Ldv修飾的吲哚喹嗪，其制備，納米結(jié)構(gòu)，活性和應用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及（6S)-3-乙?；?4-氧代-4,6, 7,12-四氫吲哚[2, 3-a]喹嗪-6-甲 酰-Leu-Asp-Val，Leu-Asp-Val的正規(guī)簡稱是LDV。涉及它的制備方法，涉及它的納米結(jié)構(gòu)， 涉及它的體內(nèi)外抗腫瘤作用，涉及它抗腫瘤細胞粘附侵襲和遷移的作用。因而本發(fā)明涉及 它在制備抗腫瘤藥物，制備抗腫瘤細胞粘附侵襲和遷移藥物中的應用。本發(fā)明屬于生物醫(yī) 藥領(lǐng)域。 技術(shù)背景
[0002] 惡性腫瘤嚴重威脅人類的健康。除了自身對腫瘤患者的預后惡劣之外，惡性腫瘤 并發(fā)的炎癥、血栓和轉(zhuǎn)移進一步惡化患者的預后。例如，超過90%以上的惡性腫瘤患者都是 死于腫瘤轉(zhuǎn)移。腫瘤轉(zhuǎn)移依賴于4個因素：1)腫瘤細胞表面形成微血栓，逃避巨噬細胞吞 噬，通過血液循環(huán)遷移到遠端；2)遷移到遠端的腫瘤細胞粘附到血管壁；3)細胞粘附到血 管壁的腫瘤細胞通過侵襲出血管而進入正常組織。
[0003] 由于現(xiàn)有抗腫瘤藥物不具備抗轉(zhuǎn)移作用，所以療效不理想。發(fā)明同時具有抗腫瘤、 抗炎癥、抗血栓和抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用的藥物是臨床的迫切需求。
[0004] RGD四肽，即RGDS，RGDF和RGDV是整合素 α ν β 3的阻斷劑，具有抗血栓和抗細胞 粘附活性。Leu-Asp-Val則具備抗腫瘤細胞遷移作用。申請人曾經(jīng)把R⑶四肽與雌激素偶 聯(lián)，制備沒有凝血副作用的抗骨質(zhì)疏松劑。申請人曾經(jīng)把R⑶四肽與四氫-β -咔啉-3-羧 酸偶聯(lián)制備高效的抗血栓劑。申請人也曾經(jīng)用氨基酸修飾四氫-β -咔啉-3-羧酸、β -咔 啉-3-羧酸及1-位取代的β -咔啉-3-羧酸，包括1-位取代的四氫-β -咔啉-3-羧酸或 1-位取代的β_咔啉-3-羧酸制備高效的抗血栓劑或抗腫瘤劑。下面是發(fā)明人創(chuàng)造的結(jié)構(gòu) 類型的代表。盡管發(fā)明人付出了大量研究精力，篩選了數(shù)百種化合物，一直沒有得到同時具 有抗腫瘤和抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用的化合物。
[0005] 發(fā)明人在分析數(shù)百種化合物的結(jié)構(gòu)及活性變化的基礎(chǔ)上，認識到將Leu-Asp-Val 與（6S) -3-乙?；?4-氧代-4,6, 7,12-四氫吲哚[2, 3-a]喹嗪-6-羧酸偶聯(lián)，形成的化合 物會同時具有抗腫瘤和抗腫瘤轉(zhuǎn)移作用?；谶@個認識，發(fā)明人提出了本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的第一個內(nèi)容是提供下面結(jié)構(gòu)的（6S)-3-乙?；?4-氧代-4,6, 7,12-四 氫吲哚[2, 3-a]喹嗪-6-甲酰-Leu-Asp-Val。
[0008] 本發(fā)明的第二個內(nèi)容是提供（6S)-3-乙酰基-4-氧代-4,6,7，12_四氫吲哚[2， 3_a]喹嗪-6-甲酰-Leu-Asp-Val的制備方法，該方法包括：
