專利名稱：：9-芴甲醇純度的測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于分析化學領(lǐng)域內(nèi)的液相色譜分析方法，更具體涉及一種采用高效液相色譜儀器對9-芴甲醇純度的測定方法。
背景技術(shù)：
：9-芴甲醇(O^Q)是白色針狀晶體，熔點106-107°C，不溶于水。它是制備功能性色素、染料、醫(yī)藥、農(nóng)藥、高分子單體的重要原料而且價格極其昂貴。9-芴甲醇也是一種重要的生物化工原料的中間體，它與光氣反應(yīng)生成氯甲酸-9-芴甲酯(Fmoc-Cl)，F(xiàn)moc-Cl是制備氨基酸的保護劑，在其合成中有重要及獨到的作用。隨著生物科學與技術(shù)的不斷發(fā)展，由9-荷甲醇制取氨基保護劑產(chǎn)品已越來越受到人們的重視。近幾年，人們對9-荷甲醇的合成的研究給于相當?shù)闹匾?，發(fā)展很快，所涉及資料報道甚多，均未涉及到對9-芴甲醇的測定，如《化學試劑》，2003，25(6)，P373374上海應(yīng)用技術(shù)學院的周祖新、顧建生在"氫化鈉催化法合成芴甲醇"的文章中僅提到分析產(chǎn)物使用到液相色譜，但未涉及對9-芴甲醇的純度進行測定。純度的正確測定關(guān)系到其產(chǎn)品的成本價格，如何對9-芴甲醇的純度進行測定仍是一個尚未解決的技術(shù)難題，也未見任何關(guān)于如何測定9-芴甲醇的純度的相關(guān)報道，不同純度的9-芴甲醇的測定始終成為生產(chǎn)、使用、銷售及科研各領(lǐng)域中需要解決的問題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種9-銜甲醇純度的測定方法，該方法能簡便而準確地采用高效液相色譜方式進行測定，為生產(chǎn)、使用、銷售及科研各領(lǐng)域內(nèi)不同純度的9-芴甲醇的測定提供了一種快速檢測手段。為達到上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案-該9-芴甲醇純度的測定方法包括以下步驟首先，將已知純度的標樣與待測純度的樣品先進行溶液配制；然后用高效液相色譜法分別測出各自相關(guān)的色譜譜圖與峰面積；最后按外定法的定量計算公式換算成待測樣品的9-芴甲醇純度值。將已知純度標樣與待測純度樣品分別定量秤取，加入定量的色譜純級有機溶劑，經(jīng)充分振搖、混合、溶解、脫泡后靜止510分鐘，即分別配成濃度為0.lmg/ml1.2mg/ml已知純度標樣與待測純度樣品的各自的分析樣品溶液，待用。所述色譜純級有機溶劑為甲醇、乙腈或四氫呋喃中任選一種。所述色譜純級有機溶劑為甲醇。高效液相色譜法所用流動相為色譜純級有機溶劑與水按體積百分比1090:9010的比例配制成混合液體。所述色的譜純級有機溶劑為甲醇、乙腈或四氫呋喃中任選一種。所述的色譜純級有機溶劑為甲醇。所述水為二次石英蒸餾水。所述的外定法的定量計算公式為爿2W其中，X,:待測樣品中9一芴甲醇的純度，％Xfe:已知標樣中9一芴甲醇的純度，％;A,:試樣中9一芴甲醇組分的峰面積；A2:標樣中9一芴甲醇組分的峰面積；m,:試樣的質(zhì)量，g;m2:標樣的質(zhì)量，g。所述高效液相色譜的所用色譜柱為通用型液相色譜柱，其填料為十八烷基鍵合相硅膠或辛烷基鍵合相硅膠或者氰基鍵合相硅膠。在本發(fā)明的上述的技術(shù)方案中，首先將已知純度的標樣與待測純度的樣品先進行溶液配制，然后用高效液相色譜法分別測出各自相關(guān)的色譜譜圖與峰面積；最后按外定法的定量計算公式換算成待測樣品的9-芴甲醇純度值。該方法采了用柱效高、使用壽命長、重現(xiàn)性好的反相鍵合柱做分離柱，常用的紫外檢測器檢測，得到的色譜峰峰形對稱尖銳、分離度高，分析時間短；該方法的相對標準偏差是0.25%，加標回收率是98.1%103.2%;該發(fā)明具有峰呈現(xiàn)性好，分辨率高、重復(fù)性好的特點，能準確快速測定各種純度的9一銜甲醇。圖l為9-芴甲醇標樣譜圖；圖2為9-芴甲醇精制品樣品譜圖；圖3為9-芴甲醇粗制品樣品譜圖。具體實施方式本發(fā)明的測定方法具體操作步驟如下一，溶液配制將已知純度標樣與待測純度樣品分別定量秤取，加入定量的色譜純級有機溶劑，經(jīng)充分振搖、混合、溶解、脫泡后靜止510分鐘，即分別配成濃度為O.lmg/ml1.2mg/ml已知純度標樣與待測純度樣品的各自的分析樣品溶液，待用。