專(zhuān)利名稱：水樣分離輻射式協(xié)同滅菌方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種水樣滅菌方法，尤其涉及一種適用于研究微生物凈水效應(yīng)的水樣分 離輻射式協(xié)同滅菌方法。
背景技術(shù)：
微生物在水體污染物的降解、遷移、轉(zhuǎn)換過(guò)程中扮演著重要角色，而對(duì)比試驗(yàn)方法 是開(kāi)展這方面研究的重要手段。因此，在研究過(guò)程中首先需對(duì)水樣的滅菌，使之呈無(wú)菌狀 態(tài)，然后，與單種或多種微生物存在下的水樣進(jìn)行比較，從而揭示單種或多種微生物的凈水 效應(yīng)。目前，水體滅菌方法種類(lèi)繁多，主要包括物理滅菌法、化學(xué)滅菌法和加入抗生素等。 其中，物理滅菌法主要有超聲波、輻照滅菌、脈沖電場(chǎng)和磁場(chǎng)等；化學(xué)滅菌法主要有鹵素制 劑、臭氧、高錳酸鉀、過(guò)氧化氫、甲醛、TiO2光催化滅菌、以及其它化學(xué)制劑，例如磺胺類(lèi)、呋 喃類(lèi)、季胺鹽類(lèi)、重金屬類(lèi)等；抗生素對(duì)微生物的作用原理大致可以分為以下幾種類(lèi)型干 擾細(xì)胞壁的合成；損傷胞漿膜；影響細(xì)菌細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成；影響核酸(包括DNA和RNA)的 合成。但是，在采用對(duì)比試驗(yàn)研究微生物的凈水效應(yīng)時(shí)，不僅要保證滅菌處理的水樣其滅菌 效果達(dá)到100%，而且要保證滅菌前后水樣的水質(zhì)狀況基本不變。因此，現(xiàn)行可供選擇的水 樣滅菌方法并不多。研究者常選用物理方法滅菌，滅菌過(guò)程中不添加任何物質(zhì)。即便如此， 滅菌條件對(duì)水樣中有機(jī)物的賦存狀態(tài)影響較大。這是由于水樣在滅菌過(guò)程(如高溫高壓滅 菌)中所處環(huán)境的改變，一些大分子有機(jī)物會(huì)產(chǎn)生一定程度的裂解，使得滅菌前后水體有 機(jī)污染物種類(lèi)、數(shù)量及理化性質(zhì)產(chǎn)生劇烈變化?；瘜W(xué)滅菌法和投加抗生素由于所添加的化 學(xué)物質(zhì)易改變水樣水質(zhì)狀況而不宜使用；物理滅菌方法又會(huì)因?yàn)闇缇^(guò)程改變?cè)畼又形?染物的形態(tài)而嚴(yán)重影響研究結(jié)果的可靠性。因此，現(xiàn)行的滅菌方法使采用對(duì)比試驗(yàn)方法研 究微生物的凈水效應(yīng)陷入困境。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種水樣分離輻射式協(xié)同滅菌方法，以保證水樣滅菌效果達(dá) 到100 %，且滅菌前后的水樣水質(zhì)狀況無(wú)差異，使滅菌前后水樣的水質(zhì)狀況具有可比性。本發(fā)明的水樣分離輻射式協(xié)同滅菌方法，其步驟如下1)在無(wú)菌環(huán)境中，用0. 45 μ m微孔濾膜過(guò)濾水樣；2)將過(guò)濾后的水樣移取至已滅菌的干凈透明玻璃容器中用紫外燈輻射滅菌。紫外 輻射強(qiáng)度為100-120uW/cm2，紫外輻射時(shí)間為5-70min ；3)采用平板菌落計(jì)數(shù)法檢測(cè)水樣滅菌效果，并檢測(cè)滅菌前后水樣的水質(zhì)差異。由于0.45 μ m微孔濾膜可以去除水中的大部分微生物，卻不能去除個(gè)體微小的 微生物并抑制細(xì)菌的滋生和繁殖；而紫外線可以殺死微生物并抑制微生物的繁殖，但穿透 能力差。因此，本發(fā)明首先，將用0.45μπι微孔濾膜過(guò)濾，使大量的微生物從水樣中分離， 然后，采用紫外燈輻射對(duì)過(guò)濾水樣進(jìn)一步進(jìn)行滅菌，去除遺留的個(gè)體較小微生物。為保證 滅菌效果，以上操作均在無(wú)菌環(huán)境下進(jìn)行。在過(guò)濾水樣時(shí)不能帶入新的污染物，所采用的0. 45 μ m微孔濾膜也須經(jīng)過(guò)紫外輻射滅菌。在紫外滅菌過(guò)程中，為使水樣充分暴露于紫外線下，宜將IOOml水樣放置在直徑 27mm、高75mm、壁厚Imm的小容積的透明玻璃容器中。本發(fā)明方法的有益效果是本發(fā)明方法簡(jiǎn)單、易行、有效，不僅能確保滅菌效果達(dá) 到100 %，而且滅菌前后水樣水質(zhì)狀況基本保持不變，即水樣水質(zhì)差異< 3 %，解決了目前 單一方法滅菌效果不理想或?qū)λ畼铀|(zhì)易產(chǎn)生劇烈影響的技術(shù)問(wèn)題，為研究和利用微生物 的凈水效應(yīng)提供了基礎(chǔ)。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明實(shí)例1水樣分離輻射式協(xié)同滅菌方法，其步驟如下1)取IOOml城鎮(zhèn)河流水樣，在無(wú)菌環(huán)境中，用經(jīng)過(guò)紫外輻射滅菌的0.45 μ m微孔濾 膜過(guò)濾水樣，微生物數(shù)量由原先的IO5-6CfuAil下降為IO2-3CfuAil ；2)將過(guò)濾后的水樣移取至已滅菌的干凈透明玻璃容器中，玻璃容器直徑27mm、高 75mm、壁厚1mm，放置在距30W紫外燈30cm處，用紫外燈輻射滅菌，紫外輻射強(qiáng)度為IlOuw/ cm2，紫外輻射時(shí)間為30min。