一種純化細(xì)菌污染絲狀真菌的簡易方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種純化被細(xì)菌污染的絲狀真菌的簡易方法。
【背景技術(shù)】
[0002]真菌在自然界中種類繁多，很多能引起人體、牲畜和植物病害，還可引起食物的霉變。有的可用于工業(yè)生產(chǎn)發(fā)酵和提取分泌產(chǎn)物等。獲得單一的目標(biāo)真菌純培養(yǎng)物是進(jìn)行一系列科學(xué)研究與應(yīng)用的基礎(chǔ)。但由于環(huán)境中微生物種類較多，目的真菌容易受到污染，尤其是細(xì)菌的污染。目前，純化被細(xì)菌污染的絲狀真菌主要有兩類方法，第一類:主要在培養(yǎng)基中添加抗生物的方法抑制細(xì)菌的生長;第二類:利用真菌菌絲具有穿透瓊脂的能力，采用一定的設(shè)備裝置去除真菌上的細(xì)菌。第一類方法主要操作流程:1)將瓊脂培養(yǎng)基加熱融化，冷卻至50°C左右;2)無菌條件下添加抗生素，搖勻后倒入培養(yǎng)皿制成平板培養(yǎng)基;3)接入目的真菌;4)適溫條件下培養(yǎng)2-4天;5)挑取菌落邊緣菌絲轉(zhuǎn)接到新的平板培養(yǎng)基上，培養(yǎng)2-4天;6)重復(fù)步驟5) 1-2次不等。第二類方法，如申請?zhí)?00910235086.5的《一種純化被細(xì)菌污染的絲狀真菌的裝置和方法》，主要操作流程:1)純化真菌收集層培養(yǎng)基(特殊培養(yǎng)基)的制作和滅菌;2)純化裝置的制作與滅菌，裝置包括封口膜、純化杯、純化柱等等;3)將被細(xì)菌污染的真菌接入純化裝置并進(jìn)行培養(yǎng);4)將純化培養(yǎng)層的真菌轉(zhuǎn)接到培養(yǎng)基中，獲得純化的目的真菌。
[0003]上述方法存在對于被細(xì)菌嚴(yán)重污染或與細(xì)菌緊密結(jié)合生長的真菌分離效果不夠好，或操作起來較為繁瑣的問題。抗生素的頻繁使用也容易改變目的真菌的某些理化性狀，使得純化后的真菌性狀與原始的菌株不同，影響后續(xù)的研究工作。同時利用純化設(shè)備裝置較為繁瑣，少量菌株的純化尚可應(yīng)付，但對于真菌的群體研究，實施起來存在困難。而用于科學(xué)研究或工業(yè)化應(yīng)用的絲狀真菌通常需要在實驗室條件下轉(zhuǎn)接培養(yǎng)擴繁，但在此過程中很容易受到環(huán)境中細(xì)菌的污染。因此，解決被細(xì)菌污染的真菌的問題，可大大提高科學(xué)研究以及工廠化生產(chǎn)的效率。
[0004]公開于該【背景技術(shù)】部分的信息僅僅旨在增加對本發(fā)明的總體背景的理解，而不應(yīng)當(dāng)被視為承認(rèn)或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種純化細(xì)菌污染絲狀真菌的簡易方法，從而克服現(xiàn)有技術(shù)中須額外使用抗生素，從而影響所得到真菌理化性狀、純化效果差、純化過程繁瑣、耗材大的缺點。
[0006]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方法如下:
[0007]—種純化細(xì)菌污染絲狀真菌的簡易方法，包含以下操作步驟:
[0008](1)制作薄層培養(yǎng)基平板:將加熱融化后的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，在培養(yǎng)皿中形成厚度為l-2mm的平板培養(yǎng)基；
[0009](2)將與細(xì)菌混合生長的目的真菌接入步驟(1)中所得平板培養(yǎng)基中，25_28°C溫度下培養(yǎng)2-3天；
[0010](3)將步驟(2)中培養(yǎng)2-3天后長有真菌菌落的平板培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)至高溫環(huán)境培養(yǎng)5-7天；
[0011](4)將步驟(3)中培養(yǎng)5-7天后長有真菌的培養(yǎng)基切割成塊狀，轉(zhuǎn)接至新的平板培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)；
[0012](5)挑取步驟(4)培養(yǎng)所得菌落邊緣菌絲轉(zhuǎn)入新的平板培養(yǎng)基中培養(yǎng)，即可獲得純化的目的真菌。