所述色譜純級有機溶劑為甲醇、乙腈或四氫呋喃中任選一種，其中優(yōu)選為毒性小價格最低的甲醇。二，測試峰面積待色譜儀工作穩(wěn)定后，用50iaL微量注射器，分別從已知純度標樣溶液和待測純度樣品溶液中各取相同的進樣量，依次注入液相色譜儀的進樣口，由于色譜儀內(nèi)泵的傳動而使其流動相液體呈不斷流動狀態(tài)，因而使己進入的己知純度標樣液或待測純度樣品液帶入通用型液相色譜柱內(nèi)，最后順色譜柱由上而下流出機外。由于上述兩種液體的流動所產(chǎn)生的各種數(shù)值通過高效液相色譜儀中液相色譜柱及紫外多波檢測器分別得出9-芴甲醇的標樣及待測樣品的分離色譜圖和相應(yīng)的峰面積。三，測試條件進樣量范圍為5uL20uL;流動相為色譜級有機溶劑與水按體積百分比1090:9010的比例配制的混合液體，其中有機溶劑為甲醇、乙腈或四氫呋喃中任選一種，其中優(yōu)選為毒性小價格最低的甲醇。上述使用的水為二次石英蒸餾水；流動相的流速為0.81.2ml/分；色譜分析時間為140分鐘；色譜柱采用通用型液相色譜柱，其填料為十八烷基鍵合相硅膠或辛烷基鍵合相硅膠或者氰基鍵合相硅膠；6、紫外多波檢測器波長為220370nm。(三)計算結(jié)果將上述所得已知的9-芴甲醇的標樣及待測樣品的分離色譜圖和相應(yīng)的峰面積用外定法定量計算公式換算成待測樣品的9-芴甲醇純度值。具體公式如下爿2X,:待測樣品中9一芴甲醇的純度，％XS:已知標樣中9一芴甲醇的純度，％;A,:試樣中9一芴甲醇組分的峰面積；A2:標樣中9一芴甲醇組分的峰面積；m,:試樣的質(zhì)量，g;m2:標樣的質(zhì)量，g。實施例l實驗儀器與色譜條件選用AgilentIIOO型高效色譜儀，配備在線真空脫氣機，四元梯度泵，20ul手動進樣器，多波長紫外檢測器，柱溫箱，AgilentIIOO化學工作站。色譜柱選用的是InertsilODS-3,填料粒度5um，柱長15cm，內(nèi)徑4.6mm;流速1.Oml/min;柱溫30°C;檢測波長232nm;進樣量10ul。試劑與藥品9-芴甲醇標樣由比利時的ACR0S公司提供，產(chǎn)品編號是A0182055,純度99.8%。標樣經(jīng)過紅外光譜、質(zhì)譜、核磁共振譜表征，并與標準譜圖比較，結(jié)構(gòu)得到確認。甲醇(色譜級)購自上海國藥集團的產(chǎn)品。實驗中流動相和溶液用水均為二次石英蒸餾水。99.8%純度9-芴甲醇標準樣品的測定流動相為甲醇水=10:90(v/v)。準確稱取29.45mg9-芴甲醇標樣，置于100ml潔凈干燥的容量瓶中，用色譜級甲醇稀釋至刻度，用超聲波脫氣10分鐘，充分搖勻，進樣。待儀器條件穩(wěn)定后連續(xù)進樣3次，取3次面積的平均值作為標樣計算的面積(A2)。數(shù)據(jù)見表l。典型色譜圖見圖l。表19-芴甲醇標樣積分面積<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>實施例2色譜條件同實施例1，準確稱取28.76mg9-芴甲醇精制品試樣，置于100ml潔凈干燥的容量瓶中，用色譜純甲醇稀釋至刻度，用超聲波脫氣io分鐘，充分搖勻，進樣。得到試樣中9-芴甲醇的面積Al二24558.3，根據(jù)下式計算:X"精制品枰品中9一芴甲醉的純度，％己知標樣中9一芴甲醇的純度，％;Al:試樣中9一芴甲醇組分的峰面積；Aw標樣中9一芴甲醇組分的峰面積；m1:試樣的質(zhì)量，g;m2:標樣的質(zhì)量，g。24558.329.45X,=99.8X_X_25348.228.76=99.01該9-芴甲醇試樣的純度是99.01%。譜圖見圖2。實施例3流動相為甲醇水=20:80(v/v)，其它色譜條件同實施例1，準確稱取27.45mg9-芴甲醇粗制品試樣，置于100ml潔凈干燥的容量瓶中，用色譜純甲醇稀釋至刻度，用超聲波脫氣10分鐘，充分搖勻，進樣。得到試樣中9-芴甲醇的面積A1二18944.0，根據(jù)下式計算X,=X(tx業(yè)x^X,:精制品樣品中9一芴甲醇的純度，％Xte:已知標樣中9一芴甲醇的純度，％;A,-試樣中9一荷甲醇組分的峰面積；1標樣中9一芴甲醇組分的峰面積；m,:試樣的質(zhì)量，g;m2:標樣的質(zhì)量，g。