一種人類(lèi)骨髓、臍帶血、外周血細(xì)胞處理試劑盒的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本實(shí)用新型涉及一種試劑盒，特別是一種人類(lèi)骨髓、臍帶血、外周血細(xì)胞處理試劑合
ΙΤΓΤ.0
【背景技術(shù)】
[0002]隨著現(xiàn)在科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，用于人類(lèi)血液細(xì)胞的分離技術(shù)不斷地發(fā)展和優(yōu)化，目前基于密度梯度法的干細(xì)胞分離方法在臨床上得到較廣的應(yīng)用。但是不同方法及操作步驟產(chǎn)生的效果不同，各有利弊，總體而言，存在如下幾個(gè)問(wèn)題:(1)不能標(biāo)準(zhǔn)化。比如申請(qǐng)?zhí)枮?00610035900.5的“一種干細(xì)胞分層液及其用于干細(xì)胞分離的方法”需要操作者自己配制工作液，而且需要調(diào)節(jié)比重，此方法增加了操作者的人為影響因素，不利于干細(xì)胞分離的推廣和產(chǎn)業(yè)化。(2)紅細(xì)胞去除不干凈:比如申請(qǐng)?zhí)枮?00610035900.5的“一種干細(xì)胞分層液及其用于干細(xì)胞分離的方法”特別是對(duì)于臍帶血來(lái)說(shuō)，該專(zhuān)利方法除不凈紅細(xì)胞，最終臨床應(yīng)用的時(shí)候大大增加了患者產(chǎn)生排異反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)；申請(qǐng)?zhí)枮?00910187212.4的“人類(lèi)骨髓、臍帶血、外周血細(xì)胞處理試劑盒及細(xì)胞處理方法”也存在相同的缺點(diǎn)；(3)干細(xì)胞得率不高:比如申請(qǐng)?zhí)枮?00610114475.9的“用于分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞的試劑盒”，其缺點(diǎn)是分離的干細(xì)胞得率數(shù)量不高，需要進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，但是由此增加了細(xì)胞污染率，同時(shí)體外細(xì)胞擴(kuò)增所產(chǎn)生的細(xì)胞功能性不穩(wěn)定，很難用于臨床治療；另外申請(qǐng)?zhí)枮?00610106875.5的“一種有核細(xì)胞體外分離試劑盒及其應(yīng)用方法”所采用的HIST0PAGUE077的密度1.077的淋巴細(xì)胞分離液，經(jīng)分離后的細(xì)胞絕大多數(shù)為淋巴細(xì)胞，這樣直接導(dǎo)致細(xì)胞中能夠用于治療的干細(xì)胞占少數(shù)，影響臨床療效；(4)分離純化成本太高:比如申請(qǐng)?zhí)枮?00710137781.9的“骨髓臍帶血干細(xì)胞體外分離試劑盒及其應(yīng)用方法”的專(zhuān)利，其試劑中添加了 Iin抗體，導(dǎo)致成本大大提高，投入臨床使用后，大大增加了患者的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，導(dǎo)致患者看不起病，接受不起細(xì)胞治療，并且使用了 Iin抗體對(duì)細(xì)胞清洗造成了較大負(fù)擔(dān)，此種物質(zhì)進(jìn)入人體后對(duì)人體的影響還是個(gè)未知數(shù)，還有待進(jìn)一步研宄。(5)沒(méi)有考慮蛋白沉淀、細(xì)胞凝聚因素對(duì)后期干細(xì)胞應(yīng)用的風(fēng)險(xiǎn):采用離心的方式分離純化干細(xì)胞，在操作過(guò)程中往往由于臍血、外周血樣品質(zhì)量不同，干細(xì)胞在純化過(guò)程中產(chǎn)生凝聚和沉淀，但此沉淀如果沒(méi)有及時(shí)去除，在后期的應(yīng)用過(guò)程中容易造成患者的微血管栓塞，影響治療效果，嚴(yán)重者可危及患者的生命安全。