[0009] (1)在多聚磷酸的存在下，L-色氨酸和苯甲醇反應，生成L-色氨酸芐酯；
[0010] ⑵在三氟乙酸的存在下，在二氯甲烷中1，1，3,3-四甲氧基丙烷和L-色氨酸芐酯 縮合為（3S) -1- (2, 2-二甲氧乙基）-2, 3,4,9-四氫-β -咔啉_3_竣酸節(jié)酯；
[0011] ⑶在三乙胺的存在下，在丙酮中雙乙烯酮和（3S)-1-(2,2-二甲氧乙基）-2,3,4， 9-四氫-β -咔啉-3-羧酸芐酯縮合為（3S) -1- (2, 2-二甲氧乙基）-2-乙酰乙?；?2, 3， 4,9-四氫-β -咔啉-3-羧酸節(jié)酯；
[0012] (4)在鹽酸水溶液（2Μ)的存在下，在丙酮中（3S)-1-(2，2-二甲氧乙基）-2_乙酰 乙酰基-2, 3,4,9-四氫-B-咔啉-3-羧酸芐酯氧化環(huán)合為（6S)-苯基-3-乙?；?4-氧 代-4,6, 7,12-四氫吲哚[2, 3-a]喹嗪-6-羧酸酯；
[0013] (5)冰浴下在NaOH的水溶液（2M)和甲醇中，（6S)-苯基-3-乙?；?4-氧代-4， 6, 7,12-四氫吲哚[2, 3-a]喹嗪-6-羧酸酯轉(zhuǎn)化為（6S) -3-乙酰基-4-氧代-4,6, 7,12-四 氫吲哚[2, 3-a]喹嗪-6-羧酸；
[0014] (6)采用逐步縮合法，在N，N_二環(huán)己基碳二亞胺和N-羥基苯駢三氮唑的存在下， 在干燥四氫呋喃中反應，得到全保護多肽序列B〇C-Leu-ASp(0BZl)-Val-0B Zl ;
[0015] (7)冰浴下在氯化氫的乙酸乙酯溶液（4M)中，全保護多肽序列 Boc-Leu_Asp(OBzl)-Val-〇Bzl 脫除 Boc 得 Leu-Asp (OBzl)-Val-OBzl ;
[0016] (8)在1-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽和N-羥基苯駢三氮唑存在 下,在無水N，N-二甲基甲酰胺中（6S)-3-乙?；?4-氧代-4,6, 7,12-四氫吲哚[2, 3-a] 喹嗪-6-羧酸和 Leu-Asp (OBzl) -Val-OBzl 縮合為（6S) -3-乙酰基-4-氧代-4,6, 7,12-四 氧口引噪[2,3-&]唾嚷-6-甲醜-1^11-八8卩（01^1)-\%1-〇1^1;
[0017] (9)冰浴下在NaOH的水溶液（2M)和甲醇中，（6S) -3-乙?；?4-氧代-4，6， 7，12_ 四氫吲哚[2,3-a]喹嗪-6-甲酰-Leu_Asp(0Bzl)-Val-0Bzl 轉(zhuǎn)化為（6S)-3-乙酰 基-4-氧代 _4,6, 7,12-四氫吲哚[2, 3-a]喹嗪-6-甲酰-Leu-Asp-Val。
[0018] 本發(fā)明的第三個內(nèi)容是測定（6S)-3-乙?；?4-氧代-4,6,7，12_四氫吲哚[2， 3_a]喹嗪-6-甲酰-Leu-Asp-Val的納米結(jié)構(gòu)。
[0019] 本發(fā)明的第四個內(nèi)容是評價（6S)-3-乙?；?4-氧代-4,6,7，12-四氫吲哚[2， 3-a]喹嗪-6-甲酰-Leu-Asp-Val體外抑制腫瘤細胞增殖的作用。
[0020] 本發(fā)明的第五個內(nèi)容是評價（6S)-3-乙?；?4-氧代-4,6,7，12-四氫吲哚[2， 3-a]喹嗪-6-甲酰-Leu-Asp-Val對荷S180小鼠腫瘤生長的抑制作用。
