專利名稱：：一種菊花連作土壤專用調節(jié)劑的生產方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及農業(yè)土壤領域，具體涉及一種利用菊花內生菌或者益生菌生產菊花專用土壤調節(jié)劑的方法。
背景技術：
：菊花是我國傳統(tǒng)藥用植物，第二大飲用植物。我國許多地區(qū)長期種植菊花等藥材，形成特色優(yōu)勢產業(yè)。例如江蘇省射陽縣洋馬鎮(zhèn)有悠久的中藥材種植歷史，早在上世紀60年代就開始引種菊花等中藥材,種植面積也不斷擴大，贏得了廣闊的市場和可觀的經濟效益。但是，由于洋馬基地的土壤為灘涂發(fā)展而成，土壤的pH值和含鹽量較高，加之長期在同一地區(qū)種植菊花，導致土壤基礎肥力較低,養(yǎng)分不平衡，又缺乏有效的土壤管理和合理的施肥技術，近年來，連作障礙日趨嚴重，即表現(xiàn)出生長勢下降、病蟲害加劇、死苗而造成產量和品質的下降，已成為當今菊花商品化生產中的一個亟待解決的問題，也已引起業(yè)內人士的關注。自21世紀以來，研究者已開始提出菊花土肥水管理，菊花喜排水良好的沙質壤土，忌連作，連作有利于褐斑病的發(fā)生，經過露地23年的連作之后菊花'高壓太子'即表現(xiàn)出生長勢下降、死苗現(xiàn)象。但是至目前尚未發(fā)現(xiàn)用于解決菊花連作障礙的專利和論文。有學者針對菊花養(yǎng)分不均衡研究探討了菊花肥料，如白菊專用肥、田力寶微生物肥(TLB),基本上能供給菊花營養(yǎng)成分，促進生長，一定程度上能提高產量。但是這些肥料主要由一些大量無機化合物和微量元素等配制而成，肥效不持久，而且使用量較大，成本高。一些學者也對菊花病蟲害有較深入的研究，而普遍認為防治病蟲害的措施冬季清除病殘體及落葉，并集中燒毀；注意田間通風透光，避免栽植過密；用15%粉銹寧、62.25%仙生、70%甲基托布津、50%多菌靈或0.2—0.3度石硫合劑等噴霧，或病穴及其鄰近植株淋灌此類化學藥劑；避免連作或輪作；氮磷鉀肥等合理配制。分析發(fā)現(xiàn)，上述防治措施不能徹底根除病害，不宜操作，造成環(huán)境污染等。世界發(fā)達國家早在20世紀70年代就提出了作物栽培的土壤障礙問題。到90年代，防治技術有了一定發(fā)展。文獻報道，作物連作障礙的克服措施包括無土栽培，農藥防治，實行輪作，加強田間管理，選擇一些抗逆性較強的作物品種等。有報道辣椒連作障礙防治措施為輪作，增施有機肥，土壤深耕；桔梗連作防治采用輪作、藥劑防治(25%敵百蟲粉液)；報道提出改善中藥材連作障礙可以采用合理的輪作、套種、合理施肥、秸稈還田；也有研究對退化土壤的微生態(tài)修復，如用"溴滅泰"土壤滅菌,土壤改良菌劑使土壤復菌，施有益微生態(tài)制劑，對克服人參、三七連作障礙有較好的效果。目前還沒有針對解決菊花連作障礙的土壤調節(jié)劑和肥料應用研究的相關報道。國內外對新型肥料的研究均十分重視，有報道利用殼聚糖在農業(yè)上作為種子處理劑、植物生長調節(jié)劑、植物病害誘抗劑、肥料和土壤改良劑等；新型肥料如微量元素肥料，微生物肥料(固氮菌類，磷細菌等活性微生物)，調節(jié)劑類，添加劑類，氨基酸，腐植酸都有一定效果；有報道活性酶土壤結構調節(jié)劑(AG-Zyme)對棉花產量及土壤結構和土壤養(yǎng)分的改良效果較好。施用有機肥增效劑和活性酶土壤結構調節(jié)劑BZ制劑使水稻的群體增大，分蘗較多，成穗率高明顯改善稻米品質。田力寶微生物肥(TLB)可使觀賞菊花的葉片增大。生物有機肥的研究表明其具有增進土壤肥力、協(xié)助農作物吸收營養(yǎng)、改善農產品品質等方面的作用。