etal.BiochemBiophysResCommun275:195-202，2000.57BMidoro-HoriutiT.etal.JImmunol164:2188-2192，2000.57CTinghinoR.etal.J\AllergyClin.Immunol.101:772-777，1998.58GrossGNetal.ScandJImmunol8:437-441，1978.58AObispoTMetal.ClinExpAllergy23:311-316，1993.58BMidoro-HoriutiT.etal.ClinExpAllergy31:771-778，2001.59LombarderoM.etal.Clin.Exp.Allergy24:765-770，1994.60Villalba，M.etal.Eur.丄Biochem.216:863-869，1993.60AAsturiasJAetal.JAllergyClinImmunol100:365-372，1997.60BBataneroE.etal.EurJBiochem241:772-778，1996.60CBataneroE.etal.FEBSLett.410:293-296，1997.60DTejeraMLetal.J"AllergyClinImmunol104:797-802，1999.60ELedesmaA.etal.FEBSLett466:192-196，2000.60FBarralP.etal.JImmunol172:3644-3651，2004.61YiFCetal.ClinExpAllergy32:1203-1210，2002.61ARamosJDetal.IntArchAllergyImmunol126:286-293，2001.62Chua，K.Y.etal.J.Exp.Med.167:175-182,1988.62AChua，K.Y.etaLInt.Arch.AllergyAppl.Immunol.91:118-123，1990.62BSmithAMetal.IntArchAllergyImmunol124:61-63，2001.62CSmithAMetal.J"AllergyClinImmunol107:977-984，2001.63SmithWA，ThomasWR.IntArchAllergyImmunol109:133-140，1996.64Lake,F.R.etal.J.AllergyClin.Immunol.87:1035-1042，1991.65Tovey，E.R.etal.J.Exp.Med.170:1457—1462，1989.66Yasueda,H.，T.Shida，T.Ando，S.Sugiyama，andH.Yamakawa.1991.AllergenicandproteolyticpropertiesoffourthallergensfromDermatophagoidesmites.In:〃DustMiteAllergensandAsthma.Reportofthe2ndinternationalworkshop"A.Todt,Ed.，UCBInstituteofAllergy,Brussels，Belgium,pp.63-64.67Shen，H.-D.etal.Clin.Exp.Allergy23:934-940，1993.67A0，NeilGMetaLBiochimBiophysActa,1219521-528，1994.67BKingC.etal.J"AllergyClinImmunol98:739-747，1996.68LindP.etal.J.Immunol.140:4256-4262,1988.69Dilworth，R.J.etal.Clin.Exp.Allergy21:25—32，1991.70Nishiyama，C.etal.Int.Arch.AllergyImmunol.101:159-166，1993.70ATrudinger，M.etaLClin.Exp.Allergy21:33—38，1991.71ShenHDetal.ClinExpAllergy25:1000-1006，1995.71ATategakiA.etal.ACIInternationalsuppl.1:74-76,2000.72AkiT.etal.JAllergyClinImmunol96:74-83,1995.72ATsaiL.etal.ClinExpAllergy29:1606-1613，1999.72BGafvelinG.etal.J"AllergyClinImmunol107:511-518，2001.73vanHage-Hamsten.etaLJ.AllergyClin.Immunol.91:353，1993.74VarelaJ.etal.EurJBiochem225:93—98，1994.74ASchmidtM.etal.FEBSLett370:11—14，1995.75ErikssonTLJetal.Eur.J.Biochem.268:287—294，2001.75ASaarneT.etal.IntArchAllergyImmunol130:258-265，2003.75BErikssonTLetal.Eur.J.Biochem.251(l-2)，443—447:1998.76RautiainenJ，RytkonenM，PelkonenJ,PentikainenJ，Perola0，VirtanenT，ZeilerT，MantyjarviR.BDA20,amajorbovinedanderallergencharacterisedatthesequencelevelisBosd2.Submitted.77GjesingB，LowensteinH.AnnAllergy53:602，1984.78deGroot，H.etal.J.AllergyClin.Immunol.87:1056-1065，1991.79Konieczny，A.Personalcommunication/ImmunologicPharmaceuticalCorp.79ABulone，V.EurJBiochem253:202-211，1998.79BSwiss-Protace,P81216,P81217.79CDandeuJ.P.etal.(1993).J.Chromatogr.621:23-31.79DGoubranBotrosH.etal.1998.丄Chromatogr.B710:57-65.79EHilgerC.etal.Allergy52:179-187;andHilgerC.etal.Gene169:295-296，1996..79FIchikawaK.etal.ClinExpAllergy,InPress2001.80FahlbuschB.etal.Allergy57:417-422，2002.81McDonald,B.etal.1988.J.AllergyClin.Immunol.83:251.81AClarke,A.J.etal.1984.EMB0J3:1045—1052.82Longbottom，J.L.1983.Characterisationofallergensfromtheurinesofexperimentalanimals.McMillanPress，London,pp.525—529.83Laperche,Y.etal.1983.Cell32:453-460.83ABushRKetal.1999.JAllergyClinImmunol104:665-671.83BAukrustL，BorchSM.1979.IntArchAllergyApplImmunol60:68—79.83CSward-NordmoM.etal.1988.IntArchAllergyApplImmunol85:288-294.84Shen，etal.