一種醛基葡聚糖的合成方法、基于所述醛基葡聚糖的包被方法和微球組合物的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種醛基葡聚糖的合成方法、基于所述醛基葡聚糖的包被方法和微球組合物的制備方法。所述醛化葡聚糖是以鹵代縮醛和葡聚糖為原料，經(jīng)取代、水解反應而成，生成的醛基不易發(fā)生交聯(lián)反應，活性基團醛基密度可控，重現(xiàn)性好，更有利于單抗、蛋白的連接。所述包被方法以環(huán)氧乙基微粒為起始原料，代替?zhèn)鹘y(tǒng)的羧基微粒。可以用有機小分子代替氨基化糖，整個包被過程顯得簡單、周期短，更適宜用于工業(yè)化生產(chǎn)。所述微球組合物的制備方法，將所述醛化葡聚糖包被在微球表面形成醛基葡聚糖微球用于生物分子的共價偶聯(lián)，該方法工藝簡單、操作簡便、重復性好。
【專利說明】
一種醛基葡聚糖的合成方法、基于所述醛基葡聚糖的包被方 法和微球組合物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于化學合成領(lǐng)域，具體涉及一種醛基葡聚糖的合成方法、基于所述醛基 葡聚糖的包被方法和微球組合物的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 聚苯乙烯微球已經(jīng)大量應用于醫(yī)療診斷領(lǐng)域，其主要原理是蛋白質(zhì)可通過多種方 式共價交聯(lián)到微球表面。微球表面可以修飾環(huán)氧基、氯甲基、醛基、羧基等功能化的基團，都 可以和抗體的Fc端的氨基進行反應，形成共價鍵。當選擇共價交聯(lián)方式的時候，往往需要考 慮交聯(lián)的效期、工藝復雜程度和最后的電荷穩(wěn)定狀況。前三種基團可以直接與蛋白的氨基 反應，形成共價鍵，使用起來較方便，但儲存穩(wěn)定性較之羧基微球稍差。而羧基微球則需經(jīng) 過EDC/NHS活化之后，才與蛋白的氨基反應，形成共價鍵，該方法相對比較穩(wěn)定，而且是目前 市場上主流的標記方法。
[0003] 但該方法也存在缺陷：
[0004] 1，以羧基微粒為原料，通過加入EDC/NHS活化形成氨基微粒，然后與蛋白中的氨基 進行反應。該反應因為加入了必不可少的活化過程，相比醛基一步法反應更易發(fā)生微粒的 并集現(xiàn)象，條件不易控制。
[0005] 2，由于微球表面除了羧基外，其余的都是裸漏的疏水表面，而這些疏水表面在蛋 白與微球的結(jié)合過程中容易發(fā)生非特異性的吸附，并且更容易受到溶劑，pH甚至鹽濃度的 影響，從而干擾檢測結(jié)果。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 為了解決現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，本發(fā)明提供了一種醛基葡聚糖的合成方法、 基于所述醛基葡聚糖的包被方法和微球組合物的制備方法。本發(fā)明提出了一種全新的醛基 葡聚糖的合成方法，并將其包被在微球表面形成醛基葡聚糖微球用于生物分子的共價偶 聯(lián)，該方法工藝簡單、操作簡便、重復性好。
[0007] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案為：
[0008] -種醛基葡聚糖的合成方法，
[0009] 醛基葡聚糖的新合成方法線路可表示如下：
[0011] 包括以下步驟：
[0012] A、將葡聚糖溶解于水后，惰性氣體保護下，加入EDTA、1，4-苯二酚、硼氫化鈉 、NaOH 和甲苯，攪拌回流1-3小時；
[0013] B、向體系中滴加2-溴-1，卜二乙氧基乙烷溶液，滴加時間不少于1小時；滴加完成 后，攪拌回流12-18小時；
[0014] C、將體系中的有機相用水洗滌，得到水溶液，所述水溶液加入甲醇中，得到醛化糖 前體沉淀；
[0015] D、將所述醛化糖前體沉淀溶于水中，加入甲苯磺酸調(diào)pH至1-2,加熱水解后，使用 NaOH溶液調(diào)至中性，以沉淀的形式得到醛基葡聚糖。
[0016]通過上述步驟，能夠合成出純度好，收率高的醛基葡聚糖。
[0017] 優(yōu)選的，一種醛基葡聚糖的合成方法，包括以下步驟：
[0018] A、將20000-40000重量份的葡聚糖溶解于50-130體積份的水后，氮氣保護下，加入 5-15重量份的EDTA、5-15重量份的1，4_苯二酚、5-15重量份的硼氫化鈉、4000-8000重量份 的NaOH和40-80體積份的甲苯，攪拌回流1-3小時；
[0019] B、向體系中滴加2-溴-1，1 -二乙氧基乙烷的甲苯溶液，滴加時間不少于1小時，2- 溴-1，1-二乙氧基乙烷與甲苯的體積比為1:4-5;滴加完成后，攪拌回流12-18小時；
[0020] C、冷卻至室溫后，將體系中的有機相用水洗滌三次，每次所用水的體積為120-180 體積份，合并水相得到水溶液，所述水溶液加入1500-2500體積份的甲醇中，抽濾后用乙醇 洗滌三次，每次所用乙醇的體積為200-280體積份，并將洗滌過的沉淀真空干燥，得到醛化 糖前體沉淀；
[0021] D、將5000-15000重量份的所述醛化糖前體沉淀溶于30-70體積份的水中，加入甲 苯磺酸調(diào)pH至1-2,加熱至70-90°C進行水解，水解1-3小時后，使用質(zhì)量分數(shù)為30-50 %的 NaOH溶液調(diào)至中性，過濾、除雜后，以沉淀的形式得到醛基葡聚糖。
[0022] 本發(fā)明還提供了一種基于所述醛基葡聚糖合成方法的包被方法，
[0023] 醛基葡聚糖的包被線路示意可以表示如下，其中微球用圓球表示：
[0025] 包括以下步驟：
[0026] A、將微球加入1，6_己二胺溶液中，反應8-16小時，得到氨化微球；
[0027] B、將所述醛基葡聚糖溶解于磷酸鹽緩沖液中，加入所述氨化微球，混合均勻后滴 加三氫硼氰化鈉溶液，反應8-16小時；
[0028] C、離心清洗，得到包被有醛基葡聚糖的微球。
[0029] 優(yōu)選的，一種基于所述醛基葡聚糖合成方法的包被方法，包括以下步驟：
