專利名稱：純化他克莫司的方法
專利說明純化他克莫司的方法 本發(fā)明涉及純他克莫司和用吸附樹脂純化大環(huán)內(nèi)酯他克莫司的方法。
相關(guān)申請本申請要求2004年12月22日提交的美國臨時(shí)申請系列號60/638,628和2004年12月23日提交的美國臨時(shí)申請系列號60/638,815的權(quán)益，它們的內(nèi)容通過全文引用結(jié)合到本文中。
背景技術(shù)：
大環(huán)內(nèi)酯是具有作為取代基的一個(gè)或多個(gè)脫氧糖的多元內(nèi)酯環(huán)。他克莫司(FK 506)是大環(huán)內(nèi)酯抗生素，它也是一種免疫抑制劑。據(jù)報(bào)道，他克莫司對T淋巴細(xì)胞具有選擇抑制作用，比環(huán)孢素更有效。他克莫司通常經(jīng)發(fā)酵得到。這樣得到的他克莫司往往含有可經(jīng)各種方法例如高壓液相色譜(HPLC)檢測出的幾種雜質(zhì)。不希望在藥用化合物中存在雜質(zhì)，許多有管轄權(quán)的健康當(dāng)局，例如美國的食品與藥品管理局，已經(jīng)確立涉及藥物中雜質(zhì)的可接受水平的指引。對減少任何藥物中雜質(zhì)水平的方法的需要及其商業(yè)效用是不言而喻的。美國專利4,894,366號、6,576,135號、6,881,341號和6,492,513號公開了他克莫司的純化方法。發(fā)明人(Fujisawa)的片劑以品名PROGRAF上市。分析和發(fā)現(xiàn)PROGRAF片劑含有幾種雜質(zhì)。該片劑的雜質(zhì)范圍概述于表1。
表1 因此，需要具有比以往所達(dá)到純度更高的純度的他克莫司，還需要針對他克莫司純化的更有效的方法。
發(fā)明概述在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及經(jīng)HPLC測定雜質(zhì)總含量少于約0.50％(面積)，優(yōu)選少于約0.16％(面積)的他克莫司。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及經(jīng)HPLC測定具有少于約0.06％(面積)，優(yōu)選少于約0.02％(面積)的子囊霉素的他克莫司。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及經(jīng)HPLC測定具有少于約0.07％(面積)，優(yōu)選少于約0.05％(面積)的二氫他克莫司的他克莫司。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及經(jīng)HPLC測定具有少于約0.02％(面積)的雜質(zhì)RRT1.19的他克莫司。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及經(jīng)HPLC測定具有少于約0.12％(面積)，優(yōu)選少于約0.02％(面積)的雜質(zhì)RRT0.60的他克莫司。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及經(jīng)HPLC測定具有少于約0.12％(面積)，優(yōu)選少于約0.02％(面積)的雜質(zhì)RRT0.83的他克莫司。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及經(jīng)HPLC測定具有少于約0.08％(面積)，優(yōu)選少于約0.02％(面積)的雜質(zhì)RRT1.45的他克莫司。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及經(jīng)HPLC測定具有少于約0.06％(面積)，優(yōu)選少于約0.02％(面積)的任何個(gè)別雜質(zhì)的他克莫司。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種純化他克莫司的方法。該方法包括提供他克莫司的裝填料，將他克莫司裝填料裝填至吸附樹脂床上，用含有THF和/或乙腈和水的洗脫液洗脫裝填料和床，以得到流出液，收集流出液的主要流分，從主要流分中回收他克莫司，使他克莫司結(jié)晶并進(jìn)一步使其再結(jié)晶。以上方法所得到的他克莫司優(yōu)選具有如上所述的雜質(zhì)水平。他克莫司可來自任何來源。在另一方面，本發(fā)明涉及根據(jù)上述方法所制備的他克莫司。
