藻(曲舟藻，雙菱藻，圓篩藻)培養(yǎng)液配方相同。
[0029]步驟2三種微藻的一級培養(yǎng)
[0030]取3個洗刷干凈的3000毫升的抽濾瓶，每個瓶加入步驟I所述培養(yǎng)液1500毫升，搖勻，取生長旺盛、處于指數(shù)生長期、無污染、純種的曲舟藻，雙菱藻，圓篩藻依次分別進行接種，進行單種培養(yǎng)。接種密度為曲舟藻4萬個細胞/毫升，雙菱藻6萬個細胞/毫升，圓篩藻3.5萬個細胞/毫升，搖勻，將此蒸餾瓶放進微藻培養(yǎng)室進行培養(yǎng)。瓶口處用一橡膠塞塞住，塞子上打一孔，插入一根直徑4-5毫米的玻璃管用以充氣，玻璃管底部插入接近瓶底，上端用較柔軟的塑料或乳膠管與空壓機相連，充入混合氣體，每個瓶充氣量為2-3升/分鐘，混合氣體成分為V空氣:Ym-V_= 98%:1%:0.8%:0.2% (體積比)，連續(xù)不間斷充氣。微藻培養(yǎng)室內空調控溫，節(jié)能燈照明，共培養(yǎng)9天，前3天溫度設為21-22°C，光照強度為4500-50001ux，第 4-6 天溫度設為 24-26°C，光照強度6000_70001ux，第 7-9 天設為 27_29°C 和8000-lOOOOlux，第6天每個瓶添加新鮮培養(yǎng)液200毫升，以補充營養(yǎng)鹽的消耗，第7天每個瓶添加蒸餾水100毫升，以補充因充氣造成的水分的損耗并稀釋藻液，到第9天，曲舟藻密度可達60萬-80萬個細胞/毫升，雙菱藻密度達100萬-120萬個細胞/毫升，圓篩藻達70萬-90萬個細胞/毫升，停止培養(yǎng)，用此藻液作為下一級培養(yǎng)的藻種。
[0031]步驟3微藻的二級培養(yǎng)
[0032]優(yōu)選地，取3個玻璃金魚缸，進行消毒，采用的消毒劑為中草藥復合消毒劑0.4-0.7份。
[0033]其中中草藥復合消毒劑組成成分(重量份數(shù)比):紅背菜2-4份，魚腥草6-9份，柴胡5-8份，連錢草7-12份，白鮮皮10-15份，蒼術7-12份，地膚子8-15份，防風5-7份，薄荷3-6份，板藍根0.5-0.9份，白芷10-14份，穿心蓮5-8份，沙棘2_6份，桑黃I _3份(該步驟也可以不進行，是一種優(yōu)選措施)。
[0034]取3個玻璃金魚缸，長80厘米，寬20厘米，高60厘米，每個缸容積為96升，玻璃厚度4毫米，魚缸上面用大小兩塊玻璃蓋住，大的一塊大小為60厘米X20厘米，小的一塊為20厘米X20厘米，較大的一塊用玻璃膠黏住，不能隨意取下，小的一塊可以隨意取下，以方便洗刷玻璃缸內壁并添加培養(yǎng)液。較大的一塊上面打上2個孔，孔的直徑為5毫米，插入長短不等的2根玻璃管，玻璃管外徑5毫米，較長的一根長度為70-80厘米，用以充氣，玻璃管底部插入接近瓶底，較短的一根為排氣管，長度為8-10厘米，兩端露出玻璃即可。將玻璃缸洗刷干凈，加入步驟I所述培養(yǎng)液50升，分別用步驟2培養(yǎng)的3種藻液接種，接種量分別是5升，進行單種培養(yǎng)，充氣管上端用較柔軟的塑料或乳膠管與空壓機相連，充入混合氣體，充氣量每個玻璃缸為4-5升/分鐘，混合氣體成分為Vs^:V鐵:V廳氣=98%:1%:0.8%:0.2%(體積比)，連續(xù)不間斷充氣。微藻培養(yǎng)室內空調控溫，節(jié)能燈照明，溫度控制為24-27°C，光照強度為8000-100001ux，共培養(yǎng)6天，到第4天每個玻璃缸補充添加步驟I所述的培養(yǎng)液3升，以補充營養(yǎng)鹽的消耗，到第6天，曲舟藻密度可達80萬-90萬個細胞/毫升，雙菱藻密度達150萬-180萬個細胞/毫升，圓篩藻達120萬-150萬個細胞/毫升，停止培養(yǎng)，用此藻液作為餌料投喂魁蚶D形幼蟲。
[0035]步驟4投喂方法
