子誘導(dǎo)Gab2表達(dá)，通過Gab2募集并整合多種信號(hào)，產(chǎn)生一個(gè)綜合效應(yīng)，而主導(dǎo)疾病的發(fā)展。
[0021] 通過124例人肝癌樣本調(diào)查證明，Gab2高表達(dá)于大部分病例；Gab2基因敲除的小 鼠，可以抵抗高脂飼料誘導(dǎo)的肥胖和脂肪在肝中的堆積、酒精對(duì)肝臟急性或慢性損傷及脂 肪產(chǎn)生，以及MCD誘導(dǎo)的脂肪肝炎。裸鼠實(shí)驗(yàn)證明，在肝癌細(xì)胞系中降低Gab2蛋白水平，也 阻滯細(xì)胞在裸鼠的成瘤。因此，通過降低Gab2表達(dá)可以預(yù)防和治療脂肪肝及相關(guān)的肝炎和 肝癌，利用檢測(cè)Gab2蛋白的表達(dá)水平可以診斷這些疾病。
[0022] 由此可見，分子靶點(diǎn)Gab2可在制備預(yù)防和治療脂肪肝及肝癌的藥物中應(yīng)用，分子 靶點(diǎn)Gab2也可在制備預(yù)防和治療脂肪肝及肝癌的保健食品中應(yīng)用。
【附圖說明】
[0023] 圖1為Gab2蛋白在非酒精性脂肪肝（NAFLD)小鼠肝組織中高表達(dá)。
[0024] 圖2為Gab2蛋白在慢性酒精性脂肪肝（NAFLD)小鼠肝組織中高表達(dá)
[0025] 圖3a為新鮮肝癌樣本中Gab2蛋白的表達(dá)。蛋白水平用抗體檢測(cè)，T標(biāo)記腫瘤組 織，P為他的癌旁組織。
[0026] 圖3b為新鮮肝癌樣本中蛋白表達(dá)的量化統(tǒng)計(jì)分析。**P〈0. 01。
[0027] 圖4a為非酒精肝模型小鼠（飼喂高脂飼料）的體態(tài)。
[0028] 圖4b為非酒精肝模型小鼠（飼喂高脂飼料）的量化統(tǒng)計(jì)分析。~~p〈0. 01，*p〈0. 05。
[0029] 圖5a為非酒精肝模型小鼠（飼喂高脂飼料）的肝臟。
[0030] 圖5b為非酒精肝模型小鼠（飼喂高脂飼料）的肝臟與體重的比例量化統(tǒng)計(jì)。 一，**p〈〇. 01〇
[0031] 圖6a為非酒精肝模型小鼠（飼喂高脂飼料）的肝臟的組織切片。HE染色顯示，空 泡為混合型脂滴。
[0032] 圖6b為非酒精肝模型小鼠（飼喂高脂飼料）的肝臟的組織切片脂滴空泡面積的 量化統(tǒng)計(jì)。一P〈0.01，*P〈0.05。
[0033] 圖7為非酒精肝模型小鼠（飼喂高脂飼料）血清的甘油三酯（TG)的水平。 **p〈〇. 01〇
[0034] 圖8為非酒精肝模型小鼠（飼喂高脂飼料）血清的總膽固醇（T-CHO)的水平。 一，**p〈〇. 01〇
[0035] 圖9為急性酒精肝模型小鼠的肝臟組織。
[0036] 圖10為慢性酒精肝模型小鼠的肝臟組織。
[0037] 圖11為慢性酒精肝模型小鼠血清ALT(谷草轉(zhuǎn)氨酶）的濃度。~~，#p〈0. 01。
[0038] 圖12為慢性酒精肝模型小鼠血清甘油三酯的濃度。**p〈0. 01。
[0039] 圖13為NASH模型小鼠的肝臟組織（HE染色）。*標(biāo)記脂滴空泡，箭頭指向炎癥細(xì) 胞浸潤(rùn)區(qū)域。
[0040] 圖14為NASH小鼠血清的甘油三酯（TG)的水平.一，#p〈0. 01。
[0041] 圖15為NASH小鼠血清的總膽固醇（T-CHO)的水平?一，林p〈0. 0。
[0042] 圖16為NASH小鼠血清的TNFa的水平.一，#p〈〇. 〇。
[0043] 圖17a為Gab2過表達(dá)或敲降的HepG2肝癌細(xì)胞系在裸鼠的成瘤實(shí)驗(yàn)中小動(dòng)物活 體成像拍攝的在體腫瘤形狀示例圖。
[0044] 圖17b為Gab2過表達(dá)或敲降的HepG2肝癌細(xì)胞系在裸鼠的成瘤實(shí)驗(yàn)中所有動(dòng)物 的瘤快統(tǒng)計(jì)分析。
[0045] 圖18a為Gab2過表達(dá)或敲降的H印G2細(xì)胞的增殖用MTT法檢測(cè)的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。 **P〈0. 01。
[0046] 圖18b為Gab2過表達(dá)或敲降的IfepG2細(xì)胞的增殖中細(xì)胞的Gab2蛋白表達(dá)。
[0047] 圖19a為Gab2過表達(dá)或敲降的IfepG2細(xì)胞的迀移示例圖。
[0048] 圖19b為Gab2過表達(dá)或敲降的H印G2細(xì)胞的迀移多次試驗(yàn)的量化統(tǒng)計(jì)分析。 **P〈0. 01。
【具體實(shí)施方式】
