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一株控制柑橘和葡萄采后病害的盔形畢赤酵母的制作方法

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一株控制柑橘和葡萄采后病害的盔形畢赤酵母的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一株控制柑橘和葡萄采后病害的盔形畢赤酵母,屬于水果采后病害生物防治領(lǐng)域。經(jīng)鑒定為盔形畢赤酵母(Pichia manshurica),命名為Pichia manshurica Y4,保藏編號(hào):CGMCC 2.5415。使用時(shí)將盔形畢赤酵母活化、培養(yǎng),離心得到菌體,菌體用無(wú)菌水稀釋制備成1.0×108個(gè)/mL的菌懸液。用噴壺噴灑至水果外表皮,再風(fēng)干,放在塑料筐中,用保鮮膜密封后,放在室溫條件下存放。經(jīng)該菌處理的柑橘綠霉病發(fā)病率及葡萄黑曲霉病、灰霉病發(fā)病率顯著降低。因此,盔形畢赤酵母可以代替化學(xué)殺菌劑防治柑橘和葡萄的采后病害,避免使用化學(xué)殺菌劑對(duì)人的危害,具有顯著的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。CGMCC No. 2.541520160331
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一株控制柑橘和葡萄采后病害的盔形畢赤酵母
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ] 本發(fā)明涉及一株藍(lán)形畢赤酵母(Pichia manshurica)Y4,該菌株可以控制柑橘采后綠霉病及匍甸米后黑曲霉病、灰霉病,屬于水果米后病害生物防治領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]水果因采后腐爛造成的嚴(yán)重?fù)p失早已成為全球性問(wèn)題,根據(jù)保守估計(jì),在發(fā)達(dá)國(guó)家有10-20%的新鮮水果損失于采后的腐爛,而缺乏貯運(yùn)冷藏設(shè)備的發(fā)展中國(guó)家,其腐損率有的高達(dá)40-50%,我國(guó)的水果腐爛一般在20-30%。
[0003]我國(guó)是世界上最大的水果生產(chǎn)和銷(xiāo)售大國(guó),水果種類(lèi)繁多,產(chǎn)量占世界水果產(chǎn)量的80%。由于水果生產(chǎn)地遠(yuǎn)離都市,而且成熟期又相對(duì)集中,因此在貯藏和運(yùn)輸期間由于腐爛、失水和營(yíng)養(yǎng)流失等現(xiàn)象造成了大量采后損失。根據(jù)早前資料顯示,我國(guó)每年水果腐爛超過(guò)8000萬(wàn)噸,因此造成的經(jīng)濟(jì)損失達(dá)750億元,占整個(gè)產(chǎn)值的30 %以上,現(xiàn)在數(shù)值應(yīng)該會(huì)更尚O
[0004]導(dǎo)致水果采后損失及品質(zhì)惡化的因素有很多,包括由于水分和營(yíng)養(yǎng)消耗造成的失重和枯萎等品質(zhì)裂變;由于采后逆境造成的生理代謝失調(diào);由于采后成熟衰老造成的水果組織結(jié)構(gòu)的崩潰和由于病原物侵染造成的腐爛等。其中病原菌侵染造成的腐爛被認(rèn)為是導(dǎo)致水果采后損失的主要原因。