[0030] A、70°C下，將500-1500重量份的環(huán)氧乙基微球加入10-30體積份的質(zhì)量分數(shù)為 10 %的1，6-己二胺溶液中，90 °C下攪拌反應8-16小時后，經(jīng)透析或中空纖維管清洗除去未 反應的小分子，得到氨化微球；
[0031] B、將2000-3000重量份的所述醛基葡聚糖溶解于40-60體積份的磷酸鹽緩沖液中， 所述磷酸鹽緩沖液的濃度為〇. lmol/L，所述磷酸鹽緩沖液的pH = 6.0，加入所述氨化微球， 混合均勻后滴加三氫硼氰化鈉溶液，所述三氫硼氰化鈉溶液為400重量份的三氫硼氰化鈉 溶于2.5體積份的0. lmol/L磷酸鹽緩沖液中得到，37°C下反應8-16小時；
[0032] C、離心清洗除去未反應的小分子，得到包被有醛基葡聚糖的微球。
[0033] 所述醛基葡聚糖的合成方法和包被方法具有下列優(yōu)點：
[0034] 1、所述醛化葡聚糖是以鹵代縮醛和葡聚糖為原料，經(jīng)取代、水解反應而成，生成的 醛基不易發(fā)生交聯(lián)反應，活性基團醛基密度可控，重現(xiàn)性好，更有利于單抗、蛋白的連接。
[0035] 2、所述包被方法以環(huán)氧乙基微粒為起始原料，代替?zhèn)鹘y(tǒng)的羧基微粒?？梢杂糜袡C 小分子代替氨基化糖，整個包被過程顯得簡單、周期短，更適宜用于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0036] 本發(fā)明還提供了一種基于所述包被方法的微球組合物的制備方法，包括以下步 驟：
[0037] A、受氧微球的制備:將二甲基噻吩、β_二丁酮和稀土配合物放入微球中，形成受氧 微球；
[0038] Β、供氧微球的制備:將光敏劑放入微球中，形成供氧微球；
[0039] C、醛基葡聚糖包被微球:將受氧微球或供氧微球加入1，6_己二胺溶液中，反應8-16小時，得到氨化微球;將所述醛基葡聚糖溶解于磷酸鹽緩沖液中，加入所述氨化微球，混 合均勻后滴加三氫硼氰化鈉溶液，反應8-16小時;離心清洗，得到包被有醛基葡聚糖的受氧 微球或供氧微球；
[0040] D、所述受氧微球和供氧微球組合為微球組合物。
[0041 ]優(yōu)選的，一種微球組合物的制備方法，包括以下步驟：
[0042] Α、受氧微球的制備:將二甲基噻吩、β-二丁酮和稀土配合物放入微球中，形成受氧 微球；
[0043] Β、供氧微球的制備:將光敏劑放入微球中，形成供氧微球；
[0044] C、醛基葡聚糖包被微球:70°C下，將500-1500重量份的受氧微球或供氧微球加入 10-30體積份的質(zhì)量分數(shù)為10 %的1，6-己二胺溶液中，90 °C下攪拌反應8-16小時后，經(jīng)透析 或中空纖維管清洗除去未反應的小分子，得到氨化微球;將2000-3000重量份的所述醛基葡 聚糖溶解于40-60體積份的磷酸鹽緩沖液中，所述磷酸鹽緩沖液的濃度為0. lmol/L，所述磷 酸鹽緩沖液的pH = 6.0，加入所述氨化微球，混合均勻后滴加三氫硼氰化鈉溶液，所述三氫 硼氰化鈉溶液為400重量份的三氫硼氰化鈉溶于2.5體積份的0. lmol/L磷酸鹽緩沖液中得 到，37°C下反應8-16小時;離心清洗除去未反應的小分子，得到包被有醛基葡聚糖的受氧微 球或供氧微球；
[0045] D、所述受氧微球和供氧微球組合為微球組合物。
[0046]優(yōu)選的，所述稀土配合物為銪配合物或鋱配合物;所述光敏劑為光氧染料物質(zhì)亞 甲基藍，玫瑰紅，酞菁化合物和葉綠素 A中的一種或組合。因為所述銪配合物和鋱配合物的 性質(zhì)相近，均能滿足本發(fā)明的需要。
[0047]優(yōu)選的，所述銪配合物的合成方法，包括以下步驟：
[0048] A、鄰苯基聯(lián)苯溶解于二氯甲烷中，加入氯化鋁，冷卻至0°C;滴加乙酰氯，滴加完畢 后室溫反應1-2小時，干燥得到固體物I;
[0049] B、將所述固體物I溶解于無水乙醚中，加入甲醇鈉和三氟乙酸乙酯，室溫反應2-3 小時，干燥得到固體物Π ;
[0050] C、將六水合三氯化銪與所述固體物Π 混合均勻，加入無水乙醇溶解，攪拌加入氨 水至pH至7-9，室溫反應1-2小時后，向體系中加入水，過濾，干燥得到固體物ΙΠ ;
[0051] D、取4,7_二苯基-1，10-菲咯啉加熱溶解于乙醇，冷卻后收集重結(jié)晶晶體;取所述 重結(jié)晶晶體與4，7-二苯基-1，10-菲咯啉加入甲苯中，攪拌1-2小時，冷卻至室溫，除甲苯，得 到銪配合物。
[0052]進一步的，所述銪配合物的合成方法，包括以下步驟
[0053] A、將4500-5000重量份的鄰苯基聯(lián)苯溶解于30-50體積份的無水二氯甲烷中，加入 5500-6000重量份的氯化鋁，冷卻至0°C;滴加3500-4500重量份的乙酰氯，滴加完畢后室溫 反應1-2小時，將體系中的有機相用水洗滌三次后，用無水硫酸鈉干燥得到5000-6000重量 份固體物I;
[0054] B、取3000-3500重量份的所述固體物I溶解于30-50體積份的無水乙醚中，加入 1500-2500重量份的甲醇鈉和3000-5000重量份的三氟乙酸乙酯，室溫反應2-3小時，將體系 中的有機相用水洗滌三次后，用無水硫酸鈉干燥得到1000-2000重量份的固體物Π ;
[0055] C、將2800-3200重量份的六水合三氯化銪與6000-6800重量份的所述固體物Π 混 合均勻，加入30-50體積份的無水乙醇溶解，攪拌加入1500-2500體積份的氨水至pH至7-9， 室溫反應1小時后，向體系中加入600-1000體積份的水，過濾收集沉淀，并將沉淀干燥得到 固體物m;
[0056] D、取3000-5000重量份的4,7-二苯基-1，10-菲咯啉加熱溶解于100-150體積份的 乙醇，冷卻后收集重結(jié)晶晶體;取2500-3500重量份的所述重結(jié)晶晶體與800-1200重量份的 4,7_二苯基-1，10-菲咯啉加入200-400體積份的甲苯中，62°C下攪拌1-2小時，冷卻至室溫， 除甲苯，得到銪配合物。
[0057] 優(yōu)選的，所述二甲基噻吩和β_二丁酮的合成方法，包括以下步驟：