發(fā)明詳述
用于本文的術(shù)語“環(huán)境溫度”指約0°-約40℃，優(yōu)選約10℃-約35℃的溫度。用于本文的術(shù)語“減少的壓力”指小于約760mm Hg的壓力。用于本文的術(shù)語“抗溶劑”指在環(huán)境溫度下他克莫司于其中溶解最少的物質(zhì)，通常是液體。用于本文的術(shù)語“雜質(zhì)”指，至少依據(jù)用來測定保留時(shí)間的色譜儀的檢出限，具有不同于他克莫司的保留時(shí)間的任何化合物。例如，可經(jīng)下文所述的HPLC方法測定不同的保留時(shí)間。用于本文的術(shù)語“雜質(zhì)RRT1.19”指在HPLC色譜圖中出現(xiàn)于約1.19RRT的雜質(zhì)。這種雜質(zhì)是他克莫司的異構(gòu)體。用于本文的術(shù)語“雜質(zhì)RRT0.60”指在HPLC色譜圖中出現(xiàn)于約0.60RRT的雜質(zhì)。用于本文的術(shù)語“雜質(zhì)RRT0.83”指在HPLC色譜圖中出現(xiàn)于約0.83RRT的雜質(zhì)。用于本文的術(shù)語“雜質(zhì)RRT1.45”指在HPLC色譜圖中出現(xiàn)于約1.45RRT的雜質(zhì)。用于本文的術(shù)語子囊霉素和二氫他克莫司各指RRT0.95和RRT1.25，它們是他克莫司中的雜質(zhì)，諸如下文所述的HPLC分析中，相對于他克莫司，其保留時(shí)間為約0.95和1.25。與液體的混合物和組合有關(guān)的用于本文的術(shù)語“體積百分比”和“體積百分率”(vol-％)指如下計(jì)算的體積分?jǐn)?shù)(以物質(zhì)A為例)vol-％A＝WtA×ρA/(WtA×ρ+WtB×ρB)其中WtA和WtB各為物質(zhì)A和B的重量(克)，ρA和ρB各為物質(zhì)A和B的密度(g/ml)。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及經(jīng)HPLC測定雜質(zhì)總含量少于約0.50％(面積)，優(yōu)選少于約0.16％(面積)的他克莫司。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及經(jīng)HPLC測定具有少于約0.06％(面積)，優(yōu)選少于約0.02％(面積)的子囊霉素的他克莫司。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及經(jīng)HPLC測定具有少于約0.07％(面積)，優(yōu)選少于約0.05％(面積)二氫他克莫司的他克莫司。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及經(jīng)HPLC測定具有少于約0.02％(面積)的雜質(zhì)RRT1.19的他克莫司。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及經(jīng)HPLC測定具有少于約0.12％(面積)，優(yōu)選少于約0.02％(面積)的雜質(zhì)RRT0.60的他克莫司。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及經(jīng)HPLC測定具有少于約0.12％(面積)，優(yōu)選少于約0.02％(面積)的雜質(zhì)RRT0.83的他克莫司。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及經(jīng)HPLC測定具有少于約0.08％(面積)，優(yōu)選少于約0.02％(面積)的雜質(zhì)RRT1.45的他克莫司。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及經(jīng)HPLC測定具有少于約0.06％(面積)，優(yōu)選少于約0.02％(面積)的任何個(gè)別雜質(zhì)的他克莫司。