方法" 部分所述的脆碎度測試和崩解測試來測量強度。
[0189] 實施例8 本實施例顯示如何可以通過干燥酶而無載體生產(chǎn)粉末。由此粉末生產(chǎn)的片劑包含 13.7% (w/w)G4淀粉酶，但是所述片劑不崩解并因此在應用中是無用的。
[0190] 將具有5. 6%(w/w)的干物質含量和148 BMK/g的酶活性的1000kg G4淀粉酶(純 度=88. 1%)加入到槽中并攪拌。不添加載體或任何其它物質。然后將溶液栗到噴霧干燥 器并如實施例2所述進行干燥。
[0191] 粉末的活性是2050 BMK/g。如實施例7所述將粉末制成片劑。生產(chǎn)由56%MCC (2. 8kg)、20%G4淀粉酶粉末（lkg)、24%其它混合物（I. 2kg "其它混合物"在"材料"部分進 行定義）組成的5kg粉末摻合物。則片劑的酶活性為410 BMK/g等于13. 7% (w/w)G4淀粉 酶。所述片劑不能根據(jù)規(guī)范生產(chǎn)；所述規(guī)范是脆碎度(如"一般方法"部分所述）最大5%，并 且崩解時間（如"一般方法"部分所述）最大180s。片劑壓縮到5. 2mm高度導致2. 3%脆碎 度，其在規(guī)范內(nèi)，但是，崩解>600s或遠高于180s。嘗試使片劑更松散以降低崩解時間導致 片劑具有6mm高度和6. 3%脆碎度，這現(xiàn)在超出5%的規(guī)范。所述片劑仍然不在600s內(nèi)崩解。
表3〇
[0192] 實施例9 本實施例顯示具有12. 4%酶蛋白的片劑的成功生產(chǎn)。
[0193] 實施例2中生產(chǎn)的粉末如實施例7中壓縮成片劑。粉末(實施例2)的活性是1240 BMK/g。混合5 kg粉末。56%MCC(2. 8kg)、30%G4淀粉酶粉末（lkg)、14%其它混合物（"其它 混合物"在"材料"部分進行定義）（1.2kg)。則片劑的酶活性為372 BMK/g等于12.4% (w/ w)G4淀粉酶。下表顯示在生產(chǎn)片劑中有一些靈活性，因為獲得兩種不同的壓縮(片劑的不 同高度)。
表4。
[0194] 實施例10 本實施例顯示具有16%酶蛋白的片劑的成功生產(chǎn)。
[0195] 從實施例3生產(chǎn)的粉末如實施例7中壓縮成片劑。粉末的活性是1600 BMK/g?；?合5 kg粉末。56%MCC(2. 8kg)、30%G4淀粉酶粉末（lkg)、14%其它混合物（"其它混合物"在 "材料"部分進行定義）（1.2kg)。則粉末混合物的酶活性為480 BMK/g，等于16% (w/w)G4 淀粉酶。生產(chǎn)了片劑。下表顯示對崩解時間和脆碎度的分析數(shù)據(jù)。
表5〇
[0196] 實施例11 本實施例顯示用具有1860BMK/g活性的G4淀粉酶粉末和具有1615BMK/g活性的如實 施例6中那樣團聚的G4淀粉酶生產(chǎn)的兩種片劑。
[0197] 片劑A和片劑B兩者包含15. 2% (w/w) G4淀粉酶蛋白；測量為456 BMK/g。所述 片劑使用如實施例7中所述相同類型的賦形劑，但是一些G4粉末已用如實施例6所述團聚 的G4粉末替換，并且一些MCC已用Prosolv SMCC 50形式的硅化的MCC替換。
[0198] 片劑A具有這樣的組成(參見表7)，其中25%的MCC已用SMCC替換并且50%的G4 粉末已用團聚的G4粉末替換。這產(chǎn)生了具有相對低崩解時間和良好的強健性的片劑，所述 強健性測量為生產(chǎn)不同高度的片劑而不過分影響崩解時間和脆碎度百分比的能力。對于生 產(chǎn)重要的是具有可以允許在一定范圍的高度上的片劑，以便在生產(chǎn)中具有靈活性。如果該 范圍縮小，可能批次到批次的變化生產(chǎn)落入規(guī)范之外的片劑。
[0199] 仍然可以改進片劑A;特別是關于脆碎度，這是在可接受的范圍的較高端。
[0200] 片劑B增大SMCC水平至SMCC的總量的50 %，并增加團聚的G4粉末到100 %，這 意味著沒有使用G4粉末。片劑B具有與片劑A相同的G4淀粉酶蛋白含量15. 2% (w/w)。
[0201] 現(xiàn)在的結果是片劑具有甚至更低的崩解時間和更低的脆碎度并且相對寬范圍的 片劑高度。
