專利名稱：一種改良的總氧自由基清除能力測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種改良的總氧自由基清除能力測定方法。
背景技術(shù)：
總氧自由基清除能力(TOSC)是醫(yī)學(xué)或生物科學(xué)實驗中常用的一項檢測指標(biāo)，因其操作簡單，反應(yīng)靈敏，可行性佳，重現(xiàn)性好且能綜合全面反映抗氧化能力的變化等特有的優(yōu)勢，已受到眾多國內(nèi)外學(xué)者的重視。其主要原理是2，2’-偶氮-雙(2-瞇基丙烷)二鹽酸鹽(ABAP)在加熱條件下產(chǎn)生自由基，而4-甲硫基-2-丁酮酸(KMBA)在自由基作用下可氧化產(chǎn)生乙烯，若有抗氧化劑的存在，則可與KMBA競爭結(jié)合自由基，從而使乙烯的產(chǎn)量減少。根據(jù)有無抗氧化劑存在時乙烯量的變化，可計算所測樣品中存在的抗氧化劑總量，從而判斷氧化系統(tǒng)的總體情況。由于ABAP在加熱條件下可產(chǎn)生自由基，而KMBA在自由基作用下可氧化產(chǎn)生乙烯，若有抗氧化劑的存在，則可與KMBA競爭結(jié)合自由基，從而使乙烯的產(chǎn)量減少。因此，根據(jù)乙烯量的變化，可計算所測樣品中存在的抗氧化劑總量，從而判斷氧化系統(tǒng)的總體情況。但該檢測方法也存在一些不足如在現(xiàn)有的操作流程中沒有說明具體的反應(yīng)時間。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明在多次實驗探索的基礎(chǔ)上，對TOSC測定方法進(jìn)行了改進(jìn)，主要是對幾個關(guān)鍵反應(yīng)時間進(jìn)行了定量，使該文法可操作性更強(qiáng)。
技術(shù)方案下面以小鼠肝臟總氧自由基清除能力測定為例對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行說明
1.在10ml頂空瓶內(nèi)分別加入0.2mmol/L的KMBA0.8ml，組織勻漿上清液0.1ml；2.密封瓶蓋；3.用1ml注射器穿透瓶蓋向內(nèi)注入0.2mol/L的ABAP 0.1ml；4.置于35℃水浴中恒溫振蕩1小時；5.用1ml微量進(jìn)樣器抽取0.6ml瓶頂液上氣進(jìn)行檢測；6.根據(jù)上述公式計算TOSC，并根據(jù)蛋白量計算TOSC/mg。
技術(shù)特征對操作流程中的主要步驟進(jìn)行嚴(yán)格的時間定量。
1.每樣品置于恒溫水浴的操作間隔為2分鐘。
2.反映1小時后按次序?qū)λ悠愤M(jìn)行抽氣檢測，同時上述的加樣水浴步驟仍可繼續(xù)進(jìn)行本發(fā)明的主要益處1.水浴1小時，各物質(zhì)的反應(yīng)充分而徹底。
2.每樣品間隔2分鐘，使操作人員在一定時間內(nèi)完成最大量的樣品檢測。
3.每個反應(yīng)體系不需要終止反應(yīng)，達(dá)到反應(yīng)時間后立即抽氣檢測。
4.各反應(yīng)體系的平衡減小了系統(tǒng)誤差。
權(quán)利要求
1.一種改良的總氧自由基清除能力測定方法。其特征在于，該方法按下列步驟順序進(jìn)行(以小鼠肝臟總氧自由基清除能力測定為例)1).在10ml頂空瓶內(nèi)分別加入0.2mmol/L的KMBA(用0.1mol/L pH 7.4的磷酸緩沖液配置0.8ml，組織勻漿上清液0.1ml；2).密封瓶蓋；3).用1ml注射器穿透瓶蓋向內(nèi)注入0.2mol/L的ABAP 0.1ml4).置于35℃水浴中恒溫振蕩1小時；5).用1ml微量進(jìn)樣器抽取0.6ml瓶頂液上氣進(jìn)行檢測；6).根據(jù)上述公式計算TOSC，并根據(jù)蛋白量計算TOSC/mg。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種改良的總氧自由基清除能力測定方法，其特征在于每樣品置于恒溫水浴的操作間隔為2分鐘。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種改良的總氧自由基清除能力測定方法，其特征在于水浴時間為1小時，各物質(zhì)的反應(yīng)充分而徹底。
全文摘要
一種改良的總氧自由基清除能力測定方法。在10ml頂空瓶內(nèi)分別加入0.2mmol/L的KMBA 0.8ml，組織勻漿上清液0.1ml；用1ml注射器穿透瓶蓋向內(nèi)注入0.2mol/L的ABAP 0.1ml；置于35℃水浴中恒溫振蕩1h；用1ml微量進(jìn)樣器抽取0.6ml瓶頂液上氣進(jìn)行檢測。本發(fā)明各物質(zhì)的反應(yīng)充分而徹底；每樣品間隔2分鐘，使操作人員在一定時間內(nèi)完成最大量的樣品檢測；每個反應(yīng)體系不需要終止反應(yīng)，達(dá)到反應(yīng)時間后立即抽氣檢測；各反應(yīng)體系的平衡減小了系統(tǒng)誤差。
文檔編號G01N31/00GK1912618SQ20061005303
公開日2007年2月14日 申請日期2006年8月21日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月21日
發(fā)明者邢鳴鸞, 劉慧剛, 徐立紅 申請人:浙江大學(xué)