專利名稱：評(píng)估患消化性潰瘍的危險(xiǎn)度的方法,包括定量測(cè)定血清樣品中胃蛋白酶原i(pgi)和胃泌 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種通過確定個(gè)體中胃炎的存在及其局部解剖表型來評(píng)價(jià)該個(gè)體患消化性潰瘍的危險(xiǎn)度的方法。
慢性胃炎是一種非常常見的疾病。據(jù)評(píng)估全世界的人幾乎一半在其一生中的某個(gè)(些)階段患有胃炎。慢性胃炎最常見由幽門螺桿菌(Helicobacterpylori)感染引起，而且認(rèn)為大多數(shù)病歷是因?yàn)榭惯@種細(xì)菌的免疫反應(yīng)造成了慢性胃炎[1-6]。
慢性胃炎是一種由唯一的細(xì)菌感染引起的疾病，具有慢性和終身患病的特征。胃炎的自發(fā)治愈，胃竇和胃體粘膜的正常化，是很罕見的。慢性胃炎的自然進(jìn)程通常是從炎癥到萎縮的一系列改變，其中萎縮明顯改變胃粘膜的結(jié)構(gòu)和功能。慢性胃炎的后果表現(xiàn)為幾種重要的功能障礙，這些功能障礙看起來顯示與特異性改變有關(guān)并與胃炎進(jìn)程中某些特定的狀態(tài)有關(guān)。
細(xì)菌感染導(dǎo)致胃粘膜的由免疫活性淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞，通常為粒細(xì)胞組成的單純炎癥[7-11]。對(duì)兒童和青年人群的研究提示慢性炎癥是早期胃炎的優(yōu)勢(shì)初始表型。對(duì)于年齡較大的人群，萎縮和粘膜下腸化生是普遍的現(xiàn)象，并隨著年齡的增長而增加[12-18]。
研究表明從慢性胃炎到萎縮是一個(gè)緩慢的過程。胃炎以及隨后的萎縮是胃粘膜的幾種功能和穩(wěn)態(tài)受損的重要原因。萎縮導(dǎo)致隨著萎縮的進(jìn)展體部和竇部粘膜的酸、胃蛋白酶原和胃泌素的分泌故障(正常胃粘膜腺體損失)。
幽門螺桿菌感染和胃炎都是消化性潰瘍(包括十二指腸和胃潰瘍)重要的危險(xiǎn)因子。胃炎能發(fā)展為十二指腸潰瘍和胃潰瘍，這提示幽門螺桿菌感染，胃炎及潰瘍形成之間的因果關(guān)系[19，20]。胃竇炎(炎癥僅局限于胃竇)或全胃炎(胃竇和胃體都有炎癥)使患十二指腸潰瘍的危險(xiǎn)性增加約十倍[19]。胃竇炎或全胃炎同時(shí)伴有胃竇萎縮時(shí)與具有正常胃的人相比可能增加患胃潰瘍的危險(xiǎn)度，尤其從積累和相關(guān)的角度說，可使該危險(xiǎn)度增加幾十倍[21，22]。
胃炎也可能降低潰瘍發(fā)生的危險(xiǎn)性，尤其是當(dāng)胃炎發(fā)生在胃體并且進(jìn)展為明顯的萎縮時(shí)。與胃竇損傷的有無和程度無關(guān)，消化性潰瘍發(fā)生的危險(xiǎn)度降低到甚至比有一個(gè)正常的胃的人群更低的水平。
總的來說，患消化性潰瘍的危險(xiǎn)度隨著胃竇損傷(胃炎和萎縮)程度的增加呈指數(shù)增加，但是隨著胃體損傷程度的增加呈指數(shù)下降。
源自人胃粘膜的胃蛋白酶原經(jīng)電泳可以區(qū)分出7種表型。其中五種遷移速度最快的組成免疫學(xué)特性一致的胃蛋白酶原I組，其余的兩種形成胃蛋白酶原II組。I組的胃蛋白酶原僅由胃體部的主要細(xì)胞和分泌細(xì)胞合成。相對(duì)的，全胃的腺體都能合成I組I的胃蛋白酶原，某種程度上十二指腸上部的Brunner氏腺體也能合成。健康人血清中胃蛋白酶原I濃度大約是胃蛋白酶原II濃度的6倍。胃體部萎縮性胃炎的血清胃蛋白酶原I濃度下降，而血清胃蛋白酶原II濃度保持原有水平。因此，血清中胃蛋白酶原I濃度很好地反應(yīng)了胃體部胃蛋白酶原分泌細(xì)胞的數(shù)量和狀態(tài)。胃體部萎縮性胃炎越重，血清中胃蛋白酶原I濃度越低。血清中低胃蛋白酶原I濃度可指示嚴(yán)重的萎縮性胃體炎，其靈敏度大于90％，特異性接近100％[23]。