【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0003]本實(shí)用新型所要解決的技術(shù)問(wèn)題就是提供一種操作性強(qiáng)、臨床安全性高、便于臨床推廣的人類(lèi)骨髓、臍帶血、外周血細(xì)胞處理試劑盒，使其易于存儲(chǔ)運(yùn)輸、可產(chǎn)業(yè)化、使用方便快捷。
[0004]本實(shí)用新型提供一種人類(lèi)骨髓、臍帶血、外周血細(xì)胞處理試劑盒，包括盒蓋、盒體，所述盒體內(nèi)設(shè)置有與盒體尺寸大小相同的襯墊，所述襯墊設(shè)置有四個(gè)圓柱形凹槽，所述四個(gè)圓柱形凹槽分別放置有:裝有PBS溶液的試劑瓶，裝有密度液的試劑瓶，裝有0.9%氯化鈉注射液的試劑瓶，裝有0.8%氯化氨溶液的試劑瓶，所述四個(gè)圓柱形凹槽的直徑分別與上述四個(gè)試劑瓶的外徑相等，其中，PBS溶液為稀釋液；0.9%氯化鈉液為洗滌液；0.8%氯化氨溶液為除紅細(xì)胞液。
[0005]進(jìn)一步地，密度液可以為泛影酸鈉-聚蔗糖400#或HIST0PAQUE1077或Ficoll，所述泛影酸鈉-聚蔗糖400#是由聚蔗糖和泛影葡胺配制成的密度為1.077±0.001的密度液。
[0006]進(jìn)一步地，裝有PBS溶液的試劑瓶、裝有密度液的試劑瓶和裝有0.9%氯化鈉注射液的試劑瓶的表面兩側(cè)均分別設(shè)有便于手持的圓形凹槽，這樣，在取用或觀(guān)察試劑時(shí)，能夠便于手持。
[0007]進(jìn)一步地，裝有PBS溶液的試劑瓶規(guī)格為250mL，裝有密度液的試劑瓶規(guī)格為150mL，裝有0.9%氯化鈉注射液的試劑瓶規(guī)格為250mL，裝有0.8%氯化氨溶液的試劑瓶規(guī)格為50mL，上述試劑瓶瓶體表面均設(shè)有相應(yīng)的體積刻度。
[0008]進(jìn)一步地，所述襯墊為紙襯墊或海綿襯墊或泡沫襯墊。
[0009]本試劑盒包含分離純化試劑盒的所有溶液，無(wú)需使用者另外準(zhǔn)備溶液，省去使用者的準(zhǔn)備工作，也避免使用者人為的污染或者第三方污染引入，適用于人類(lèi)骨髓、臍帶血、外周血的干細(xì)胞分離，對(duì)于不同的樣品，試劑組成相同，避免了國(guó)內(nèi)現(xiàn)有的一些專(zhuān)利只能分離人類(lèi)骨髓和臍帶血，不能分離外周血的問(wèn)題。
[0010]另外，本實(shí)用新型可根據(jù)樣品體積的需要，按比例加入不同體積的試劑溶液進(jìn)行操作即可，適用于臨床小批量樣品的操作或者大批量操作，避免了樣品的浪費(fèi)，是臨床上迫切需要的一種分離細(xì)胞的試劑盒。
【附圖說(shuō)明】
[0011]圖1為本實(shí)用新型試劑盒示意圖；
[0012]圖2為本實(shí)用新型實(shí)施例規(guī)格為150mL的試劑瓶正視圖；
[0013]圖3為本實(shí)用新型實(shí)施例規(guī)格為150mL的試劑瓶側(cè)視圖。
[0014]其中，1-盒蓋，2-盒體，3-襯墊，4-圓柱形凹槽，5-裝有PBS溶液的試劑瓶，6_裝有密度液的試劑瓶，7-裝有0.9 %氯化鈉注射液的試劑瓶，8-裝有0.8 %氯化氨溶液的試劑瓶，9-圓形凹槽。
【具體實(shí)施方式】