丄AllergyClin.Immunol.103:S157，1999.84ACrameriR.EpidemiologyandmolecularbasisoftheinvolvementofAspergillusfumigatusinallergicdiseases.Contrib.Microbiol.Vol.2，Karger，Basel(inpress).84BShen，etal.(manuscriptsubmitted)，199984CShenHDetal.Vacuolarserineproteinase:AmajorallergenofAspergillusfumigatus.10thInternationalCongressofImmunology,Abstract,1998.85K隨rA.etal.1993.丄AllergyClin.Immunol.91:1024-1030.85ASaxenaS.etal.2003.ClinExpImmunol134:86-91.85BBaurX.etal.Allergy57:943-945，2002.86AShenHDetal.1996.ClinExpAllergy26:444-451.86BShen，etal.Abstract;TheXVIIICongressoftheEuropeanAcademyofAllergologyandClinicalImmunology,Brussels,Belgium,3-7July1999.87ShenHDetal.ClinExpAllergy29:642-651，1999.87AShenHDetal.ClinExpAllergy25:350—356，1995.87BShenHDetal.JLabClinMed137:115-124,2001.88WoodfolkJAetal.1998.JBiolChem273:29489-96.88ADeuell，B.etal.1991.J.Immunol.147:96-101.89Shen，H.D.etal.1991.Clin.Exp.Allergy21:675—681.89AHornerWEetal.1995.IntArchAllergyImmunol107:298-300.89BChangCYetal.JBiomedSci9:645-655,2002.90YasuedaH.etal.BiochemBiophysResCo醒un248:240-244，1998.NB:strainTIMM2782(TeikyoUniversityInstituteforMedicalMycology)equaltostrainCBS1878(CentralBureauvonSchim-melkulturen).90AOnishiY.etal.EurJBiochem261:148-154，1999.NB:strainTIMM2782(TeikyoUniversityInstituteforMedicalMycology)equaltostrainCBS1878(CentralBureauvonSchimmelkul-turen).91SchmidtM.etal.EurJBiochem246:181—185，1997.NB:strainATCCno.42132(AmericanTypeCultureCollection).91ARasool0.etal.EurJBiochem267:4355-4361,2000.NB:strainATCCno.42132(AmericanTypeCultureCollection).91BNB:;strain4625(IndianAgriculturalResearchInstitute,PUSA;NewDelhi,India).92Kuchler，K.etal.1989.Eur.J.Biochem.184:249-254.93Gmachl，M.，andG.Kreil.1993.Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:3569-3573.93AHoffmanDR.1977.JAllergyClin.Immunol.59:364—366.94Habermann，E.1972.Science177:314-322.95HoffmanDR，JacobsonRS.1996.J.AllergyClin.Immunol.97:812-821.95AHoffmanDR，El-ChoufaniAE，Smith畫，deGrootH.2001.Occupationalallergytobumblebeevenom:AllergensofBombuster—restris.JAllergyClinImmunolInpress.95BHelmR.etal.1996.JAllergClinImmunol98:172-180.95CPomesA.etal.1998.JBiolChem273:30801-30807.96ArrudaLKetal.JBiolChem270:19563-19568，1995.97ArrudaLKetal.JBiolChem270:31196-31201，1995.98ArrudaLKetal.IntArchAllergyImmunol107:295—297,1995.98AWuCHetal.1998.JAllergyClinImmunol101:832-840.98BMelenE.etal.1999.JAllergyClinImmunol103:859-64.98CWuCHetal.JBiolChem271:17937-17943，1996.98DWuCHetal.MolecularImmunol34:1-8，1997.98ESantosABRetal.1999.JAllergyClinImmunol104:329-337.98FAsturiasJAetal.1999.JImmunol162:4342-4348.99Mazur，G.etal.1990.Monog.Allergy28:121-137.99AMoneoI.etal.Allergy58:34-37，2003.100Soldatova，L.etal.1993.FEBSLetters320:145-149.皿Lu，G.etal.1994.J.AllergyClin.Immunol.93:224.102Fang，K.S.F.etal.1988,Proc.Natl.Acad.Sci.，USA85:895-899.103King,T.P.etal.1990.Prot.Seq.DataAnal.3:263-266.104Lu，G.etal.1993.丄Immunol.150:2823-2830.105King，T.P.andLu，G.1997.Unpublisheddata.105AKingTPetal.1996.J.AllergyClin.Immunol.98:588-600.106Hoffman,D.R.1993.J.AllergyClin.Immunol.92:707-716.107HoffmanDR.1992.Unpublisheddata.108HoffmanDR.丄AllergyClin.Immunol.91:187，1993.109JacobsonRSetal.丄AllergyClin.Immunol.89:292，1992.110HoffmanDR.J.AllergyClin.Immunol91:71—78，1993.111SchmidtM.etal.FEBSLetters319:138-140，1993.111APaddockCDetal.JImmunol167:2694-2699，2001.112ElsayedS，BennichH.ScandJImmunol3:683-686，1974.113ElsayedS.etal.Immunochemistry9:647-661，1972.114Hoffman,D.R.1983.