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種純化他克莫司，即減少他克莫司中雜質(zhì)含量的方法。該方法包括提供他克莫司的裝填料，將他克莫司裝填料裝填至吸附樹脂床上，用含有THF和/或乙腈和水的洗脫液洗脫裝填料和床，從而得到流出液，收集流出液的主要流分，從主要流分中回收他克莫司，使他克莫司結(jié)晶并進(jìn)一步再結(jié)晶。以上方法中得到的他克莫司的雜質(zhì)水平優(yōu)選如上所述。他克莫司可來自任何來源。在本發(fā)明的實(shí)施中，主要通過用洗脫液洗脫裝填有他克莫司裝填料的吸附樹脂床，得到流出液，實(shí)現(xiàn)雜質(zhì)的減少和分離。用于實(shí)施本發(fā)明的吸附樹脂為本領(lǐng)域所知，并優(yōu)選為交聯(lián)非離子型苯乙烯-二乙烯苯材料，它可經(jīng)化學(xué)修飾。丙烯酸型吸附樹脂也是已知的。該吸附樹脂具有高多孔結(jié)構(gòu)，其具有可吸附并再解吸各種化學(xué)物質(zhì)的表面。吸附和解吸受環(huán)境(例如所用的溶劑)的影響。在極性溶劑(例如水)的存在下，吸附樹脂表現(xiàn)出疏水性。當(dāng)采用非極性溶劑(例如烴)時(shí)，吸附樹脂會(huì)表現(xiàn)出一定的極性。吸附樹脂一般具有大網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，其表面積至少約300m2/g。用于實(shí)施本發(fā)明的吸附樹脂包括可得自Rohm and Haas的AMBERLITEXAD樹脂；只介紹幾種XAD4、XAD7 HP、XAD16 HP、XAD761和XAD1180。也可用得自Mitsubishi的Diaion吸附樹脂；只介紹幾種HP10、HP20、HP21、HP30、HP40、HP50、SP800、SP825、SP850、SP875、SP205、SP206、SP207、HP1MG和HP2MG。AMBERLITEXAD1180是用于實(shí)施本發(fā)明的優(yōu)選吸附樹脂的實(shí)例。AMBERLITEXAD1180是大網(wǎng)狀交聯(lián)芳族聚合物。它是非離子、疏水、交聯(lián)聚合物，其吸收性源于其取得專利的大網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)(含有連續(xù)聚合物相和連續(xù)孔相)、高表面積和其表面的芳香性。表面積為500m2/g或更高?？紫堵蕿?.60ml/ml以上。PDS0205A-98年1月-1/2的產(chǎn)品數(shù)據(jù)單進(jìn)一步給出關(guān)于該樹脂的信息?？梢栽谟袡C(jī)溶劑或在與水混合的有機(jī)溶劑中的他克莫司溶液，或以他克莫司吸附到吸附樹脂裝填部分的裝填有他克莫司的裝填部分提供裝填料。當(dāng)他克莫司裝填料在裝填到吸附樹脂床之前被吸附(沉積)到吸附樹脂的裝填部分時(shí)，該吸附包括制備有機(jī)溶劑中的任選含有水的他克莫司溶液，將該溶液與一部分吸附樹脂和水合并。吸附樹脂可與用于制備床的樹脂相同，或可為不同的吸附樹脂。吸附樹脂裝填部分可為床的約33％-約50％體積。他克莫司在吸附樹脂上的吸附基本完成后，從殘余溶液中分離裝填料?？山?jīng)過濾分離。當(dāng)用循環(huán)柱法制備裝填料時(shí)，簡單地從循環(huán)系統(tǒng)中分離出柱。用來制備從中裝填或沉積裝填料的溶液的有機(jī)溶劑，優(yōu)選自四氫呋喃(THF)、丙酮、乙腈(ACN)、甲醇、乙醇、正丁醇、正丙醇、異丙醇、酯(例如乙酸乙酯)和偶極非質(zhì)子溶劑，例如二甲基甲酰胺(DMF)。有機(jī)溶劑更優(yōu)選THF、丙酮或CAN，最優(yōu)選THF和CAN。水的加入降低溶劑水的比率，從而增加他克莫司在吸附樹脂上的吸附?？稍谂溆袛嚢杵鞯娜魏伪憷娜萜?例如攪拌釜反應(yīng)器)中混合他克莫司溶液裝填料、吸附樹脂的裝填部分和水。作為實(shí)例，他克莫司溶液裝填料可為約100g/l，而水的體積可為溶液體積的至少五倍。吸附樹脂裝填部分的總體積可約等于溶液的體積。為實(shí)現(xiàn)他克莫司在吸附樹脂裝填部分上的吸收，技術(shù)人員會(huì)懂得通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化該比例。