。
[0024] 進(jìn)一步地,所述改性膳食纖維是將膳食纖維經(jīng)物理、化學(xué)或生物的方法處理而得 到的具有強(qiáng)持水性、膨脹性、增稠性、吸附性且網(wǎng)格結(jié)構(gòu)豐富的可溶性纖維素含量高、生物 活性強(qiáng)、對人體益生菌群有重要的、積極作用的纖維素,與普通膳食纖維相比,其生物活性 作用更強(qiáng)大;
[0025] 優(yōu)選地,所述改性纖維是由菊粉、蘋果纖維、燕麥纖維、小麥纖維中的一種或多種 經(jīng)生物酶酶解而得到的;
[0026] 更優(yōu)選地,所述改性膳食纖維的制備方法,包括W下步驟:將菊粉、燕麥纖維、小麥 纖維按質(zhì)量比5-7:2-4:1-2均勻混合,加入其質(zhì)量3-7倍的水,室溫100-300胖、35-401(化條件 超聲提取l〇-15min,然后在電場強(qiáng)度20-40kV/cm,脈沖時(shí)間300-500ys,脈沖頻率200-400HZ 條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理10-15min;用乳酸調(diào)節(jié)pH值為4.5-6.5,加入混合物質(zhì)量0. Ι? ο. 3 % 的生物酶 ,于 45-55 °C 酶解 20-48min; 酶解液減壓濃縮 、冷凍干燥 、低溫粉碎至粒徑為 0.1-0.3mm即得改性膳食纖維;
[0027] 所述生物酶為纖維素酶、木聚糖酶、漆酶、果膠酶按質(zhì)量比3-5:1-3:1-3:1-2均勻 混合。
[0028] 進(jìn)一步地,所述益生菌粉劑益生菌活菌含量為:6 X 1〇i2-8 X l〇i2c化/g;
[0029] 所述益生菌粉劑包括W下益生菌粉劑中的任意一種或多種:例如:植物乳桿菌 (Lactobacillus plantarum)、兩岐雙岐桿菌(Bifidobacterium bifidum)、嬰兒雙岐桿菌 (B. infantis)、長雙岐桿菌(B. longum)、短雙岐桿菌(B.breve)、青春雙岐桿菌 (B.adolescentis)、乳雙歧桿菌(Bifidobacterium lactis)、保加利亞乳桿菌 (Lactobacillus .Bulgari州S)、嗜酸乳桿菌(X.acido地ilus)、干酪乳桿菌(Xactobacillus casei)、鼠李糖乳桿菌化 actobacillus rhamnosus )、嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus);
[0030] 優(yōu)選地,所述益生菌粉劑由W下重量份數(shù)的粉劑均勻混合而成:植物乳桿菌30-40 份,兩岐雙岐桿菌25-35份,乳雙歧桿菌20-30份,嗜熱鏈球菌10-20份,保加利亞乳桿菌12- 15份,干酪乳桿菌8-10份,鼠李糖乳桿菌5-10份;
[0031 ]更優(yōu)選地,所述植物乳桿菌粉劑是W植物乳桿菌CGMCC NO. 11763為出發(fā)菌按按常 規(guī)方法制備的,其中的冷凍保護(hù)劑W含有抗凍蛋白的動(dòng)物或植物為原料,經(jīng)高壓脈沖電場 提取、超聲波輔助微波提取和復(fù)配酶酶解而制得的,可有效提高植物乳桿菌粉劑在冷凍干 燥過程活菌存活率;
[0032] 優(yōu)選地,所述保護(hù)劑的制備方法,包括如下步驟:將冬黑麥、沙冬青、整魚皮膠原蛋 白分別清洗、漸干,按質(zhì)量比8-10: 3-5: 2-4均勻混合,加入混合物料質(zhì)量0.1-1倍的抑值為 3.8-4.5的乳酸潤濕3-化,于-18-22°(:冷凍1-化后立即進(jìn)行粉碎,冷凍料層厚度3-5畑1,粉 碎物粒徑0.5-3mm,接著加入粉碎物質(zhì)量10-20倍的水,用乳酸調(diào)節(jié)抑值為3.5-5.5,于室溫 下在電場強(qiáng)度25-3化V/cm,脈沖時(shí)間300-50化S,脈沖頻率200-300HZ條件下進(jìn)行高壓脈沖 電場處理20-30min;然后于室溫在功率150-300W條件下進(jìn)行微波福照提取15-20min,同時(shí) 在功率200-300W,頻率30-40Ifflz條件下進(jìn)行超聲波輔助提取;加入提取液質(zhì)量1-2%的復(fù)配 酶,于45-55 °C酶解30-50min;酶解液過濾、濾液濃縮、低溫粉碎至粒徑為0.1-0.3mm即得保 護(hù)劑;