[0021] 本發(fā)明的第六個內(nèi)容是評價（6S)-3-乙?；?4-氧代-4,6,7，12-四氫吲哚[2， 3-a]喹嗪-6-甲酰-Leu-Asp-Val體外抑制腫瘤細胞粘附侵襲和遷移的作用。
【附圖說明】
[0022] 圖1.發(fā)明人創(chuàng)造的抗血栓或抗腫瘤活性化合物的結(jié)構(gòu)類型代表，式中AA為L-氨 基酸或甘氨酸。
[0023] 圖2. (6S)-3-乙?；?4-氧代-4,6, 7,12-四氫吲哚[2, 3-a]喹嗪-6-甲 酰-Lys-Glu的合成路線.⑴多聚磷酸，苯甲醇，80°C ;(ii)l，l，3,3-四甲氧基丙烷，三氟 乙酸，二氯甲烷；（iii)雙乙烯酮，三乙胺，丙酮；（iv)鹽酸水溶液（2M)，丙酮；（v)NaOH水溶 液（2M)，甲醇，0°C ; (vi) 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基）碳二亞胺鹽酸鹽，N-羥基苯駢三氮 唑，二氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺；（vii)NaOH水溶液（2M)，甲醇，0°C;(viii)N-羥基苯駢三 氮唑，N，N-二環(huán)己基碳二亞胺，N-甲基嗎啉，四氫呋喃；（ix)氯化氫的乙酸乙酯溶液（4M)， (TC。
[0024] 圖3.化合物7在純水溶液中1 X 10 SM濃度下的透射電鏡照片。
【具體實施方式】
[0025] 為了進一步闡述本發(fā)明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，它 們僅用來對本發(fā)明進行具體描述，不應當理解為對本發(fā)明的限制。
[0026] 實施例1制備L-色氨酸芐酯磷酸鹽（1)
[0027] 將20. 4g(lOOmmol) L-色氛酸、120mmol苯甲醇和120mmol多聚憐酸依次加入 500ml茄瓶中，瓶口安裝冷凝管，置于油浴中加熱至80°C，反應72小時，TLC顯示原料完全 消失，反應結(jié)束。將反應液冷卻至室溫，加入30ml無水乙醚，析出白色固體，攪拌2小時，反 應液減壓過濾，得白色固體，用無水乙醚磨洗3次，得35. 4g(90. 4%)目標化合物，為白色固 體。ESI-MS(m/e) :393. 1[M+H]+。
[0028] 實施例2制備（3S)(2, 2- _甲氧乙基）_2, 3,4,9-四氧-β -卩卡琳竣酸節(jié) 酯⑵
[0029] 將250ml CH2C12加入500ml茄瓶中，冰浴下依次加入15mll，1，3, 3-四甲氧基丙烷 和14ml三氟乙酸，攪拌0. 5小時，加入20. 0g(68mmol) L-色氨酸芐酯，室溫攪拌120小時， 反應結(jié)束。冰浴攪拌下向反應液中緩慢加入飽和Na2C03水溶液，劇烈攪拌，至水層pH為7， 分離二氯甲烷層，二氯甲烷層用5% NaHC03水溶液和飽和NaCl水溶液萃洗3次，二氯甲烷 層用無水Na2S04干燥，減壓過濾，濾液減壓濃縮至干，殘留物經(jīng)硅膠柱層析純化（石油醚： 丙酮=3 : 1)，得9.38g(35%)目標化合物，為無色油狀物。ESI-MS(m/e) :395·2[Μ+Η]+。
[0030] 實施例3制備（3S)(2, 2--甲氧乙基）_2-乙醜乙醜基-2, 3,4,9-四氧-β -昨 啉-3-羧酸芐酯（3)
[0031 ]將 9. 38g (23. 8μπο1) (3S) _1_ (2, 2_ 一 甲氧乙基）_2, 3,4,9_ 四氧 _ β _ 昨琳