專利名稱：一種多聚物與生物染色劑的偶合物及其制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，尤其涉及一種多聚物與生物染色劑的偶合物及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
腫瘤治療方法主要為放療、化療、靶向治療和外科手術(shù)。腫瘤治療的目的主要是獲得較高生存率，要達(dá)到此結(jié)果在手術(shù)中不僅要徹底的切除原發(fā)灶，更重要的一點(diǎn)是要防止腫瘤轉(zhuǎn)移。其中腫瘤細(xì)胞能夠通過淋巴系統(tǒng)轉(zhuǎn)移已得到眾多實(shí)驗(yàn)證明[Steven et al Carcinogenesis 2006 ;27 (9) 1729]。如果前哨淋巴結(jié)不發(fā)生轉(zhuǎn)移，其它淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移的可能性很小，即使有跳躍性轉(zhuǎn)移，其幾率也少于[Shoaib et al =Cancer 2001 ； 91(10) :2077]。為防止腫瘤的轉(zhuǎn)移，手術(shù)中經(jīng)常尋找前哨淋巴并有選擇地切除和清掃[王永勝中華乳腺病雜志2007 ;1(1) :5;李國杰等醫(yī)學(xué)信息(手術(shù)學(xué)分冊)2007 ;20 (6) 535]。在手術(shù)前做出有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的正確判斷，術(shù)中確定淋巴管和淋巴結(jié)的正確位置是實(shí)行淋巴清除的關(guān)鍵。因此解決各部位的淋巴走行非常重要。利用影像學(xué)技術(shù)觀察和獲得前哨淋巴管和淋巴結(jié)分布是解決以上問題的重要方法。淋巴造影是一種檢查淋巴結(jié)病變、有可能鑒別良性反應(yīng)性淋巴結(jié)腫大和淋巴結(jié)腫瘤的較簡單、安全和可靠的診斷方法。目前臨床使用的常用造影劑主要為小分子造影劑， 能夠清楚地觀察血管和病變組織，如CT造影劑碘帕醇、碘海醇、碘普胺、碘美普爾、碘噴托、 碘佛醇等，核磁共振造影劑釓雙胺和釓噴酸。另外經(jīng)典的活體染料如Intent藍(lán)、亞甲藍(lán)和 Evant藍(lán)亦被廣泛用于淋巴結(jié)觀察。利用小分子造影劑直接和間接淋巴造影雖然能夠使其富集于淋巴結(jié)而被檢測到[冷新等實(shí)用臨床醫(yī)藥雜志2008 ；12(4) 110 ；葉川等現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展2006 ；15(5) :372-374]，但仍不能特異性觀察淋巴管。淋巴管壁孔徑明顯大于血管壁孔徑。因此必須制備大分子造影劑和染色劑以能夠特異性地檢測淋巴管和淋巴結(jié)。近年來發(fā)展了大分子造影劑如右旋糖酐-DTPA-Gd[Desser et al =J Magn Reson Imaging 1994 ;4 :467]，但僅少數(shù)報(bào)道用于淋巴管的檢測Ran et al =Pharm Res 2010 ；27 1884]，用于手術(shù)中的輔助淋巴檢測的染料試劑更是沒有報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)中對應(yīng)用于淋巴造影使用的造影劑和染色劑存在的缺陷和不足，本發(fā)明提供了一種多聚物與生物染色劑的偶合物，也提供所述偶合物的制備方法及其在淋巴管和淋巴結(jié)顯影中的用途。本發(fā)明提供的偶合物水溶性好，能夠在體內(nèi)滲透，能特異性檢測淋巴管和淋巴結(jié)；而且顯影時間長，可提供充足的臨床手術(shù)和觀察時間；而且所述偶合物沒有明顯的腎臟毒性和肝臟毒性。為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)—種多聚物與生物染色劑的偶合物，它具有以下通式(I)所示的結(jié)構(gòu)G-X-B
