富馬酸酮替芬的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了富馬酸酮替芬的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用，本發(fā)明提供的富馬酸酮替芬的藥物組合物中含有富馬酸酮替芬和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，富馬酸酮替芬、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)高泌乳素血癥具有治療作用；富馬酸酮替芬和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)高泌乳素血癥的治療效果顯著提高，可以開發(fā)成治療高泌乳素血癥的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【專利說明】
富馬酸酮替芬的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及富馬酸酮替芬的新用途，具體涉及富馬酸酮替芬 的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 富馬酸酮替芬兼有組胺H1受體拮抗作用和抑制過敏反應(yīng)介質(zhì)釋放作用，不僅抗過 敏作用較強(qiáng)，且藥效持續(xù)時(shí)間較長，故對(duì)預(yù)防各種支氣管哮喘發(fā)作及外源性哮喘的療效比 對(duì)內(nèi)源性哮喘更佳。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種富馬酸酮替芬的藥物組合物，該藥物組合物中含有富 馬酸酮替芬和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，富馬酸酮替芬和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療高泌乳 素血癥。
[0004] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0005] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0006]
[0007] -種富馬酸酮替芬的藥物組合物，包括富馬酸酮替芬、如權(quán)利要求1所述的化合物 (I)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0008] 進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0009] 進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0010] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將華山參粉碎，用85~95%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃 取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇萃取物 用大孔樹脂除雜，先用8 %乙醇洗脫10個(gè)柱體積，再用70 %乙醇洗脫12個(gè)柱體積，收集70 % 洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠 分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d) 步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇 梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積 百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到 化合物(I)。
[0011] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用90%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0012] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為AB-8型大孔吸附樹脂。
[0013]進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制備治療高泌乳素血癥的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 上述富馬酸酮替芬的藥物組合物在制備治療高泌乳素血癥的藥物中的應(yīng)用。
[0016] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):本發(fā)明提供的富馬酸酮替芬的藥物組合物中含有富馬酸酮替芬和 一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，富馬酸酮替芬和該天然產(chǎn)物單獨(dú)作用時(shí)，具有治療高泌乳素血 癥作用;二者聯(lián)合作用時(shí)，治療高泌乳素血癥效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療高泌乳素血 癥的藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。
[0018] 實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0019] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0020] 分離方法：（a)將華山參(2kg)粉碎，用90%乙醇熱回流提取(20LX 3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯（4L X 3次）和水飽和的正丁醇 (4LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 正丁醇萃取物用AB-8型大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗脫12 個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫 濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1 (8個(gè)柱體積）、20:1 (8個(gè)柱體積）、10:1 (8個(gè)柱 體積)和5:1(10個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4用 正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1(8個(gè)柱體積）、5:1(10個(gè)柱體積)和2:1(5個(gè)柱體 積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個(gè)柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)(純度大于98% )。