[0058] Α、將溴代苯胺溶解在DMF中，加入溴代十四烷和二異丙基乙胺，100°C反應10-14小 時后，向反應液中加入二氯甲烷，重結(jié)晶得N，N-二取代的對溴苯胺；
[0059] B、將所述N，N_二取代的對溴苯胺、鎂條和碘溶解于THF中配成溶液，保持回流條件 下，將溶液滴加到THF中，加液完畢后回流反應1小時，冷卻至0°C，向體系中加入過氧苯甲酸 和THF，室溫下反應2-3小時；向體系中加入鹽酸以水解生成的鹽后，向體系中加入二氯甲 烷，干燥層析分離得到中間體；
[0060] C、將所述中間體溶解于甲苯溶液中，加入氯化鋅和2-巰基乙醇，回流反應3-5小 時，除甲苯層析得到二甲基噻吩和β-二丁酮。
[0061] 進一步的，所述二甲基噻吩和β-二丁酮的合成方法，包括以下步驟：
[0062] Α、將30000-40000重量份的溴代苯胺溶解在100-150體積份的DMF中，加入120000-200000重量份的溴代十四烷和50000-100000重量份的二異丙基乙胺，100°C反應12小時后， 向反應液中加入200-400體積份的二氯甲烷，將體系用水洗滌三次后，加入乙醇重結(jié)晶，得 N，N-二取代的對溴苯胺；
[0063] B、將所述N，N-二取代的對溴苯胺、2500-3500重量份的鎂條和碘溶解于40-60體積 份的THF中配成溶液，并將溶液滴加到80-120體積份的THF中保持回流，加液完畢后回流反 應反應1小時，冷卻至〇°C，向體系中加入10000-15000重量份的過氧苯甲酸和40-60體積份 的THF，室溫下反應2-3小時；向體系中加入摩爾濃度為0.1mol/L鹽酸以水解生成的鹽后，向 體系中加入150-250體積份的二氯甲烷，將體系中的有機相用水洗滌三次后，用無水硫酸鈉 干燥，柱層析分離得到中間體；
[0064] C、將所述中間體溶解于80-120體積份的甲苯溶液中，加入氯化鋅和7000-10000重 量份的2-巰基乙醇，回流反應3-5小時，除甲苯，柱層析得到二甲基噻吩和β-二丁酮。
[0065] 關(guān)于本發(fā)明中出現(xiàn)的英文縮寫及其他物質(zhì)的名稱解釋：
[0066] DMF:富馬酸二甲酯，CAS 號：68-12-2;
[0067] THF;四氫呋喃，CAS號：109-99-9;
[0068] DPP: 4，7-二苯基-1，10-菲咯啉，CAS 號：1662-01-7;
[0069] EDTA:乙二胺四乙酸，CAS號：60-00-4;
[0070] 1，4_ 苯二酚，CAS 號：123-31-9;
[0071] 硼氫化鈉 ，CAS 號：16940-66-2;
[0072] 2-溴-1，1-二乙氧基乙烷，化學式：C6Hi3Br〇2，CAS 號：2032-35-1;
[0073] 甲苯磺酸，CAS 號:98-11-3;
[0074] 1，6-己二胺，CAS號：124-09-4;
[0075] 三氫硼氰化鈉，又名氰基硼氫化鈉，CAS號：25895-60-7;
[0076] 2，5二甲基噻吩，CAS號：638-02-8;
[0077] 鄰苯基聯(lián)苯，C12H1Q，CAS 號：92-52-4;
[0078]乙酰氯，CAS 號：75-36-5;
[0079] 三氟乙酸乙酯；CAS號：383-63-1;
[0080] 對氨基溴化苯，CAS號：106-40-1;
[0081 ]溴代十四烷，CAS 號：112-71-0;
[0082]二異丙基乙胺，CAS 號：7087-68-5;
[0083]本發(fā)明中，所用水為去離子水。
[0084]需要說明的是，本發(fā)明中的重量份和體積份，只是為了表明各物料的比例關(guān)系，并 不具體表示某個數(shù)量值，在本發(fā)明中，所述重量份和體積份有如下對應關(guān)系：當1重量份為 lg時，1體積份為1L。
[0085]本發(fā)明的有益效果為：
[0086] 1、所述醛化葡聚糖是以鹵代縮醛和葡聚糖為原料，經(jīng)取代、水解反應而成，生成的 醛基不易發(fā)生交聯(lián)反應，活性基團醛基密度可控，重現(xiàn)性好，更有利于單抗、蛋白的連接。
[0087] 2、所述包被方法以環(huán)氧乙基微粒為起始原料，代替?zhèn)鹘y(tǒng)的羧基微粒?？梢杂糜袡C 小分子代替氨基化糖，整個包被過程顯得簡單、周期短，更適宜用于工業(yè)化生產(chǎn)。
[0088] 3、所述微球組合物的制備方法，將所述醛化葡聚糖包被在微球表面形成醛基葡聚 糖微球用于生物分子的共價偶聯(lián)，該方法工藝簡單、操作簡便、重復性好。
【具體實施方式】
[0089] 在本發(fā)明中，若非特指，所有的份、百分比均為重量單位，所有的設(shè)備和原料等均 可從市場購得或是本行業(yè)常用的。下述實施例中的方法，如無特別說明，均為本領(lǐng)域的常規(guī) 方法。
[0090] 本發(fā)明提供了一種一種醛基葡聚糖的合成方法、基于所述醛基葡聚糖的包被方法 和微球組合物的制備方法。
[0091] 下面結(jié)合實施例，更具體地說明本發(fā)明的內(nèi)容。應當理解，本發(fā)明的實施并不局限 于下面的實施例，對本發(fā)明所做的任何形式上的變通和/或改變都將落入本發(fā)明保護范圍。 [0092] 實施例1
[0093 ] -種醛基葡聚糖的合成方法，包括以下步驟：
[0094] A、將30g葡聚糖溶解于90ml的水后，氮氣保護下，加入10mg EDTA、10mgl，4-苯二 酸、10mg硼氫化鈉、6g NaOH和60ml甲苯，攪拌回流2小時；
[0095] B、向體系中緩慢滴加2-溴-1，1 -二乙氧基乙烷的甲苯溶液，滴加時間不少于1小 時，2-溴-1，1-二乙氧基乙烷的甲苯溶液為50ml2-溴-1，1-二乙氧基乙烷溶解于200ml甲苯 溶液中制成;滴加完成后，攪拌回流15小時；
[0096] C、冷卻至室溫后，將體系中的有機相用水洗滌三次，每次所用水的體積為15 0 m 1， 合并水相得到水溶液，所述水溶液加入2000ml的甲醇中，抽濾后用乙醇洗滌三次，每次所用 乙醇的體積為240ml，并將洗滌過的沉淀真空干燥，得到33g醛化糖前體沉淀；