(I)其中G為多聚物，X為連接基團(tuán)，B為生物染色劑及其衍生物；所述多聚物為葡聚糖類、果聚糖類、聚甘露糖醛酸類、聚古羅糖醛酸類、雜聚多糖類、單或雜聚多糖硫酸酯類、單或雜聚糖醛酸多糖類、單或雜聚糖醛酸硫酸酯類、親水性醇類高聚物、聚賴氨酸、聚谷氨酸或聚天冬氨酸；所述生物染色劑及其衍生物為甲苯胺藍(lán)、亞甲藍(lán)、依文思藍(lán)、中性紅、健那綠或亮焦油紫；所述連接基團(tuán)為含1-10個碳原子的有機(jī)基團(tuán)。對技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)所述的葡聚糖類多聚物為右旋糖酐，聚甘露糖醛酸類為聚甘露糖醛酸丙酯硫酸酯鈉鹽，聚古羅糖醛酸類為聚古羅糖醛酸丙酯硫酸酯鈉鹽，雜聚糖醛酸硫酸酯類為藻酸雙酯鈉。對技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)所述連接基團(tuán)為羰基、丙二?；?、丁二?；?、順丁烯二?；⒎炊∠┒；⑽於；?、己二?；蚨蚁┤肺逡阴；?。對技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)所述的多聚物分子量范圍為4，000-2000, 000。對技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)所述的生物染色劑及其衍生物優(yōu)選為甲苯胺藍(lán)和/或依文思藍(lán)。對技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)所述的連接基團(tuán)優(yōu)選為丁二?；?。對技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)所述偶合物水溶液中的滲透壓為20-100mmol/L，粒徑為 100-1000nm。本發(fā)明還提供了所述的多聚糖與生物染色劑偶合物的制備方法，所述方法為 以二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、六甲基磷酰三胺、二甲亞砜或甲基吡咯烷酮為溶劑，在 0-30°C條件下，在1-5摩爾比的三乙胺、吡啶、二異丙基乙基胺、N-甲基嗎啡啉、碳酸氫鈉、 氫氧化鈉或4-N，N- 二甲基氨基吡啶催化下，1摩爾比的生物染色劑與1-5摩爾比的羰基二咪唑、丙二酰氯、丁二酰氯、順丁烯二酰氯、順丁烯二酸酐、反丁烯二酰氯、丁二酸單酰氯、丁二酸酐、戊二酰氯、戊二酸單酰氯、己二酰氯、己二酸單酰氯或二乙烯三胺五乙酸酐反應(yīng)，制備生物染色劑?；铮粚⑸锶旧珓；镉枚谆柞０贰⒍谆阴０?、六甲基磷酰三胺、二甲亞砜或甲基吡咯烷酮溶解，在0. 1-1摩爾比的N，N- 二環(huán)己基碳二亞胺、N, N- 二異丙基碳二亞胺、苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鐺六氟磷酸鹽、雙(2-氧代-3-惡唑烷基) 次磷酰氯、羰基二咪唑、3_( 二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-苯并三嗪-4-酮、1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N，N-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-N，N，N，N-四甲基脲六氟磷酸鹽催化下，0. 1-1摩爾比的生物染色劑?；锱c按糖單元計(jì)1摩爾比的多聚物反應(yīng)制備多聚物與生物染色劑的偶合物。本發(fā)明還提供了所述的多聚物與生物染色劑偶合物在制備用于淋巴造影的造影劑中的應(yīng)用。對技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)所述多聚物與生物染色劑偶合物為凍干粉針劑或水針劑。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是本發(fā)明制得的右旋糖酐與甲苯胺藍(lán)偶合物、右旋糖酐與依文思藍(lán)偶合物、藻酸雙酯鈉與甲苯胺藍(lán)偶合物、藻酸雙酯鈉與依文思藍(lán)偶合物、聚賴氨酸與甲苯胺藍(lán)偶合物和聚賴氨酸與依文思藍(lán)偶合物的水溶性好，能夠在體內(nèi)滲透；利用本發(fā)明所述偶合物制備的造影劑分子量大于目前臨床使用的小分子造影劑，能特異性檢測淋巴管和淋巴結(jié)，而且顯影時間長，可提供充足的臨床手術(shù)和觀察時間； 而且所述偶合物沒有明顯的腎臟毒性和肝臟毒性。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施方式