丄AllergyClin.Immunol.71:481-486.115Langeland，T.1983.Allergy38:493-500.116DaulCB，SlatteryM，MorganJ"E，LehrerSB.1993.CommonCrustaceaallergens:identificationofBcellepitopeswiththeshrimpspecificmonoclonalantibodies.In:"MolecularBiologyandImmunologyofAllergens"(D.KraftandA.Sehon，eds.).CRCPress,BocaRaton,pp.291-293.116AShantiKNetal.J.Immunol.151:5354-5363，1993.117YuCJetal.JImmunol170:445-453，2003.117AMiyazawaMetal.J.AllergyClin.Immunol.98:948-953，1996.117BAsturiasJAetal.IntArchAllergyImmunol128:90-96，2002.117CLopataetal.J.AllergyClin.Immunol.100:642-648，1997.117DHoffmami-SommergruberLetClin.Exp.Allergy29:840-847，1999.118MonsalveRIetal.Biochem.J.293:625-6321993.118A.MonsalveRIetal.1997.ClinExpAllergy27:833-841.119Mena，M.etal.PlantMolec.Biol.20:451-458，1992.119APalosuoK.etal.J".AllergyClin.Immunol.108:634-638，2001.119BXuH.etal.Gene164:255—259，1995.119CPastorelloEAetal.J.AllergyClin.Immunol.94:699-707，1994.119DDiaz-PeralesA.etal.JAllergyClinImmunol110:790-796，2002.119EGalleguillosF,RodriguezJC.ClinAllergy8:21—24，1978.119FBaurX.ClinAllergy9:451-457，1979.119GGailho.ferG.etal.ClinAllergy18:445-450，1988.120Menendez-Arias,L.etal.1988.Eur.J.Biochem.177:159-166.120AGonzalezR.etal.Lancet346:48—49，1995.120BKleine-TebbeJ.etal.JAllergyClinImmunol110:797-804，2002.120CSanchez-MongeR.etal.J.AllergyClin.Immunol.106:955-961，2000.121Gavrovic-JankulovicM.etal.J"AllergyClinImmunol110:805-810，2002.121APastorelloEAetal.J.Chromatogr.BBiomed.Sci.Appl.756:85-93，2001.121BMoneoLetal.J.AllergyClin.Immunol.106:177-182，2000.121CAsturiasJAetal.2000.Allergy55:898-890.122Christie,J.F.etal.1990.Immunology69:596-602.122ABaurX.etal.ClinAllergy12:9-17，1982.122B0nisukaR.etal.IntArchAllergyImmunol125:135-143，2001.123CzupponABetal.JAllergyClinImmunol92:690-697,1993.124AttanayakaDPSTGetal.1991.PlantMolBiol16:1079-1081.125ChyeML，CheungKY.1995.PlantMolBiol26:397-402.126AleniusH.etal.1993.IntArchAllergyImmunol102:61—66.127YeangHY，CheongKF，SunderasanE，HamzahS，ChewNP，HamidS,HamiltonRG，CardosaMJ.1996.The14.6kD(REF，Hevb1)and24kD(Hevb3)rubberparticleproteinsarerecognisedbyIgEfromSpinaBifidapatientswithLatexallergy.JAllergClinImmunolinpress.128SunderasanE.etal.1995.JnatRubbRes10:82-99.編碼這些變應(yīng)原的核酸序列的知識(shí)使得它們可重組產(chǎn)生。因此，特別地，這些變應(yīng)原優(yōu)選地使用在免疫治療中和在本發(fā)明的方法中。本發(fā)明的另一方面是涉及評(píng)價(jià)個(gè)體的變應(yīng)原敏感性和/或變應(yīng)原免疫治療臨床效果的方法，其包括步驟一采集在對(duì)IgE-變應(yīng)原復(fù)合物產(chǎn)生應(yīng)答時(shí)能釋放介質(zhì)的細(xì)胞，一使所述細(xì)胞與所述個(gè)體的血清和/或血漿接觸，所述血清和血漿為用至少一個(gè)純的變應(yīng)原或其衍生物刺激(spike)，一確定從所述樣本中釋放出的介質(zhì)量，并評(píng)價(jià)個(gè)體在治療前的變應(yīng)原敏感性和/或通過比較所述量來評(píng)價(jià)免疫治療的臨床效果。能夠釋放介質(zhì)的細(xì)胞通常包含結(jié)合其的IgE分子。這些細(xì)胞能夠從接受本發(fā)明的方法的個(gè)體所獲得的樣本中分離或者從其它個(gè)體樣本中分離。當(dāng)然，在根據(jù)本發(fā)明的方法中，也可能使用能結(jié)合IgE的細(xì)胞系。根據(jù)本發(fā)明的方法特別適用于確定個(gè)體的變應(yīng)原敏感性，因?yàn)槠淠軌虼_定出變應(yīng)原特異性的IgE和IgG分子在所述個(gè)體的血漿和血清中的比率。因?yàn)橹挥蠭gE-變應(yīng)原復(fù)合物而非游離的IgE能夠誘導(dǎo)介質(zhì)從介質(zhì)釋放細(xì)胞比如白細(xì)胞中的釋放，介質(zhì)釋放水平與存在于樣本中的IgE復(fù)合物的量相關(guān)。依次地，在所述樣本中的IgE復(fù)合物的量與變應(yīng)原特異性IgE、變應(yīng)原和除IgE之外的變應(yīng)原特異性抗體的量相關(guān)，該變應(yīng)原特異性抗體如IgG、IgA或IgM，IgM與IgE競(jìng)爭(zhēng)游離的變應(yīng)原并隨后抑制IgE變應(yīng)原復(fù)合物的形成。這意味著低水平的變應(yīng)原特異性IgE或者高水平的變應(yīng)原特異性IgG導(dǎo)致低水平的IgE復(fù)合物形成，因此引起介質(zhì)釋放減少。變應(yīng)原在所述血清和/或血漿中的濃度優(yōu)選地為1ng/ml至100Pg/ml之間，更優(yōu)選地為1pg/ml至10l^g/ml之間。本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及一種試劑盒，該試劑盒用于評(píng)價(jià)個(gè)體的變應(yīng)原敏感性和/或用至少一種變應(yīng)原進(jìn)行變應(yīng)原免疫治療的臨床效果，其包括一至少一種變應(yīng)原，用于誘導(dǎo)能夠釋放介質(zhì)的細(xì)胞對(duì)變應(yīng)原產(chǎn)生應(yīng)答時(shí)釋放介質(zhì)，一用于檢測(cè)介質(zhì)的方法，和一任選地至少一個(gè)介質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)。