[0021] 結(jié)構(gòu)確證:冊431-]\^顯示[]\?1]+為111/2 263.1209，結(jié)合核磁特征可得分子式為 C15H18〇4,不飽和度為 7。核磁共振氫譜數(shù)據(jù) SH(ppm，CD2Cl2,500MHz):H-la(2.14，dd，J=16.0， 13.5Hz)，H-lb(2.85,dd，J=16.0，3·7Ηζ)，Η-4(7·26,s)，H-5(2.74,d，J=10.6Hz)，H-8 (3.23，d，J = 10.3Hz)，H-9(1.55，m)，H-10(1.77，m)，H-12a(5.23，t，J = 2.0Hz)，H-12a (5.36，t，J = 2.0Hz)，H-13a(4.32，dd，J=13.4,2.0Hz)，H-13b(4.65，dd，J=13.4,2.0Hz)， !1-14(1.12，(1，了 = 6.4他），!1-15(1.84,8);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)6。（卯111，〇)2(：1 2，1251抱）：42.5 (CH2d-C)，199.3(C，2-C)，136.5(C，3-C)，145.7(CH，4-C)，47.5(CH，5-C)，73.4(C，6-C)， 103.7(C，7-C)，73.4(CH，8-C)，42.4(CH，9-C)，40.5(CH，10-C)，146.7(C，11-C)，112.7(CH2， 12-C)，69.3(CH2，13-C)，15.5(CH3，14-C)，16.6(CH3，15-C)<JR 光譜（1675cm-1)以及紫外吸 收波長(238nm)表明該化合物含有一個(gè)α，β-不飽和酮羰基。氫譜顯示該化合物含有一個(gè)乙 烯甲基質(zhì)子信號(hào)[知1.84(3!1，8，16-15)]，一個(gè)雙峰甲基信號(hào)％1.12(3!1，(1，1 = 6.4他，16-14)]，一組環(huán)外雙鍵信號(hào)[δH5·23(lH，t，J = 2·0Hz，H-12a)和5·36(lH，t，J = 2·0Hz，H-l2b)]，一個(gè)連氧亞甲基質(zhì)子信號(hào)[δH4·32(lH，dd，J=13·4,2·0Hz，H-13a)和4·65(lH，dd，J =13.4,2.0抱，!1-1313)]，一個(gè)烯屬次甲基質(zhì)子信號(hào)％7.26(1!1，8，!1-4)]以及一個(gè)連氧次甲 基質(zhì)子信號(hào)[6 113.23(1!1，(1，1=10.3他，!1-8)]。該化合物的碳譜顯示15個(gè)碳信號(hào)，其中有兩 組雙鍵碳信號(hào)，一個(gè)羰基碳信號(hào)，一個(gè)半縮酮碳信號(hào)以及三個(gè)連氧碳信號(hào)。綜合高分辨質(zhì)譜 和核磁數(shù)據(jù)顯示，該化合物可能為一個(gè)倍半萜類化合物。查閱文獻(xiàn)可知，該化合物和已知化 合物L(fēng)yophyllone Α具有相似的結(jié)構(gòu)。比較兩者核磁數(shù)據(jù)可知，相較于已知化合物，新化合 物中C-6和C-7位的碳信號(hào)向高場位移，同時(shí)新化合物中多出了一個(gè)不飽和度。故而，猜測該 化合物還含有一個(gè)額外的環(huán)。比較新化合物和已知化合物的核磁數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)，C-6和C-7 位的碳信號(hào)均向高場位移，結(jié)合高分辨數(shù)據(jù)，可以確認(rèn)該化合物在C-6和C-7之間存在一個(gè) 三元氧環(huán)。N0ESY譜中，H-10與Me-14，H-5與H-9以及H-8與Me-14的相關(guān)性說明8-OH為α構(gòu)型， Η-10與Me-14為β構(gòu)型。同時(shí)，Ha-12與Η-10以及Ha-13與Η-8的相關(guān)性說明五元內(nèi)酯環(huán)與六元 環(huán)是順式稠合的，C-6和C-7之間的三元氧環(huán)是α朝向的。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和N0ESY譜， 以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD 試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。
[0022] 該化合物化學(xué)式及碳原子編號(hào)如下：
[0023]
Q
[0024] 實(shí)施例2:藥理作用
[0025]本實(shí)施例使用背部皮下注射鹽酸甲氧氯普胺注射液制備高泌乳素血癥(HPRL)大 鼠模型，觀察藥物降低血清泌乳素(PRL)，升高雌二醇(Ε2)、孕酮(Ρ)水平等方面的抗高泌乳 素血癥作用。
[0026] 1、材料與方法
[0027] 1.1動(dòng)物
[0028] 雌性未孕Wi star大鼠60只，SPF級(jí)，體質(zhì)量200~220g，購于湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中 心。
[0029] 1.2試劑與樣品
[0030] 富馬酸酮替芬購自中國藥品生物制品檢定所。化合物（I)自制，制備方法見實(shí)施例 1。鹽酸甲氧氯普胺注射液(滅吐靈，徐州萊恩藥業(yè)有限公司，規(guī)格lmL:10mg);甲磺酸溴隱亭 (Switzerland，2.5mg/片，研碎后用蒸餾水溶解為0.045mg/mL的水溶液，使用時(shí)充分搖勻）。 E2、P、PRLELISA酶聯(lián)免疫試劑盒(上海麗臣生物有限公司）。
[0031] 1.3儀器
[0032] J2714恒溫箱(武漢大江電器儀表廠）；Rayt〇RT-6000酶標(biāo)儀、RaytoRT-3100全自動(dòng) 洗板機(jī)(深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司）。
[0033] 1.4大鼠分組及模型制備
[0034] 大鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽性對(duì)照組（甲磺 酸溴隱亭組，50mg · kg-4和富馬酸酮替芬組(80mg · kg-Ο、化合物（I)組(80mg · kg-1富馬 酸酮替芬與化合物（I)組合物組【40mg · kg<富馬酸酮替芬+40mg · kg-1化合物（I)】。正常組 每只大鼠背部皮下注射生理鹽水lmL，其他組大鼠背部皮下注射鹽酸甲氧氯普胺注射液 50mg/kg體質(zhì)量，每天上午下午分別定時(shí)注射1次，連續(xù)5d。各組動(dòng)物在造模成功后，灌胃相 應(yīng)藥物或蒸餾水，每日1次，連續(xù)20d。正常對(duì)照組與模型對(duì)照組大鼠灌胃給予純化水。