在該實(shí)施方案的后繼步驟中，將裝載有他克莫司的裝載部分并置于制備好的濕潤吸附樹脂床。該床被限制于適用容器中。該床優(yōu)選被限制于優(yōu)選具有圓形橫截面的柱中。為制備床，用水或水和溶劑(例如THF或ACN)的混合物使所需量的吸附樹脂制成漿狀。當(dāng)床直徑大時(shí)，水-溶劑組合是有利的。通過使洗脫液穿過裝填料，接著穿過以流體與裝填料連通且并置的吸附樹脂床，分離他克莫司和雜質(zhì)，借此減少他克莫司中的雜質(zhì)水平，得到純他克莫司。洗脫液任選含有其它有機(jī)溶劑，它選自在本方法的第一個(gè)步驟中用于溶解他克莫司的溶劑。在所提供的裝填料為在有機(jī)溶劑或在與水合并的有機(jī)溶劑中的他克莫司溶液時(shí)，將該溶液噴入所制備的濕潤吸附樹脂床，使柱與他克莫司溶液流接觸，將洗脫液引入流經(jīng)并環(huán)繞吸附樹脂裝填部分的溶液流中，借此，他克莫司樣品漸漸吸附到吸附樹脂的裝填部分上。在第一次洗脫后，該床可置于與第二個(gè)床相通的流體中，以便來自第一個(gè)床的流出液經(jīng)第二個(gè)床洗脫。在第一個(gè)床和第二個(gè)床洗脫后，第二個(gè)床可并優(yōu)選與第一個(gè)床分離(即破壞流體連通)，繼續(xù)單獨(dú)經(jīng)第二個(gè)床洗脫。洗脫液任選是體積百分比約33比37的THF和水的混合物?？墒占疵撘翰糠?，并用水稀釋，其后可使其通過第三個(gè)床(柱)。任選可將額外的柱連接到該系統(tǒng)，并用額外量的水稀釋，以得到更純的產(chǎn)物。優(yōu)選向最后一個(gè)柱加入額外量的水，以提高他克莫司在吸附樹脂的吸附。洗脫液包括水和有機(jī)溶劑，例如THF、CAN及其混合物。優(yōu)選的洗脫液基本上是THF和水的混合物，它具有約20％體積至約50％體積，最優(yōu)選約31％體積至約40％體積的THF。當(dāng)有機(jī)溶劑(例如甲醇、乙腈、丙酮或正丁醇)與THF/水洗脫液共用時(shí)，THF含量少于38％體積，優(yōu)選介于約4-約38％體積。另一種優(yōu)選洗脫液是乙腈和水的混合物，它具有約30％體積-約70％體積，最優(yōu)選約40％體積-約65％體積的乙腈。當(dāng)洗脫液是乙腈和水的混合物時(shí)，洗脫液還可含有相對于1份洗脫液約0.0005-約0.003份的磷酸。洗脫液以一定速度經(jīng)裝填料和與之并置的吸附樹脂床洗脫出，該速度取決于床的總橫截面積(與洗脫液流體垂直測出的)。流速(相對于橫截面積)優(yōu)選低于約25cm/小時(shí)，優(yōu)選低于約15cm/小時(shí)。較低的洗脫速度會(huì)增加時(shí)間，但會(huì)提高分離效率。對于提高的分離效率而言的優(yōu)選洗脫速度為約9cm/小時(shí)-約11cm/小時(shí)?？捎萌魏畏奖愕姆椒ūO(jiān)測洗脫出流分的含量和組成。可通過下文所述的HPLC法進(jìn)行他克莫司中的雜質(zhì)、尤其是子囊霉素和二氫他克莫司的檢測和定量。主要流分的收集尤其取決于柱裝載量和洗脫液的組成和流速，以至最終分離出的產(chǎn)物經(jīng)HPLC測定具有約0.1％(面積)或更低的子囊霉素。如需要，可通過任何常規(guī)方法(例如萃取、冷凍干燥、蒸發(fā)、加入抗溶劑)，從流出液分離出與雜質(zhì)分離從而雜質(zhì)水平減少的他克莫司。水、烷烴和環(huán)烷烴是有用的抗溶劑，其它的為本領(lǐng)域所知?？山Y(jié)合多個(gè)分離方法。例如抗溶劑與濃縮洗脫液相結(jié)合。優(yōu)選的分離方法包括于70℃以下，優(yōu)選60℃以下，優(yōu)選760mm Hg或更低壓力下，濃縮主要流分至其最初體積的約50％，借此得到濃縮的他克莫司流分。優(yōu)選在濃縮前加入每升洗脫液約1-約10ml的磷酸，以穩(wěn)定他克莫司。經(jīng)濃縮的主要流分任選于環(huán)境溫度中維持一段保留時(shí)間。當(dāng)采用保留時(shí)間時(shí)，優(yōu)選的保留時(shí)間為約1-4天。將水不混溶性溶劑(例如乙酸乙酯或二氯甲烷)和堿(例如氨溶液)加至經(jīng)濃縮他克莫司流分，分離水不混溶性溶劑相，并濃縮。