對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。實(shí)施例1、甲苯胺藍(lán)?；锏闹苽淙〖妆桨匪{(lán)(2.00g，6. 54mmol)，丁二酸酐(0. 65g，6. 54mmol)，4_ 二甲氨基吡唆 (DMAP) (0. 80g，6. 54mmol)于IOOml兩口瓶，減壓干燥1小時。氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入干燥的二甲基甲酰胺(DMF) 50ml，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)10小時，TLC檢測反應(yīng)完全。向反應(yīng)液中加入500ml乙酸乙酯，充分?jǐn)嚢?，過濾，真空干燥得藍(lán)色固體甲苯胺藍(lán)酰化物2. 02g，收率83. 5%。實(shí)施例2、依文思藍(lán)?；锏闹苽淙∫牢乃妓{(lán)(2.00g，2. 08mmol)，丁二酸酐(0. 42g，4. 19mmol)，4-二甲氨基吡啶即DMAP(0. 52g，4. 19mmol)于IOOml兩口瓶，減壓干燥1小時。氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入干燥的DMF 50ml，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)10小時，TLC檢測反應(yīng)完全。向反應(yīng)液中加入500ml乙酸乙酯，充分?jǐn)嚢?，過濾，真空干燥得藍(lán)色固體依文思藍(lán)?；?.8g，收率80. 1%。除甲苯胺藍(lán)和依文思藍(lán)外，所述生物染色劑還可以為亞甲藍(lán)、中性紅、健那綠或亮焦油紫等其它用于細(xì)胞或組織染色的染料。實(shí)施例3、右旋糖酐與甲苯胺藍(lán)偶合物的制備取制得的所述甲苯胺藍(lán)酰化物(2.0(^，4.92讓01)，右旋糖苷40(2.4(^，按葡萄糖單元計(jì) 14. 81mmol)，EDC · HCl (1. 42g, 7. 39mmol)，HOBt (1. 00g, 7. 39mmol)，4- 二甲氨基吡啶(1.20g，9. 86mmol)于IOOml三口瓶中，真空干燥0. 5小時。冰浴下加二甲基亞砜 (DMSO) 50ml，超聲溶解，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)12小時，TLC檢測，反應(yīng)完全。向反應(yīng)液中加500ml乙酸乙酯，攪拌0. 5小時，過濾，真空干燥得右旋糖酐與甲苯胺藍(lán)偶合物3. 32g產(chǎn)率為75%。實(shí)施例4、右旋糖酐與依文思藍(lán)偶合物的制備取羰基二咪唑(CDI) (0. 54g, 3. 35mmol)溶于30ml DMSO中，加入依文思藍(lán)酰化物 (1. 80g, 1. 67mmol)，反應(yīng)液在室溫下攪拌過夜。然后加入右旋糖酐(1. 63g，10. 07mmol)，氮?dú)獗Ｗo(hù)下80°C反應(yīng)M小時。TLC檢測，反應(yīng)完全，將反應(yīng)液倒入200ml的乙酸乙酯中，充分?jǐn)嚢?，過濾。濾餅用乙酸乙酯洗三遍。真空干燥得右旋糖酐與依文思藍(lán)偶合物2. 12g，產(chǎn)率為 81%。本發(fā)明制得的右旋糖酐與甲苯胺藍(lán)的偶合物和右旋糖酐與依文思藍(lán)的偶合物有明顯的水溶性，水溶液中的滲透壓介于20-100mmol/L，粒徑介于100_1000nm。實(shí)施例5、藻酸雙酯鈉與甲苯胺藍(lán)偶合物的制備取CDI(0. 79g，4. 91mmol)溶于 50ml DMSO 中，加入甲苯胺藍(lán)?；?2. 05g， 4. 93mmol)，反應(yīng)液在室溫下攪拌過夜。然后加入藻酸雙酯鈉(12. 51g，14. 79mmol)。氮?dú)獗Ｗo(hù)下80°C反應(yīng)M小時。TLC檢測，反應(yīng)完全，將反應(yīng)液倒入500ml的乙酸乙酯，充分?jǐn)嚢瑁?過濾。濾餅用乙酸乙酯洗三遍。真空干燥得藻酸雙酯鈉與甲苯胺藍(lán)偶合物11. 64g，產(chǎn)率為 80%。