[0097] D、將10g所述醛化糖前體沉淀溶于50ml水中，加入甲苯磺酸調(diào)pH至1-2,加熱至80 °(：進行水解，水解2小時后，使用質(zhì)量分數(shù)為40%的NaOH溶液調(diào)至中性，過濾、透析或離心清 洗除去小分子雜質(zhì)，凍干得醛基葡聚糖凍干粉9g。
[0098] 實施例2
[0099 ] -種醛基葡聚糖的合成方法，包括以下步驟：
[0?00] A、將20g葡聚糖溶解于130ml的水后，氮氣保護下，加入5mg EDTA、15mgl，4_苯二 酸、5mg硼氫化鈉、8g NaOH和40ml甲苯，攪拌回流3小時；
[0101] B、向體系中緩慢滴加2-溴-1，1 -二乙氧基乙烷的甲苯溶液，滴加時間不少于1小 時，2-溴-1，1-二乙氧基乙烷的甲苯溶液為40ml2-溴-1，1-二乙氧基乙烷溶解于200ml甲苯 溶液中制成;滴加完成后，攪拌回流12小時；
[0102 ] C、冷卻至室溫后，將體系中的有機相用水洗滌三次，每次所用水的體積為18 0 m 1， 合并水相得到水溶液，所述水溶液加入1500ml的甲醇中，抽濾后用乙醇洗滌三次，每次所 用乙醇的體積為280ml，并將洗滌過的沉淀真空干燥，得到22g醛化糖前體沉淀；
[0103] D、將5g所述醛化糖前體沉淀溶于70ml水中，加入甲苯磺酸調(diào)pH至1-2，加熱至70°C 進行水解，水解3小時后，使用質(zhì)量分數(shù)為30%的NaOH溶液調(diào)至中性，過濾、透析或離心清洗 除去小分子雜質(zhì)，凍干得醛基葡聚糖凍干粉4.5g。
[0104] 實施例3
[0105] -種醛基葡聚糖的合成方法，包括以下步驟：
[0106] A、將40g葡聚糖溶解于50ml的水后，氮氣保護下，加入15mg EDTA、5mgl，4_苯二酸、 15mg硼氫化鈉、4g NaOH和80ml甲苯，攪拌回流1小時；
[0107] B、向體系中緩慢滴加2-溴-1，1 -二乙氧基乙烷的甲苯溶液，滴加時間不少于1小 時，2-溴-1，1-二乙氧基乙烷的甲苯溶液為45ml2-溴-1，1-二乙氧基乙烷溶解于200ml甲苯 溶液中制成;滴加完成后，攪拌回流18小時；
[01 08] C、冷卻至室溫后，將體系中的有機相用水洗滌三次，每次所用水的體積為120ml， 合并水相得到水溶液，所述水溶液加入2500ml的甲醇中，抽濾后用乙醇洗滌三次，每次所用 乙醇的體積為200ml，并將洗滌過的沉淀真空干燥，得到44g醛化糖前體沉淀；
[0109] D、將15g所述醛化糖前體沉淀溶于30ml水中，加入甲苯磺酸調(diào)pH至1-2,加熱至90 °(：進行水解，水解1小時后，使用質(zhì)量分數(shù)為50%的NaOH溶液調(diào)至中性，過濾、透析或離心清 洗除去小分子雜質(zhì)，凍干得醛基葡聚糖凍干粉13.5g。
[0110] 實施例4
[0111] -種基于實施例1所述醛基葡聚糖的包被方法，包括以下步驟：
[0112] A、70°C下，將lg環(huán)氧乙基微球(購自美國Bangs Laboratories，INC)加入20ml質(zhì)量 分數(shù)為10%的1，6-己二胺溶液中，90°C下攪拌反應12小時后，經(jīng)透析或中空纖維管清洗除 去未反應的小分子，得到氨化微球；
[0113] B、取2.5g實施例1中的所述醛基葡聚糖凍干粉溶解于50ml磷酸鹽緩沖液中，所述 磷酸鹽緩沖液的濃度為〇. lmol/L，所述磷酸鹽緩沖液的pH=6.0，加入所述氨化微球，混合 均勻后緩慢滴加三氫硼氰化鈉溶液，所述三氫硼氰化鈉溶液為〇.4g三氫硼氰化鈉溶于 2.5ml的0. lmol/L磷酸鹽緩沖液中得到，37°C下反應12小時；
[0114] C、離心清洗除去未反應的小分子并定容成50ml，得到0.9g包被有醛基葡聚糖的微 球。
[0115] 實施例5
[0116] -種基于實施例2所述醛基葡聚糖的包被方法，包括以下步驟：
[0117] A、70°C下，將15g環(huán)氧乙基微球(購自美國Bangs Laboratories，INC)加入10ml質(zhì) 量分數(shù)為10%的1，6-己二胺溶液中，90°C下攪拌反應16小時后，經(jīng)透析或中空纖維管清洗 除去未反應的小分子，得到氨化微球；
[0118] B、取2g實施例2中的所述醛基葡聚糖凍干粉溶解于60ml磷酸鹽緩沖液中，所述磷 酸鹽緩沖液的濃度為〇. lmol/L，所述磷酸鹽緩沖液的pH = 6.0，加入所述氨化微球，混合均 勻后緩慢滴加三氫硼氰化鈉溶液，所述三氫硼氰化鈉溶液為〇. 4g三氫硼氰化鈉溶于2.5ml 的0. lmol/L磷酸鹽緩沖液中得到，37°C下反應8小時；
[0119] C、離心清洗除去未反應的小分子并定容成50ml，得到1.35g包被有醛基葡聚糖的 微球。
[0120] 實施例6
[0121 ] -種基于實施例3所述醛基葡聚糖的包被方法，包括以下步驟：
[0122] A、70°C下，將0 · 5g環(huán)氧乙基微球(購自美國Bangs Laboratories，INC)加入30ml質(zhì) 量分數(shù)為10%的1，6-己二胺溶液中，90°C下攪拌反應8小時后，經(jīng)透析或中空纖維管清洗除 去未反應的小分子，得到氨化微球；
[0123] B、取3g實施例3中的所述醛基葡聚糖凍干粉溶解于40ml磷酸鹽緩沖液中，所述磷 酸鹽緩沖液的濃度為〇. lmol/L，所述磷酸鹽緩沖液的pH = 6.0，加入所述氨化微球，混合均 勻后緩慢滴加三氫硼氰化鈉溶液，所述三氫硼氰化鈉溶液為〇. 4g三氫硼氰化鈉溶于2.5ml 的0. lmol/L磷酸鹽緩沖液中得到，37°C下反應16小時；
[0124] C、離心清洗除去未反應的小分子并定容成50ml，得到0.45g包被有醛基葡聚糖的 微球。
[0125] 實施例7
[0126] -種微球組合物的制備方法，包括以下步驟：
[0127] A、受氧微球的制備：用專利號為US 5780646的實施方式中的方法將200mg二甲基 噻吩、β-二丁酮和l〇〇mg稀土配合物放入微球(購自美國Bangs Laboratories，INC)中，形成 受氧微球;所述稀土配合物為銪配合物；
[0128] B、供氧微球的制備：用專利號為US 5780646的實施方式中的方法，將200mg光敏劑 放入微球中，形成供氧微球;所述光敏劑為根據(jù)美國專利US 5709994公開的可釋放單線態(tài) 氧的葉綠素 A;