18944.029.45X,=99.8X_X_25348.227.45"~=80.02分析結(jié)果是該9-芴甲醇試樣純度為80.02%(w%)，譜圖如圖3。實施例4高效液相色譜儀同實施例1,準確稱取9-芴甲醇粗制品15mg左右，置于100ml潔凈干燥的容量瓶中，再準確稱取一定量99.8%標準樣品加入試樣瓶中，用色譜純甲醇稀釋至刻度，用超聲波脫氣10分鐘，充分搖勻，進樣，(C錢/C狄)x100%即為回收率，得到此方法的加標回收率為98.1%103.2%，具體數(shù)據(jù)見表2。對實施例2中樣品進行了6次連續(xù)測定，統(tǒng)計誤差得到相對標準偏差是0.25%，具體數(shù)據(jù)見表3。表2加標回收率試驗數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表3相對標準偏差試驗數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>權(quán)利要求1、一種9-芴甲醇純度的測定方法，其特征在于，該測定方法包括以下步驟首先，將已知純度的標樣與待測純度的樣品先進行溶液配制；然后用高效液相色譜法分別測出各自相關(guān)的色譜譜圖與峰面積；最后按外定法的定量計算公式換算成待測樣品的9-芴甲醇純度值。2、根據(jù)權(quán)利要求l所述的9-芴甲醇純度的測定方法，其特征在于將已知純度標樣與待測純度樣品分別定量秤取，加入定量的色譜純級有機溶劑，經(jīng)充分振搖、混合、溶解、脫泡后靜止510分鐘，即分別配成濃度為0.1mg/ml1.2mg/ml已知純度標樣與待測純度樣品的各自的分析樣品溶液，待用。3、根據(jù)權(quán)利要求l或2所述的9-芴甲醇純度的測定方法，其特征在于所述色譜純級有機溶劑為甲醇、乙腈或四氫呋喃中任選一種。4、根據(jù)權(quán)利要求3所述的9-芴甲醇純度的測定方法，其特征在于所述色譜純級有機溶劑為甲醇。5、根據(jù)權(quán)利要求l或2所述的9-芴甲醇純度的測定方法，其特征在于高效液相色譜法所用流動相為色譜純級有機溶劑與水按體積百分比1090:9010的比例配制成混合液體。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的9-芴甲醇純度的測定方法，其特征在于所述色的譜純級有機溶劑為甲醇、乙腈或四氫呋喃中任選一種。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的9-芴甲醇純度的測定方法，其特征在于所述的色譜純級有機溶劑為甲醇。8、根據(jù)權(quán)利要求5所述的9-芴甲醇純度的測定方法，其特征在于所述水為二次石英蒸餾水。9、根據(jù)權(quán)利要求l所述的9-芴甲醇純度的測定方法，其特征在于，所述的外定法的定量計算公式為-<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中，X1:待測樣品中9—芴甲醇的純度，％X:已知標樣中9一芴甲醇的純度，％;A,:試樣中9一芴甲醇組分的峰面積；A2:標樣中9一芴甲醇組分的峰面積；m1:試樣的質(zhì)量，g;m2:t示樣的質(zhì)量，g。10、根據(jù)權(quán)利要求l所述的9-芴甲醇純度的測定方法，其特征在于所述高效液相色譜的所用色譜柱為通用型液相色譜柱，其填料為十八烷基鍵合相硅膠或辛垸基鍵合相硅膠或者氰基鍵合相硅膠。全文摘要本發(fā)明公開了一種涉及9-芴甲醇純度的測定方法，將已知純度的標樣與待測純度的樣品先進行溶液配制，然后用高效液相色譜法分別測出各自相關(guān)的色譜譜圖與峰面積；最后按外定法的定量計算公式換算成待測樣品的9-芴甲醇純度值。本發(fā)明首次采用通用液相色譜柱和紫外多波檢測器檢測所得色譜峰峰形對稱尖銳、分離度高，分析時間短；相對標準偏差是0.25％，加標回收率是98.1％～103.2％；本發(fā)明能廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)、使用、銷售及科研各領(lǐng)域內(nèi)不同純度9-芴甲醇的快速檢測。文檔編號G01N30/86GK101131377SQ20061003036公開日2008年2月27日申請日期2006年8月24日優(yōu)先權(quán)日2006年8月24日發(fā)明者張秀云,陸惠萍,陳葉飛,陳國敏申請人:寶山鋼鐵股份有限公司