實(shí)施例6、藻酸雙酯鈉與依文思藍(lán)偶合物的制備取CDI (0. 54g, 3. 36mmol)溶于 50ml DMSO 中，加入依文思藍(lán)酰化物(1. 80g， 1.68mm0l)，反應(yīng)液在室溫下攪拌過夜。然后加入藻酸雙酯鈉(12. 51g，14. 79mmol)。氮?dú)獗Ｗo(hù)下80°C反應(yīng)M小時。TLC檢測，反應(yīng)完全，將反應(yīng)液倒入200ml的乙酸乙酯，充分?jǐn)嚢瑁^濾，濾餅用乙酸乙酯洗三遍。真空干燥得藻酸雙酯鈉與依文思藍(lán)偶合物4. 73g，產(chǎn)率為 78%。實(shí)施例7、聚賴氨酸與甲苯胺藍(lán)偶合物的的制備取CDI(0. 79g，4. 91mmol)溶于 20ml DMSO 中，加入甲苯胺藍(lán)?；?2. 05g， 4. 93mmol)，反應(yīng)液在室溫下攪拌過夜。然后加入聚賴氨酸(1. 91g，14. 67mmol)。氮?dú)獗Ｗo(hù)下80°C反應(yīng)M小時。TLC檢測，反應(yīng)完全，將反應(yīng)液倒入500ml的乙酸乙酯，充分?jǐn)嚢?，過
濾。濾餅用乙酸乙酯洗三遍。真空干燥得聚賴氨酸與甲苯胺藍(lán)偶合物3. 09g，產(chǎn)率為78%。實(shí)施例8、聚賴氨酸與依文思藍(lán)偶合物的制備取CDI (0. 54g, 3. 36mmol)溶于 IOml DMSO,加入依文思藍(lán)?；?1. 80g， 1. 68mmol)，反應(yīng)液在室溫下攪拌過夜。然后加入聚賴氨酸(1. 91g，14. 67mmol)。氮?dú)獗Ｗo(hù)下80°C反應(yīng)M小時。TLC檢測，反應(yīng)完全，將反應(yīng)液倒入200ml的乙酸乙酯，充分?jǐn)嚢瑁^
濾，濾餅用乙酸乙酯洗三遍。真空干燥得聚賴氨酸與依文思藍(lán)偶合物4. 73g，產(chǎn)率為78%。實(shí)施例9、右旋糖酐與甲苯胺藍(lán)的偶合物間接顯影觀察取健康的新西蘭大白兔30只，體重為2. 4 3. 6kgo隨機(jī)分成三組，每組10只。 用氯胺酮(80mg/kg、l. 6ml)及地西泮(5mg/kg、lml)肌肉注射麻醉家兔。將家兔固定在兔手術(shù)臺上，行雙側(cè)頸部備皮，術(shù)區(qū)用2. 5%碘伏消毒，用1.0%的利多卡因局部皮下注射麻醉。 于頸部正中做縱行切口長約10cm，于頸淺筋膜處分離皮下組織，充分顯露出頸內(nèi)動靜脈及雙側(cè)頸部、頌下和頦下淋巴結(jié)，操作中保護(hù)頸中及頸深筋膜。前兩組分別行雙側(cè)舌背近舌緣粘膜下注射1.0% (0. 14mmol/L)的右旋糖酐與甲苯胺藍(lán)偶合物和1. 0% (32. 6mmol/L)的甲苯胺藍(lán)各0. 1ml，注射區(qū)均不做按摩。以染色淋巴管到達(dá)的第1站淋巴結(jié)為前哨淋巴結(jié) (sentinel lymph node, SLN)，觀察頸部淋巴管及SLN的染色時間和褪色時間，并測量各染料在舌體組織的擴(kuò)散范圍。各組動物于SLN染色后，分別在著色10分鐘(均在染色淋巴管褪色之前)及1小時各切取2只家兔雙側(cè)頸部SLN，并固定于10. 0%甲醛中行組織病理學(xué)檢查；其余動物縫合切口，分別于1天、2天后觀察SLN的染色情況，之后飼養(yǎng)4周后處死切取雙側(cè)頸部淋巴結(jié)、心臟、肺臟、肝臟及腎臟送病理學(xué)檢查。各組動物在實(shí)驗(yàn)前和飼養(yǎng)4周后，各抽取靜脈血檢測血常規(guī)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮和肌酐。第三組均暫時阻斷雙側(cè)頸內(nèi)動脈，用留置針行頸總動脈分別注射右旋糖酐與甲苯胺藍(lán)的偶合物和甲苯胺藍(lán)溶液各lml，觀察舌體組織染色過程及雙側(cè)頸部淋巴結(jié)染色情況，并各切取舌體、淋巴結(jié)、肌肉組織、頌下腺行病理組織學(xué)檢查。兩種染料均能通過間接淋巴染色法使淋巴管及淋巴結(jié)染色。行舌體粘膜下注射后，右旋糖酐與甲苯胺藍(lán)的偶合物組到達(dá)SLN所需的時間為 (21. 667士0. 193)秒，甲苯胺藍(lán)組為(3. 219士0. 