[0129] C、醛基葡聚糖包被微球:70°C下，將lg的受氧微球或供氧微球加入20ml的質(zhì)量分 數(shù)為10%的1，6_己二胺溶液中，90°C下攪拌反應12小時后，經(jīng)透析或中空纖維管清洗除去 未反應的小分子，得到氨化微球;將2.5g實施例1中的醛基葡聚糖溶解于50ml的磷酸鹽緩沖 液中，所述磷酸鹽緩沖液的濃度為〇. lmol/L，所述磷酸鹽緩沖液的pH=6.0,加入所述氨化 微球，混合均勻后滴加三氫硼氰化鈉溶液，所述三氫硼氰化鈉溶液為0.4g的三氫硼氰化鈉 溶于2.5ml的0. lmol/L磷酸鹽緩沖液中得到，37°C下反應12小時;離心清洗除去未反應的小 分子并定容成50ml，得到包被有醛基葡聚糖的受氧微球或供氧微球；
[0130] D、所述受氧微球和供氧微球組合為微球組合物。
[0131] 實施例8
[0132] -種微球組合物的制備方法，包括以下步驟：
[0133] A、受氧微球的制備：用專利號為US 5780646的實施方式中的方法將200mg二甲基 噻吩、β-二丁酮和l〇〇mg稀土配合物放入微球(購自美國Bangs Laboratories，INC)中，形成 受氧微球;所述稀土配合物為銪配合物；
[0134] B、供氧微球的制備：用專利號為US 5780646的實施方式中的方法，將200mg光敏劑 放入微球中，形成供氧微球;所述光敏劑為根據(jù)美國專利US 5709994公開的光氧染料物質(zhì) 亞甲基藍；
[0135] C、醛基葡聚糖包被微球:70°C下，將0.5g的受氧微球或供氧微球加入30ml的質(zhì)量 分數(shù)為10%的1，6_己二胺溶液中，90°C下攪拌反應8小時后，經(jīng)透析或中空纖維管清洗除去 未反應的小分子，得到氨化微球;將3g實施例2中的醛基葡聚糖溶解于40ml的磷酸鹽緩沖液 中，所述磷酸鹽緩沖液的濃度為〇. lmol/L，所述磷酸鹽緩沖液的pH = 6.0，加入所述氨化微 球，混合均勻后滴加三氫硼氰化鈉溶液，所述三氫硼氰化鈉溶液為0.4g的三氫硼氰化鈉溶 于2.5ml的0. lmol/L磷酸鹽緩沖液中得到，37°C下反應16小時;離心清洗除去未反應的小分 子并定容成50ml，得到包被有醛基葡聚糖的受氧微球或供氧微球；
[0136] D、所述受氧微球和供氧微球組合為微球組合物。
[0137] 實施例9
[0138] -種微球組合物的制備方法，包括以下步驟：
[0139] A、受氧微球的制備：用專利號為US 5780646的實施方式中的方法將200mg二甲基 噻吩、β-二丁酮和l〇〇mg稀土配合物放入微球(購自美國Bangs Laboratories，INC)中，形成 受氧微球;所述稀土配合物為鋱配合物；
[0140] B、供氧微球的制備：用專利號為US 5780646的實施方式中的方法，將200mg光敏劑 放入微球中，形成供氧微球;所述光敏劑為根據(jù)美國專利US 5709994公開的光氧染料物質(zhì) 玫瑰紅；
[0141] C、醛基葡聚糖包被微球:70°C下，將1.5g的受氧微球或供氧微球加入10ml的質(zhì)量 分數(shù)為10%的1，6_己二胺溶液中，90°C下攪拌反應16小時后，經(jīng)透析或中空纖維管清洗除 去未反應的小分子，得到氨化微球;將2g實施例3中的醛基葡聚糖溶解于60ml的磷酸鹽緩沖 液中，所述磷酸鹽緩沖液的濃度為〇.lmol/L，所述磷酸鹽緩沖液的pH=6.0,加入所述氨化 微球，混合均勻后滴加三氫硼氰化鈉溶液，所述三氫硼氰化鈉溶液為0.4g的三氫硼氰化鈉 溶于2.5ml的0. lmol/L磷酸鹽緩沖液中得到，37°C下反應8小時；離心清洗除去未反應的小 分子并定容成50ml，得到包被有醛基葡聚糖的受氧微球或供氧微球；
[0142] D、所述受氧微球和供氧微球組合為微球組合物。
[0143] 實施例10
[0144] -種微球組合物的制備方法，包括以下步驟：
[0145] A、銪配合物的合成方法:將4.8g的鄰苯基聯(lián)苯溶解于40ml的無水二氯甲烷中，加 入5.88g的氯化鋁，冷卻至0°C ;滴加4g的乙酰氯，滴加完畢后室溫反應1.5小時，將體系中的 有機相用水洗滌三次后，用無水硫酸鈉干燥得到5.2g固體物I;取3.2g所述固體物I溶解于 40ml的無水乙醚中，加入2g甲醇鈉和4g三氟乙酸乙酯，室溫反應2.5小時，將體系中的有機 相用水洗滌三次后，用無水硫酸鈉干燥得到1.6g固體物Π ;將2.932g六水合三氯化銪與 6.39g所述固體物Π 混合均勾，加入40ml無水乙醇溶解，攪拌加入2ml氨水至pH至8，室溫反 應1小時后，向體系中加入800ml水，過濾收集沉淀，并將沉淀干燥得到9g固體物ΙΠ ;取4.0g 4,7_二苯基-1，10-菲咯啉(DPP)加熱溶解于120ml乙醇，冷卻后收集重結(jié)晶晶體;取3.014g 所述重結(jié)晶晶體與〇.997g 4,7_二苯基-1，10-菲咯啉加入300ml甲苯中，62°C下攪拌1.5小 時，冷卻至室溫，除甲苯，得到銪配合物。
[0146] B、二甲基噻吩和β-二丁酮的合成方法:將34.4g溴代苯胺溶解在125ml DMF中，加 入0.6mol溴代十四烷和0.6mol二異丙基乙胺，100°C反應12小時后，向反應液中加入300ml 的二氯甲烷，將體系用水洗滌三次后，加入乙醇重結(jié)晶，得N，N-二取代的對溴苯胺;將所述 N，N-二取代的對溴苯胺、3g鎂條和碘溶解于50ml THF中配成溶液，保持回流條件下，將溶液 滴加到l〇〇ml THF中，加液完畢后回流反應1小時，冷卻至0°C，向體系中加入0. lmol過氧苯 甲酸和50ml THF，室溫下反應2.5小時；向體系中緩慢加入摩爾濃度為0. lmol/L鹽酸以水解 生成的鹽后，向體系中加入200ml二氯甲烷，將體系中的有機相用水洗滌三次后，用無水硫 酸鈉干燥，柱層析分離得到中間體;將所述中間體溶解于l〇〇ml的甲苯溶液中，加入氯化鋅 和O.llmol 2-巰基乙醇，回流反應4小時，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去甲苯，柱層析得到二甲基噻吩和 二丁酮。