在本文中提供的所述試劑盒包括至少一種變應(yīng)原，其可用于誘導(dǎo)來自包含在樣品中的介質(zhì)釋放細(xì)胞的介質(zhì)釋放。然后，直接地或優(yōu)選地在除去樣品的固體部分后檢測(cè)在反應(yīng)混合物的上層清液中釋放的介質(zhì)。任選地，用于檢測(cè)結(jié)合所述變應(yīng)原的IgE分子的方法也包括在本發(fā)明的試劑盒中。當(dāng)IgE結(jié)合介質(zhì)釋放細(xì)胞和變應(yīng)原結(jié)合時(shí)，IgE能夠結(jié)合不同的變應(yīng)原，并介導(dǎo)的從所述細(xì)胞釋放介質(zhì)。然而，IgE對(duì)變應(yīng)原的特異性通常在血液中不能檢測(cè)到，且僅當(dāng)某個(gè)人對(duì)變應(yīng)原變得敏感時(shí)才會(huì)產(chǎn)生。為了精確的確定樣本中的介質(zhì)量(用于提供標(biāo)準(zhǔn)曲線)，介質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)可以是試劑盒的任選部分。優(yōu)選地，所述細(xì)胞是肥大細(xì)胞和/或嗜堿細(xì)胞和/或嗜酸細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，變應(yīng)原選自大部分的白樺花粉變應(yīng)原，尤其是Betv1和Betv4、大部分的梯牧草花粉變應(yīng)原，尤其是phlp1、Phlp2、Phip5、Phip6和Phlp7、大部分的房塵螨變應(yīng)原，尤其是De:rp1和Derp2、大部分的貓變應(yīng)原，F(xiàn)eld1、大部分的蜜蜂變應(yīng)原、大部分的黃蜂變應(yīng)原、抑制蛋白，特別是Phlp12和儲(chǔ)螨變應(yīng)原，尤其是L印d2及在表1中列出的變應(yīng)原。用于檢測(cè)介質(zhì)的方法優(yōu)選抗體。如上所述，優(yōu)選通過免疫治療檢測(cè)介質(zhì)。因此，所述試劑盒可以提供至少一種能夠結(jié)合特異性介質(zhì)的抗體。優(yōu)選地可使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、放射免疫測(cè)定法(RIA)或者橫向流動(dòng)裝置(1atemlflowdevices)。本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及用于評(píng)價(jià)變應(yīng)原敏感性或用至少一種變應(yīng)原進(jìn)行變應(yīng)原免疫治療的臨床效果的試劑盒，所述變應(yīng)原包含至少兩種下述成分一至少一種變應(yīng)原，用于誘導(dǎo)對(duì)變應(yīng)原產(chǎn)生應(yīng)答時(shí)能夠釋放介質(zhì)的細(xì)胞的介質(zhì)釋放，一用于檢測(cè)介質(zhì)的方法，一至少一個(gè)介質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)，和一對(duì)IgE-變應(yīng)原復(fù)合物產(chǎn)生應(yīng)答時(shí)能夠釋放介質(zhì)的細(xì)胞。本發(fā)明通過下述的圖形和實(shí)施例進(jìn)行做進(jìn)一步說明，但不受其限制。圖l顯示了來自真皮內(nèi)終點(diǎn)滴定法(X軸給出第一陽性反應(yīng)的變應(yīng)原濃度)和rBetv卜特異性血清IgE(Y軸kU/LCAP系統(tǒng))的相關(guān)性結(jié)果。圖2顯示了來自嗜堿細(xì)胞組胺釋放(X軸給出30%組胺釋放的變應(yīng)原濃度)和rBetvl-特異性血清IgE(Y軸kU/LCAP系統(tǒng))的相關(guān)性結(jié)果。圖3顯示了真皮內(nèi)終點(diǎn)滴定法(X軸給出第一陽性反應(yīng)的變應(yīng)原濃度)和嗜堿細(xì)胞組胺釋放(Y軸給出30%組胺釋放的變應(yīng)原濃度)結(jié)果之間的關(guān)系。圖4顯示了通過CAP確定的Betvl-特異性IgE(X軸kU/L)和通過標(biāo)記的a-鏈確定的rBetv卜特異性IgE(Y軸每分鐘計(jì)數(shù)(c.p.m.);l:5血清稀釋)之間的相關(guān)系。圖5顯示了嗜堿細(xì)胞組胺釋放的結(jié)果(X軸最大組胺釋放(％))和皮膚單刺試驗(yàn)(Y軸通過2ug/ml重組Betvl皮膚單刺試驗(yàn)誘發(fā)的風(fēng)團(tuán)反應(yīng)(mm2)的結(jié)果之間的相關(guān)性。具體實(shí)施例方式實(shí)施例實(shí)施例1:通過變應(yīng)原交聯(lián)結(jié)合工gE抗體的效應(yīng)細(xì)胞(肥大細(xì)胞和嗜堿粒細(xì)胞)對(duì)I型變態(tài)反應(yīng)的速發(fā)型癥狀的誘導(dǎo)作用是至關(guān)重要的事件(Ka-wakamiT，等，NatRevImmunol(2002)2:773-86)。正如Prausnitz禾口Ki3stner(PrausnitzC，等，CentralbeFBact1AbtOrig(1921)86:160-8)的經(jīng)典試驗(yàn)所描述的，該事件依賴三個(gè)因素，即，變應(yīng)原-特異性IgE抗體、效應(yīng)細(xì)胞和變應(yīng)原。因?yàn)镮gE抗體的特征描述和能夠精確地測(cè)定變應(yīng)原-特異性IgE抗體的量的診斷測(cè)驗(yàn)的發(fā)展，某些試驗(yàn)已經(jīng)研究了變應(yīng)原-特異性血清IgE抗體水平和過敏患者對(duì)變應(yīng)原的生物敏感性之間的關(guān)系(SteniusB等，ClinAllergy(1971)1:37-55;BryantDH等，ClinAllergy(1975)5:145-57;PauliG等，ClinAllergy(1977)7:337-46;BousquetJ等ClinAllergy(1987)17:529-36;WittemanAM等JAllergyClinImmunol(1996)97:16-25:NiederbergerV，等JInvestDermatol(2001)117:848-51;NormanPS等JAllergyClinImmunol(1973)52:210-24;LichtensteinLM等JAllergyClinImmunol(1971)47:103(A37))?，F(xiàn)已確定變應(yīng)原-特異性血清IgE的是出現(xiàn)速發(fā)型反應(yīng)的必要條件，但是變應(yīng)原-特異性工gE的量是否與給定的變應(yīng)原的速發(fā)型敏感癥有關(guān)還有很多爭(zhēng)論。為描述這一問題，過去進(jìn)行的幾乎所有研究都是使用變應(yīng)原提取物，如變應(yīng)原和非變應(yīng)原分子的混合物(SteniusB等，ClinAllergy(1971)1:37-55;BousquetJ等，ClinAllergy(1987)17:529-36;NormanPS等JAllergyClinImmunol(1973)52:210-24;LichtensteinLM等，JAllergyClinImmunol(1971)47:103(A37))。這也是為什么這些研究不能在分子水平分析變應(yīng)原-特異性IgE水平和生物學(xué)活性之間相關(guān)性的原因。