專利名稱：：一種新生牛血清無菌混合工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種新生牛血清的無菌混合工藝。
背景技術(shù)：
：目前國內(nèi)市場的牛血清生產(chǎn)均按照國標規(guī)定內(nèi)容生產(chǎn)。國標對新生牛血清產(chǎn)品規(guī)定符合如下要求1、新生牛血清根據(jù)出生后時間的不同(0.5小時內(nèi)、出生2小時內(nèi)、出生4小時內(nèi)、出生14小時內(nèi))分為頂級、超級、特技和普通4級。2、規(guī)定蛋白總量為3.5-5.0(W/V)，血紅蛋白含量《0.035(W/V)，內(nèi)毒素含量《10EU/ml，無菌試驗陰性、支原體陰性和大腸桿菌噬菌體陰性。3、牛腹瀉病毒抗體和口蹄疫抗體陰性。4、對血清促進BHK細胞和SP2/0的細胞生長的情況做了規(guī)定(見表l)。但在實際新生牛血清生產(chǎn)過程中，一般工藝難以做到無支原體污染。為了減少支原體污染，公開號為CN1961981A的發(fā)明專利公開了一種用多聯(lián)血袋全封閉無菌生產(chǎn)原料動物血清的方法，從源頭杜絕了支原體的污染。然而僅僅在原料牛血清的生產(chǎn)過程中杜絕支原體的污染是遠遠不夠的，原因為產(chǎn)品牛血清生產(chǎn)過程環(huán)節(jié)眾多、繁雜，存有多個污染漏洞，比如為了保障產(chǎn)品血清的均一性，以保障細胞培養(yǎng)過程的穩(wěn)定性和疫苗病毒的產(chǎn)量，必須將多批次的牛血清進行混合。目前血清混合工藝多是在潔凈環(huán)境開放條件下完成的，皮膚、唾液氣溶膠、呼吸氣溶膠、汗?jié)n等人體脫落物以及原料血清外包裝攜帶的包括支原體在內(nèi)的微生物都有可能在混合過程進入牛血清。為了保障血清無菌狀態(tài)，可以采取多級過濾程序，以除掉混合過程中污染的細菌。但是，支原體具有形態(tài)學可變特性，高壓條件下支原體可以通過變型而通過微孔濾膜，因此，多級過濾程序并不能防止支原體的污染，產(chǎn)品血清污染支原體的幾率依然非常大。
發(fā)明內(nèi)容針對上述現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種可徹底斷絕支原體污染的新生牛血清無菌混合工藝。一種新生牛血清無菌混合工藝，其特征在于在GMP車間內(nèi)，將需要混合的密封包裝的新生牛血清在萬級條件下置于乙醇消毒池中，浸泡1020min,以殺滅包裝袋表面的細菌、支原體等微生物，然后通過無菌傳遞窗進入百級車間，在百級條件下晾干包裝袋，然后將袋中新生牛血清傾入無菌混合罐中，攪拌混勻，然后進入常規(guī)多級過濾系統(tǒng)及其他常規(guī)程序。所述乙醇消毒池中乙醇的體積分數(shù)為72%78%。本發(fā)明的整套混合工藝具有全程封閉的特點，消除了操作過程中細菌、支原體、噬菌體等微生物的污染機會，適用于畜牧業(yè)疫苗藥業(yè)。本發(fā)明具有操作簡單、方便有效等優(yōu)點。具體實施例方式下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步的說明實施例原料新生牛血清的生產(chǎn)最小批量50頭新生牛血清1.120080001號新生牛血清的生產(chǎn)1.1.1新生牛血清檔案a新生牛血清編號20080001,b新生牛的隸屬關(guān)系山東佳寶乳業(yè)乳?；谻出生地山東省濟南市長清區(qū)佳寶乳業(yè)乳?；禺a(chǎn)房。d出生時間2008年6月17日13時.25分。