[0147] C、受氧微球的制備：用專利號為US 5780646的實施方式中的方法將200mg所述二 甲基噻吩、β-二丁酮和l〇〇mg所述銪配合物放入微球(購自美國Bangs Laboratories，INC) 中，形成受氧微球；
[0148] D、供氧微球的制備：用專利號為US 5780646的實施方式中的方法，將200mg光敏劑 放入微球中，形成供氧微球;所述光敏劑為根據(jù)美國專利US 5709994公開的可釋放單線態(tài) 氧的葉綠素 A;
[0149] E、醛基葡聚糖包被微球:70 °C下，將lg的受氧微球或供氧微球加入20ml的質(zhì)量分 數(shù)為10%的1，6_己二胺溶液中，90°C下攪拌反應12小時后，經(jīng)透析或中空纖維管清洗除去 未反應的小分子，得到氨化微球;將2.5g實施例1中的醛基葡聚糖溶解于50ml的磷酸鹽緩沖 液中，所述磷酸鹽緩沖液的濃度為〇.lmol/L，所述磷酸鹽緩沖液的pH=6.0,加入所述氨化 微球，混合均勻后滴加三氫硼氰化鈉溶液，所述三氫硼氰化鈉溶液為0.4g的三氫硼氰化鈉 溶于2.5ml的0. lmol/L磷酸鹽緩沖液中得到，37°C下反應12小時;離心清洗除去未反應的小 分子并定容成50ml，得到包被有醛基葡聚糖的受氧微球或供氧微球；
[0150] F、所述受氧微球和供氧微球組合為微球組合物。
[0151] 實施例11
[0152] -種微球組合物的制備方法，包括以下步驟：
[0153] C、銪配合物的合成方法:將4.5g的鄰苯基聯(lián)苯溶解于50ml的無水二氯甲烷中，加 入5.50g的氯化鋁，冷卻至0°C ;滴加4.5g的乙酰氯，滴加完畢后室溫反應1小時，將體系中的 有機相用水洗滌三次后，用無水硫酸鈉干燥得到5.0g固體物I;取3.5g所述固體物I溶解于 30ml的無水乙醚中，加入2.5g甲醇鈉和3g三氟乙酸乙酯，室溫反應3小時，將體系中的有機 相用水洗滌三次后，用無水硫酸鈉干燥得到2.0g固體物Π ;將2.800g六水合三氯化銪與 6.00g所述固體物Π 混合均勾，加入50ml無水乙醇溶解，攪拌加入1.5ml氨水至pH至7，室溫 反應1小時后，向體系中加入1000ml水，過濾收集沉淀，并將沉淀干燥得到10g固體物ΙΠ ;取 3.0g 4,7_二苯基-1，10-菲咯啉(DPP)加熱溶解于150ml乙醇，冷卻后收集重結(jié)晶晶體；取 2.500g所述重結(jié)晶晶體與1.200g 4，7-二苯基-1，10-菲咯啉加入200ml甲苯中，62°C下攪拌 2小時，冷卻至室溫，除甲苯，得到銪配合物。
[0154] D、二甲基噻吩和β-二丁酮的合成方法:將30.0g溴代苯胺溶解在150ml DMF中，加 入0.45mol溴代十四烷和0.8mol二異丙基乙胺，100°C反應12小時后，向反應液中加入200ml 的二氯甲烷，將體系用水洗滌三次后，加入乙醇重結(jié)晶，得N，N-二取代的對溴苯胺;將所述 N，N-二取代的對溴苯胺、3.5g鎂條和碘溶解于40ml THF中配成溶液，保持回流條件下，將溶 液滴加到120ml THF中，加液完畢后回流反應1小時，冷卻至0°C，向體系中加入0.8mol過氧 苯甲酸和60ml THF，室溫下反應2小時；向體系中緩慢加入摩爾濃度為0. lmol/L鹽酸以水解 生成的鹽后，向體系中加入250ml二氯甲烷，將體系中的有機相用水洗滌三次后，用無水硫 酸鈉干燥，柱層析分離得到中間體;將所述中間體溶解于80ml的甲苯溶液中，加入氯化鋅和 0.13mol 2-巰基乙醇，回流反應3小時，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去甲苯，柱層析得到二甲基噻吩和β-二丁酮。
[0155] C、受氧微球的制備：用專利號為US 5780646的實施方式中的方法將200mg二甲基 噻吩、β-二丁酮和1 〇〇mg所述銪配合物放入微球(購自美國Bangs Laboratories，INC)中，形 成受氧微球；
[0156] D、供氧微球的制備：用專利號為US 5780646的實施方式中的方法，將200mg光敏劑 放入微球中，形成供氧微球;所述光敏劑為根據(jù)美國專利US 5709994公開的光氧染料物質(zhì) 亞甲基藍；
[0157] E、醛基葡聚糖包被微球:70°C下，將0.5g的受氧微球或供氧微球加入30ml的質(zhì)量 分數(shù)為10%的1，6_己二胺溶液中，90°C下攪拌反應8小時后，經(jīng)透析或中空纖維管清洗除去 未反應的小分子，得到氨化微球;將3g實施例2中的醛基葡聚糖溶解于40ml的磷酸鹽緩沖液 中，所述磷酸鹽緩沖液的濃度為〇. lmol/L，所述磷酸鹽緩沖液的pH = 6.0，加入所述氨化微 球，混合均勻后滴加三氫硼氰化鈉溶液，所述三氫硼氰化鈉溶液為0.4g的三氫硼氰化鈉溶 于2.5ml的0. lmol/L磷酸鹽緩沖液中得到，37°C下反應16小時;離心清洗除去未反應的小分 子并定容成50ml，得到包被有醛基葡聚糖的受氧微球或供氧微球；
[0158] F、所述受氧微球和供氧微球組合為微球組合物。
[0159] 實施例12
[0160] -種微球組合物的制備方法，包括以下步驟：
[0161] E、銪配合物的合成方法:將5.0g的鄰苯基聯(lián)苯溶解于30ml的無水二氯甲烷中，加 入6.00g的氯化鋁，冷卻至0°C ;滴加3.5g的乙酰氯，滴加完畢后室溫反應2小時，將體系中的 有機相用水洗滌三次后，用無水硫酸鈉干燥得到6.0g固體物I;取3.0g所述固體物I溶解于 50ml的無水乙醚中，加入1.5g甲醇鈉和5g三氟乙酸乙酯，室溫反應2小時，將體系中的有機 相用水洗滌三次后，用無水硫酸鈉干燥得到1 .〇g固體物Π ;將3.200g六水合三氯化銪與 6.80g所述固體物Π 混合均勾，加入30ml無水乙醇溶解，攪拌加入2.5ml氨水至pH至9，室溫 反應1小時后，向體系中加入600ml水，過濾收集沉淀，并將沉淀干燥得到1 lg固體物m;取 5.0g 4,7_二苯基-1，10-菲咯啉(DPP)加熱溶解于100ml乙醇，冷卻后收集重結(jié)晶晶體；取 3.500g所述重結(jié)晶晶體與0.800g 4，7_二苯基-1，10-菲咯啉加入400ml甲苯中，62°C下攪拌 1小時，冷卻至室溫，除甲苯，得到銪配合物。