[0005]引起水果貯藏期間腐爛的霉菌種類(lèi)很多,但每種水果占優(yōu)勢(shì)的致病菌一般有2-3種。例如,(I)葡萄采后由真菌引起的病害主要為黑曲霉屬(AspergilIus sp)引起的黑曲霉病及由灰葡萄孢(Botrytis cinerea)引起的灰霉病,其中由葡萄灰霉菌(B.cinerea)引起的灰霉病是葡萄生產(chǎn)中危害最大的病害,全球年均造成減產(chǎn)20 %?40 %,嚴(yán)重的可達(dá)60 %以上。葡萄灰霉菌不僅會(huì)引起田間損失,而且殘存在葡萄上的病原菌在貯藏期同樣可以潛伏侵染,引起葡萄貯藏過(guò)程中的腐爛、脫粒及褐變,使貯藏期縮短,品質(zhì)降低,是葡萄貯藏中的重要病原菌之一。(2)柑桔采后腐爛主要有以意大利青霉(Penici I Iium i tali cum)引起的青霉病和指狀青霉(Penicillium digitatum)引起的綠霉病,其中以指狀青霉引起的腐爛尤為嚴(yán)重,此類(lèi)病原菌分布廣泛,以腐生在有機(jī)物上的方式,將所產(chǎn)生的大量分生孢子擴(kuò)散在空氣之中,從而擴(kuò)散到果實(shí)上,引起果實(shí)腐爛,損失極大。水果采后病害發(fā)生的原因是非常復(fù)雜的,此外采前田間帶病、采后機(jī)械損傷、貯藏溫濕度條件管理不當(dāng)造成的生理失調(diào)等都是促成發(fā)病的因素。
[0006]病原真菌對(duì)采后水果的危害不僅在于導(dǎo)致水果在導(dǎo)致水果大量腐爛損失,而且由于許多病原真菌能分泌產(chǎn)生多種次生代謝產(chǎn)物從而引起嚴(yán)重的食品安全問(wèn)題,如葡萄上的兩種主要致病菌曲霉屬(Aspergillus sp)產(chǎn)生的赭曲霉毒素A(OTA)、灰葡萄孢(B.cinerea)產(chǎn)生的葡雙醛霉素(botrydial)等。其中OTA具有多種毒性,尤其具有腎毒性,且有一定致畸、致癌、致突變性,被認(rèn)為是巴爾干地方性腎病的主要因素之一,因此對(duì)動(dòng)物和人體健康會(huì)造成很大的潛在危害。
[0007]長(zhǎng)期以來(lái),控制果蔬采后病害的主要措施是使用殺菌劑。根據(jù)最新數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì),殺菌劑在農(nóng)作物病害防治市場(chǎng)約占26%份額,2011年銷(xiāo)售金額高達(dá)133億美元?;瘜W(xué)殺菌劑具有成本低、簡(jiǎn)單方便、作用機(jī)理明確、效果明顯等優(yōu)點(diǎn)。常用的控制水果采后病害的化學(xué)殺菌劑種類(lèi)很多。如控制葡萄病害的化學(xué)殺菌劑主要有烯酰嗎啉、多菌靈、科定、科佳、嘧霉胺、20%苯醚甲環(huán)唑水分散粒劑等。柑桔貯藏期間綠霉病的防治主要依靠化學(xué)藥劑抑霉哇、噻菌靈、嘧菌酯、特克多、鄰苯酚鈉、仲丁胺以及苯并咪唑類(lèi)殺菌劑等。
[0008]但過(guò)去十多年,公眾和科學(xué)界對(duì)于食品和環(huán)境中農(nóng)藥(尤其殺菌劑)殘毒問(wèn)題的關(guān)注日益增加。殺菌劑的長(zhǎng)期和大量使用,嚴(yán)重污染環(huán)境,有害于人類(lèi)健康。美國(guó)國(guó)家科學(xué)院(NAS)的報(bào)道(1987)指出在用于食物的全部農(nóng)藥中,殺菌劑構(gòu)成60%的致瘤危險(xiǎn)。此外,高頻率地使用單一種類(lèi)的殺菌劑會(huì)使病原菌產(chǎn)生抗藥性問(wèn)題,使殺菌劑的防治效果大大降低。據(jù)早前美國(guó)加利福尼亞的調(diào)查,抑霉哇(Imaziall)作為苯并咪哇類(lèi)、仲丁胺藥物的換代產(chǎn)品,連續(xù)在柑橘上使用5年以后,已經(jīng)出現(xiàn)了指狀青霉的抗抑霉哇菌株。而且據(jù)國(guó)內(nèi)調(diào)查,單獨(dú)使用多菌靈多年的地區(qū),指狀青霉對(duì)其產(chǎn)生了嚴(yán)重的抗性,使柑橘腐爛率回升,同時(shí)抗藥性菌株對(duì)甲基托布津、苯來(lái)特、涕必靈等三種苯并咪唑類(lèi)殺菌劑具有交叉抗性。因此,在很多發(fā)達(dá)國(guó)家和地區(qū),一些化學(xué)殺菌劑已經(jīng)開(kāi)始被限制使用,如,克菌丹(Captan)和苯菌靈(benomyl)等幾種殺菌劑已經(jīng)被美國(guó)環(huán)保機(jī)構(gòu)所禁用。