[0013]其中，所述的培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基，即馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基。
[0014]其中，步驟(3)中所述高溫環(huán)境的溫度為30_35°C。
[0015]其中，步驟(3)中所述培養(yǎng)皿不用封口膜封口，即只需將培養(yǎng)皿蓋子蓋上，不額外使用封口膜將蓋子邊沿密封。
[0016]其中，步驟(4)在無菌操作臺上操作。
[0017]其中，步驟(4)、步驟(5)中培養(yǎng)條件與步驟(2)中一樣。
[0018]真菌和細(xì)菌的抗逆性存在較為明顯的差異，真菌屬于真核生物，具有較好的抗逆性細(xì)胞壁;而細(xì)菌屬于原核生物，無細(xì)胞壁，抗逆性較真菌差。本發(fā)明方法將真菌和細(xì)菌同時處于高溫?zé)o營養(yǎng)(培養(yǎng)基已干燥)條件下，細(xì)菌因為抗逆性較差而死亡，但真菌尚具有生長活力，通過重新培養(yǎng)從而達(dá)到純化真菌的目的。
[0019]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果:
[0020]本發(fā)明方法對細(xì)菌污染絲狀真菌的純化分離方法，通過簡捷的操作，不用添加額外的抗生素，不用其他裝置設(shè)備輔助，即能獲得較純的真菌。純化效果好，純化方法易操作、耗材少，成本低。
【具體實施方式】
[0021]下面結(jié)合【具體實施方式】進(jìn)行詳細(xì)描述，但應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明的保護(hù)范圍并不受【具體實施方式】的限制。
[0022]實施例1
[0023]—種純化細(xì)菌污染絲狀真菌的簡易方法，操作步驟如下:
[0024](1)制作薄層培養(yǎng)基平板:將加熱融化后的PDA培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，在培養(yǎng)皿中形成厚度為2_的PDA平板培養(yǎng)基；
[0025](2)將與細(xì)菌混合生長的目的真菌甘鹿梢腐病菌(Fusarium sacchari)接入步驟(1)中所得PDA平板培養(yǎng)基中，25°C溫度下培養(yǎng)3天；
[0026](3)將步驟(2)中培養(yǎng)3天后長有真菌菌落的TOA平板培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿放置在32°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7天，即當(dāng)Η)Α培養(yǎng)基干燥，表面無細(xì)菌的濕潤狀時即可，其中培養(yǎng)皿僅用培養(yǎng)皿蓋子蓋住，避免環(huán)境中其他微生物的污染，不再使用封口膜將蓋子邊沿封住，使培養(yǎng)基水分可以蒸發(fā)出去；
[0027](4)在無菌操作臺上將步驟(3)中培養(yǎng)7天后長有真菌的PDA培養(yǎng)基用無菌手術(shù)到切割成小塊，轉(zhuǎn)接至新的TOA平板培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件與步驟(2)中的相同，即培養(yǎng)溫度為25°C，培養(yǎng)時間為3天；
[0028](5)挑取步驟(4)培養(yǎng)所得菌落邊緣菌絲轉(zhuǎn)入新的PDA平板培養(yǎng)基中培養(yǎng)，即可獲得純化的甘鹿梢腐病菌(Fusarium sacchari)，培養(yǎng)條件與步驟(2)中的相同，即培養(yǎng)溫度為25°C，培養(yǎng)時間為3天。
[0029]實施例2
[0030]—種純化細(xì)菌污染絲狀真菌的簡易方法，操作步驟如下:
[0031 ] (1)制作薄層培養(yǎng)基平板:將加熱融化后的PDA培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，在培養(yǎng)皿中形成厚度為1_的PDA平板培養(yǎng)基；
[0032](2)將與細(xì)菌混合生長的目的真菌甘鹿赤腐病菌(Colletotrichum falcatum)接入步驟(1)中所得PDA平板培養(yǎng)基中，28°C溫度下培養(yǎng)2天；
[0033](3)將步驟(2)中培養(yǎng)2天后長有真