[0162] F、二甲基噻吩和β-二丁酮的合成方法:將40.0g溴代苯胺溶解在100ml DMF中，加 入0.8mol溴代十四烷和0.45mol二異丙基乙胺，100°C反應12小時后，向反應液中加入400ml 的二氯甲烷，將體系用水洗滌三次后，加入乙醇重結(jié)晶，得N，N-二取代的對溴苯胺;將所述 N，N-二取代的對溴苯胺、2.5g鎂條和碘溶解于60ml THF中配成溶液，保持回流條件下，將溶 液滴加到80ml THF中，加液完畢后回流反應1小時，冷卻至0°C，向體系中加入0.12mol過氧 苯甲酸和40ml THF，室溫下反應3小時；向體系中緩慢加入摩爾濃度為0. lmol/L鹽酸以水解 生成的鹽后，向體系中加入150ml二氯甲烷，將體系中的有機相用水洗滌三次后，用無水硫 酸鈉干燥，柱層析分離得到中間體;將所述中間體溶解于120ml的甲苯溶液中，加入氯化鋅 和0.09mol 2-巰基乙醇，回流反應5小時，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去甲苯，柱層析得到二甲基噻吩和 二丁酮。
[0163] C、受氧微球的制備：用專利號為US 5780646的實施方式中的方法將200mg二甲基 噻吩、β-二丁酮和1 〇〇mg所述銪配合物放入微球(購自美國Bangs Laboratories，INC)中，形 成受氧微球；
[0164] D、供氧微球的制備：用專利號為US 5780646的實施方式中的方法，將200mg光敏劑 放入微球中，形成供氧微球;所述光敏劑為根據(jù)美國專利US 5709994公開的光氧染料物質(zhì) 酞菁化合物；
[0165] E、醛基葡聚糖包被微球:70°C下，將1.5g的受氧微球或供氧微球加入10ml的質(zhì)量 分數(shù)為10%的1，6_己二胺溶液中，90°C下攪拌反應16小時后，經(jīng)透析或中空纖維管清洗除 去未反應的小分子，得到氨化微球;將2g實施例3中的醛基葡聚糖溶解于60ml的磷酸鹽緩沖 液中，所述磷酸鹽緩沖液的濃度為〇.lmol/L，所述磷酸鹽緩沖液的pH=6.0,加入所述氨化 微球，混合均勻后滴加三氫硼氰化鈉溶液，所述三氫硼氰化鈉溶液為0.4g的三氫硼氰化鈉 溶于2.5ml的0. lmol/L磷酸鹽緩沖液中得到，37°C下反應8小時；離心清洗除去未反應的小 分子并定容成50ml，得到包被有醛基葡聚糖的受氧微球或供氧微球；
[0166] F、所述受氧微球和供氧微球組合為微球組合物。
[0167] 最后所應說明的是，以上實施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參 照較佳實施例對本發(fā)明進行了詳細說明，所應理解的是，以上所述僅為本發(fā)明的具體實施 方式而已，并不用于限定本發(fā)明的保護范圍，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所做的任何修 改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項】
1. 一種醛基葡聚糖的合成方法，其特征在于，包括以下步驟： A、 將葡聚糖溶解于水后，惰性氣體保護下，加入EDTA、1，4-苯二酚、硼氫化鈉、NaOH和甲 苯，攪拌回流1-3小時； B、 向體系中滴加2-溴-I，1-二乙氧基乙烷溶液，滴加時間不少于1小時;滴加完成后，攪 拌回流12-18小時； C、 將體系中的有機相用水洗滌，得到水溶液，所述水溶液加入甲醇中，得到醛化糖前體 沉淀； D、 將所述醛化糖前體沉淀溶于水中，加入甲苯磺酸調(diào)pH至1-2,加熱水解后，使用NaOH 溶液調(diào)至中性，以沉淀的形式得到醛基葡聚糖。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的醛基葡聚糖的合成方法，其特征在于，包括以下步驟： A、 將20000-40000重量份的葡聚糖溶解于50-130體積份的水后，氮氣保護下，加入5-15 重量份的EDTA、5-15重量份的1，4_苯二酚、5-15重量份的硼氫化鈉、4000-8000重量份的 NaOH和40-80體積份的甲苯，攪拌回流1-3小時； B、 向體系中滴加2-溴-I，1-二乙氧基乙烷的甲苯溶液，滴加時間不少于1小時，2-溴-1， 1-二乙氧基乙烷與甲苯的體積比為1:4-5;滴加完成后，攪拌回流12-18小時； C、 冷卻至室溫后，將體系中的有機相用水洗滌三次，每次所用水的體積為120-180體積 份，合并水相得到水溶液，所述水溶液加入1500-2500體積份的甲醇中，抽濾后用乙醇洗滌 三次，每次所用乙醇的體積為200-280體積份，并將洗滌過的沉淀真空干燥，得到醛化糖前 體沉淀； D、 將5000-15000重量份的所述醛化糖前體沉淀溶于30-70體積份的水中，加入甲苯磺 酸調(diào)pH至1-2，加熱至70-90°C進行水解，水解1-3小時后，使用質(zhì)量分數(shù)為30-50 %的NaOH溶 液調(diào)至中性，過濾、除雜后，以沉淀的形式得到醛基葡聚糖。3. -種基于權(quán)利要求1或2得到的所述醛基葡聚糖合成方法的包被方法，其特征在于， 包括以下步驟： A、 將微球加入1，6-己二胺溶液中，反應8-16小時，得到氨化微球； B、 將所述醛基葡聚糖溶解于磷酸鹽緩沖液中，加入所述氨化微球，混合均勻后滴加三 氫硼氰化鈉溶液，反應8-16小時； C、 離心清洗，得到包被有醛基葡聚糖的微球。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的包被方法，其特征在于，包括以下步驟： A、 70°C下，將500-1500重量份的環(huán)氧乙基微球加入10-30體積份的質(zhì)量分數(shù)為10%的 1，6_己二胺溶液中，90°C下攪拌反應8-16小時后，經(jīng)透析或中空纖維管清洗除去未反應的 小分子，得到氨化微球； B、 將2000-3000重量份的所述醛基葡聚糖溶解于40-60體積份的磷酸鹽緩沖液中，所述 磷酸鹽緩沖液的濃度為〇. Imo 1/L，所述磷酸鹽緩沖液的pH=6.0，加入所述氨化微球，混合 均勻后滴加三氫硼氰化鈉溶液，所述三氫硼氰化鈉溶液為400重量份的三氫硼氰化鈉溶于 2.5體積份的0. lmol/L磷酸鹽緩沖液中得到，37°C下反應8-16小時； C、 離心清洗除去未反應的小分子，得到包被有醛基葡聚糖的微球。