最近的研究報(bào)道了這些參數(shù)之間具有相當(dāng)大的差異，所述研究采用純化的天然的和重組的變應(yīng)原來重新研究皮膚敏感性和變應(yīng)原-特異性IgE水平之間的相關(guān)性(WittemanAM等，JAllergyClinImmunol(1996)97:16-25;NiederbergerV等JInvestDermatol(2001)117:848-51)。在該實(shí)施例當(dāng)中，純化重組體Betv1，大部分的的白樺花粉變應(yīng)原作被用作進(jìn)一步研究變應(yīng)原-特異性IgE水平、效應(yīng)細(xì)胞應(yīng)答反應(yīng)以及在活體內(nèi)敏感性之間關(guān)系的代表性工具。在18個(gè)白樺花粉過敏的人群中，其根據(jù)熟知的臨床標(biāo)準(zhǔn)且排除花粉的季節(jié)選擇，定量對(duì)指定量的結(jié)構(gòu)折疊的重組體Betv1應(yīng)答的皮膚敏感性和嗜堿性粒細(xì)胞脫粒。比較生物學(xué)的試驗(yàn)結(jié)果和血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果。為了評(píng)價(jià)Betvl-特異性IgE抗體水平，采用兩種不同的測(cè)定一種是檢測(cè)任意Betv1-特異性IgE，另一種是檢測(cè)能夠與效應(yīng)細(xì)胞結(jié)合的Betvl-特異性IgE。材料和方法研究人群對(duì)患者的檢查是在白樺花粉季節(jié)開始前的一月和四月之間進(jìn)行。該項(xiàng)研究包括18名患者，8名女性和10名男性，年齡均在28到58歲之間(平均年齡45.6歲)，他們均具有白樺花粉過敏史，并且白樺花粉提取物單刺皮膚試驗(yàn)呈陽性。所有患者都至少在三年前首次被診斷患有中度到嚴(yán)重的鼻炎。5名患者在白樺花粉季節(jié)患有輕度哮喘，12名患者對(duì)薔薇科水果(蘋果、桃、杏和扁桃)、茄科蔬菜(土豆，西紅柿)和傘形科蔬菜(芹菜和胡蘿卜)具有口腔過敏癥狀。進(jìn)行用呼吸器官過敏原的皮膚單刺試驗(yàn)(stallergenes，F(xiàn)rance)來證實(shí)致敏特性，所述過敏原包括房塵螨、真菌變應(yīng)原混合物、狗和貓的皮屑、蟑螂、草、樹(包括白樺、橄欖和岑樹)以及雜草花粉?；颊叩奶卣鳛橄卤韑中列出的。表l.被研究人群的血清學(xué)、嗜堿細(xì)胞組胺釋放和皮膚實(shí)驗(yàn)的臨床數(shù)據(jù)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table>研究設(shè)計(jì)為了分析變應(yīng)原-特異性IgE水平、皮膚敏感性以及嗜堿性粒細(xì)胞脫粒之間可能的關(guān)系，對(duì)患者抽血，并在同一天對(duì)他們的皮膚進(jìn)行測(cè)試。進(jìn)行該分析，要嚴(yán)格避開白樺花粉季節(jié)以避免季節(jié)性變應(yīng)原接觸帶來的影響。在進(jìn)行研究前至少一周，患者不得服用抗過敏藥或者消炎藥。沒有一名患者在過去5年以上的時(shí)間內(nèi)接受過變應(yīng)原特異性免疫治療。在征得同意后，采集血液用于嗜堿細(xì)胞組胺釋放和用于血清樣本。然后，立即采用終點(diǎn)滴定法進(jìn)行真皮內(nèi)皮膚試驗(yàn)(GrammerLC等，JAllergyClinImmunol(1985)76:123-7)。測(cè)定并量化變應(yīng)原-特異性抗體變應(yīng)原-特異性IgGl到IgG4亞型水平與變應(yīng)原-特異性IgM和IgA水平都通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)來測(cè)定，其采用如上所述的同種型特異性單克隆抗體(VrtalaS等，JAllergyClinImmunol(1996)97:781-7)。結(jié)果顯示雙份測(cè)定的平均值，且顯示相應(yīng)于結(jié)合抗體的量的OD值。嗜堿細(xì)胞組胺釋放測(cè)試根據(jù)Tanisaki等人描述的方法，在一個(gè)劑量響應(yīng)模式中進(jìn)行用rBetv1和抗-IgE作為陽性對(duì)照的全血中激發(fā)免疫反應(yīng)(TanisakiY等，IntArchAllergyApplImmunol(1984)73:141-5)。將10毫升靜脈血注入一個(gè)含有1毫升肝素的塑料注射器當(dāng)中。將250Pi不同濃度的rBetv1(從10-4到10mg/ml)或者抗-IgE(從10—4到10—3，especific，Dako，Glostrup,Denmark)力口入至lj含有500ml在氨基丁三醇(10mmo1/1Tris、136mmo1/1NaCl、2.7mmol/1KC1、0.23mmol/1MgCl2、1.8mmol/LCaCl2、5.5mmol/1葡萄糖；pH7.3)中1:4稀釋的全血的試管中。將混合溶液在37。C下培養(yǎng)30分鐘。反應(yīng)停止，通過在375xg下冷離心(4°C)5分鐘分離細(xì)胞。如前所述，取200Pi無細(xì)胞上清液用采用?；M胺單克隆抗體(Iramunotech，Marseille,France)放射免疫測(cè)定法進(jìn)行組胺定量化(MorelAM，等JAllergyClinImmunol(1988)82:646-54)。通過反復(fù)融凍使細(xì)胞溶解后，測(cè)定全部的組胺。所有的試驗(yàn)都按雙份進(jìn)行。用于描述嗜堿細(xì)胞敏感性的參數(shù)是誘導(dǎo)組胺釋放總量的30%的最低變應(yīng)原濃度。真皮內(nèi)試驗(yàn)閾值真皮內(nèi)皮膚試驗(yàn)是通過在胳膊側(cè)部注射0.03ml的10倍稀釋的rBetv1來進(jìn)行的。從1000mg/ml的溶液連續(xù)稀釋配制溶液，并且試驗(yàn)的首次稀釋液為10mg/ml。該試驗(yàn)注射后15分鐘讀數(shù)。記錄風(fēng)團(tuán)區(qū)域和紅斑。當(dāng)誘導(dǎo)的風(fēng)團(tuán)區(qū)域超過了由注射引起的風(fēng)團(tuán)區(qū)域時(shí)，認(rèn)為測(cè)試呈陽性，并且誘導(dǎo)產(chǎn)生陽性測(cè)試結(jié)果的最低變應(yīng)原濃度用于與其它參數(shù)的比較(GrammerLC，等，JAllergyClinImmunol(1985)76:123-7)。數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析通過使用VisualStatsProfessional軟件(version2003)的Spearmans非參量檢驗(yàn)測(cè)定不同參數(shù)之間的相關(guān)性。結(jié)果rBetvl-特異性免疫球蛋白E水平與皮膚對(duì)rBetv1的敏感性之間幾乎沒有關(guān)系。為了比較rBetv卜特異性IgE水平與皮膚敏感性，通過CAP進(jìn)行測(cè)定rBetvl-特異性IgE水平，其與誘導(dǎo)真皮內(nèi)試驗(yàn)風(fēng)團(tuán)反應(yīng)呈陽性的rBetv1閾濃度相關(guān)。圖1顯示了變應(yīng)原-特異性IgE水平與皮膚敏感性之間沒有相關(guān)性&=-0.007，P二0.977)。觀察到在患者體內(nèi)變應(yīng)原-特異性IgE和皮膚敏感性之間存在較大偏差。例如，患者8顯示出較高的Betv1-特異性IgE水平(79.9kU/1)，但是僅在10mg/ml的rBetv1(表1)顯示出陽性ID反應(yīng)。另一方面，患者10具有低的rBetv1-特異性IgE(4.5kU/1),但是對(duì)Betv1(1ng/mlrBetv1的陽性ID測(cè)試反應(yīng))的皮膚敏感性比患者8大1000倍。