[0036]魁蚶D形幼蟲置于長1.2米，寬I米，高0.6米的玻璃瓦水槽中培養(yǎng)，培養(yǎng)用水為磁化處理的煮沸冷卻海水，水深0.35米，溫度23-26°C，光照1500-25001ux，按每個魁蚶D形幼蟲每天投喂曲舟藻3000-5000個，雙菱藻8000-12000個，圓篩藻6000-9000個的量投喂，分早中晚三次投喂，每次間隔8小時，同時用空壓機不間斷充氣，充氣量為8-12升/分鐘。每隔2天換水一次，換水量為I/4-1/3。
[0037]步驟I中所述硝酸銨，硅酸鈉，氯化鎂，碳酸氫鈉，氯化鈷，硼酸，氯化鈣，磷酸氫二鉀，泛酸鈣，硫酸鈉，硫化鈉，生物素，硫酸錳，氯化鈉化學藥品純度均需化學純級別;但尿素可以是普通農用化肥；
[0038]步驟I所述麥飯石處理過的煮沸冷卻后的海水制備方法:取海水，脫脂棉過濾，加熱，煮沸2-3分鐘，冷卻，加入20-25 %麥飯石(重量比)，浸泡24-30小時，移走麥飯石，剩下的液體攪拌均勻，靜置、沉淀12-18小時，棄沉渣，取上清液即得；
[0039]步驟I所述鈦溶液配法(重量比):把0.7366份草酸鈦，溶解于100份蒸餾水中，加入5份氫氧化銨，使之成堿性，發(fā)生沉淀，用離心法將沉淀集中，用20份0.05mol/L的硫酸溶解即得；
[0040]步驟2中接種用曲舟藻，雙菱藻，圓篩藻預先進行提純(本領域常規(guī)方法，只要可實現(xiàn)提純即可，例如高氏提取法)，以確保接種時藻種為純種且處于生長旺盛的指數(shù)生長期；[0041 ]步驟4所述磁化處理的煮沸冷卻海水制備方法:取海水，脫脂棉過濾，加熱，煮沸3-5分鐘，冷卻，流經磁化水器后，即為磁化水;磁化水器磁感應強度為0.3T，流量為2-3t/h，流速為0.1-0.2m/s;
[0042]步驟I中各種營養(yǎng)鹽要按配方中提供的順序加入，以免發(fā)生化學反應；
[0043]步驟2中所用抽濾瓶、橡膠塞、玻璃管均需洗刷干凈放在70°C烘箱中烘干后使用；
[0044]步驟2所述接種過程需在無菌操作臺上進行。
[0045]最后應說明的是:以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術方案，而非對其限制;盡管參照前述實施例對本發(fā)明進行了詳細的說明，本領域的普通技術人員應當理解:其依然可以對前述實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換;而這些修改或者替換，并不使相應技術方案的本質脫離本發(fā)明實施例技術方案的精神和范圍。
【主權項】
1.一種魁蚶D形幼蟲餌料微藻的培養(yǎng)方法，其特征在于步驟如下: 步驟I三種餌料微藻培養(yǎng)液的配制 三種餌料為:曲舟藻與雙菱藻與圓篩藻； 微藻培養(yǎng)液成分，按照重量份數(shù)比如下:尿素0.2-0.3份，硝酸錢0.4-0.6份，娃酸鈉.0.002-0.004份，氯化鎂0.1-0.2份，碳酸氫鈉1.2-1.5份，氯化鈷0.02-0.04份，硼酸0.001-.0.002份，氯化鈣0.4-0.6份，磷酸氫二鉀0.2-0.5份，泛酸鈣0.3-0.5份，硫酸鈉0.8_1份，硫化鈉0.05-0.08份，生物素0.001-0.003份，硫酸錳0.04-0.08份，氯化鈉0.8-1.4份，鈦溶液.0.5-0.8份，麥飯石處理過的煮沸冷卻后海水1000份;三種餌料微藻(曲舟藻，雙菱藻，圓篩藻)培養(yǎng)液配方相同； 步驟2三種微藻的一級培養(yǎng) 取3個洗刷干凈的3000毫升的抽濾瓶，每個瓶加入步驟I所述培養(yǎng)液1500毫升，搖勻，取生長旺盛、處于指數(shù)生長期、無污染、純種的曲舟藻，雙菱藻，圓篩藻依次分別進行接種，進行單種培養(yǎng);接種密度為曲舟藻4萬個細胞/毫升，雙菱藻6萬個細胞/毫升，圓篩藻3.5萬個細胞/毫升，搖勻，將此蒸餾瓶放進微藻培養(yǎng)室進行培養(yǎng);瓶口處用一橡膠塞塞住，塞子上打一孔，插入一根直徑4-5毫米的玻璃管用以充氣，玻璃管底部插入接近瓶底，上端用較柔軟的塑料或乳膠管與空壓機相連，充入混合氣體，每個瓶充氣量為2-3升/分鐘，混合氣體成分為V鐵:v_= 