一種新型牙髓干細胞培養(yǎng)基的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種新型牙髓干細胞培養(yǎng)基，每1L牙髓干細胞培養(yǎng)基中由以下成分組成：100?150ml的胎牛血清、10?15ml的青鏈霉素雙抗、1?5ng TGF?β、1?5mM L?谷氨酰胺、1640培養(yǎng)基余量；制備方法：取總量1/3的1640培養(yǎng)基，加入TGF?β、L?谷氨酰胺、青鏈霉素雙抗，攪拌溶解，補加余下1640培養(yǎng)基定容至1L，攪拌均勻；配制的溶液用0.22um濾膜過濾，無菌條件下加入胎牛血清，即得；本發(fā)明的培養(yǎng)基中，基礎(chǔ)培養(yǎng)基為1640，其含有乳牙牙髓基質(zhì)細胞向成牙本質(zhì)細胞方向分化所需要的無機成分；培養(yǎng)基中含有胎牛血清，提供細胞生長所需營養(yǎng)物質(zhì)并可以促進細胞貼壁生長；谷氨酰胺和TGF?β可以增強細胞的增殖；青鏈霉素雙抗起到抗菌作用。
【專利說明】
一種新型牙髓干細胞培養(yǎng)基
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及干細胞培養(yǎng)領(lǐng)域，尤其涉及新型牙髓干細胞培養(yǎng)基。
【背景技術(shù)】
[0002]干細胞是一類具有自我復(fù)制能力的多潛能細胞，是原始且未特化的細胞。在一定條件下，它可以分化成多種功能細胞，具有再生各種組織器官和人體的潛在功能。干細胞存在所有多細胞組織里，能經(jīng)由有絲分裂與分化來分裂成多種的特化細胞，而且可以利用自我更新來提供更多干細胞。干細胞的來源有很多，包括骨髓、臍帶、臍帶血、牙齒與脂肪。
[0003]2000年首次發(fā)現(xiàn)了牙髓干細胞，Gronthos等發(fā)現(xiàn)在離體的乳牙和智齒中都存在牙髓干細胞。這是一類具有高增殖能力、高度自我更新能力、多項分化能力的細胞。已有研究利用該細胞成功地構(gòu)建牙髓、牙本質(zhì)以及牙齒組織。牙髓干細胞與其他組織來源的干細胞在生物學(xué)特性上有很多相似之處。而乳牙的獲取則容易無痛，且每個人一生中首先長出來的是20顆乳牙，乳牙在半歲左右即開始萌出，約2歲半出齊，6-12歲之間乳牙陸續(xù)脫落，因此從乳牙牙髓獲取間充質(zhì)干細胞將越來越普遍。
[0004]2003年，Miura等從脫落乳牙的牙髓中分離出具有高度增殖能力和多向分化能力的干細胞-SHED。由于其具有良好的間充質(zhì)干細胞的生物學(xué)特性，組織來源易得且無創(chuàng)傷，被認為是干細胞組織工程技術(shù)中進行組織再生修復(fù)比較理想的種子細胞。
[0005]現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)乳牙間充質(zhì)干細胞在治療骨和牙組織再生修復(fù)、神經(jīng)系統(tǒng)疾病及肌肉萎縮、免疫系統(tǒng)疾病、皮膚外傷、肝臟疾病等方面有廣闊的應(yīng)用前景。因此，開發(fā)簡單、快速、安全獲得大量乳牙間充質(zhì)干細胞方法成為當務(wù)之急，在干細胞的培養(yǎng)中，培養(yǎng)基的選擇是基礎(chǔ)的研究，合適的培養(yǎng)基選擇是做干細胞培養(yǎng)成功的保證。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種新型牙髓干細胞培養(yǎng)基。
[0007]本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的:一種新型牙髓干細胞培養(yǎng)基，每IL牙髓干細胞培養(yǎng)基中由以下成分組成:
胎牛血清100-150ml
青鏈霉素雙抗 10_15ml TGF-βl-5ng
L-谷氨酰胺l_5mM
1640培養(yǎng)基余量。
[0008]在上述方案基礎(chǔ)上優(yōu)選的，每IL牙髓干細胞培養(yǎng)基中由以下成分組成:
胎牛血清120ml
青鏈霉素雙抗12ml
TGF-β3ng
L-谷氨酰胺3mM 1640培養(yǎng)基余量。
[0009]—種制備牙髓干細胞培養(yǎng)基的方法，包括以下步驟:
步驟一，取總量I/3的1640培養(yǎng)基，加入TGFH-谷氨酰胺、青鏈霉素雙抗，攪拌溶解，補加余下1640培養(yǎng)基定容至1L，攪拌均勻；
步驟二，將步驟一配制的溶液用0.22um濾膜過濾，無菌條件下加入胎牛血清，即得；用
0.22um濾膜過濾，可以達到很好的除菌目的。
[0010]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明中的培養(yǎng)基，基礎(chǔ)培養(yǎng)基為1640，其含有乳牙牙髓基質(zhì)細胞向成牙本質(zhì)細胞方向分化所需要的無機成分;培養(yǎng)基中含有胎牛血清，提供細胞生長所需營養(yǎng)物質(zhì)并可以促進細胞貼壁生長;谷氨酰胺和TGF-β可以增強細胞的增殖;青鏈霉素雙抗起到抗菌作用。
【具體實施方式】
[0011 ]以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明:
實施例1
制備IL新型牙髓干細胞培養(yǎng)基:
取胎牛血清10ml、青鏈霉素雙抗1ml、TGFKsigma) 5叫、1^-谷氨酰胺(8丨811^)511^[、1640培養(yǎng)基IL;
取0.3L的1640培養(yǎng)基，加入TGF-?Κ sigma)、M L-谷氨酰胺(sigma)、青鏈霉素雙抗(sigma)，攪拌溶解，補加1640培養(yǎng)基至IL定容，攪拌均勾，用0.22um濾膜過濾除菌，無菌條件下加入胎牛血清(gibco)，將制得的溶液無菌分裝至已滅菌的收集瓶內(nèi)保存。
[0012]實施例2
制備IL新型牙髓干細胞培養(yǎng)基:
取胎牛血清120ml、青鏈霉素雙抗12ml、TGFKsigma) 3叫、1^-谷氨酰胺(8丨811^)311^[、1640培養(yǎng)基IL;
取0.3L的1640培養(yǎng)基，加入TGF-?Κ sigma)、M L-谷氨酰胺(sigma)、青鏈霉素雙抗(sigma)，攪拌溶解，補加1640培養(yǎng)基至IL定容，攪拌均勾，用0.22um濾膜過濾除菌，無菌條件下加入胎牛血清(gibco)，將制得的溶液無菌分裝至已滅菌的收集瓶內(nèi)保存。
[0013]實施例3
制備IL新型牙髓干細胞培養(yǎng)基:
取胎牛血清150ml、青鏈霉素雙抗15ml、TGFKsigma) Ing、L-谷氨酰胺(sigma)ImM、1640培養(yǎng)基IL;
取0.3L的1640培養(yǎng)基，加入TGF-?Κ sigma)、M L-谷氨酰胺(sigma)、青鏈霉素雙抗(sigma)，攪拌溶解，補加1640培養(yǎng)基至IL定容，攪拌均勾，用0.22um濾膜過濾除菌，無菌條件下加入胎牛血清(gibco)，將制得的溶液無菌分裝至已滅菌的收集瓶內(nèi)保存。
【主權(quán)項】
1.一種新型牙髓干細胞培養(yǎng)基，其特征在于，每IL牙髓干細胞培養(yǎng)基中由以下成分組成: 胎牛血清100-150ml 青鏈霉素雙抗 10_15ml TGF-βl-5ng L-谷氨酰胺l_5mM 1640培養(yǎng)基余量。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新型牙髓干細胞培養(yǎng)基，其特征在于，每IL牙髓干細胞培養(yǎng)基中由以下成分組成: 胎牛血清120ml 青鏈霉素雙抗12ml TGF-β3ng L-谷氨酰胺3mM 1640培養(yǎng)基余量。3.—種制備牙髓干細胞培養(yǎng)基的方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟一，取總量I/3的1640培養(yǎng)基，加入TGF-13、L-谷氨酰胺、青鏈霉素雙抗，攪拌溶解，補加余下1640培養(yǎng)基定容至1L，攪拌均勻； 步驟二，將步驟一配制的溶液用0.22um濾膜過濾，無菌條件下加入胎牛血清，即得。
【文檔編號】C12N5/074GK106011053SQ201610475763
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年6月27日
【發(fā)明人】晁若瑜, 王麗麗
【申請人】安徽新生命干細胞科技有限公司