加入堿直到pH為約9或更低?？赏ㄟ^使已回收產(chǎn)物經(jīng)歷幾種額外的處理例如結(jié)晶和再結(jié)晶，進(jìn)一步減少雜質(zhì)。他克莫司油狀殘余物的結(jié)晶包括在乙酸乙酯和環(huán)己烷中溶解他克莫司的油狀殘余物，加水以誘發(fā)他克莫司結(jié)晶，再回收結(jié)晶的他克莫司。在溶解步驟前，優(yōu)選用乙酸乙酯稀釋油狀殘余物并再次濃縮成油狀殘余物。優(yōu)選逐滴加入水。結(jié)晶過程中的水:他克莫司一般為0.015kg-0.3kg水對1kg他克莫司。他克莫司的再結(jié)晶包括使他克莫司溶解于乙酸乙酯，濃縮該溶液直到得到油狀殘余物，使油狀殘余物溶解于乙酸乙酯，向溶液加入環(huán)己烷，加水以誘發(fā)他克莫司結(jié)晶，再回收結(jié)晶的他克莫司。優(yōu)選可重復(fù)溶解和濃縮步驟。優(yōu)選用活性碳處理溶液，以去除顏色和纖維。如上所述般濃縮。優(yōu)選進(jìn)一步干燥所得的他克莫司。在本發(fā)明的實(shí)施中，用三個(gè)串聯(lián)柱進(jìn)行最后的色譜法步驟，這導(dǎo)致子囊霉素和二氫他克莫司顯著減少，而向溶劑混合物中經(jīng)調(diào)節(jié)地加入水和經(jīng)調(diào)節(jié)的結(jié)晶時(shí)間導(dǎo)致雜質(zhì)RRT1.19顯著減少。可用下文所述的HPLC法監(jiān)測通過本發(fā)明方法所實(shí)現(xiàn)的他克莫司的純化。在特定實(shí)施方案中，至少雜質(zhì)子囊霉素和二氫他克莫司的水平被降低，得到高純度的他克莫司。其它雜質(zhì)的水平也被降低。該方法包括下列步驟制備帶或不帶吸附樹脂(尤其是大網(wǎng)狀樹脂，例如AMBERLITEXAD1180和Diaion HP20)的裝填部分、包含他克莫司溶液的他克莫司裝填料；將裝填料裝載到可包含于容器尤其是柱中的濕潤吸附樹脂，尤其是AMBERLITEXAD1180和DiaionHP20；用洗脫液洗脫裝填部分和吸附樹脂，洗脫液是四氫呋喃(THF)和水的混合物，它具有約20％體積-約50％體積、尤其是約31％體積-約40％體積的THF，或是乙腈(ACN)和水的混合物，它具有約30％體積-約70％體積、最特別是約40％體積-約65％體積的乙腈；至少收集洗脫液的主要流分(中心流分)，它含有超過約60％、優(yōu)選介于約60％-約90％的初始他克莫司(取決于初始純度)；和任選通過例如濃縮主要流分，例如在酸的存在下減壓濃縮主要流分，使具有減少量雜質(zhì)的他克莫司從主要流分中分離；和任選回收這樣得到的產(chǎn)物。所得產(chǎn)物經(jīng)進(jìn)一步如上所述般結(jié)晶和再結(jié)晶。所得的他克莫司優(yōu)選經(jīng)HPLC測定雜質(zhì)總含量少于0.50％(面積)，最優(yōu)選少于0.16％(面積)。所得的他克莫司優(yōu)選經(jīng)HPLC測定具有少于約0.06％(面積)、最優(yōu)選少于約0.02％(面積)的子囊霉素。所得的他克莫司優(yōu)選經(jīng)HPLC測定具有少于約0.07％(面積)、最優(yōu)選少于約0.05％(面積)的二氫他克莫司。所得的他克莫司優(yōu)選經(jīng)HPLC測定具有少于約0.02％(面積)的雜質(zhì)RRT1.19。所得的他克莫司優(yōu)選經(jīng)HPLC測定具有少于約0.12％(面積)、最優(yōu)選少于約0.02％(面積)的雜質(zhì)RRT0.60。所得的他克莫司優(yōu)選經(jīng)HPLC測定具有少于約0.12％(面積)、最優(yōu)選少于約0.02％(面積)的雜質(zhì)RRT0.83。所得的他克莫司優(yōu)選經(jīng)HPLC測定具有少于約0.08％(面積)、最優(yōu)選少于約0.02％(面積)的雜質(zhì)RRT1.45。所得的他克莫司優(yōu)選經(jīng)HPLC測定具有少于約0.06％(面積)、最優(yōu)選少于約0.02％(面積)的任何個(gè)別雜質(zhì)。本發(fā)明提供由以上方法所得的他克莫司。