98%:1%:0.8%:0.2%(體積比)，連續(xù)不間斷充氣;微藻培養(yǎng)室內空調控溫，節(jié)能燈照明，共培養(yǎng)9天，前3天溫度設為21-22°C，光照強度為4500-50001UX，第4-6天溫度設為24-26°C，光照強度6000-70001ux，第7-9天設為27-29°C和8000-.l00001uX，第6天每個瓶添加新鮮培養(yǎng)液200毫升，以補充營養(yǎng)鹽的消耗，第7天每個瓶添加蒸餾水100毫升，以補充因充氣造成的水分的損耗并稀釋藻液，到第9天，曲舟藻密度可達60萬-80萬個細胞/毫升，雙菱藻密度達100萬-120萬個細胞/毫升，圓篩藻達70萬-90萬個細胞/毫升，停止培養(yǎng)，用此藻液作為下一級培養(yǎng)的藻種； 步驟3微藻的二級培養(yǎng) 取3個玻璃金魚缸，長80厘米，寬20厘米，高60厘米，每個缸容積為96升，玻璃厚度4毫米，魚缸上面用大小兩塊玻璃蓋住，大的一塊大小為60厘米X20厘米，小的一塊為20厘米X.20厘米，較大的一塊用玻璃膠黏住，不能隨意取下，小的一塊可以隨意取下，以方便洗刷玻璃缸內壁并添加培養(yǎng)液;較大的一塊上面打上2個孔，孔的直徑為5毫米，插入長短不等的2根玻璃管，玻璃管外徑5毫米，較長的一根長度為70-80厘米，用以充氣，玻璃管底部插入接近瓶底，較短的一根為排氣管，長度為8-10厘米;將玻璃缸洗刷干凈，加入步驟I所述培養(yǎng)液.50升，分別用步驟2培養(yǎng)的3種藻液接種，接種量分別是5升，進行單種培養(yǎng)，充氣管上端用較柔軟的塑料或乳膠管與空壓機相連，充入混合氣體，充氣量每個玻璃缸為4-5升/分鐘，混合氣體成分為Ve: V鐵:V_= 98 %:1%:0.8%:0.2%(體積比)，連續(xù)不間斷充氣;微藻培養(yǎng)室內空調控溫，節(jié)能燈照明，溫度控制為24-27°C，光照強度為8000-100001ux，共培養(yǎng)6天，到第4天每個玻璃缸補充添加步驟I所述的培養(yǎng)液3升，以補充營養(yǎng)鹽的消耗，到第6天，曲舟藻密度可達80萬-90萬個細胞/毫升，雙菱藻密度達150萬-180萬個細胞/毫升，圓篩藻達120萬-150萬個細胞/毫升，停止培養(yǎng)，用此藻液作為餌料投喂魁蚶D形幼蟲； 步驟4投喂方法 魁蚶D形幼蟲置于長1.2米，寬I米，高0.6米的玻璃瓦水槽中培養(yǎng)，培養(yǎng)用水為磁化處理的煮沸冷卻海水，水深0.35米，溫度23-26°(3，光照1500-250011?，按每個魁蚶0形幼蟲每天投喂曲舟藻3000-5000個，雙菱藻8000-12000個，圓篩藻6000-9000個的量投喂，分早中晚三次投喂，每次間隔8小時，同時用空壓機不間斷充氣，充氣量為8-12升/分鐘;每隔2天換水一次，換水量為I/4-1/3。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種魁蚶D形幼蟲餌料微藻的培養(yǎng)方法，屬水產養(yǎng)殖領域。本技術核心是采用二級培養(yǎng)法培養(yǎng)魁蚶D形幼蟲餌料微藻-曲舟藻，雙菱藻，圓篩藻。第一級采用抽濾瓶充氣培養(yǎng)，二級采用玻璃魚缸培養(yǎng)。實驗結果表明，培養(yǎng)液配方科學合理，藻類生長快，產量高，不易污染，操作方便，設備簡單，用以投喂魁蚶D形幼蟲，幼蟲生長快，體質健壯，成活率提高160％。
【IPC分類】C12N1/20, C12R1/89, A23K50/80
【公開號】CN105533292
【申請?zhí)枴緾N201610127341
【發(fā)明人】王培磊, 呂慎金
【申請人】臨沂大學
【公開日】2016年5月4日
【申請日】2016年3月8日