胃泌素至少以三種形式在胃腸道中分泌，測(cè)定血清胃泌素(總血清胃泌素)便可檢測(cè)這三種胃泌素的免疫反應(yīng)活性。胃泌素三種亞型分別被稱為極小胃泌素(G-14)，小胃泌素(G-17)，大胃泌素(G-34)。生理上最重要的是胃泌素-17和胃泌素-34。胃泌素-17促進(jìn)鹽酸分泌的作用是胃泌素-34的6倍。分泌胃泌素的細(xì)胞被稱為G細(xì)胞，胃竇和十二指腸都有G細(xì)胞。最重要的胃泌素分泌加速劑是迷走神經(jīng)的緊張和蛋白降解產(chǎn)物。pH值低于2.5減慢胃泌素的分泌。胃竇分泌的胃泌素90％以上是胃泌素-17，而十二指腸主要分泌胃泌素-34[24]。禁食時(shí)血清中主要為胃泌素-34，餐后血清中主要是胃泌素-17[25]。還用蛋白刺激試驗(yàn)研究過胃泌素-17的分泌。在該試驗(yàn)中，清晨采未進(jìn)食時(shí)的血樣，病人進(jìn)高蛋白飲食后，每隔15分鐘采血，共2小時(shí)。最大分泌量在進(jìn)食后大約20分鐘時(shí)出現(xiàn)。
患萎縮性胃竇炎時(shí)竇部的粘膜萎縮并因此其胃泌素-17分泌下降，因而它在血清中的濃度也減少。因此血清胃泌素-17濃度的減少可以表明竇的萎縮和這個(gè)部位患癌癥的危險(xiǎn)上升。竇部粘膜萎縮時(shí)，蛋白刺激試驗(yàn)反應(yīng)也下降，這種蛋白刺激試驗(yàn)似乎比單純血清濃度測(cè)定更靈敏地反映萎縮。在WO 96/15456中介紹了一種通過測(cè)定胃的不同部位的萎縮來篩查癌癥危險(xiǎn)度的方法。
因?yàn)槁晕秆椎母叨攘餍校绕涫窃诶夏耆巳褐械牧餍?，開發(fā)一種方法來評(píng)估慢性胃炎的存在及其局部解剖表型從而來評(píng)估患相關(guān)的消化性潰瘍的危險(xiǎn)度是很重要的。尤其是開發(fā)一種以非侵入方式實(shí)施所述評(píng)估的方法較為有利，所述非侵入方式即無需在胃鏡診斷性檢查期間采集胃粘膜的活檢標(biāo)本。開發(fā)一種不僅能評(píng)估患消化性潰瘍的危險(xiǎn)度，還能區(qū)分患胃潰瘍和十二指腸潰瘍的危險(xiǎn)度的差異的方法也是有利的。
本發(fā)明的方法能實(shí)現(xiàn)以上提及的目標(biāo)。所述方法涉及評(píng)估個(gè)體患消化性潰瘍的危險(xiǎn)度的方法，此方法包括以下步驟-定量確定該個(gè)體血清樣品中胃蛋白酶原I和胃泌素-17的濃度-選擇每種分析物的方法特異性參考值和閾值-將所測(cè)的胃蛋白酶原I和胃泌素-17濃度與它們各自的參考值和閾值比較，當(dāng)血清中胃蛋白酶原I和胃泌素-17濃度都大于各自的參考值上限，或者血清胃蛋白酶原I濃度大于它的參考值上限且胃泌素-17濃度在其參考值范圍內(nèi)或者小于其閾值時(shí)指示此個(gè)體患消化性潰瘍的危險(xiǎn)度增加。
因此本發(fā)明包括一個(gè)步驟，此步驟將血清中胃蛋白酶原I和胃泌素-17濃度都大于分別的參考值上限，或者血清胃蛋白酶原I濃度大于它的參考值上限且胃泌素-17濃度在其參考值范圍內(nèi)或者小于其閾值的個(gè)體鑒定為患消化性潰瘍的危險(xiǎn)度增高，或有患消化性潰瘍的傾向。
根據(jù)發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，所述方法包括一個(gè)通過測(cè)定血清樣品中幽門螺桿菌(helicobacter pylori)抗體來診斷該個(gè)體還有幽門螺桿菌感染的方法。
根據(jù)本發(fā)明的方法因此對(duì)病人血清聯(lián)合應(yīng)用兩種或優(yōu)選三種測(cè)定來篩查患消化性潰瘍的危險(xiǎn)度，既血清胃蛋白酶原I(PGI)的測(cè)定，胃泌素-17的測(cè)定和任選幽門螺桿菌抗體的測(cè)定。
