項(xiàng)或者多項(xiàng)：
[0037] (1)步驟1)中，所述的茯苓藥材為茯苓塊、茯苓片或茯苓粉；
[0038] 不拘于理論的限制，茯苓塊或者茯苓片通常是粉末壓制成的，可以在加入水浸泡 之前粉碎，再進(jìn)行浸提。
[0039] (2)步驟1)中，所用水為蒸餾水或去離子水；
[0040] (3)步驟1)中，水浸提的溫度為0°C- 100°C，優(yōu)選為20°C-70°C，更優(yōu)選為 50°C- 70°C，進(jìn)一步優(yōu)選為 50°C- 60°C;
[0041] 本發(fā)明人通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，在上述溫度范圍內(nèi)，不會(huì)破壞糖的性質(zhì)，且隨溫度升高， 糖的得率增加。
[0042] (4)步驟1)中，將浸提后得到的茯苓按照相同條件進(jìn)行一次或多次浸提（例如2 或3次），合并水提液；
[0043] (5)步驟1)中，水的用量為能夠浸沒(méi)茯苓的用量，優(yōu)選為茯苓的5 - 20倍量（L/ kg)；
[0044] (6)步驟1)中，浸提期間進(jìn)行攪拌；
[0045] (7)步驟1)中，浸提的時(shí)間為1 - 48小時(shí)；
[0046] (8)步驟2)中，加入的乙醇的體積為濃縮液的1 一 4倍；
[0047] (9)步驟2)中，乙醇沉淀的時(shí)間為大于12小時(shí)，例如為48 - 72小時(shí)；
[0048] (10)步驟2)中，醇沉后上清液中乙醇的終濃度為50% - 80% (質(zhì)量百分比濃 度），優(yōu)選為60%- 70% ;
[0049] (11)步驟3)中，乙醇沉淀后離心，得到的沉淀物加水進(jìn)行一次或多次溶解，離心， 合并上清液，得到溶解液；
[0050] (12)步驟3)中，透析所用的透析袋的截留分子量大于1000 ;
[0051] (13)步驟3)中，用自來(lái)水和/或蒸餾水進(jìn)行透析；透析進(jìn)行一次或多次；
[0052] (14)步驟5)中，噴霧干燥的溫度低于80°C。
[0053] 具體地，上面述任一項(xiàng)所述的制備方法為本發(fā)明任一項(xiàng)所述的茯苓多糖的制備方 法。
[0054] 本發(fā)明的再一方面涉及一種茯苓多糖，其由本發(fā)明任一項(xiàng)所述的制備方法制得。
[0055] 本發(fā)明的再一方面涉及一種藥物組合物，其包含本發(fā)明中任一項(xiàng)所述的茯苓多 糖；具體地，所述藥物組合物為疫苗；具體地，所述疫苗為動(dòng)物或人用的減毒疫苗、滅活疫 苗、蛋白質(zhì)疫苗、DNA疫苗或多肽疫苗；更具體地，為H1N1疫苗或者乙肝疫苗。可選地，所述 藥物組合物還包含藥學(xué)上可接受的輔料。
[0056] 本發(fā)明的再一方面涉及一種疫苗佐劑，其包含本發(fā)明中任一項(xiàng)所述的茯苓多糖； 具體地，所述疫苗佐劑為選自如下疫苗的佐劑：動(dòng)物或人用的減毒疫苗、滅活疫苗、蛋白質(zhì) 疫苗、DNA疫苗和多肽疫苗；更具體地，為為H1N1疫苗佐劑或者乙肝疫苗佐劑。
[0057] 本發(fā)明的再一方面涉及本發(fā)明中任一項(xiàng)所述的茯苓多糖在制備疫苗、疫苗佐劑或 者抗體中的用途；
[0058] 具體地，所述藥物組合物為疫苗；具體地，所述疫苗為動(dòng)物或人用的減毒疫苗、滅 活疫苗、蛋白質(zhì)疫苗、DNA疫苗或多肽疫苗；更具體地，為H1N1疫苗或者乙肝疫苗；
[0059] 具體地，所述疫苗佐劑為選自如下疫苗的佐劑：動(dòng)物或人用的減毒疫苗、滅活疫 苗、蛋白質(zhì)疫苗、DNA疫苗和多肽疫苗；更具體地，為為H1N1疫苗佐劑或者乙肝疫苗佐劑。
[0060] 在本發(fā)明中，所述疫苗選自動(dòng)物和人用的減毒疫苗、滅活疫苗、蛋白質(zhì)疫苗、DNA疫 苗預(yù)計(jì)多肽疫苗。
[0061] 本發(fā)明中，所用乙醇的濃度，如果沒(méi)有特別說(shuō)明，均為質(zhì)量百分比濃度。
[0062] 發(fā)明的有益效果
[0063] 本發(fā)明制備的茯苓多糖，具有良好的疫苗佐劑作用。
【附圖說(shuō)明】
[0064] 圖1 :55 °C提取茯苓多糖的分子量（PCP-55)分布圖譜（HPGPC)。色譜柱： TSK-4000PSWL;洗脫液：0.lmol/LNa2S04;檢測(cè)器：示差檢測(cè)器。注：右側(cè)的峰為溶劑峰。 [0065]圖2:不同溫度下制備的茯苓多糖的分子量分布圖譜（HPGPC)。色譜柱： TSK-4000PSWL;洗脫液：0.lmol/LNa2S04;檢測(cè)器：示差檢測(cè)器。