上述肥料有的是針對一般農作物生產，但是主要是由無機營養(yǎng)，大量元素，微量元素組成，少部分含有微生物，但是為細菌型等傳統(tǒng)低效微生物，不具有專一性，且普遍存在生產工藝復雜，成本較高的缺點，推廣困難，且沒有針對藥用菊花的連作障礙的專門制劑。近年來，國內外對內生菌的研究報道很多，植物內生真菌的防病機理主要表現(xiàn)在通過產生抗生素類，水解酶類，植物生長調節(jié)劑和生物堿類物質,與病原菌競爭營養(yǎng)物質，增強宿主植物的抵抗力以及誘導植物產生系統(tǒng)抗性等途徑抑制病原菌生長，國內外都有研究植物內生菌在防治病害、促進植物生長發(fā)育以及固氮方面的作用，如吳藹民2000年報道了內生菌73a和Ala對棉花黃萎病的田間防效及增產作用，袁軍等2002年報道了防治馬鈴薯環(huán)腐病有益內生菌118菌株定殖、促生、拮抗3種作用兼?zhèn)洹埩⑿碌?005年報道了番茄內生真菌對多種植物病原菌的抑制效果。內生真菌^cre歷朋i"http:///sp.接種在宿主植物布頓大麥草(欣)rc/ez孤Z^c^3/7ii)上，能有效提高布頓大麥草的總生物量、地上部分干物質產量、根干重，以及每株植物的分蘗數(shù)；內生真菌Afeot7P力06^朋^7j7能明顯促進黑麥草(ZW&歷pere/we)的生長。國內外研究均表明內生菌對防治植物病害和促進作物生長具有潛在的應用和開發(fā)價值，但是目前尚無從內生菌或者益生菌角度發(fā)明一種菊花連作土壤專用調節(jié)劑方法來解決菊花種植上出現(xiàn)的連作障礙。本發(fā)明為農業(yè)土壤的范疇，是利用促生長的內生真菌或益生菌，內生真菌、益生菌與植物共生，可以長期發(fā)揮作用，顯然的具有上述功能，經發(fā)酵生產再加入一定比例的營養(yǎng)元素，生產土壤調節(jié)劑或菌肥，來解決菊花種植中的連作障礙問題調節(jié)土壤環(huán)境，防治病蟲害，促進生長，提高產量、穩(wěn)定品質，此方法是十分可行的，但是目前國內外尚無文獻報道。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的是提供一種利用藥用植物內生真菌或者益生菌生產菊花專用土壤調節(jié)劑的方法。利用具促生長、產次生代謝物、抗病蟲害、改善土壤環(huán)境的菊花內生菌或者益生菌生產菌體和發(fā)酵液制作土壤調節(jié)劑，解決菊花連作障礙中存在的問題。本發(fā)明所說的利用藥用植物內生真菌生產土壤調節(jié)劑和微生物有機肥的方法是將從菊花內生菌培養(yǎng)活化，發(fā)酵，收集，混合，稀釋，再按一定比例加入植物必須營養(yǎng)元素氮磷鉀鈣鎂等，制成液體調節(jié)劑；或進一步按一定方法與農林廢棄物，酒糟，菜籽餅，動物糞便等以及加入少量營養(yǎng)元素共同發(fā)酵制成具有特定土壤調節(jié)作用的固體土壤調節(jié)劑。上述方法中所說的土壤調節(jié)劑是菌體發(fā)酵液稀釋加入營養(yǎng)元素的具有肥效和調節(jié)土壤功能的混合物或者固體發(fā)酵物。本發(fā)明的一個具體的技術方案是斜面活化有益內生菌球毛殼菌(C力朋t^/"/7/^Ma^/z)或葡萄孢屬(So^y"ssp.)真菌，發(fā)酵培養(yǎng)采用菌株先分別制備種子液，再按10%的接種量，用特定的改進的培養(yǎng)基，分別進行發(fā)酵，28°C，150rpm發(fā)酵7天，分別收集發(fā)酵產物，再按一定比例混合，加入少量營養(yǎng)元素制備成土壤專用調節(jié)劑。本發(fā)明的另一個技術方案是斜面活化有益內生菌如球毛殼菌(Wo^s鵬)或葡萄孢屬(化^y"ssp.)