5. -種使用權(quán)利要求3所述包被方法的微球組合物的制備方法，其特征在于，包括以下 步驟： A、 受氧微球的制備：將二甲基噻吩、β-二丁酮和稀土配合物放入微球中，形成受氧微 球； B、 供氧微球的制備:將光敏劑放入微球中，形成供氧微球； C、 醛基葡聚糖包被微球:將受氧微球或供氧微球加入1，6-己二胺溶液中，反應8-16小 時，得到氨化微球;將所述醛基葡聚糖溶解于磷酸鹽緩沖液中，加入所述氨化微球，混合均 勻后滴加三氫硼氰化鈉溶液，反應8-16小時;離心清洗，得到包被有醛基葡聚糖的受氧微球 或供氧微球； D、 所述受氧微球和供氧微球組合為微球組合物。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的微球組合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： A、 受氧微球的制備：將二甲基噻吩、β-二丁酮和稀土配合物放入微球中，形成受氧微 球； B、 供氧微球的制備:將光敏劑放入微球中，形成供氧微球； C、 醛基葡聚糖包被微球:70°C下，將500-1500重量份的受氧微球或供氧微球加入10-30 體積份的質(zhì)量分數(shù)為10%的1，6_己二胺溶液中，90°C下攪拌反應8-16小時后，經(jīng)透析或中 空纖維管清洗除去未反應的小分子，得到氨化微球;將2000-3000重量份的所述醛基葡聚糖 溶解于40-60體積份的磷酸鹽緩沖液中，所述磷酸鹽緩沖液的濃度為0. lmol/L，所述磷酸鹽 緩沖液的PH = 6.0，加入所述氨化微球，混合均勻后滴加三氫硼氰化鈉溶液，所述三氫硼氰 化鈉溶液為400重量份的三氫硼氰化鈉溶于2.5體積份的0. lmol/L磷酸鹽緩沖液中得到，37 °C下反應8-16小時；離心清洗除去未反應的小分子，得到包被有醛基葡聚糖的受氧微球或 供氧微球； D、 所述受氧微球和供氧微球組合為微球組合物。7. 根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的微球組合物的制備方法，其特征在于，所述稀土配合物為 銪配合物或鋱配合物;所述光敏劑為亞甲基藍、玫瑰紅、酞菁化合物和葉綠素 A中的一種或 組合。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的微球組合物的制備方法，其特征在于，所述銪配合物的合成方 法包括以下步驟： A、 鄰苯基聯(lián)苯溶解于二氯甲烷中，加入氯化鋁，冷卻至0°C ;滴加乙酰氯，滴加完畢后室 溫反應1-2小時，干燥得到固體物I; B、 將所述固體物I溶解于無水乙醚中，加入甲醇鈉和三氟乙酸乙酯，室溫反應2-3小時， 干燥得到固體物Π ; C、 將六水合三氯化銪與所述固體物Π 混合均勻，加入無水乙醇溶解，攪拌加入氨水至 pH至7-9，室溫反應1-2小時后，向體系中加入水，過濾，干燥得到固體物ΙΠ ; D、 取4,7_二苯基-1，10-菲咯啉加熱溶解于乙醇，冷卻后收集重結(jié)晶晶體;取所述重結(jié) 晶晶體與4，7-二苯基-1，10-菲咯啉加入甲苯中，攪拌1-2小時，冷卻至室溫，除甲苯，得到銪 配合物。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的微球組合物的制備方法，其特征在于，所述銪配合物的合成方 法包括以下步驟 A、將4500-5000重量份的鄰苯基聯(lián)苯溶解于30-50體積份的無水二氯甲烷中，加入 5500-6000重量份的氯化鋁，冷卻至0°C;滴加3500-4500重量份的乙酰氯，滴加完畢后室溫 反應1-2小時，將體系中的有機相用水洗滌三次后，用無水硫酸鈉干燥得到5000-6000重量 份固體物I; B、 取3000-3500重量份的所述固體物I溶解于30-50體積份的無水乙醚中，加入1500-2500重量份的甲醇鈉和3000-5000重量份的三氟乙酸乙酯，室溫反應2-3小時，將體系中的 有機相用水洗滌三次后，用無水硫酸鈉干燥得到1000-2000重量份的固體物Π ; C、 將2800-3200重量份的六水合三氯化銪與6000-6800重量份的所述固體物Π 混合均 勻，加入30-50體積份的無水乙醇溶解，攪拌加入1500-2500體積份的氨水至pH至7-9,室溫 反應1小時后，向體系中加入600-1000體積份的水，過濾收集沉淀，并將沉淀干燥得到固體 物m; D、 取3000-5000重量份的4,7_二苯基-1，10-菲咯啉加熱溶解于100-150體積份的乙醇， 冷卻后收集重結(jié)晶晶體;取2500-3500重量份的所述重結(jié)晶晶體與800-1200重量份的4,7_ 二苯基-1，10-菲咯啉加入200-400體積份的甲苯中，62 °C下攪拌1-2小時，冷卻至室溫，除甲 苯，得到銪配合物。10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的微球組合物的制備方法，其特征在于，所述二甲基噻吩和β-二丁酮的合成方法包括以下步驟： Α、將溴代苯胺溶解在DMF中，加入溴代十四烷和二異丙基乙胺，100°C反應10-14小時 后，向反應液中加入二氯甲烷，重結(jié)晶得N，N-二取代對溴苯胺； B、 將所述N，N-二取代的對溴苯胺、鎂條和碘溶解于THF中配成溶液，保持回流條件下， 將溶液滴加到THF中，加液完畢后回流反應1小時，冷卻至0 °C，向體系中加入過氧苯甲酸和 THF，室溫下反應2-3小時；向體系中加入鹽酸以水解生成的鹽后，向體系中加入二氯甲烷， 干燥層析分離得到中間體； C、 將所述中間體溶解于甲苯溶液中，加入氯化鋅和2-巰基乙醇，回流反應3-5小時，除 甲苯層析得到二甲基噻吩和二丁酮。
【文檔編號】C08L25/06GK105949343SQ201610289196
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年5月4日
【發(fā)明人】包德泉
【申請人】成都愛興生物科技有限公司