[0033] 所述復(fù)配酶為纖維素酶、蛋白酶、淀粉酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比3-5:2-4:1-3: 1-3:1-2均勻混合;
[0034] 更優(yōu)選地,所述微波福照提取為間歇式提取,即微波福照10s,間隔20s。
[0035] 本發(fā)明另一目的是提供上述玫瑰加香干白葡萄酒的制備方法:包括W下步驟:
[0036] 1)按照配方,稱取各組份原料,首先將玫瑰花分成花瓣,放入裝有0.8-1.2%碳酸 氨鋼溶液的超聲波清洗機(jī)中于200-400W、20-40KHZ清洗3-5min,漸干,然后浸泡在質(zhì)量百分 比為8-12%的絲膠膚溶液中10-15min,于-18-22°C冷凍30-50min后立即進(jìn)行粉碎,冷凍料 層厚度3-5cm,粉碎物粒徑0.3-0.5mm,接著加入粉碎物質(zhì)量2-4倍的水,升溫至30-40°C,用 乳酸調(diào)節(jié)pH值為2.5-4.0,加入粉碎物質(zhì)量0.5-0.9 %的漆酶和0.1-0.3 %的娃藻±,攬拌均 勻,靜置1.5-2.化,接著于室溫下在電場強(qiáng)度25-3化V/cm,脈沖時(shí)間300-50化S,脈沖頻率 200-300化條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理20-30min;然后于室溫在功率150-300W條件下進(jìn) 行微波福照提取15-20min,同時(shí)在功率200-300W,頻率30-40Ifflz條件下進(jìn)行超聲波輔助提 取;加入提取液質(zhì)量1.5-2.5 %的混合酶,于40-50°C酶解30-50min得玫瑰花酶解液;
[0037] 進(jìn)一步地,所述混合酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比3-5:2-4:1- 3:1-2均勻混合;
[0038] 進(jìn)一步地,所述漆酶為多孔真菌漆酶;
[0039] 2)取干白葡萄酒質(zhì)量的20-30%,控制溫度40-45°C,邊攬拌邊加入改性膳食纖維、 低聚果糖、乳糖和玫瑰花酶解液,充分溶解20-40min,加入益生菌粉劑質(zhì)量的50-60 %恒溫 發(fā)酵3-化,接著W〇.8-1.0°C/min的速率升溫至50-55°C,加入益生菌粉劑質(zhì)量的40-50%恒 溫發(fā)酵1.5-3.化,最后W0.6-0.8°C/min的速率降溫至40-45°C,繼續(xù)發(fā)酵0.5-化,發(fā)酵液依 次經(jīng)40目、80目雙聯(lián)過濾器過濾,濾液經(jīng)超高壓均質(zhì)機(jī)于2-4°C、140-160M化均質(zhì),均質(zhì)液經(jīng) 130-135°C超高溫瞬時(shí)滅菌4-6S,最后依次經(jīng)微濾、循環(huán)超濾濃縮至固形物含量為20-30% 得玫瑰干白生物活性濃縮液;
[0040] 3)將剩余干白葡萄酒和玫瑰干白生物活性濃縮液均勻混合,向其中加入過氧乙酸 溶液,使過氧乙酸濃度為400-45化pm,混合液于功率200-400W,頻率30-40KHZ條件下進(jìn)行超 聲波處理5-lOmin,控制混合液溫度為25-35Γ,然后通過連續(xù)式高壓脈沖處理室處理,靜 置、過濾即得玫瑰加香干白葡萄酒;