真菌，發(fā)酵培養(yǎng)采用菌株先分別制備種子液，再按10%的接種量，特定的改進的培養(yǎng)基，分別進行發(fā)酵，28°C，150rpm發(fā)酵7天，獲得包含菌體的發(fā)酵液，兩種再1:1比例混合，獲得接種劑，進一步把發(fā)酵菌劑加入含有少量菊花秸稈(10%)、農林廢棄物(40%),動物糞便(50%)固體培養(yǎng)基中，按一定加水40%，pH5.5—6.5，在大型發(fā)酵池內堆積發(fā)酵，翻堆機定期攪現(xiàn)有菊花內生菌、益生菌均能用于本發(fā)明的方法，但本發(fā)明推薦使用球毛殼菌(C力ae^2/ffyi/ffl《Jo6as"歷)，葡萄包(Soif/ytissp.)真菌，J以莖,a霉(尸/omo/w/sspp.)，角擔子菌(CeratMasjW"歷We陀/WJ^)等藥用植物內的特有菌屬。所說的球毛殼菌(6T朋^fii娜《A^os"腿)，葡萄孢(&^y^'ssp.)真菌，具有促生長和抗逆境能力，擬莖點霉(P/zomo/w!'ssp.)有顯著抑制病原菌的作用，角擔子菌(Ceraz^few'c^"ere脂'i)有殺蟲作用。表l部分內生菌目錄<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>表2部分益生菌目錄<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>所說的營養(yǎng)元素及無機營養(yǎng)為土壤調節(jié)劑和生物有機肥的常規(guī)添加成分，如植物必須營養(yǎng)元素氮磷鉀鈣鎂等。其添加量在本發(fā)明中均按l/2常規(guī)添加量即可，因為微生物作用下的有機質氧化、分解、礦質化和腐殖質過程，釋放出一定量氮、磷、鉀和微量元素等有效養(yǎng)分。本發(fā)明的方法采用藥用植物內生真菌(如球毛殼菌，葡萄孢屬真菌)，益生菌(擬莖點霉、角擔子菌)生產土壤調節(jié)劑。由于植物的內生真菌具有防治植物病害、促進作物生長、調節(jié)土壤微生態(tài)環(huán)境等作用，是植物尤其連作區(qū)的菊花所需要的土壤調節(jié)劑和生物肥料重要成分，內生菌通過產生抗生素類,水解酶類，植物生長調節(jié)劑和生物堿類物質來改善土壤微生態(tài)系統(tǒng)，降低植物病蟲害的發(fā)生，提高土壤生物肥力。毛殼菌是一種腐生真菌,能產生較多的纖維素分解酶,有比較好的生防效果，試驗表明，其通過競爭和拮抗作用對立枯絲核菌、核盤菌、雪腐鐮刀菌的抑制作用。本發(fā)明的方法采用具有促生長、抗逆境及抗病蟲作用的內生菌經發(fā)酵生產土壤專用調節(jié)劑和微生物有機肥，不受環(huán)境、季節(jié)和氣候的限制，生產周期短，生產工藝簡單，生產時間和產量易于控制，幾種內生菌發(fā)酵后，發(fā)酵液和菌絲體作用均很明顯，采用浸泡植物根或澆灌的方法使其作用于植物，使用方法簡單，易操作，且均能收到良好效果。本發(fā)明，生產方面，原材料內生菌為本實驗室資源，且生產工藝簡單，使用方面，易于貯存，且添加于植物根或土壤，易操作，用量較少。本發(fā)明具有具有改善土壤微生態(tài)系統(tǒng)，降低植物病蟲害的發(fā)生的優(yōu)點。另一方面，菌劑在加入畜禽糞便等廢棄物中進行生物發(fā)酵，形成一種能量流、物質流的交換、互動、循環(huán)過程。在有氧條件下，內生菌類迅速繁殖，能強烈分解其中的有機物質。并利用產生的熱量和微生物，使有機質氧化、分解產生生物熱形成能量交換、運轉，能殺死病菌、蟲卵，并產生礦質化和腐殖質過程，釋放出N、P、K和微量元素等有效養(yǎng)分,無需加入過多的植物營養(yǎng)成分，降低成本。