[0015]下面詳細(xì)描述本實(shí)用新型的實(shí)施例，所述實(shí)施例的示例在附圖中示出，其中自始至終相同或類(lèi)似的標(biāo)號(hào)表示相同或類(lèi)似的元件或具有相同或類(lèi)似功能的元件。下面通過(guò)參考附圖描述的實(shí)施例是示例性的，僅用于解釋本實(shí)用新型，而不能理解為對(duì)本實(shí)用新型的限制。
[0016]一種人類(lèi)骨髓、臍帶血、外周血細(xì)胞處理試劑盒，包括盒蓋1、盒體2，所述盒體2內(nèi)設(shè)置有與盒體2尺寸大小相同的紙襯墊3，所述紙襯墊3設(shè)置有四個(gè)圓柱形凹槽4，所述四個(gè)圓柱形凹槽4分別放置有:裝有PBS溶液的試劑瓶5，裝有密度液的試劑瓶6，裝有0.9%氯化鈉注射液的試劑瓶7，裝有0.8%氯化氨溶液的試劑瓶8，所述四個(gè)圓柱形凹槽4的直徑分別與所述試劑瓶5、試劑瓶6、試劑瓶7、試劑瓶8的外徑相等，所述試劑瓶6裝有的密度液為Ficoll溶液，所述試劑瓶5、試劑瓶6、試劑瓶7的表面兩側(cè)均分別設(shè)有便于手持的圓形凹槽9。
[0017]其中，試劑瓶5規(guī)格為250mL，所述試劑瓶6規(guī)格為150mL，所述試劑瓶7規(guī)格為250mL，所述試劑瓶8規(guī)格為50mL。
[0018]利用上述試劑盒分離10ml臍帶血干細(xì)胞方法步驟如下:
[0019](I)取試劑瓶5中的稀釋液100ml，按1:1比例稀釋臍血，混勻，可4度保存?zhèn)溆茫?br>[0020](2)取20個(gè)15ml的離心管，用1ml移液管從試劑瓶6中吸取4ml密度液加入各官中備用；
[0021](3)用1ml的移液管吸取臍血各10ml，沿離心管壁緩慢疊加于密度液液面上，保持清楚的界面；
[0022](4)水平離心，轉(zhuǎn)速2114rpm，離心時(shí)間25分鐘，溫度21度；
[0023](5)取四個(gè)50ml離心管，各加入35ml試劑瓶7中的洗滌液，備用；
[0024](6)步驟4離心后，離心管內(nèi)樣品溶液分為四層，用巴氏吸管吸取第三層(白色云霧層狹窄帶)平均分于步驟5中的四個(gè)離心管中，混勻；水平離心1674rpmX20分鐘，溫度21度；
[0025](7)用25ml移液管吸去上清，用1ml移液管從試劑瓶7中吸取5ml的洗滌液于一離心管中，重懸細(xì)胞，并依次將四管細(xì)胞匯集到一個(gè)50ml離心管中，輕柔吹打混勻；
[0026](8)若步驟7中紅細(xì)胞過(guò)多，則在離心管中緩慢加入15ml試劑瓶8中的除紅細(xì)胞液，混勻，反應(yīng)6分鐘，其中每隔2分鐘混勻一次；水平離心1674rpmX 10分鐘，溫度21度；
[0027](9)用1ml移液管吸去上清，加入20ml試劑瓶7中的洗滌液，混勻；水平離心，轉(zhuǎn)速1674rpm，離心時(shí)間20分鐘，溫度21度；
[0028](10)若重懸的細(xì)胞出現(xiàn)明顯可見(jiàn)大顆粒沉淀，可采用過(guò)濾器進(jìn)行過(guò)濾；再將過(guò)濾液進(jìn)行離心；水平離心，轉(zhuǎn)速1674rpm，離心時(shí)間20分鐘，溫度21度；
[0029](11)用1ml移液管吸去上清，加入20ml試劑瓶7中的洗滌液，混勻；水平離心，轉(zhuǎn)速1674rpm，離心時(shí)間20分鐘，溫度21度；
[0030](12)用1ml移液管吸去上清，根據(jù)需要加入5ml或者20ml試劑瓶7中的洗滌液重懸細(xì)胞，保存?zhèn)溆谩?br>[0031]通過(guò)本實(shí)用新型試劑盒，無(wú)需自行稱(chēng)量配制或另行購(gòu)買(mǎi)，使用方便，操作簡(jiǎn)單，省時(shí)省力，提高工作效率。能夠分離人類(lèi)骨髓或臍帶血或外周血中的干細(xì)胞，將試劑盒中4種試劑組合應(yīng)用，并通過(guò)試劑瓶6中的試劑密度梯度離心，根據(jù)各種細(xì)胞密度差異將它們分散于自上而下的試劑層次，去除人類(lèi)骨髓或人類(lèi)臍帶血或外周血中的血漿，血小板，血紅蛋白，粒細(xì)胞和大部分紅細(xì)胞等，經(jīng)過(guò)本實(shí)用新型分離的干細(xì)胞回收率能夠達(dá)到85%以上；