[0049] 實(shí)施例I:Gab2高表達(dá)于高脂飼料或酒精飼喂的小鼠肝臟，以及60%以上的人的 肝癌病例，可以作為肝癌診斷的標(biāo)記。
[0050] (1).小鼠非酒精性脂肪肝模型
[0051] 篩選Gab2(全敲/半敲）小鼠進(jìn)行非酒精性脂肪肝造模實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)選取12只8 周齡Gab2(-/_)雄性小鼠和12只8周齡Gab2(+/_)雄性小鼠，每種小鼠隨機(jī)分為兩組，每 組6只，分別為對(duì)照組和高脂組，對(duì)照組飼喂正常小鼠基礎(chǔ)料，高脂組飼喂高脂飼料（基礎(chǔ) 飼料77.9% +豬油10%，膽固醇2%，蛋黃粉10%，膽鹽0. 1% )。各組分別于造模開始后 定期稱量體重，以用于繪制生長(zhǎng)曲線，并于造模6個(gè)月時(shí)小鼠體重不再有明顯增長(zhǎng)后處死， 取出完整肝臟進(jìn)行westernblot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)Gab2蛋白的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)Gab2蛋白在非酒精 性脂肪肝（NAFLD)小鼠模型中高表達(dá)（如圖1)。
[0052] (2)為了驗(yàn)證Gab2與肝臟脂質(zhì)代謝之間的關(guān)系，同時(shí)也用Lieber-DeCarli含有酒 精的液體飼料以及等熱量等體積的對(duì)照組飼料喂食C57BL/6的小鼠6周，每天早上9時(shí)更 換新鮮配制的液體飼料。移出肝臟進(jìn)行免疫印跡實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證Gab2表達(dá)變化。結(jié)果顯示酒精 喂食組小鼠肝臟中Gab2的表達(dá)明顯增多（如圖2)。
[0053] (3)人肝癌樣本
[0054] 利用組織勻漿儀提取了 60例0.Icm3新鮮人肝組織（30例肝癌，30例癌旁對(duì)照） 的蛋白并檢測(cè)了Gab2蛋白表達(dá)，結(jié)果顯示其中有21個(gè)肝癌組織相對(duì)其癌旁樣本Gab2存在 不同程度高表達(dá)，結(jié)果如圖3a，蛋白表達(dá)的量化統(tǒng)計(jì)分析參見圖3b。
[0055] 另外，檢測(cè)94例肝癌組織和23正常組織的Gab2表達(dá)，發(fā)現(xiàn)大部分肝癌病例Gab2 高表達(dá)，而正常組織僅有少量的表達(dá)，蛋白芯片中肝癌樣本中Gab2蛋白的表達(dá)統(tǒng)計(jì)分析如 表1。
[0056] 表 1
[0057]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 分子靶點(diǎn)Gab2,其特征在于是一種介導(dǎo)致病因素誘發(fā)脂肪肝及肝癌的細(xì)胞質(zhì)信號(hào) 支架蛋白。
2. 如權(quán)利要求1所述分子靶點(diǎn)Gab2在制備預(yù)防和治療脂肪肝及肝癌的藥物中應(yīng)用。
3. 如權(quán)利要求1所述分子靶點(diǎn)Gab2在制備預(yù)防和治療脂肪肝及肝癌的保健食品中應(yīng) 用。
【專利摘要】分子靶點(diǎn)Gab2及其在制備預(yù)防和治療脂肪肝及肝癌藥物和保健食品中的應(yīng)用，涉及分子靶點(diǎn)。所述分子靶點(diǎn)Gab2是一種介導(dǎo)致病因素誘發(fā)脂肪肝及肝癌的細(xì)胞質(zhì)信號(hào)支架蛋白；利用多種疾病動(dòng)物模型，證明在脂肪肝及相關(guān)疾病中，致病因子誘導(dǎo)Gab2表達(dá)，通過Gab2募集并整合多種信號(hào)，產(chǎn)生一個(gè)綜合效應(yīng)，而主導(dǎo)疾病的發(fā)展。分子靶點(diǎn)Gab2可在制備預(yù)防和治療脂肪肝及肝癌的藥物中應(yīng)用，分子靶點(diǎn)Gab2也可在制備預(yù)防和治療脂肪肝及肝癌的保健食品中應(yīng)用。
【IPC分類】A23L1-29, G01N33-68, C07K14-47
【公開號(hào)】CN104558146
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510026681
【發(fā)明人】呂忠顯, 陳帥, 康宇佳, 李艷麗, 陶進(jìn), 程江紅
【申請(qǐng)人】廈門大學(xué)
【公開日】2015年4月29日
【申請(qǐng)日】2015年1月20日