[0035] 1.5PRL水平測定實(shí)驗(yàn)
[0036] 含量測定采用酶聯(lián)免疫分析方法，嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書中實(shí)驗(yàn)操作流程 進(jìn)行。
[0037] 1·6Ε2、Ρ水平測定實(shí)驗(yàn)
[0038]采用酶聯(lián)免疫分析方法，嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書中實(shí)驗(yàn)操作流程進(jìn)行。
[0039] 1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
[0040]實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X土s)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差 分析和t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0041 ] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0042] 2.1對(duì)高泌乳素血癥(HPRL)模型大鼠 PRL水平的影響
[0043]與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠 PRL水平明顯升高(P<0.01);與模型對(duì)照組 比較，富馬酸酮替芬與化合物（I)組合物組和甲磺酸溴隱亭組PRL水平顯著降低(P<0.01); 與模型對(duì)照組比較，富馬酸酮替芬組、化合物（I)組PRL水平降低(P<0.05)。結(jié)果見表1。 [0044] 2.2對(duì)高泌乳素血癥模型大鼠 E2、P水平的影響
[0045] 與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠 E2、P水平明顯降低(P<0.01)。與模型對(duì)照組 比較，富馬酸酮替芬與化合物（I)組合物組和甲磺酸溴隱亭組E2、P水平顯著提高（P< 〇.〇 1);與模型對(duì)照組比較，富馬酸酮替芬組、化合物（I)組E2、P水平提高(P<0.05)。見表1。 [0046] 表1對(duì)HPRL大鼠 PRL、E2、P含量的影響
[0047]
[0048] 血清PRL濃度的增高會(huì)擾亂下丘腦-垂體-性腺軸的功能，使下丘腦促性腺激素釋 放激素(GnRH)合成和分泌受阻，并減弱了垂體對(duì)GnRH的敏感性，導(dǎo)致促FSH和LH分泌低下， 繼而卵巢分泌E2、P不足，造成卵泡發(fā)育不良和黃體功能不足而致月經(jīng)失調(diào)、閉經(jīng)和不孕等。
[0049] 上述結(jié)果表明，富馬酸酮替芬、化合物（I)單獨(dú)作用時(shí)，對(duì)高泌乳素血癥具有治療 作用；富馬酸酮替芬和化合物（I)聯(lián)合作用時(shí)，對(duì)高泌乳素血癥的治療效果顯著提高，可以 開發(fā)成治療高泌乳素血癥的藥物。
[0050] 上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，2. -種富馬酸酬替芬的藥物組合物，其特征在于:包括富馬酸酬替芬、如權(quán)利要求1所 述的化合物(I)和藥學(xué)上可W接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的富馬酸酬替芬的藥物組合物，其特征在于:藥學(xué)上可W接受的 載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附 載體或潤滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的富馬酸酬替芬的藥物組合物，其特征在于：所述劑型包括片 劑、膠囊劑、日服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注 射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將華 山參粉碎，用85~95%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙 醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b) 步驟(a)中正下醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用8%乙醇洗脫10個(gè)柱體積，再用70%乙醇洗 脫12個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中70%乙醇 洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為40:1、20:1、10:1和5:1的二氯甲燒-甲醇梯度 洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(C)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1、5:1和 2:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得至Ij3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個(gè)柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用90%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為AB-8型 大孔吸附樹脂。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲燒代 替乙酸乙醋進(jìn)行萃取，得到二氯甲燒萃取物。9. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療高泌乳素血癥的藥物中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求2~4任一所述的富馬酸酬替芬的藥物組合物在制備治療高泌乳素血癥的 藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P15/00GK105906648SQ201610335380
【公開日】2016年8月31日
【申請(qǐng)日】2016年5月15日
【發(fā)明人】劉雨
【申請(qǐng)人】劉雨