[0041] 進(jìn)一步地,所述過氧乙酸溶液的質(zhì)量百分比濃度為10-30% ;
[0042] 進(jìn)一步地,所述高壓脈沖電場處理?xiàng)l件為電場強(qiáng)度25-30kV/cm、脈沖數(shù)40-50。
[0043] 本發(fā)明植物乳桿菌(Xactobacillus plantarunOXH于2015年11月30日保藏于中國 微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中屯、(簡稱CGMCC),保藏號(hào)為CGMCC NO. 11763,保藏 地址為:中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào),中國科學(xué)院微生物研究所,郵編:100101。
[0044] 植物乳桿菌益生特性如下:
[0045] 本發(fā)明所提供的植物乳桿菌CGMCC NO. 11763經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)能夠在抑為1.50的條件 下存活,在1 %膽鹽培養(yǎng)4小時(shí)后仍處于存活狀態(tài);植物乳桿菌CGMCC NO. 11763降解亞硝酸 鹽速度快,分解能力達(dá)到10.9mg/h/kg,該菌種在生產(chǎn)泡菜時(shí),整個(gè)發(fā)酵過程中亞硝酸鹽濃 度在4.8mg/kgW下;CGMCC NO. 11763在發(fā)酵60h小時(shí)后,對膽固醇降解率可達(dá)到64.76%。 CGMCC NO. 11763黏附能力測定的自凝集率為95.71 %。
[0046] 植物乳桿菌CGMCC NO. 11763對膽固醇降解能力研究和測定:
[0047] 取1ml CGMCC NO. 11763母液接種于lOmL的MRS膽固醇液體培養(yǎng)基(膽固醇含量 O.lmg/ml,抑6.2)中,37°C的恒溫靜置分別培養(yǎng)20h、40h、60h備用,W接入1血無菌水的MRS 膽固醇培養(yǎng)基為對照,取W上培養(yǎng)不同時(shí)間的菌液樣品及對照液各lml,9000r/min,4°C下 離屯、lOmin,得到發(fā)酵上清液,鄰苯二甲醒法測定上清液中膽固醇含量(具體為:取各上清液 0.1ml于相應(yīng)的試管中,加冰醋酸0.3ml,Img/ml的鄰苯二甲醒0.15ml,緩緩加入濃硫酸 1.0ml,混合均勻。室溫靜置lOmin,于550nm下測吸光值)。每一處理3個(gè)重復(fù),W同樣方法制 作膽固醇標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算上清液中膽固醇含量及降解率,結(jié)果見表1??芍?,CGMCCN0.11763 對膽固醇有很好的降解作用,在發(fā)酵60h小時(shí)后,降解率可達(dá)到64.76%。
[004引表1對膽固醇的降解情況。
[0049]
[(Κ)加]植物乳桿菌CGMCC NO. 11763菌株的耐膽鹽試驗(yàn):
[0化1 ] 取CGMCCN0.11763菌液ImL接種菌種于含有不同膽鹽(含量梯度為0.0%、0.2 %、 0.4%、0.6%、0.8%、l%)的10血MRS液體培養(yǎng)基(PH=6.4),置于37°C下分別培養(yǎng)0、2、4h, 每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)。各取1ml樣品菌液于9ml生理鹽水中混勻,制備稀釋度溶液,取0.1ml稀釋 液于MRS中涂布,于37Γ生化培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)48小時(shí)(每個(gè)稀釋度做3個(gè)平行)記錄計(jì)算平 板上的菌數(shù)個(gè)數(shù)。結(jié)果見表2。可知該菌在膽鹽濃度為1 %處理4h后菌的生長量依然達(dá)到 0.59±0.92 X 107(cfu/ml),有很好的耐膽鹽能力。