測(cè)定PGI，G-17和幽門螺桿菌抗體的不同方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，也有商品化的試劑盒。這些方法通常是免疫學(xué)方法，其利用所述分析物的單克隆或多克隆抗體來實(shí)施。用來檢測(cè)的方法包括，例如，測(cè)量吸收值，熒光或發(fā)光。也可同時(shí)進(jìn)行這三種檢測(cè)，例如，在同一塊微滴板(microplate)上的不同孔中進(jìn)行，這種聯(lián)合檢測(cè)體系為診斷提供了特別方便的方法。
本發(fā)明包括將所測(cè)的分析物濃度與該分析物的方法特異性閾值和參考值比較的步驟，對(duì)這些值的選擇是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的，并且依賴于測(cè)定分析物濃度所用試驗(yàn)方法的特異性和靈敏度，例如見William J Marshall，臨床化學(xué)，第三版，1995，Mosby。
有許多商品化的試劑盒可以用來測(cè)定幽門螺桿菌抗體(例如羅氏(Roche)公司的Orion Pyloriset EIA-G，Pyloriset EIA-A，EIA2G，WhittakerBioproducts公司的Pyloristat)。抗原可以用幽門螺桿菌為材料通過不同的方法制備[26]，而且也有商品化產(chǎn)品。


圖1說明慢性胃炎的局部解剖表型和與胃病的相關(guān)危險(xiǎn)度，和圖2說明SPGI，G-17和幽門螺桿菌感染的血清學(xué)檢測(cè)與慢性胃炎的局部解剖表型的關(guān)系。
本發(fā)明中，術(shù)語“局部解剖”或“局部解剖的”用來指胃炎在胃中的定位。無論在胃體還是在胃竇，表型區(qū)分為正常，胃炎(淺表型胃炎)和萎縮性胃炎，萎縮性胃炎又可根據(jù)嚴(yán)重程度依次分為輕度，中度和重度萎縮性胃炎。
如圖1所示，當(dāng)胃體和胃竇粘膜的胃炎是淺表型胃炎或者輕度萎縮型胃炎(與胃健康的個(gè)體，圖中標(biāo)記為“R”者相比)時(shí)胃潰瘍尤其是十二指腸潰瘍的患病率增高，患病危險(xiǎn)度隨著胃竇部胃炎的嚴(yán)重程度的增加而增加。這種情況下血清胃蛋白酶原I和胃泌素-17濃度都增加到高于它們的參考值，參考值的上限根據(jù)所用方法的特異性和靈敏度將PGI定為25-120μg/l胃泌素-17也高于其正常值或參考值，該參考值范圍是2-25pmol/l。幽門螺桿菌陽性的滴度閾值是200-500。
在胃體部正常或胃體部胃炎是淺表型且胃竇部為中到重度萎縮型胃炎的情況下，患胃潰瘍(以及胃癌)的危險(xiǎn)度增加，這種情況下，如上述，胃蛋白酶原I濃度也超過其參考值的上限，但是胃泌素-17的值在正常范圍內(nèi)，在其較低的參考值處，或當(dāng)嚴(yán)重萎縮時(shí)低于其閾值，該閾值根據(jù)所用方法的特異性和靈敏度定為0.1-2pmol/l。該方法還可與蛋白刺激試驗(yàn)聯(lián)合使用，所述試驗(yàn)是測(cè)量血清胃泌素17在基線狀態(tài)以及在蛋白刺激(如高蛋白標(biāo)準(zhǔn)餐)后的濃度。缺少對(duì)該試驗(yàn)的反應(yīng)說明有患胃潰瘍的危險(xiǎn)。
從圖中還可以看出萎縮性胃體炎嚴(yán)重程度增加，且沒有或者只有淺表性胃竇炎時(shí)，血清胃蛋白酶原I濃度下降到低于閾值可指示患癌癥和惡性貧血的危險(xiǎn)度增高，其中所述閾值根據(jù)所選方法的特異性和靈敏度為20-30μg/l。胃泌素-17濃度仍如上述高于它的參考值。
在胃竇和胃體的萎縮性胃炎嚴(yán)重程度都增加的情況下，血清胃蛋白酶原I濃度低于其閾值表明患癌癥的危險(xiǎn)度增加，血清胃泌素-17在其參考值下限處，或者在其閾值以下，表明患癌癥的危險(xiǎn)度增加。這些胃炎表型都與胃癌高風(fēng)險(xiǎn)度有關(guān)。
以上所說的用聯(lián)合的方法對(duì)胃不同部位的粘膜的胃炎表型的評(píng)價(jià)如表1所示。
表1血清胃蛋白酶原I和胃泌素-17聯(lián)合方法評(píng)價(jià)胃體或胃竇部粘膜的胃炎表型表1