335)秒，記錄數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析可知，右旋糖酐與甲苯胺藍(lán)的偶合物組與甲苯胺藍(lán)組比較有明顯延長，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P = O. 000。 右旋糖酐與甲苯胺藍(lán)的偶合物組淋巴管從染色到明顯褪色的時間為(19. 700士 1.337)分鐘，甲苯胺藍(lán)組為(14. 300士0.949)分鐘，記錄數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析可知兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P = O. 000。右旋糖酐與甲苯胺藍(lán)的偶合物組注射后5分鐘在舌體擴(kuò)散的范圍為 (10. 500士 1.080)mm，而甲苯胺藍(lán)組為(20. 000士 1. 054)mm，5分鐘之后兩者范圍無明顯擴(kuò)大，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，F(xiàn) = O. 15, P = 0. 000。2天后甲苯胺藍(lán)組淋巴結(jié)已完全褪色， 而右旋糖酐與甲苯胺藍(lán)的偶合物組4周后仍明顯染色。實(shí)施例10、偶合物對實(shí)驗(yàn)動物的毒副實(shí)驗(yàn)觀察期間各組實(shí)驗(yàn)動物均無明顯毒副反應(yīng)發(fā)生，各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室檢查實(shí)驗(yàn)前后數(shù)據(jù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P > 0. 05，送檢的內(nèi)臟器官組織學(xué)檢查也未見明顯的病理學(xué)改變(表1)。 對比注射部位，甲苯胺藍(lán)組深染組織在4周后已明顯褪色，右旋糖酐與甲苯胺藍(lán)的偶合物組注射部位仍明顯染色，但染料在粘膜下組織的擴(kuò)散直徑4周< 2mm。差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義， P > 0. 05，送檢的內(nèi)臟器官組織學(xué)檢查也未見明顯的病理學(xué)改變。對比注射部位，甲苯胺藍(lán)組深染組織在4周后已明顯褪色，右旋糖酐與甲苯胺藍(lán)的偶合物組注射部位仍明顯染色， 但染料在粘膜下組織的擴(kuò)散直徑4周< 2mm。表1 右旋糖酐與甲苯胺藍(lán)的偶合物的主要的實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較
權(quán)利要求
1.一種多聚物與生物染色劑的偶合物，其特征在于它具有以下通式(I)所示的結(jié)構(gòu)G-X-B(I)其中G為多聚物，X為連接基團(tuán)，B為生物染色劑及其衍生物；所述多聚物為葡聚糖類、果聚糖類、聚甘露糖醛酸類、聚古羅糖醛酸類、雜聚多糖類、單或雜聚多糖硫酸酯類、單或雜聚糖醛酸多糖類、單或雜聚糖醛酸硫酸酯類、親水性醇類高聚物、聚賴氨酸、聚谷氨酸或聚天冬氨酸；所述生物染色劑及其衍生物為甲苯胺藍(lán)、亞甲藍(lán)、依文思藍(lán)、中性紅、健那綠或亮焦油紫；所述連接基團(tuán)為含1-10個碳原子的有機(jī)基團(tuán)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種多聚物與生物染色劑的偶合物，其特征在于所述的葡聚糖類多聚物為右旋糖酐，聚甘露糖醛酸類為聚甘露糖醛酸丙酯硫酸酯鈉鹽，聚古羅糖醛酸類為聚古羅糖醛酸丙酯硫酸酯鈉鹽，雜聚糖醛酸硫酸酯類為藻酸雙酯鈉。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種多聚物與生物染色劑的偶合物，其特征在于所述連接基團(tuán)為羰基、丙二?；⒍《；?、順丁烯二?；?、反丁烯二?；⑽於；?、己二?；蚨蚁┤肺逡阴；?。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種多聚物與生物染色劑的偶合物，其特征在于所述的多聚物分子量范圍為4，000-2000, 000。