[0052] 表2耐膽鹽能力檢測[(±s) X 107cfu/ml]
[0化3]
[0化4] 植物乳桿菌CGMCC NO. 11763菌株的耐酸試驗(yàn)
[0化5] 取HLX37母液按1ml接種菌種于不同pH值(pH梯度為1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0)的 lOmLMRS液體培養(yǎng)基,置于37°C下分別培養(yǎng)0、2、地,每一處理3個(gè)重復(fù)。各取1ml樣品菌液于 9ml生理鹽水中混勻,制備稀釋溶液,取0.1ml稀釋液于MRS中涂布,于37°C生化培養(yǎng)箱中倒 置培養(yǎng)48小時(shí)(每個(gè)稀釋度做3個(gè)平行)記錄平板上的菌落個(gè)數(shù)。結(jié)果見表3。說明該菌具有 很強(qiáng)的耐酸能力。
[0056]表3 耐酸能力檢測[(+S) X l07cfu/ml]
[0化7]
[0化引植物乳桿菌CGMCC NO. 11763的黏附能力測定
[0化9] 培養(yǎng)CGMCC NO. 11763(MRS液體培養(yǎng)基)、大腸桿菌D冊a(LB液體培養(yǎng)基)24h得發(fā)酵 液,分別置于3000r/min、4°C下離屯、lOmin,收集菌泥,分別用抑=7.0的無菌憐酸鹽緩沖液 (PBS)洗涂菌泥2次(即在菌落中加入PBS,震蕩混合均勻后,置于3000r/min、4°C下離屯、 lOmin,收集菌體)。自凝集率(% ):用無菌的PBS將菌泥CGMCC NO. 11763制成在波長600皿處 的吸光值為〇.4±0.1(A 0)的懸浮菌液及菌懸液,靜置24h后測定吸光值A(chǔ) 24,自凝集率 (%)公式為(A 0-A 24)/A 0。;他凝集率(%):將CGMCC ^).11763和大腸桿菌0冊〇的懸菌 液調(diào)節(jié)成在波長600皿處的吸光值為0.6±0.1 (A 0)的混合懸浮菌液。靜置24H后測定吸光 值A(chǔ) 24,他凝集率(% )公式為(A 0 -A 24)/A 0。測定結(jié)果見表4,可知CGMCC NO. 11763的自 凝集率為95.71 %,有很強(qiáng)的黏附能力。
[0060]表4黏附能力表
[0061]
[0062] 植物乳桿菌CGMCC NO. 11763的菌株生理特性
[0063] 所述植物乳桿菌化actobacillusplanta;rum)XH于2015年ll月30日保藏于中國微 生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中屯、(簡稱CGMCC),保藏號(hào)為CGMCC NO. 11763,保藏地 址為:中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào),中國科學(xué)院微生物研究所,郵編:100101。
[0064] 該菌株特點(diǎn)如下:在顯微鏡下觀察,該菌株為短桿狀,革蘭氏染色呈陽性,無鞭毛, 不產(chǎn)芽抱;在固體培養(yǎng)基上,該菌菌落為白色,表面光滑,致密,形態(tài)為圓形,邊緣較整齊。
[0065] 理化特征為:過氧化氨酶(-),明膠液化(-),嗎I噪實(shí)驗(yàn)( + ),運(yùn)動(dòng)性(-),發(fā)酵產(chǎn)氣 (-),亞硝酸鹽還原(-),發(fā)酵產(chǎn)氣(-),產(chǎn)硫化氨氣體(-),pH4.0MRS培養(yǎng)基中生長(+ )。經(jīng)過 生理生化鑒定為為植物乳桿菌化actobaci