7名具有相似的rBetv1-特異性IgE水平(17.126.6kU/l)的患者(2，5，7，9，11，12和17)顯示出極寬的皮膚rBetvl敏感性范圍(從3到IO5mg/ml)(表l)。rBetv1-特異性IgE水平與rBetvl-相關(guān)的嗜堿細(xì)胞敏感性之間幾乎沒有相關(guān)性圖2(IgEvs.30%組胺釋放)顯示出rBetvl-特異性IgE水平與Betvl-誘導(dǎo)的嗜堿細(xì)胞敏感性之間也缺乏相關(guān)性(圖2:r=-0.113，P=0.656)。誘發(fā)30%的組胺釋放的rBetv1濃度從l(T到1mg/ml之間變化。對(duì)于給定的rBetv1-特異性IgE水平(RASTclass3:4.5117.lkU/1)，誘發(fā)30%組胺釋放的rBetv1的濃度在1000倍的范圍內(nèi)變化(1l(T3mg/ml)。rBetv1-誘發(fā)的嗜堿細(xì)胞組胺釋放與皮膚敏感性之間的相關(guān)性圖3顯示，真皮內(nèi)試驗(yàn)和嗜堿細(xì)胞組胺釋放試驗(yàn)結(jié)果之間具有比血清學(xué)和生物學(xué)試驗(yàn)結(jié)果之間更好的相關(guān)性。引發(fā)30%組胺釋放的rBetv1濃度和真皮內(nèi)風(fēng)團(tuán)反應(yīng)之間具有顯著傾向(r=0.614;P=0.007)。那些在rBetv1-特異性IgE水平和生物學(xué)試驗(yàn)結(jié)果之間顯示出極差相關(guān)性的患者(例如患者8和10)，他們的真皮內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果與嗜堿細(xì)胞組胺釋放進(jìn)行比較時(shí)顯示出較好的相關(guān)性(表l)。進(jìn)行其它實(shí)驗(yàn)結(jié)果是為了解釋下述給出的血清學(xué)試驗(yàn)和生物學(xué)試驗(yàn)之間的偏差。rBetvl-特異性免疫球蛋白G亞類、免疫球蛋白A和免疫球蛋白M的測(cè)定結(jié)果。己經(jīng)描述了Betv1-過敏癥患者的血清含有Betvl-特異性IgG抗體，它可以干擾IgE結(jié)合Betv1或者識(shí)別Betv1分子而不是IgE的抗原表位，因此對(duì)于IgE結(jié)合Betv1沒有影響(ViscoV等人JImmunol(1996)157:956-62;Den印ouxS，等FEBSLett(2000)465:39-46)。因此，確定了rBetv1-特異性IgG的水平(IgGlIgG4;表1)。所述患者顯示出不同的rBetv1-特異性IgGlIgG4亞類的應(yīng)答，在IgGl和IgG4亞類中具有最顯著的響應(yīng)。血清中并未檢測(cè)到顯著水平的rBetv1-特異性IgA和IgM抗體，排除了這些抗體類別可能影響IgE對(duì)Betv1的識(shí)別。評(píng)價(jià)Betvl-特異性免疫球蛋白E占所有IgE的百分?jǐn)?shù)如果Betvl-特異性IgE僅僅占所有IgE的百分?jǐn)?shù)低，那么組胺釋放的不足和皮膚反應(yīng)性可以通過以下事實(shí)來解釋嗜堿細(xì)胞和肥大細(xì)胞主要被抗其它變應(yīng)原的IgE占據(jù)。因此，確定了總的IgE值，并且可以計(jì)算Betvl-特異性IgE比例。這一實(shí)施例中的患者具有相對(duì)較低的總IgE值(〈168kU/L)，而且沒有在低的Betv1-特異性IgE百分比和弱的生物學(xué)應(yīng)答之間相關(guān)性。例如，在顯示出高的敏感性的患者11中，Betv1-特異性IgE僅僅占總的IgE的20X。另一方面，雖然患者13為低敏感性的，但是總體62.6%的IgE直接抗Betv1(表1)。討論變應(yīng)原-特異性IgE抗體水平、效應(yīng)細(xì)胞的敏感性以及臨床敏感性之間是否存在相關(guān)性一直是存在爭(zhēng)論的問題。某些研究顯示變應(yīng)原-特異性血清IgE抗體與變應(yīng)原-引發(fā)的速發(fā)型反應(yīng)之間存在明顯的相關(guān)性，甚至當(dāng)采用多種變應(yīng)原和非變應(yīng)原成分的復(fù)合混合物時(shí)，而這使得難于比較皮膚試驗(yàn)和RAST(SteniusB等人，ClinAllergy(1971)1:37-55;BousquetJ等人，ClinAllergy(1987)17:529-36;NormanPS等人，JAllergyClinImmunol(1973)52:210-24;LichtensteinLM等人.JAllergyClinImmunol(1971)47:103(A37))。最近，其它采用純的變應(yīng)原的研究(WittemanAM等，JAllergyClinImmunol(1996)97:16-25)和重組變應(yīng)原(NiederbergerV等JInvestDermatol(2001)117:848-51)已經(jīng)證實(shí)了在抗體水平和生物學(xué)敏感性之間存在相當(dāng)大的偏差。已經(jīng)完成了使用確定純度和結(jié)構(gòu)上折疊的變應(yīng)原的臨床研究(例如，大部分的白樺花粉變應(yīng)原，Betv1)，其用于研究在分子水平特異性IgE與嗜堿性粒細(xì)胞脫粒和皮膚敏感性之間的相關(guān)性。發(fā)現(xiàn)在這三個(gè)方法學(xué)和白樺敏感性的臨床相關(guān)之間存在良好一致；然而，記錄了變應(yīng)原-特異性IgE水平、嗜堿細(xì)胞敏感性和活體內(nèi)的敏感性(例如，皮膚敏感性通過終點(diǎn)滴定法確定)之間的巨大差異。在某些病人當(dāng)中，觀察到了很低的特異性IgE水平，但是同時(shí)觀察到在嗜堿性粒細(xì)胞脫粒和皮膚測(cè)試中較高的敏感性，反之亦然。已有文獻(xiàn)的回顧顯示出缺乏對(duì)皮膚測(cè)試、嗜堿細(xì)胞組胺釋放和特異性IgE水平之間的比較研究。少數(shù)可以利用的研究顯示出不同的結(jié)果，并且采用的是粗的變應(yīng)原提取物。例如，Norman等(NormanPS等，JAllergyClinImmunol(1973)52:210-24)發(fā)現(xiàn)三項(xiàng)測(cè)試在診斷豕草花粉癥方面有良好的一致性。Lich-tenstein等人(Lichtenstein等，JAllergyClinImmunol(1971)47:103(A37))發(fā)現(xiàn)皮膚測(cè)試和組胺釋放之間在數(shù)量上具有顯著的相關(guān)性。然而，在這一實(shí)例中并沒有進(jìn)行特異性IgE的測(cè)定。致敏性白細(xì)胞和肥大細(xì)胞對(duì)抗原的響應(yīng)可取決于大量因素。低的敏感性和弱組胺釋放的一種可能是僅有很小比例的總血清IgE為變應(yīng)原-特異性IgE。因此，測(cè)定總的IgE水平，并計(jì)算變應(yīng)原-特異性IgE的百分比。然而，發(fā)現(xiàn)低百分比的變應(yīng)原-特異性IgE反應(yīng)和弱的生物學(xué)活性之間具有相關(guān)性。特異性-IgE占總IgE的低比例可能是引起對(duì)給定變應(yīng)原的弱的生物反應(yīng)的原因，這在多種敏感性受試者中可能是非常重要的(NormanPS等人，JAllergyClinImmunol(1973)52:210-24;ConroyMC等人JImmunol(1977)118:1317-21;MacGlashanDWJr等人，JImmunol(1986)136:2231-9)。存在其它因素，其可引起變應(yīng)原-特異性IgE水平和生物學(xué)反應(yīng)之間的偏差，但是它們即使在采用純化的變應(yīng)原的系統(tǒng)中都無法確定。