實(shí)施例所采用的色譜條件柱ZORBAX SB-C18 75×4.6mm；3.5μm前置柱SymmetryShield RP 183.9×20mm；5μm洗脫液A量取200ml乙腈加入到2000ml容量瓶，再用蒸餾水稀釋體積至2000ml總體積。然后，加入100μl 50％乙酸。
B加100μl50％乙酸至2000ml乙腈。
梯度表
流速2.3ml/min檢測波長210nm注入體積20μl樣品溶劑乙腈柱單元溫度60℃分析時(shí)間27min他克莫司的保留時(shí)間約14min檢出限少于0.01％(面積)定量限度少于0.02％(面積)。
雜質(zhì)子囊霉素(RRT0.95)、二氫他克莫司(RRT1.25)和雜質(zhì)RRT1.19的保留時(shí)間是相對于他克莫司計(jì)的，并相對于色譜圖中的全部峰的面積以面積％表示。
目前可得到的典型HPLC裝置的檢測和定量限度各少于0.01％(面積)和少于0.02％(面積)。
實(shí)施例
下列非限制性實(shí)施例僅僅說明本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，不應(yīng)被解釋為限制本發(fā)明，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求書限定。
實(shí)施例1
經(jīng)層析法和幾個(gè)結(jié)晶步驟純化他克莫司原料。用以上“實(shí)施例所采用的色譜條件”中所述的分析型HPLC法進(jìn)行純度分析。原料含有0.16％(面積)的子囊霉素、1.56％(面積)的雜質(zhì)RRT1.19和0.46％(面積)的二氫他克莫司。對初始物質(zhì)的分析得到95％質(zhì)量的純度。用本發(fā)明的方法純化后，終產(chǎn)物含有0.02％(面積)的子囊霉素、0.02％(面積)的雜質(zhì)RRT1.19和0.05％(面積)的二氫他克莫司。其它雜質(zhì)的含量不超過0.02％(面積)，用本發(fā)明方法所得的他克莫司的純度為99.84％(面積)。
層析步驟
AMBERLITEXAD1180吸附樹脂用于層析法。制備三個(gè)層析柱(40cm直徑，1m柱高和約100升濕潤吸附樹脂)。將3812g量的他克莫司原料(其中3623g是活性物質(zhì))溶解于30升丙酮。將33升量的樹脂AMBERLITEXAD1180加至他克莫司溶液。邊攪拌，邊緩慢加入180升量的水至他克莫司溶液:樹脂混合物。當(dāng)完成加水時(shí)，經(jīng)過濾收集吸附樹脂裝填料。將所收集的裝填料作為一層裝載至濕潤吸附樹脂床頂部?？倶渲w積約為100升。先用約700升四氫呋喃/水(34％體積THF)洗脫液洗脫柱。第一次洗脫后，將第二個(gè)柱與第一個(gè)柱相連。繼續(xù)用約1400升THE/水(34％體積THE)洗脫液洗脫。使第一個(gè)柱與第二個(gè)柱分開，繼續(xù)用約1200升THE/水(34％體積THF)洗脫液洗脫。收集各有20升體積的流分。使0.5升量的水與每一流分混合，得到經(jīng)稀釋的流分。使經(jīng)稀釋流分通過第三個(gè)柱，他克莫司吸附于第三個(gè)柱的樹脂上。用約1800升THE/水(34％體積THF)洗脫液從第三個(gè)柱上洗脫他克莫司。收集各有20升體積的流分，用上文“實(shí)施例所采用的色譜條件”中所述的分析型HPLC法分析幾個(gè)流分。再合并各適當(dāng)流分。然而，應(yīng)該注意到，在合并各流分前，可合并預(yù)試流分，例如各適當(dāng)流分中的10ml，并用HPLC分析法分析。如果對預(yù)試合并物的HPLC分析得出高于0.02％(面積)的子囊霉素濃度和/或高于0.04％(面積)的二氫他克莫司濃度，那么合并流分的數(shù)量應(yīng)當(dāng)改進(jìn)，以提供所需的高純度，因?yàn)樵诤喜⒏髁鞣制陂g得到所需的高純度會(huì)帶來高純度的終產(chǎn)物。合并的主要流分(約500升)與100ml85％磷酸混合，并減壓濃縮到約200升體積。將濃縮物冷卻至環(huán)境溫度，向濃縮物加入50升水、100升乙酸乙酯和200ml濃氨溶液。分離乙酸乙酯相(約75升)，減壓濃縮成油狀殘余物。
主要流分的結(jié)晶