第三方面，真菌發(fā)酵后，制成土壤調節(jié)劑，蘸根法，浸泡法，直接澆灌，或直接穴施普施，使菌以較高的定植率定植于植物體內和土壤中，抑制土壤病原菌，改善土壤微生物區(qū)系，和植物形成共生關系，促進生長，抵抗逆境，并隨凋落物等在植物和土壤中遷移定植，一段長的時期仍然存在和發(fā)揮作用，因此內生菌或益生菌制成的土壤調節(jié)劑作用持久，短期內不需要重復施肥，且具有無化學污染獨特優(yōu)勢。另外，菌劑在加入畜禽糞便等廢棄物中進行生物發(fā)酵，形成一種能量流、物質流的交換、互動、循環(huán)過程。在有氧條件下，菌種迅速繁殖，能強烈分解其中的有機物質。并利用產生的熱量和微生物，使有機質氧化、分解產生生物熱形成能量交換、運轉，能殺死病菌、蟲卵，并產生礦質化和腐殖質過程，釋放出N、P、K和微量元素等有效養(yǎng)分,無需加入過多的植物營養(yǎng)成分，降低成本。因此，本發(fā)明和現(xiàn)有技術相比，有效的降低了菊花生產上的肥料，農藥的成本，可以節(jié)省人力物力，且性質穩(wěn)定，作用效果顯著，是克服菊花連作障礙的有效研究。圖l是本發(fā)明的工藝流程圖具體實施例方式在本發(fā)明中所使用的術語，除非有另外說明，一般具有本領域普通技術人員通常理解的含義。下面結合具體的實施例，并按照數(shù)據(jù)進一步詳細地描述本發(fā)明。應理解這些實施例只是為了舉例說明本發(fā)明，而非以任何形式限制本發(fā)明的范圍。在以下的實施例中，未詳細描述的各種過程和方法是本領域中公知的常規(guī)方法。所用試劑的來源，商品名以及有必要列出其組成成分者，均在首次出現(xiàn)時標明，其后所用相同試劑如無特殊說明，均于首次標明的內容相同。實施例l制備過程如圖l所示(1)分別斜面活化內生菌球毛殼菌(6yaeto//鵬Wo6os鵬)ACCC30351、葡萄孢(S"2T"ssp.)Cl，發(fā)酵培養(yǎng)采用菌株先分別制備種子液(培養(yǎng)基成分(每L):15g菊花葉片浸汁，200g土豆煮汁，20g葡萄糖，20g瓊脂)，再按10%的接種量分別進行發(fā)酵(PDA:200g土豆煮汁/L，20g葡萄糖/L)，28°C，150rpra發(fā)酵7天。(2)分別收獲發(fā)酵產物，按l:l比例混合，稀釋，發(fā)酵產物與水為1(L):50(L)體積。(3)然后加入少量，約l/2植物必須營養(yǎng)元素氮磷鉀鈣鎂鐵，濃度約為N:0.41,P:0.04,K:0.51，Ca:0.ll，Mg:0.09，F(xiàn)e:0.07(單位g/Kg)，最終制備成土壤專用調節(jié)劑。實施例2制備過程如圖l所示球毛殼菌(C力朋飾2'〃/ff^7。6(OS"歷)C4、角擔子菌(Cersf。Zas7V湖sZw朋677)B6等斜面活化，制備種子液，再按10%的接種量分別進行發(fā)酵，28°C，150rpm發(fā)酵7天，收獲發(fā)酵液，發(fā)酵液按l:l混合，得到發(fā)酵接種菌劑。發(fā)酵菌劑按5%濃度加入含有菊花秸稈(10%)、農林廢棄物(40%)、動物糞便(50%)等混合形成的固體培養(yǎng)基中，再加入植物必須營養(yǎng)元素氮磷鉀鈣鎂鐵，其添加量在本發(fā)明中均按1/2常規(guī)添加量，N:0.41,P:0.04，K:0.51，Ca:O.ll，Mg:0.09，F(xiàn)e:0.07(單位g/Kg)。然后按一定料水比，pH5.5—6.5,溫度4(TC左右，在大型發(fā)酵池內堆積發(fā)酵，翻堆機定期攪拌混合均勻，發(fā)酵15-18天即成具有土壤調節(jié)作用的微生物有機肥，用于克服菊花連作障礙。