它們包括嗜堿細(xì)胞和肥大細(xì)胞敏感性的個(gè)體差異，因?yàn)镮gE-受體細(xì)胞表面密度有差異，所述表面密度為通過血清IgE水平調(diào)節(jié)的一個(gè)參數(shù)(ConroyMC等JImmunol(1977)118:1317-21;MalveauxFJ等，JClinInvest(1978)62:176-81;DemboM等，JImmunol(1978)121:345-53;MacGla-shanDWJr等JAllergyClinImmunol(1999)104:492-8)。不同細(xì)胞敏感性已經(jīng)通過在相似總量和變應(yīng)原-特異性IgE血清濃度情況下的劑量響應(yīng)曲線的可變移動(dòng)(測(cè)定50%或30%的敏感性)得到證實(shí)(ConroyMC等JImmunol(1977)118:1317-21;MacGlashanDWJr.，JAllergyClinImmunol(1993)91:605-15)。此外，顯示在嗜堿粒細(xì)胞上具有相等數(shù)量IgE分子的人可以釋放他們組胺含量的O—100%的(ConroyMC等JImmunol(1977)118:1317-21)。在表皮肥大細(xì)胞中也被觀察到相同的情況(PetersenLJ等，JAllergyClinImmunol(1996)97:672-9;BordignonV，Petal.，InvestAllergolClinImmunol(2000)10:78-82)。而且，已經(jīng)顯示出發(fā)生的早期信號(hào)事件包括酪氨酸激酶(sykkinase)和IP3產(chǎn)物，其與特異性IgE水平或者嗜堿細(xì)胞敏感性無關(guān)(MacGlashanDWJr.,JAllergyClinImmunol(1993)91:605—15;MiuraK等，JImmunol(2001)167:7027;MacGlashanDWJr.，JImmunol(2003)170:4914-25)。最新證據(jù)表明肥大細(xì)胞也可以受到Toll-樣受體影響(MarshallJS等，IntArchAllergyImmunol(2003)132:87-97)。然而，試驗(yàn)使用的rBetvl制劑并不包括內(nèi)毒素。最后，有可能地是IgE抗體的存在影響了血清學(xué)和生物學(xué)的測(cè)試結(jié)果，所述抗體具有誘導(dǎo)不同過敏活性的抗原表位的不同親和力或結(jié)合特異性.結(jié)論是，該研究從分子水平上證實(shí)變應(yīng)原-特異性血清IgE水平與細(xì)胞和體內(nèi)試驗(yàn)測(cè)定的生物學(xué)敏感性之間沒有必然的相關(guān)性。然而，發(fā)現(xiàn)在皮膚試驗(yàn)和嗜堿細(xì)胞組胺釋放測(cè)試之間具有穩(wěn)定的相關(guān)性。實(shí)施例2:為了在治療前確定病人的敏感性以使得給予正確劑量，使用全血的嗜堿細(xì)胞組胺釋放試驗(yàn)。具有高敏感性的患者將比低敏感性患者注射更小的劑量。治療前，采用純化的變應(yīng)原建立劑量應(yīng)答曲線。同時(shí)，用抗-IgE刺激細(xì)胞以確定全部細(xì)胞的敏感性，其可以影響對(duì)于變應(yīng)原的敏感性。通常在治療4一8周后，在抗變應(yīng)原的IgG抗體變得可檢測(cè)后，將可以控制治療的成功性。因?yàn)?，阻斷IgG抗體可能是引起敏感性降低的原因，同時(shí)確定對(duì)所給變應(yīng)原的IgG水平是很有用的。此外，采用純化的變應(yīng)原和抗-IgE再次測(cè)定劑量響應(yīng)。比較給予最大細(xì)胞活化的劑量(即最大組胺釋放或者CD203c增量調(diào)節(jié))或者測(cè)定給出一定程度活化的劑量，并且用處理前獲得的試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較。材料和方法如在實(shí)施例1中描述的。實(shí)施例3:如描述的(Stah1-Skov等1977.JExpImmunol27:432-439)，當(dāng)用洗過的粒細(xì)胞制劑進(jìn)行嗜堿細(xì)胞組胺釋放試驗(yàn)時(shí)，沒有發(fā)現(xiàn)組胺釋放數(shù)據(jù)和皮膚敏感性之間的相關(guān)性。組胺釋放可使用來自過敏患者的嗜堿細(xì)胞進(jìn)行。用葡聚糖沉積將它們濃縮，分離，洗滌，再懸浮在組胺釋放緩沖液中，并暴露于在37"C下的96-孔滴定板(TPP，Trasadingen,Switzerland)中不同濃度的重組體BetvI(IO-5，10_4，，10,10—2，10—、1lVml)或抗IgEMbE-124-2-8(1ug/ml)中30分鐘。培養(yǎng)后，離心分離細(xì)胞。回收不含細(xì)胞的上清液，通過采用市售放射免疫測(cè)定法分析組胺含量(Immunotech，Marseille,France)。將組胺釋放表達(dá)為在細(xì)胞溶解產(chǎn)物中測(cè)定的總組胺的百分?jǐn)?shù)(Valent等，1989，ProcNatlAcadSciUSA86:5542-5546)。如描述的(Pauli等，1996，JAllergyClinImmunol97:1100-1109)，采用連續(xù)稀釋的重組Betvl進(jìn)行皮膚單刺試驗(yàn)。從暴露于重組Betv1(服。/。-max)的嗜堿細(xì)胞釋放的最大量組胺與皮膚單剌試驗(yàn)反應(yīng)(mm2)沒有相關(guān)性(SPT2^/ml)(r=0.224，P=0.342)(圖5)。權(quán)利要求1、用于評(píng)價(jià)個(gè)體的變應(yīng)原敏感性和/或變應(yīng)原免疫治療的臨床效果的方法，其包括步驟-采集至少兩個(gè)來自接受或打算接受用至少一種純的變應(yīng)原或其衍生物進(jìn)行免疫治療的個(gè)體的樣本，所述樣本選自血液或者其部分、結(jié)締組織、鼻的、支氣管的、皮膚或者消化道的活組織檢查材料，其中所述樣本包含對(duì)所述變應(yīng)原產(chǎn)生應(yīng)答時(shí)能夠釋放介質(zhì)的細(xì)胞，-使所述樣本與所述變應(yīng)原或其衍生物接觸，和-確定從所述樣本中釋放出的介質(zhì)的量，并且通過比較所述量來評(píng)價(jià)個(gè)體在治療前的變應(yīng)原敏感性和/或評(píng)價(jià)免疫治療的臨床效果。2、用于評(píng)價(jià)個(gè)體的變應(yīng)原敏感性和/或變應(yīng)原免疫治療的臨床效果的方法，其包括步驟一采集在對(duì)IgE-變應(yīng)原復(fù)合物產(chǎn)生應(yīng)答時(shí)能釋放介質(zhì)的細(xì)胞，一使所述細(xì)胞與所述個(gè)體的血清和/或血漿接觸，所述個(gè)體用至少一個(gè)純的變應(yīng)原或其衍生物刺激，和一確定從所述樣本中釋放出的介質(zhì)的量，并通過比較所述量來評(píng)價(jià)個(gè)體在治療前的變應(yīng)原敏感性和/或評(píng)價(jià)免疫治療的臨床效果。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2的方法，其特征在于所述介質(zhì)選自組胺、纖維蛋白溶酶、前列腺素、白三烯，特別是半胱氨酰白三烯、嗜酸細(xì)胞陽離子蛋白、細(xì)胞因子，如白介素類(IL)，尤其是IL-2R、CD63、CD203c及其組合。4、根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述細(xì)胞為肥大細(xì)胞和/或嗜堿性細(xì)胞和/或嗜酸性細(xì)胞。