[0032]盡管已經(jīng)示出和描述了本實(shí)用新型的實(shí)施例，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以理解:在不脫離本實(shí)用新型的原理和宗旨的情況下可以對(duì)這些實(shí)施例進(jìn)行多種變化、修改、替換和變型，本實(shí)用新型的范圍由權(quán)利要求及其等同物限定。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種人類(lèi)骨髓、臍帶血、外周血細(xì)胞處理試劑盒，包括盒蓋(I)、盒體(2)，其特征在于，所述盒體⑵內(nèi)設(shè)置有與盒體⑵尺寸大小相同的襯墊(3)，所述襯墊(3)設(shè)置有四個(gè)圓柱形凹槽(4)，所述四個(gè)圓柱形凹槽(4)分別放置有:裝有PBS溶液的試劑瓶(5)，裝有密度液的試劑瓶出)，裝有0.9%氯化鈉注射液的試劑瓶(7)，裝有0.8%氯化氨溶液的試劑瓶(8)，所述四個(gè)圓柱形凹槽(4)的直徑分別與所述試劑瓶(5)、試劑瓶￠)、試劑瓶(7)、試劑瓶(8)的外徑相等。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑瓶(6)裝有的密度液為泛影酸鈉-聚蔗糖400#或HIST0PAQUE1077或FicolI，所述泛影酸鈉-聚蔗糖400#是由聚蔗糖和泛影葡胺配制成的密度為1.077±0.001的密度液。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑瓶(5)、試劑瓶￠)、試劑瓶(7)的表面兩側(cè)均分別設(shè)有便于手持的圓形凹槽(9)。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑瓶(5)規(guī)格為250mL，所述試劑瓶(6)規(guī)格為150mL，所述試劑瓶(7)規(guī)格為250mL，所述試劑瓶⑶規(guī)格為50mL，所述試劑瓶(5)、試劑瓶￠)、試劑瓶(7)、試劑瓶(8)瓶體表面均設(shè)有相應(yīng)的體積刻度。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述襯墊(3)為紙襯墊或海綿襯墊或泡沫襯墊。
【專(zhuān)利摘要】本實(shí)用新型提供一種人類(lèi)骨髓、臍帶血、外周血細(xì)胞處理試劑盒，包括盒蓋、盒體，所述盒體內(nèi)放置有：裝有PBS溶液的試劑瓶，裝有密度液的試劑瓶，裝有0.9％氯化鈉注射液的試劑瓶，裝有0.8％氯化氨溶液的試劑瓶，所述四個(gè)圓柱形凹槽的直徑分別與上述四個(gè)試劑瓶的外徑相等，其中，PBS溶液為稀釋液；0.9％氯化鈉液為洗滌液；0.8％氯化氨溶液為除紅細(xì)胞液，本試劑盒，無(wú)需使用者另外準(zhǔn)備溶液，省去使用者的準(zhǔn)備工作，也避免使用者人為的污染或者第三方污染引入，適用于人類(lèi)骨髓、臍帶血、外周血的干細(xì)胞分離。
【IPC分類(lèi)】C12M1/00
【公開(kāi)號(hào)】CN204625610
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201520291702
【發(fā)明人】姚惟琦, 武棟成
【申請(qǐng)人】武漢漢密頓生物科技股份有限公司
【公開(kāi)日】2015年9月9日
【申請(qǐng)日】2015年5月7日