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種多聚物與生物染色劑的偶合物，其特征在于所述的生物染色劑及其衍生物優(yōu)選為甲苯胺藍(lán)和/或依文思藍(lán)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種多聚物與生物染色劑的偶合物，其特征在于所述的連接基團(tuán)優(yōu)選為丁二?；?br> 7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種多聚物與生物染色劑的偶合物，其特征在于所述偶合物水溶液中的滲透壓為20-100 mmol/L，粒徑為100-1000 nm。
8.、一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的多聚糖與生物染色劑偶合物的制備方法，其特征在于所述方法為以二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、六甲基磷酰三胺、二甲亞砜或甲基吡咯烷酮為溶劑，在0-30°C條件下，在1-5摩爾比的三乙胺、吡啶、二異丙基乙基胺、N-甲基嗎啡啉、 碳酸氫鈉、氫氧化鈉或4-N，N-二甲基氨基吡啶催化下，1摩爾比的生物染色劑與1-5摩爾比的羰基二咪唑、丙二酰氯、丁二酰氯、順丁烯二酰氯、順丁烯二酸酐、反丁烯二酰氯、丁二酸單酰氯、丁二酸酐、戊二酰氯、戊二酸單酰氯、己二酰氯、己二酸單酰氯或二乙烯三胺五乙酸酐反應(yīng)，制備生物染色劑?；?；將生物染色劑?；镉枚谆柞０?、二甲基乙酰胺、六甲基磷酰三胺、二甲亞砜或甲基吡咯烷酮溶解，在0. 1- 1摩爾比的N，N- 二環(huán)己基碳二亞胺、N，N- 二異丙基碳二亞胺、苯并三氮唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鐺六氟磷酸鹽、雙(2-氧代-3-惡唑烷基)次磷酰氯、羰基二咪唑、3_( 二乙氧基磷酰氧基)_1，2，3-苯并三嗪-4-酮、1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N, N, N-四甲基脲六氟磷酸酯、苯并三氮唑-N，N, N, N-四甲基脲六氟磷酸鹽催化下，0. 1- 1摩爾比的生物染色劑?；锱c按糖單元計(jì)1摩爾比的多聚物反應(yīng)制備多聚物與生物染色劑的偶合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多聚物與生物染色劑偶合物在制備用于淋巴造影的造影劑中的應(yīng)用。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的多聚物與生物染色劑偶合物在制備用于淋巴造影的造影劑中的應(yīng)用，其特征在于所述多聚物與生物染色劑偶合物為凍干粉針劑或水針劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種多聚物與生物染色劑的偶合物及其制備方法和用途，偶合物具有G-X-B結(jié)構(gòu)，多聚物G為葡聚糖類、果聚糖類、聚甘露糖醛酸類、聚古羅糖醛酸類、雜聚多糖類、單或雜聚多糖硫酸酯類、單或雜聚糖醛酸多糖類、單或雜聚糖醛酸硫酸酯類、親水性醇類高聚物、聚賴氨酸、聚谷氨酸或聚天冬氨酸；連接基團(tuán)X為含1-10個碳原子的有機(jī)基團(tuán)，生物染色劑及其衍生物B為甲苯胺藍(lán)、亞甲藍(lán)、依文思藍(lán)、中性紅、健那綠或亮焦油紫。本發(fā)明所述偶合物能通過間接淋巴染色法使健康的新西蘭大白兔雙側(cè)頸部、頜下和頦下淋巴管及淋巴結(jié)染色，且不在舌體擴(kuò)散，且各組實(shí)驗(yàn)動物均無明顯毒副反應(yīng)發(fā)生，內(nèi)臟器官組織學(xué)檢查也未見明顯的病理學(xué)改變。
文檔編號C09B69/10GK102504603SQ201110320899
公開日2012年6月20日 申請日期2011年10月20日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月20日
發(fā)明者萬升標(biāo), 劉鳳桐, 尚偉, 張曉瑜, 李學(xué)敏, 江濤 申請人:中國海洋大學(xué)