5、根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述樣本中進(jìn)一步包含免疫球蛋白(Ig)，特別是免疫球蛋白G(IgG)。6、根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述樣本在所述個(gè)體接受免疫治療前后采集。7、根據(jù)權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述樣本在所述個(gè)體接受免疫治療后采集。8、根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的方法，其特征在于至少一個(gè)樣本是在所述個(gè)體接受免疫治療之后最多1小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、10天、4周、6個(gè)月以及36個(gè)月采集。9、根據(jù)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述變應(yīng)原是重組產(chǎn)生的。10、根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其特征在于所述變應(yīng)原包含至少一個(gè)缺失，至少一個(gè)替換或者至少一個(gè)插入。11、根據(jù)權(quán)利要求9的方法，其特征在于所述變應(yīng)原為通過基因工程重組所述變應(yīng)原片段來修飾的。12、根據(jù)權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)的方法，其特征在于使所述樣本與不同濃度的所述變應(yīng)原接觸。13、根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其特征在于所述變應(yīng)原濃度選自lng/ml至100Pg/ml的范圍，優(yōu)選lpg/ml至醇g/ml的范圍。14、根據(jù)權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)的方法，其特征在于進(jìn)一步確定所述細(xì)胞的介質(zhì)的總量。15、根據(jù)權(quán)利要求14的方法，其特征在于細(xì)胞的致敏度為通過測(cè)定誘導(dǎo)占所述細(xì)胞的介質(zhì)總量的10%，優(yōu)選30%的釋放的所述變應(yīng)原的濃度來定義。16、根據(jù)權(quán)利要求15的方法，其特征在于個(gè)體的變應(yīng)原敏感性和/或變應(yīng)原免疫治療的臨床效果通過觀察在所述免疫治療過程中的細(xì)胞致敏度來評(píng)價(jià)。17、根據(jù)權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述樣本中的該介質(zhì)通過免疫法和/或色譜法確定的。18、根據(jù)權(quán)利要求17的方法，其特征在于所述方法選自放射免疫測(cè)定法(RIA)、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)、高效液相色譜法(HPLC)、逆轉(zhuǎn)錄酶多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、免疫熒光流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)及其組合。19、根據(jù)權(quán)利要求1至18中任一項(xiàng)的方法，其特征在于所述變應(yīng)原選自大部分的白樺花粉變應(yīng)原，特別是Betv1和Betv4，大部分的梯牧草花粉變應(yīng)原，特別是Phlpl、Phip2、Phip5、Phip6和Phlp7，大部分的房塵螨變應(yīng)原，特別是Derp1和Derp2，大部分的貓變應(yīng)原Feldl，大部分的蜜蜂變應(yīng)原，大部分的黃蜂變應(yīng)原，抑制蛋白，尤其是Phlp12和儲(chǔ)螨變應(yīng)原，尤其是L印d2。20、用于評(píng)價(jià)個(gè)體變應(yīng)原敏感性或者對(duì)至少一種變應(yīng)原進(jìn)行變應(yīng)原免疫治療的臨床效果的試劑盒，其包括一至少一種變應(yīng)原，用于誘導(dǎo)對(duì)變應(yīng)原產(chǎn)生應(yīng)答時(shí)能夠釋放介質(zhì)的細(xì)胞釋放介質(zhì)，一用于檢測(cè)介質(zhì)的方法，禾口一任選地至少一個(gè)介質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)。21、用于評(píng)價(jià)個(gè)體的變應(yīng)原敏感性或者對(duì)至少一種變應(yīng)原進(jìn)行變應(yīng)原免疫治療的臨床效果的試劑盒，包含至少兩種下述成分一至少一種變應(yīng)原，用于誘導(dǎo)對(duì)變應(yīng)原產(chǎn)生應(yīng)答時(shí)能夠釋放介質(zhì)的細(xì)胞釋放介質(zhì)，一用于檢測(cè)介質(zhì)的方法，一至少一種介質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)，和一對(duì)IgE-變應(yīng)原復(fù)合物產(chǎn)生應(yīng)答時(shí)能夠釋放介質(zhì)的細(xì)胞。22、根據(jù)權(quán)利要求21的試劑盒，其特征在于所述細(xì)胞是肥大細(xì)胞和/或嗜堿性細(xì)胞和/或嗜酸性細(xì)胞。23、根據(jù)權(quán)利要求20—22中任一項(xiàng)的試劑盒，其特征在于所述變應(yīng)原選自大部分的白樺花粉變應(yīng)原，特別是Betv1和Betv4，大部分的梯牧草花粉變應(yīng)原，特別是Phlpl、Phip2、Phip5、Phip6和Phlp7，大部分的房塵螨變應(yīng)原，特別是Derp1和Derp2，大部分的貓變應(yīng)原Feldl，大部分的蜜蜂變應(yīng)原。大部分的黃蜂變應(yīng)原，抑制蛋白，尤其是Phlp12和儲(chǔ)螨變應(yīng)原，尤其是L印d2。24、根據(jù)權(quán)利要求20—23中任一項(xiàng)的試劑盒，其特征在于所述用于檢測(cè)介質(zhì)的方法選自由抗體組成的組。全文摘要本發(fā)明公開了一種用于評(píng)價(jià)個(gè)體的變應(yīng)原敏感性和/或變應(yīng)原免疫治療臨床效果的方法，其包括以下步驟采集至少兩個(gè)來自接受或打算接受用至少一種純的變應(yīng)原或其衍生物免疫治療個(gè)體的樣本，所述樣本選自血液或者其成分、結(jié)締組織、鼻的、支氣管的、皮膚或者消化道的活組織檢查物質(zhì)，其中所述樣本包含對(duì)所述變應(yīng)原產(chǎn)生應(yīng)答時(shí)能夠釋放介質(zhì)的細(xì)胞，將所述樣本與所述變應(yīng)原或其衍生物接觸，并且確定從所述樣本中釋放出的介質(zhì)的量，并且通過比較所述量來評(píng)價(jià)個(gè)體在治療前的變應(yīng)原敏感性和/或評(píng)價(jià)免疫治療的臨床效果。文檔編號(hào)G01N33/68GK101115996SQ200680004343公開日2008年1月30日申請(qǐng)日期2006年2月9日優(yōu)先權(quán)日2005年2月9日發(fā)明者A·普羅希特,A·韋羅特,C·梅茨-法夫爾,G·保利,N·莫特-盧克施,P·瓦郎,R·瓦倫塔,S·拉弗申請(qǐng)人:碧歐美公司