[0009]從2001年,我國(guó)加入世貿(mào)組織后,國(guó)際之間水果貿(mào)易將日趨活躍,水果市場(chǎng)的競(jìng)爭(zhēng)也會(huì)更加激烈,部分發(fā)達(dá)國(guó)家利用“綠色壁皇”為我國(guó)農(nóng)產(chǎn)品(包括葡萄和柑橘)出口設(shè)置了重重障礙。因此,研究并利用更安全、更環(huán)保,能替代化學(xué)殺菌劑的物質(zhì)或生物來(lái)防治果蔬采后病害,是果蔬采后貯藏保鮮的一個(gè)新的研究方向。當(dāng)前國(guó)際上越來(lái)越重視用有益微生物進(jìn)行水果采后病害生物防治的研究,并認(rèn)為這是最有希望取代化學(xué)殺菌劑的方向之一。,這些研究對(duì)減少果蔬產(chǎn)品中農(nóng)藥的殘留、保護(hù)環(huán)境、人體健康和增加果蔬產(chǎn)品的經(jīng)濟(jì)效益,都具有深刻的意義。
[0010]近年來(lái),生物防治已引起了世界各國(guó)的關(guān)注,拮抗微生物的應(yīng)用被證明是一種行之有效的方法。其中酵母菌由于拮抗效果好、不產(chǎn)生毒素、可以和化學(xué)殺菌劑共同使用等優(yōu)點(diǎn)成為研究熱點(diǎn)。Chalitz等從梓檬表面分離得到一株漢遜德巴利酵母(Debaryomyceshansenii),對(duì)柑橘綠霉病、青霉病等有顯著的防治效果。Torres等報(bào)道Pantoeaagglomerans對(duì)柑橘Penici 11 ium digitatum有很好的防治效果。Arras報(bào)道了 Candidafamata對(duì)柑橘綠霉病具有顯著的防治效果,并探討了其作用機(jī)制。目前部分拮抗菌已經(jīng)商業(yè)化或者半商業(yè)化應(yīng)用,主要包括嗜油假絲酵母Canida oleophi Ia,季也蒙假絲酵母Canida gui IIiermondi,季也蒙畢赤氏酵母Pichia guiIIiermondi和阿比達(dá)斯隱球酵母Cryptococcus albidus幾種。產(chǎn)品主要集中在西方發(fā)達(dá)國(guó)家,如1995年美國(guó)首次開(kāi)發(fā)應(yīng)用于水果采后病害的生物防治系列產(chǎn)品B1Save 100、110和Aspire;隨后,南非也研發(fā)通過(guò)了Avogreen和Yield Plus兩種生防制劑,目前我國(guó)還沒(méi)能實(shí)現(xiàn)生物防腐的商業(yè)化應(yīng)用。主要原因是缺乏高效的生防菌株。
[0011]本發(fā)明中的盔形畢赤酵母被認(rèn)為是最安全的酵母之一,研究證明,其能顯著降低柑橘采后病害的發(fā)生,進(jìn)而達(dá)到水果貯藏保鮮的目的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0012]本發(fā)明的目的是提供一株分離自葡萄園的能夠高效控制柑橘采后綠霉病及葡萄采后黑曲霉病、灰霉病的藍(lán)形畢赤酵母(Pichia manshurica)Y4,可以廣泛的用于柑橘和葡萄采后病害的生物防治,減少采后病害造成的損失,具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。
[0013]本發(fā)明采用的技術(shù)方案
[0014]本發(fā)明所提供的防治柑橘采后綠霉病以及葡萄采后灰霉病和黑曲霉病的酵母菌株是從江蘇省鎮(zhèn)江市句容的葡萄園中分離到的,在NYDA固體培養(yǎng)基平板上和麥芽汁液體培養(yǎng)基中28 °C培養(yǎng),進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀(guān)察;對(duì)該菌株的5.8S rDNA-1TS區(qū)序列分析,進(jìn)行分子生物學(xué)鑒定,并將其保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。