實施例3制備過程如圖l所示擬莖點霉(P/zowo;w^sp.)CFCC81894、CFCC81338、B3、球毛殼菌(C/ae^MW'〃歷^Wos"歷)ACCC30351等斜面活化，制備種子液，再按10%的接種量分別進行發(fā)酵，28'C，150rpm發(fā)酵7天，分別收集發(fā)酵液，按1;1配合，獲得發(fā)酵接種劑，按10%濃度加入含有菊花秸稈(10%)、農林廢棄物(40%)、動物糞便(50%)等混合形成的固體培養(yǎng)基中，再加入如植物必須營養(yǎng)元素氮磷鉀鈣鎂等，其添加量為N:0.41，P:0.04，K:0.51'Ca:O.ll，Mg:0.09，F(xiàn)e:0.07(單位g/Kg)。然后按一定料水比，pH5,5_6.5，溫度4(TC左右，堆肥發(fā)酵，翻堆機定期攪拌混合均勻，發(fā)酵15-18天即成具有土壤調節(jié)作用的固體培養(yǎng)物。用于克服菊花連作障礙。實施例4將上述擬莖點霉(尸/wwo/w&sp.)、球毛殼菌(6^eto/w'"歷^o力o幼歷)做成的菊花連作障礙專用土壤調節(jié)劑200公斤/畝，條施到菊花田中，栽植2個月后，添加土壤調節(jié)劑處理組，生物量為對照的143.37%,株高分別達到對照的126.20%，根數(shù)分別達到對照的133.3%。立枯病、根腐病發(fā)病率顯著下降。實施例5:在多年連作土壤中栽培菊花，在根周圍土壤加入50—60毫升的球毛殼菌，葡萄孢制成的液體土壤調節(jié)劑，三個月后生長觀察，發(fā)現(xiàn)接入發(fā)酵液組成活率100%，發(fā)病率小于10%，而對照組的成活率為40—50%，且后期發(fā)病率較高達50—60%。本發(fā)明不限于這些公開的實施方案，本發(fā)明將覆蓋在本專利書中所描述的范圍，以及權利要求范圍的各種變型和等效變化。權利要求1、一種菊花土壤專用土壤調節(jié)劑的制備方法，其特征在于，將益生菌或菊花內生真菌活化，在含有菊花葉片浸汁的液體培養(yǎng)基或者含有菊花秸稈的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到土壤調節(jié)劑。2、根據(jù)權利要求l所說的菊花專用土壤調節(jié)劑的制備方法；其特征在于，菌經活化培養(yǎng)后，發(fā)酵后添加少量營養(yǎng)鹽，制成土壤調節(jié)劑。3、根據(jù)權利要求2所說的菊花土壤專用調節(jié)劑的制備方法；其特征在于，所說的營養(yǎng)鹽的添加量是每Kg發(fā)酵物中N:0.41g，P:0.04g,K:0.51g，Ca:0.llg，Mg:0.09g，F(xiàn)e:0.07g。4、根據(jù)權利要求1所說的茅蒼術接種劑的制備方法；其特征在于，所說的益生菌或者從菊花分離的內生真菌是球毛殼菌、葡萄孢、擬莖點霉、角擔子菌。全文摘要本發(fā)明涉及農業(yè)土壤領域，具體涉及一種利用菊花內生真菌或者益生菌生產土壤調節(jié)劑的方法。其方法具體是將菊花內生真菌或益生菌活化，在含有馬鈴薯浸汁、菊花葉片浸汁、葡萄糖液體培養(yǎng)基或者含有菊花秸稈的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)后，添加少量營養(yǎng)鹽，移栽時浸根或者直接添加到根際土壤中。本調節(jié)劑的生產不受環(huán)境影響，生產周期短，生產工藝簡單，生產時間和產量易于控制，作用明顯。采用浸泡植物根或澆灌，以及直接添加于土壤的方法使其作用于植物，方法簡單，易操作，用量少，成本低且均能收到良好效果。文檔編號C09K17/00GK101475808SQ20081024323公開日2009年7月8日申請日期2008年12月26日優(yōu)先權日2008年12月26日發(fā)明者宋文玲,戴傳超,芳方申請人:南京師范大學