用10升乙酸乙酯稀釋油狀殘余物，再次減壓濃縮成油狀殘余物。加熱溫度為約60℃，預(yù)計(jì)沸點(diǎn)為20-40℃。重復(fù)稀釋-濃縮步驟兩次。經(jīng)減壓蒸發(fā)少量的樣品，確定油狀殘余物的固體含量，得到油狀殘余物的固體含量為1329g。用乙酸乙酯將油狀殘余物稀釋至約2525g，將7970ml環(huán)己烷加至溶液。將用溫度循環(huán)器將溫度保持于25℃。向溶液中快速加入10.6ml量的水。用3小時(shí)向溶液中加入18.6ml量的水，啟動(dòng)結(jié)晶。攪拌45分鐘后，濾出晶體，用1600ml環(huán)己烷洗滌。經(jīng)洗滌晶體在70℃下干燥12小時(shí)，得到質(zhì)量為1250g的干燥晶體。
再結(jié)晶
將1250g量的他克莫司溶解于7.5升乙酸乙酯。使溶液減壓濃縮成油狀殘余物。重復(fù)稀釋-濃縮步驟兩次。將油狀殘余物溶解于3750ml乙酸乙酯，用12.5g活性碳處理。30℃下用活性碳處理30分鐘。過濾懸液，用125ml乙酸乙酯洗滌濾餅。減壓濃縮經(jīng)過濾溶液，用乙酸乙酯稀釋到2375g。經(jīng)1.5小時(shí)將6.25升量的環(huán)己烷加至他克莫司溶液。經(jīng)2小時(shí)向溶液加入27.5ml量的水。經(jīng)2小時(shí)向溶液中加入246ml量的水，啟動(dòng)結(jié)晶。冷卻懸液至8℃，8℃下經(jīng)1小時(shí)向懸液加入1.25升量的環(huán)己烷。再于8℃下攪拌懸液12小時(shí)。濾出晶體，并用環(huán)己烷懸浮兩次。用來懸浮的環(huán)己烷的體積為2.5升。40℃下，減壓干燥12小時(shí)，并在約25℃下干燥24小時(shí)。整個(gè)干燥過程中使用氮?dú)馊肟?。結(jié)晶步驟有效地降低產(chǎn)物中的雜質(zhì)RRT1.19含量。終產(chǎn)物的質(zhì)量為1180g。所得他克莫司的純度經(jīng)HPLC測定為99.84％(面積)，即總雜質(zhì)含量經(jīng)HPLC測定為0.16％(面積)。終產(chǎn)物含有經(jīng)HPLC測出的0.02％(面積)的子囊霉素、經(jīng)HPLC測出的0.05％(面積)的二氫他克莫司和經(jīng)HPLC測出的0.02％(面積)的雜質(zhì)RRT1.19、經(jīng)HPLC測出的0.02％(面積)的RRT0.83、經(jīng)HPLC測出的少于0.02％(面積)的RRT0.60、經(jīng)HPLC測出的少于0.02％(面積)的RRT1.45、經(jīng)HPLC測出的0.02％(面積)的RRT0.25和經(jīng)HPLC測出的少于0.02％(面積)的任何個(gè)別雜質(zhì)。雜質(zhì)范圍概述于表2。
表2 如果結(jié)晶后終產(chǎn)物中的雜質(zhì)RRT1.19濃度大于所希望的，可進(jìn)行一個(gè)或更多個(gè)額外的結(jié)晶步驟除去該雜質(zhì)。
權(quán)利要求
1.他克莫司，其雜質(zhì)總含量經(jīng)HPLC測定少于約0.50％(面積)。
2.權(quán)利要求1的他克莫司，經(jīng)HPLC測定其雜質(zhì)總含量少于約0.16％(面積)。
3.他克莫司，經(jīng)HPLC測定其具有少于約0.06％(面積)的子囊霉素。
4.權(quán)利要求3的他克莫司，經(jīng)HPLC測定其具有少于約0.02％(面積)的子囊霉素。
5.他克莫司，經(jīng)HPLC測定其具有少于約0.07％(面積)的二氫他克莫司。
6.權(quán)利要求5的他克莫司，經(jīng)HPLC測定其具有少于約0.05％(面積)的二氫他克莫司。
7.他克莫司，經(jīng)HPLC測定其具有少于約0.02％(面積)的雜質(zhì)RRT 1.19。
8.他克莫司，經(jīng)HPLC測定其具有少于約0.12％(面積)的雜質(zhì)RRT 0.60。
9.權(quán)利要求8的他克莫司，經(jīng)HPLC測定其具有少于約0.02％(面積)的雜質(zhì)RRT 0.60。
10.他克莫司，經(jīng)HPLC測定其具有少于約0.12％(面積)的雜質(zhì)RRT 0.83。
11.權(quán)利要求10的他克莫司，經(jīng)HPLC測定其具有少于約0.02％(面積)的雜質(zhì)RRT 0.83。
12.他克莫司，經(jīng)HPLC測定其具有少于約0.08％(面積)的雜質(zhì)RRT 1.45。