表7.本表顯示片劑A和片劑B的％ (w/w)組成。
[0202] 實施例12 本實施例顯示在干燥期間如何使用不溶性載體增加粉末的密度并因此可以生產(chǎn)更高 高度的片劑。
[0203] 通過使用1000 kg具有5.6%(w/w)干物質含量和148BMK/g酶活性的G4淀粉酶 (純度=88. 1%)生產(chǎn)粉末A。將其添加到槽中并攪拌。不添加載體或任何其它物質。然后將 酶溶液栗到噴霧干燥器并如實施例2所述進行干燥。
[0204] 通過使用1000 kg具有5. 6% (w/w)干物質含量和148BMK/g酶活性的G4淀粉酶 (純度=88. 1%)生產(chǎn)粉末B。將其添加到槽中并攪拌。添加17kgMCC(AvicelPH101)。 然后將漿料如實施例2中所述噴霧干燥。
[0205] 混合物A 生產(chǎn)5kg粉末摻合物，其由56%MCC( 2. 8kg)、25%粉末A(lkg)、19%其它混合物（I. 2kg) 組成。"其它混合物"在"材料"部分定義。在生產(chǎn)片劑之前，如上文在"一般方法"下所述 測量的片劑混合物的松散粉末密度是〇. 336g/cm3。
[0206] 混合物B 生產(chǎn)5kg粉末摻合物，其由56%MCC( 2. 8kg)、25%粉末A(lkg)、19%其它混合物（I. 2kg) 組成。"其它混合物"在"材料"部分定義。在生產(chǎn)片劑之前，片劑混合物的松散粉末密度是 0. 403g/cm3。
[0207] 使用混合物B(其中粉末與MCC載體一起噴霧干燥）以在KilianE壓片機上生產(chǎn) 片劑，獲得比使用混合物A(其中粉末在不使用載體的情況下噴霧干燥）生產(chǎn)片劑重23%的 片劑。對于Ki11ian機器的具體設定，來自混合物A的片劑具有2. 78g的重量，并且來自混 合物B的片劑具有3. 43g的重量。
[0208] 實施例13 本實施例顯示酶溶液與不溶性載體(MCC) -起干燥得到可以被壓縮成高有效載荷片劑 (>10 % (w/w)酶蛋白）的粉末。此片劑容易在水中崩解。本實施例還顯示無MCC載體的情 況下干燥導致不容易在水中崩解的片劑。
[0209] 在幾乎類似于實施例1的過程中制備酶溶液。
[0210] 通過使用旋轉真空過濾器或類似物從枯草芽孢桿菌的FNA蛋白酶酶發(fā)酵物分離細 胞，并且無細胞發(fā)酵液在橫流超濾設備上用10千道爾頓膜濃縮以生產(chǎn)更濃縮的FNA蛋白酶 溶液。所述酶濃縮物中加入5%甲酸鈉/甲酸至pH=5. 5并且FNA酶在15°C下24-48小時經(jīng) 歷結晶過程。在離心機上將晶體與上清液分離。為獲得更高的純度，晶體用冷水洗滌一次。
[0211] 通過在45°C使用1重量份晶體和3份水隨后攪拌30分鐘重溶解晶體。此溶液現(xiàn) 在稱為FNA酶溶液。
[0212] 具有MCC的粉末Nl 將具有8. 2%干物質含量和93%純度(如在"一般方法"部分定義）的4. 68kgFNA酶溶 液添加到槽中并攪拌，連同0.094kg不溶性MCC載體Vivapur101。酶漿料在Niro噴霧 干燥器尺寸6. 3上進行噴霧干燥。干燥的粉末(這里稱為NI)分析具有FNA蛋白酶含量585 mg/g(= 58.5 % (w/w))和DM=93.5%。計算的不溶性載體含量是（0,094 / (0,082X4,68 + 0, 094)X0, 935 = 18, 4%。
[0213] 無MCC的粉末L2 具有7. %的干物質含量和82%的純度的4. 6kgFNA酶溶液在與Nl類似但不使用載體的 過程中噴霧干燥。干燥的粉末(這里稱為L2)分析具有FNA蛋白酶含量611mg/g(= 61. 1 % (w/w))和DM=95%。
表9 :該表顯示用于從NI粉末和L2粉末制造片劑的粉末摻合物的組成。
[0216] 使用具有壓力控制的手動單沖壓片機將粉末混合物壓制成片劑。將壓力調節(jié)至達 到片劑脆碎度剛好在5%以下的水平，這將產(chǎn)生最容易崩解的片劑。
[0217] 表10顯示關于生產(chǎn)的片劑的數(shù)據(jù)。具有粉末Nl的片劑含有12. 5%的酶并容易崩 解（160s)，而具有粉末L2的片劑花費遠超過6分鐘崩解（》360秒)。