[0015]藍(lán)形畢赤酵母(Pichia manshurica)Y4,現(xiàn)保藏于位于中國(guó)的北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)的中國(guó)科學(xué)院微生物研究所,中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC),保藏編號(hào)為:CGMCC N0.2.5415,保藏日期為2016年3月31日,建議的分類(lèi)命名為藍(lán)形畢赤酵母Pichia manshurica。
[0016]利用盔形畢赤酵母進(jìn)行水果采后病害防治及貯藏保鮮:將盔形畢赤酵母活化、發(fā)酵培養(yǎng),離心得到菌體;將菌體用無(wú)菌水稀釋制備成1.0 X 18CFlVmL的菌懸液;用噴壺噴灑至水果外表皮,再風(fēng)干;放在塑料筐中,用保鮮膜密封后,放在室溫下存放。
[0017]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):
[0018](I)本發(fā)明所使用的藍(lán)形畢赤酵母(Pichia manshurica)Y4為本實(shí)驗(yàn)室篩選,其措抗效力強(qiáng),對(duì)人體無(wú)害。
[0019](2)本發(fā)明所使用的藍(lán)形畢赤酵母(Pichia manshurica)Y^l]]菌譜廣,可以控制葡萄和柑橘采后多種由致病菌導(dǎo)致的病害損失。
[°02°] (3)本發(fā)明所使用的藍(lán)形畢赤酵母(Pichia manshurica)Y4比先前相關(guān)專(zhuān)利中描述的拮抗菌生防效果好。
[0021 ] (4)本發(fā)明使用藍(lán)形畢赤酵母(Pichia manshurica)Y4,可以代替化學(xué)殺菌劑防治水果采后病害,避免使用化學(xué)殺菌劑對(duì)人的危害,具有顯著的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
[0022]通過(guò)借助以下實(shí)施實(shí)例將更加詳細(xì)的說(shuō)明本發(fā)明。以下實(shí)施例僅是說(shuō)明性的,本發(fā)明并不受這些實(shí)施實(shí)例的限制。
【附圖說(shuō)明】
[0023]圖1為本發(fā)明盔形畢赤酵母的5.8SrDNA-1TS區(qū)序列進(jìn)化關(guān)系圖。
[0024]圖2為盔形畢赤酵母對(duì)柑橘綠霉病的抑制效果。注:CK:無(wú)菌蒸餾水,即對(duì)照組;Pm:1 X 108cells/mL的藍(lán)形畢赤酵母菌懸液。不同字母代表差異顯著(P〈0.05)。
[0025]圖3為盔形畢赤酵母對(duì)葡萄灰霉病和黑曲霉病的抑制效果。注:CK:無(wú)菌蒸餾水,即對(duì)照組;Pm:1 X 108cells/mL的藍(lán)形畢赤酵母菌懸液。不同字母代表差異顯著(P〈0.05)。
【具體實(shí)施方式】
[0026]實(shí)施例1:藍(lán)形畢赤酵母(Pichia manshurica)Y4菌株微生物學(xué)特性如下:
[0027]1.形態(tài)學(xué)特征
[0028](I)NYDA培養(yǎng)基(牛肉膏0.8 %,酵母浸出物0.5 %,葡萄糖I %,瓊脂2 %,121°C濕熱滅菌20min)上28°C培養(yǎng)48h,菌落呈圓形、邊緣光滑、較濕潤(rùn)、易挑起。細(xì)胞形態(tài)呈長(zhǎng)橢圓形,單個(gè)分散。
[0029](2)在NYDB液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h后,不形成醭,菌液渾濁,有沉淀,鏡檢酵母細(xì)胞呈橢圓形,芽殖。
[0030]2.分子生物學(xué)鑒定
[0031]對(duì)篩選菌株盔形畢赤酵母的5.8S rDNA-1TS區(qū)序列分析,在GenBank上檢索,確定為藍(lán)形畢赤酵母(Pichia manshurica)。根據(jù)檢索到的同源菌株,應(yīng)用DNAStar軟件的Mege5.1程序,構(gòu)建生物進(jìn)化關(guān)系樹(shù)如圖1。