13.權(quán)利要求12的他克莫司，經(jīng)HPLC測定其具有少于約0.02％(面積)的雜質(zhì)RRT 1.45。
14.他克莫司，經(jīng)HPLC測定其具有少于約0.06％(面積)的任何個(gè)別雜質(zhì)。
15.權(quán)利要求14的他克莫司，經(jīng)HPLC測定其具有少于約0.02％(面積)的任何個(gè)別雜質(zhì)。
16.一種純化他克莫司的方法，它包括a)提供他克莫司的裝填料；b)將他克莫司裝填料裝填至吸附樹脂床上；c)用含有THF、乙腈或它們的組合和水的洗脫液洗脫裝填料和床，得到流出液；d)收集流出液的主要流分；e)從主要流分中回收他克莫司；f)使他克莫司結(jié)晶；和g)使他克莫司再結(jié)晶。
17.權(quán)利要求16的方法，其中的吸附樹脂是AMBERLITEXAD1180。
18.權(quán)利要求16的方法，其中的裝填料是在有機(jī)溶劑或在與水混合的有機(jī)溶劑中的他克莫司溶液。
19.權(quán)利要求16的方法，其中的裝填料是吸附于吸附樹脂的裝填部分上的他克莫司。
20.權(quán)利要求19的方法，其中的吸附包括制備他克莫司在有機(jī)溶劑中的溶液，將該溶液與一部分吸附樹脂和水合并，再從殘存溶液中分離所吸附的裝填料。
21.權(quán)利要求20的方法，其中的分離是經(jīng)過濾分離。
22.權(quán)利要求20的方法，其中的有機(jī)溶劑選自四氫呋喃(THF)、丙酮、乙腈(ACN)、甲醇、乙醇、正丁醇、正丙醇、異丙醇、酯(例如乙酸乙酯)和偶極非質(zhì)子溶劑，例如二甲基甲酰胺(DMF)。
23.權(quán)利要求22的方法，其中的有機(jī)溶劑是THF、丙酮或乙腈。
24.權(quán)利要求16的方法，其中的步驟c)中的洗脫液含有至少一種有機(jī)溶劑。
25.權(quán)利要求16的方法，其中的吸附樹脂床被限于柱中。
26.權(quán)利要求16的方法，其中在步驟d)之前，該床與第二個(gè)吸附樹脂床建立流體傳遞。
27.權(quán)利要求26的方法，其中使第二個(gè)床與第一個(gè)床分離。
28.權(quán)利要求26的方法，還包括將其它吸附樹脂床連接到該系統(tǒng)。
29.權(quán)利要求28的方法，其中向最后的柱加入額外量的水。
30.權(quán)利要求的方法16，其中步驟e)中的分離包括在磷酸存在下，在約70℃或更低的溫度，約760mmHg或更低壓力下，濃縮主要流分，加入水不混溶性溶劑和堿，分離水不混溶性溶劑相并濃縮它。
31.權(quán)利要求30的方法，其中水不混溶性溶劑是乙酸乙酯或二氯甲烷。
32.權(quán)利要求30的方法，其中的堿是氨溶液。
33.權(quán)利要求16的方法，其中步驟f)中的結(jié)晶包括使他克莫司的油狀殘余物溶解于乙酸乙酯和環(huán)己烷，加水以誘發(fā)他克莫司結(jié)晶，再回收結(jié)晶的他克莫司。
34.權(quán)利要求33的方法，其中在溶解步驟之前，用乙酸乙酯稀釋油狀殘余物，并再次濃縮成油狀殘余物。
35.權(quán)利要求16的方法，其中步驟g)中的再結(jié)晶包括使他克莫司溶解于乙酸乙酯，濃縮該溶液直到得到油狀殘余物，使油狀殘余物溶解于乙酸乙酯，向溶液加入環(huán)己烷，加水以誘發(fā)他克莫司結(jié)晶并回收他克莫司。
36.經(jīng)權(quán)利要求16的方法得到的他克莫司。
全文摘要
本發(fā)明提供純他克莫司和純化他克莫司的方法，其中，將他克莫司的裝填料與濕潤吸附樹脂床并列安放，裝填料和床經(jīng)含有THF、乙腈或它們的組合和水和任選至少一種其它有機(jī)溶劑的洗脫液洗脫，收集洗脫液的中心流分，并收集他克莫司，進(jìn)一步使他克莫司結(jié)晶和再結(jié)晶，直到達(dá)到雜質(zhì)水平降低。
文檔編號B01D15/26GK101087796SQ200580044188
公開日2007年12月12日 申請日期2005年12月22日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月22日
發(fā)明者V·克里, A·喬爾瓦西, I·梅爾策爾, A·西蒙 申請人:特瓦藥廠私人有限公司