表10 :該表顯示如何從Nl生產(chǎn)片劑；具有MCC載體的粉末獲得良好質量的片劑，其可 以崩解，而從粉末L2生產(chǎn)的片劑未使用載體，獲得不能在合理的時間框架中崩解的片劑。
[0218] 序列表
【主權項】
1. 用于制備酶片劑的方法，所述方法包括下列步驟： a) 混合酶和不溶性載體，以獲得漿料， b) 干燥所述漿料以獲得干燥的酶粉末，其顆粒具有大于30 Mm的體積平均直徑，并且 其中干燥的酶粉末中不溶性載體的含量基于干燥的酶粉末的重量為至少10% (w/w)，并至 多 50% (w/w)，和 c) 直接壓縮所述干燥的酶粉末成片劑，其中所述片劑包含至少10% (w/V)所述酶。2. 根據(jù)權利要求1的方法，其中以酶溶液形式添加所述酶以獲得漿料。3. 根據(jù)權利要求2的方法，其中所述酶溶液具有在50-90% (w/w)純酶區(qū)間的酶純度， 諸如在60-90% (w/w)純酶區(qū)間，諸如在65-90% (w/w)純酶區(qū)間，諸如在70-90% (w/w)純 酶區(qū)間，諸如在75-90% (w/w)純酶區(qū)間。4. 根據(jù)權利要求2-3任一項的方法，其中所述酶溶液具有4-20% (w/w)，5-20% w/w，諸 如5-15% (w/w)或6-12% (w/w)的干物質含量。5. 根據(jù)權利要求1-4任一項的方法，其中所述酶是選自淀粉酶、蛋白酶、木聚糖酶、氧 化酶和脂肪酶的一種或多種。6. 根據(jù)權利要求1-5任一項的方法，其中所述片劑包含10% (w/w)和45% (w/w)之 間的酶，諸如10% (w/w)和40% (w/w)之間的酶，諸如15 % (w/w)和20% (w/w)之間 的酶。7. 根據(jù)權利要求1-6任一項的方法，其中所述不溶性載體選自聚乙烯聚吡咯烷酮 (PVPP)、微晶纖維素和小麥淀粉，優(yōu)選微晶纖維素。8. 根據(jù)權利要求1-7任一項的方法，其中所述不溶性載體是顆粒狀微晶纖維素諸如任 選地涂覆有二氧化硅。9. 根據(jù)權利要求1-8任一項的方法，其中所述顆粒狀微晶纖維素具有25-150 Wn，諸如 30-75 的體積平均直徑。10. 根據(jù)權利要求1-9任一項的方法，其中干燥的酶粉末中不溶性載體的含量是基于 干燥的酶粉末的重量至少10% (w/w)且至多40 (w/w)，諸如10-35% (w/w)或10-30% (w/ w)或 10-20% (w/w)。11. 根據(jù)權利要求1-10任一項的方法，其中所述干燥是噴霧干燥，諸如單級噴霧干燥。12. 根據(jù)權利要求1-11任一項的方法，其中步驟b)的所述酶顆粒具有30-250 Mm，諸 如30-150 Mm，諸如35-75 或諸如40-75 的體積平均直徑。13. 根據(jù)權利要求1-12任一項的方法，其中步驟b)的所述酶顆粒在直接壓縮之前進一 步團聚，諸如通過諸如流化噴霧干燥。14. 根據(jù)權利要求13的方法，其中所述團聚的酶顆粒具有40 - 250 Mm，諸如50 - 150 的體積平均直徑。15. 根據(jù)權利要求1-14任一項的方法，其中所述干燥的酶顆?；蚋稍锏膱F聚的酶顆粒 在步驟c)之前與另外的片劑賦形劑諸如崩解劑混合。16. 根據(jù)權利要求15的方法，其中作為片劑賦形劑加入的崩解劑的量是20-80% (w/ w)，諸如 30-65% (w/w)，諸如 40-56% (w/w)或 50-60% (w/w)。17. 根據(jù)權利要求1-16任一項的方法，其中所述片劑在300秒內(nèi)，諸如180秒內(nèi)自崩解 和/或其中所述片劑在180秒內(nèi)諸如100秒內(nèi)崩解。
【專利摘要】本發(fā)明涉及酶片劑的制備方法，所述酶片劑包含高酶量（具有高有效載荷），用于在例如飼料或食品工業(yè)中使用。
【IPC分類】C11D3/386, C11D17/00
【公開號】CN105121618
【申請?zhí)枴緾N201480023557
【發(fā)明人】J.達姆加亞爾德
【申請人】杜邦營養(yǎng)生物科學有限公司
【公開日】2015年12月2日
【申請日】2014年4月30日
【公告號】WO2014177644A1