以進(jìn)一步殺死遺留在水樣中的個(gè)體較小的微生物。3)采用平板菌落計(jì)數(shù)法檢測(cè)水樣滅菌效果，并檢測(cè)滅菌前后水樣的水質(zhì)差異。檢測(cè)結(jié)果表明水樣滅菌效果可達(dá)到100%，且滅菌前后水樣中的總碳、有機(jī)碳、 無(wú)機(jī)碳、可溶性總氮、可溶性總磷等的濃度差異均<3%，符合《環(huán)境水質(zhì)監(jiān)測(cè)質(zhì)量保證手 冊(cè)》中平行樣水質(zhì)檢測(cè)誤差< 10%的要求，滅菌前后的水樣水質(zhì)狀況具有可比性。實(shí)例2水樣分離輻射式協(xié)同滅菌方法，其步驟如下1)取IOOml生活排污口水樣，在無(wú)菌環(huán)境中，用經(jīng)過(guò)紫外輻射滅菌的0.45 μ m微孔 濾膜過(guò)濾水樣；使得大部分微生物與水樣分離，遺留在水樣中的主要為個(gè)體較小的微生物。2)將過(guò)濾后的水樣移取至已滅菌的干凈透明玻璃容器中，玻璃容器直徑27mm、高 75mm、壁厚1mm，放置在距30W紫外燈50cm處，用紫外燈輻射滅菌，紫外輻射強(qiáng)度為120uw/ cm2，紫外輻射時(shí)間為70min。以進(jìn)一步殺死遺留在水樣中的個(gè)體較小的微生物。3)采用平板菌落計(jì)數(shù)法檢測(cè)水樣滅菌效果，并檢測(cè)滅菌前后水樣的水質(zhì)差異。檢測(cè)結(jié)果表明水樣滅菌效果可達(dá)到100%，且滅菌前后水樣中的總碳、有機(jī)碳、 無(wú)機(jī)碳、可溶性總氮、可溶性總磷等的濃度差異均<3%，符合《環(huán)境水質(zhì)監(jiān)測(cè)質(zhì)量保證手 冊(cè)》中平行樣水質(zhì)檢測(cè)誤差< 10%的要求，滅菌前后的水樣水質(zhì)狀況具有可比性。上述具體實(shí)施方式
用來(lái)解釋說(shuō)明本發(fā)明，而不是對(duì)本發(fā)明進(jìn)行限制。在本發(fā)明的 精神和權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)，對(duì)本發(fā)明作出的任何修改和改變，都落入本發(fā)明的保護(hù)范 圍。
權(quán)利要求
水樣分離輻射式協(xié)同滅菌方法，其步驟如下1)在無(wú)菌環(huán)境中，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾水樣；2)將過(guò)濾后的水樣移取至已滅菌的干凈透明玻璃容器中用紫外燈輻射滅菌。紫外輻射強(qiáng)度為100 120uw/cm2，紫外輻射時(shí)間為5 70min；3)采用平板菌落計(jì)數(shù)法檢測(cè)水樣滅菌效果，并檢測(cè)滅菌前后水樣的水質(zhì)差異。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的水樣分離輻射式協(xié)同滅菌方法，其特征是將IOOml水樣置于 直徑27mm、高75mm、壁厚Imm的透明玻璃容器中。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)的水樣分離輻射式協(xié)同滅菌方法，其步驟如下1)在無(wú)菌環(huán)境中，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾水樣；2)將過(guò)濾后的水樣移取至已滅菌的干凈透明玻璃容器中用紫外燈輻射滅菌。紫外輻射強(qiáng)度為100-120uw/cm2，紫外輻射時(shí)間為5-70min；3)采用平板菌落計(jì)數(shù)法檢測(cè)水樣滅菌效果，并檢測(cè)滅菌前后水樣的水質(zhì)差異。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單、易行、有效，不僅能確保滅菌效果達(dá)到100％，而且滅菌前后水樣水質(zhì)狀況基本保持不變，即水樣水質(zhì)差異＜3％，解決了目前單一方法滅菌效果不理想或?qū)λ畼铀|(zhì)易產(chǎn)生劇烈影響的技術(shù)問(wèn)題，為研究和利用微生物的凈水效應(yīng)提供了基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)C02F9/08GK101948203SQ20101026995
公開(kāi)日2011年1月19日 申請(qǐng)日期2010年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月31日
發(fā)明者史一鳴, 呂軍, 陳丁江 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)