e取血時間2008年6月17日14時10分f體重:45kg，精神好，未進食，無腹瀉,體表粘液未干；g新生牛母親的健康狀況，第2胎h母牛疫苗接種史口蹄疫疫苗、牛流行熱、布氏桿菌、炭疽i母牛病史l年來未發(fā)生明顯疾病；j周圍牛群的疫情發(fā)生情況3年來未發(fā)生重大疫情。k周圍畜牧養(yǎng)殖動物的疫情發(fā)生情況隔離喂養(yǎng)，與周圍動物無接觸。也無禽流感等疫情發(fā)生。1.1.2血清采集無菌封閉式采血(可以采用公開號為CN1961981A的發(fā)明專利公開的方法)。每份血清取4份留樣，分別為(D、②、G)、@、⑤，做標簽后-20凍存?zhèn)渥鰴z測；1.22008000250號新生牛血清的生產(chǎn)1.2.l新生牛血清檔案1.2.2血清采集同20080001號新生牛血清的采集方法。留樣5份，標簽后-20凍存?zhèn)渥鰴z測。2留樣檢測包括微生物學檢測(細菌、真菌、支原體、E.Coli(C300orK-12)噬菌體)、細菌內(nèi)毒素檢測、蛋白含量檢測、血紅蛋白定量檢測、血清抗體檢測(牛腹瀉病毒抗體和口蹄疫抗體)。3產(chǎn)品新生牛血清的生產(chǎn)3.1歸類合并3.1.1乙醇滅菌程序首先將原料血清通過物流通道運輸至GMP車間的乙醇池，在7278%乙醇中浸泡1520min，以殺滅包裝袋表面的細菌、支原體等微生物，然后通過傳遞窗口將浸泡過的原料血清傳遞至下一個生產(chǎn)程序。3.1.2混合均一程序GMP車間百級條件下混合車間進行將傳遞窗口輸入的原料牛血清無菌條件下打開并加入混合罐中，攪拌混勻，然后通過封閉式管道，將血清泵入"多級過濾和灌裝程序"。3.1.3多級過濾和無菌灌裝程序?qū)⒒旌暇坏难逋ㄟ^過濾、自動灌裝系統(tǒng)灌裝、加塞。3.1.4:賦予標簽、檔案3.1.5抽檢、賦予合格證抽檢內(nèi)容包括無菌檢測、細菌毒素檢測、支原體檢測、抗體檢測、細胞增殖試驗。實施例中除3.1.-1、3.1.2外，其他均為公知技術(shù)。<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>權(quán)利要求1.一種新生牛血清無菌混合工藝，其特征在于在GMP車間內(nèi)，將需要混合的密封包裝的新生牛血清在萬級條件下置于乙醇消毒池中，浸泡10～20min，然后通過無菌傳遞窗進入百級車間，在百級條件下晾干包裝袋，然后將袋中新生牛血清傾入無菌混合罐中，攪拌混勻，然后進入常規(guī)多級過濾系統(tǒng)及其他常規(guī)程序。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種新生牛血清無菌混合工藝，其特征在于所述乙醇消毒池中乙醇的體積分數(shù)為72%78%。全文摘要本發(fā)明公開了一種新生牛血清無菌混合工藝在GMP車間內(nèi)，將需要混合的密封包裝的新生牛血清在萬級條件下置于乙醇消毒池中，浸泡10～20min，以殺滅包裝袋表面的細菌、支原體等微生物，然后通過無菌傳遞窗進入百級車間，在百級條件下晾干包裝袋，然后將袋中新生牛血清傾入無菌混合罐中，攪拌混勻，然后進入常規(guī)多級過濾系統(tǒng)及其他常規(guī)程序。本發(fā)明的整套混合工藝具有全程封閉的特點，消除了操作過程中細菌、支原體、噬菌體等微生物的污染機會，適用于畜牧業(yè)疫苗藥業(yè)。本發(fā)明具有操作簡單、方便有效等優(yōu)點。文檔編號B01F15/00GK101411969SQ20081015834公開日2009年4月22日申請日期2008年10月31日優(yōu)先權(quán)日2008年10月31日發(fā)明者紅孟,岳盈盈,鵬李,李志會,溫曉燕申請人:山東省醫(yī)學科學院基礎(chǔ)醫(yī)學研究所