[0032]將該酵母藍(lán)形畢赤酵母(Pichia manshurica)Y4,現(xiàn)保藏于位于中國(guó)的北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào)的中國(guó)科學(xué)院微生物研究所,中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC),保藏編號(hào)為:CGMCC N0.2.5415,保藏日期為2016年3月31日,建議的分類(lèi)命名為藍(lán)形畢赤酵母Pichia manshurica。
[0033]實(shí)施例2:盔形畢赤酵母對(duì)柑橘綠霉病的控制效果
[0034]一)試驗(yàn)方案
[0035]供試的果實(shí)經(jīng)過(guò)精細(xì)挑選,盡量選擇果實(shí)均勻一致,表面無(wú)擦傷或機(jī)械損傷和病蟲(chóng)傷害。用無(wú)菌打孔器在水果赤道處打3個(gè)孔,柑橘的表面?zhèn)跒?mm(直徑)X3mm(深)。每個(gè)傷口處等量加入30yL以下處理液:(I) I X 18ce 11 s/mL的盔形畢赤酵母菌懸液;(2)無(wú)菌蒸饋水。2h后,再向柑橘傷口處分別接種30yL I X 105spores/mL的指狀青霉(P.digitatum)孢子懸浮液。自然晾干后,將果實(shí)放入塑料筐并用保鮮膜密封,恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(濕度95%),置于室溫(20°C)。每處理重復(fù)3次,每次重復(fù)12個(gè)果實(shí)。整個(gè)試驗(yàn)重復(fù)2次。經(jīng)過(guò)若7天的培養(yǎng),記錄果實(shí)發(fā)病率,以此評(píng)價(jià)盔形畢赤酵母的抑菌效果。
[0036]發(fā)病率的計(jì)算公式如下:
[0037]發(fā)病率(%)=發(fā)病的果實(shí)/果實(shí)總數(shù)X 100%
[0038]二)試驗(yàn)結(jié)果
[0039]按照上述步驟試驗(yàn),統(tǒng)計(jì)水果的腐爛率結(jié)果如下:
[0040]對(duì)柑橘綠霉病的抑制效果
[0041]如圖2中所示,對(duì)照組果實(shí)的發(fā)病率約為99.6%,經(jīng)盔形畢赤酵母處理的柑橘發(fā)病率為45.3 %。即柑橘人為接種指狀青霉孢子懸浮液前應(yīng)用盔形畢赤酵母,與對(duì)照相比,經(jīng)盔形畢赤酵母處理的柑橘發(fā)病率顯著低于對(duì)照(P〈0.05),因此說(shuō)明盔形畢赤酵母在20°C下能夠有效控制由指狀青霉造成的柑橘采后綠霉病。
[0042]實(shí)施例3:盔形畢赤酵母對(duì)葡萄灰霉病和黑曲霉病的控制效果
[0043]一)試驗(yàn)方案
[0044]將活化后酵母接種在裝有50mLNYDB(酵母膏5g,牛肉浸膏Sg,葡萄糖10g,蒸餾水100mL)的三角瓶中,28°C、180r/min搖床培養(yǎng)20h。取菌液8000r/min離心lOmin,棄上清,無(wú)菌水反復(fù)清洗3次,血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)配成濃度為I X 18個(gè)/mL的菌懸液,對(duì)照組為無(wú)菌水。在果實(shí)腰部用打孔器打I個(gè)直徑為3m(寬)X3mm(深)的孔,然后在每孔分別注15yL的以上濃度的酵母菌懸液,對(duì)照水果注入15yL無(wú)菌水。2h后,再向葡萄傷口處分別接種1yL IX105spores/mL的灰葡萄孢霉(B.cinerea)孢子懸浮液或5 X104spores/mL的黑曲霉(Aspergi I Ius niger)孢子懸浮液。瞭干后將果實(shí)裝入塑料筐內(nèi),保鮮膜封口保持95 %的濕度,在室溫下貯藏,5d后統(tǒng)計(jì)果實(shí)的發(fā)病腐爛率。每處理重復(fù)3次,每次重復(fù)36個(gè)果實(shí)。整個(gè)試驗(yàn)重復(fù)2次。
[0045]發(fā)病率的計(jì)算公式如下:
[0046]發(fā)病率(%)=發(fā)病的果實(shí)/果實(shí)總數(shù)X 100%
[0047]二)試驗(yàn)結(jié)果
[0048]按照上述步驟試驗(yàn),統(tǒng)計(jì)水果的腐爛率結(jié)果如下:
[0049]1、對(duì)葡萄灰霉病的抑制效果
[0050]如圖3中所示,對(duì)照組的發(fā)病率為94.4%,經(jīng)盔形畢赤酵母處理的葡萄發(fā)病率為5.6%,因此盔形畢赤酵母在室溫下能夠有效控制由灰葡萄孢霉造成葡萄的采后灰霉病病害。
[0051]2、對(duì)葡萄黑曲霉病的抑制效果
[0052]如圖3中所示,對(duì)照組的發(fā)病率為100%,經(jīng)盔形畢赤酵母處理的葡萄發(fā)病率為
11.1%,因此盔形畢赤酵母在室溫下能夠有效控制由黑曲霉造成葡萄的采后黑曲霉病病害。
[0053]該結(jié)果明顯比先前相關(guān)專(zhuān)利中描述的拮抗菌生防效果好,例如,中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利《葡萄果實(shí)采后病害或果粒脫落的防治方法及其專(zhuān)用防治劑》(申請(qǐng)?zhí)?00910078858.9)公開(kāi)了一種羅倫隱球酵母和硼酸鈉結(jié)合使用防治葡萄病害的技術(shù),經(jīng)羅倫隱球酵母和硼酸鈉處理后的葡萄在室溫條件下放置三天后,因灰霉病導(dǎo)致的腐爛率僅比對(duì)照降低了 50%左右,且并未表明其對(duì)葡萄采后黑曲霉病有抑制作用;中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利《解脂亞羅酵母、在葡萄采后病害防治中的應(yīng)用及使用方法》(申請(qǐng)?zhí)朇N201410231417.9)提供了一種解脂亞羅酵母防治葡萄采后病害和降解赭曲霉毒素A的技術(shù),文中介紹了解脂亞羅酵母對(duì)葡萄島青霉有顯著的抑制效果,但未表明其對(duì)葡萄采后黑曲霉病和灰霉病有抑制作用。
[0054]實(shí)施例4:盔形畢赤酵母的保藏
[0055]首選培養(yǎng)基為NYDA培養(yǎng)基,也可以使用馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基:馬鈴薯200克,葡萄糖20克,瓊脂15?20克,自來(lái)水1000毫升,pH 7.0?9.0,26°C?28°C,培養(yǎng)36h。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.藍(lán)形畢赤酵母Pichiamanshurica Y4,保藏編號(hào)為CGMCC N0.2.5415。2.權(quán)利要求書(shū)I所述的盔形畢赤酵母菌株的用途,其特征在于可以用其控制柑橘采后綠霉病及葡萄采后黑曲霉病、灰霉病,用于貯藏保鮮。3.權(quán)利要求1所述的盔形畢赤酵母進(jìn)行柑橘和葡萄采后病害防治及貯藏保鮮方法:將盔形畢赤酵母活化,用NYDB培養(yǎng)基培養(yǎng)盔形畢赤酵母,離心得到菌體,用無(wú)菌水稀釋制備成I X 18 cells/mL的菌懸液;將菌懸液均勻噴灑在水果上,自然風(fēng)干;放在塑料筐中,用保鮮膜密封后,放在室溫條件下存放。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的盔形畢赤酵母使用防治水果采后病害的方法,其特征在于其中所述的NYDB培養(yǎng)基為:酵母膏5 g,葡萄糖10 g,牛肉浸膏8 g,蒸饋水1000 ml,pH自然,.121 °C 滅菌 30min。
【文檔編號(hào)】C12R1/84GK105861340SQ201610225320
【公開(kāi)日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年4月12日
【發(fā)明人】張紅印, 李萬(wàn)海, 張曉云, 任曉鋒, 朱淑云
【申請(qǐng)人】江蘇大學(xué)
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