[0066] 圖3:茯苓多糖對(duì)0VA抗原三次免疫小鼠血清特異性抗體滴度的影響。Saline-生 理鹽水；0VA-卵清蛋白；Alum-鋁佐劑；PCP-茯苓多糖。圖3A，初次免疫后14天小鼠血清 抗體滴度測(cè)定；圖3B,二次免疫后14天小鼠血清抗體滴度測(cè)定；圖3C,三次免疫后14天小 鼠血清抗體滴度測(cè)定。
[0067] 與鹽水組相比廣p〈0. 01;與0VA抗原組相比/p〈0. 05廣p〈0. 01;與0VA+鋁佐劑組 相比，$ρ〈〇· 05, $$ρ〈0· 01，η= 5〇
[0068] 圖4 :苓多糖對(duì)Η1Ν1流感抗原免疫小鼠的佐劑作用。圖4Α，Η1Ν1流感抗原初次免 疫后14天小鼠血清抗體滴度測(cè)定；圖4B，H1N1流感抗原二次免疫后14天小鼠血清抗體滴 度測(cè)定。
[0069] 與鹽水組相比廣p〈0. 01;與0VA抗原組相比/p〈0. 05廣p〈0. 01;與0VA+鋁佐劑組 相比，$ρ〈〇· 05, $$ρ〈0· 01，η= 5〇
[0070] 圖5 :獲苓多糖對(duì)乙肝抗原的佐劑作用。HBsAg-乙肝抗原；PCP-實(shí)施例1制備的 獲茶多糖；AL-錯(cuò)佐劑；group-組別（分組）；control-生理鹽水組。圖5A，乙肝抗原初次 免疫后14天小鼠血清抗體滴度測(cè)定；圖5B,乙肝抗原二次免疫后14天小鼠血清抗體滴度 測(cè)定。
[0071] 與鹽水組相比廣p〈0. 01 ;與0VA抗原組相比/p〈0. 05廣p〈0. 01 ;與0VA+鋁佐劑組 相比，$ρ〈〇· 05, $$ρ〈0· 01，η= 5〇
【具體實(shí)施方式】
[0072] 下面將結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì) 理解，下列實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限定本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體 條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為 可以通過(guò)市購(gòu)獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0073] 實(shí)施例1 :55°C淵度下制各茯芩多糖
[0074] 取茯苓塊1kg，向其中加入蒸餾水15L，55°C溫度下浸泡5小時(shí)，期間不時(shí)攪拌；浸 提液過(guò)濾，濾液離心；浸提后的茯苓殘?jiān)谕瑯訔l件下進(jìn)行第二次提??；合并兩次提取的 水提液，減壓濃縮，然后加入3倍體積的乙醇，使乙醇終濃度為70% (質(zhì)量百分比濃度）進(jìn) 行醇沉48小時(shí)；醇沉物離心，將沉淀部分加入水中攪拌溶解，離心，沉淀再同樣操作二次； 合并溶解的上清液，裝入透析袋（截留分子量>1000)，用水透析；將所截留的透析液減壓濃 縮后，濃縮液裝入小瓶，進(jìn)行冷凍干燥，獲得所述茯苓多糖（命名為PCP-55)。
[0075] 實(shí)施例2 :在10°C- 100°C之間制各茯芩多糖
[0076]取茯苓塊 8 份，每份 100g。分別在 15 °C、25 °C、50°C、60°C、70°C、80°C、90°C和 100°C 溫度下加水浸提。每份茯苓各加入1.5L水。15°C和25°C浸提24小時(shí)，50°C、6(TC、7(rC、 80°C、90°C溫度下各浸提5小時(shí)，100°C煎煮1. 5小時(shí)。每個(gè)溫度下均浸提二次。浸提液過(guò) 濾，濾液離心；浸提后的茯苓殘?jiān)谕瑯訔l件下進(jìn)行第二次提取；合并兩次提取的水提液， 減壓濃縮，然后加入3倍體積的乙醇，使乙醇終濃度為70% (質(zhì)量百分比濃度）進(jìn)行醇沉 48小時(shí)；醇沉物離心，將沉淀部分加入水中攪拌溶解，離心，沉淀再同樣操作二次；合并溶 解的上清液，裝入透析袋（截留分子量>1000)，用水透析；將所截留的透析液減壓濃縮后， 濃縮液裝入小瓶，進(jìn)行冷凍干燥，獲得不同溫度下獲得的茯苓多糖（分別命名為PCP-15、 PCP-25、PCP-50、PCP-60、PCP-70、PCP-80、PCP-90 和PCP-100)。
[0077] 實(shí)施例3 :不同淵度制各茯芩多糖的理化件質(zhì)測(cè)定
[0078] 1.實(shí)驗(yàn)樣品
[0079] 根據(jù)實(shí)施例1和實(shí)施例2的制備方法制備的茯苓多糖。
[0080] 2.茯苓多糖得率以及茯苓多糖中糖含量的測(cè)定