表型1＝正常，2＝淺表型胃炎，3＝輕度，4＝中度，5＝重度萎縮性胃炎SPGI＝血清胃蛋白酶原ISG-17＝血清胃泌素-17參考文獻(xiàn)1. MARSHALL，BJ，WARREN JR胃炎和消化性潰瘍患者胃內(nèi)未確定的彎曲狀桿菌。柳葉刀1984，i1311-1314。
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權(quán)利要求
1.評(píng)估個(gè)體患消化性潰瘍的危險(xiǎn)度的方法，此方法包括以下步驟-定量確定所述個(gè)體的血清樣品中胃蛋白酶原I和胃泌素-17的濃度-為每種分析物選擇方法特異性參考值和閾值-將所測(cè)的胃蛋白酶原I和胃泌素-17濃度與它們各自的方法特異性參考值和閾值比較，當(dāng)血清中胃蛋白酶原I和胃泌素-17濃度都大于各自參考值的上限，或者血清胃蛋白酶原I濃度大于它的參考值上限且胃泌素-17濃度在參考值范圍內(nèi)或者小于其閾值時(shí)，指示此個(gè)體患消化性潰瘍的危險(xiǎn)度增加。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中在血清樣品中還測(cè)定幽門螺桿菌抗體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中血清胃泌素-17濃度還用蛋白刺激試驗(yàn)測(cè)定，在所述試驗(yàn)中測(cè)量基線狀態(tài)下以及高蛋白標(biāo)準(zhǔn)餐后的所述濃度，缺乏應(yīng)答則指示有胃潰瘍的危險(xiǎn)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1，2，或3的方法，其中胃蛋白酶原I和胃泌素-17利用塑料，玻璃，或纖維素支持物用免疫學(xué)方法測(cè)定。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中支持物是微滴板。
6.根據(jù)權(quán)利要求1到5中任何一項(xiàng)的方法，其中用基于測(cè)量吸收值，熒光或發(fā)光的方法來測(cè)定胃蛋白酶原I和胃泌素-17。
7.根據(jù)權(quán)利要求4到6中任何一項(xiàng)的方法，其中為了測(cè)定胃蛋白酶原I的濃度，使用抗胃蛋白酶原I的單克隆抗體或多克隆抗體。
8.根據(jù)權(quán)利要求4到7中任何一項(xiàng)的方法，其中為了測(cè)定胃泌素-17的濃度，使用抗胃泌素-17的單克隆抗體或多克隆抗體。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任何一項(xiàng)的方法，其中胃蛋白酶原I，胃泌素-17和幽門螺桿菌測(cè)定方法與試劑盒方法相結(jié)合，其中用單克隆抗體和多克隆抗體以及基于吸收值，熒光或發(fā)光的檢測(cè)方法在微滴板上同時(shí)進(jìn)行測(cè)定。
全文摘要
本發(fā)明關(guān)注一種通過確定個(gè)體中胃炎的存在及其局部解剖學(xué)表型而評(píng)價(jià)消化性潰瘍的方法,其中定量測(cè)定該個(gè)體血清樣品中胃蛋白酶原I和胃泌素－17濃度,選擇針對(duì)每種分析物的方法特異性參考值和閾值,根據(jù)所測(cè)胃蛋白酶原I和胃泌素－17濃度與它們各自的方法特異性參考值和閾值比較來評(píng)價(jià)胃炎的局部解剖特征和表型,將所評(píng)價(jià)的胃炎表型與消化性潰瘍的危險(xiǎn)度相關(guān)聯(lián)。
文檔編號(hào)G01N33/577GK1355888SQ00808720
公開日2002年6月26日 申請(qǐng)日期2000年4月28日 優(yōu)先權(quán)日1999年4月30日
發(fā)明者彭蒂·西波南, 馬蒂·哈科南, 奧斯莫·斯沃瓦尼米, 埃里克·福斯布洛姆 申請(qǐng)人:拜奧希特公司