專利名稱：膽汁酸螯合劑的制作方法
業(yè)已認(rèn)識(shí)到血漿的高膽固醇含量是促使人患冠心病的主要危險(xiǎn)因素并且認(rèn)識(shí)到降低血漿的膽固醇含量可減少冠心病的危險(xiǎn)。
膽固醇是一種脂溶性甾類化合物其是在肝臟中合成，也可通過從食物中攝取而引入體內(nèi)。膽固醇是部分作為游離甾類化合物和部分作為脂類存在于血漿中的，其中甾類化合物是用脂肪酸酯化，并且是一種生物合成膽固醇衍生物，例如膽汁酸的原料。膽汁酸是甾類化合物，例如膽酸、脫氧膽酸，其可以在肝臟中由膽固醇合成，并且除少量膽汁酸以糞便排出外其可以作為與氨基酸、甘氨酸和牛磺酸的共軛物在肝臟和胃腸道之間再循環(huán)。膽汁酸有助于消化腸內(nèi)的脂肪。
血漿的膽固醇含量反映了有助于增加血漿膽固醇含量的因素(即攝入和生物合成膽固醇，和有助于減少血漿膽固醇含量的因素(即將膽固醇轉(zhuǎn)化為其它化合物和從身體排出膽固醇衍生物)之間的動(dòng)態(tài)平衡。
有效控制血漿膽固醇的方法包括飲食的改變，例如使含膽固醇的食物以及高脂肪含量的食物的攝入減至最小;抑制生物合成膽固醇和促使增加從身體排出的膽汁酸的量。
能夠螯合膽汁酸的粒狀樹脂，例如美國專利No 3383281所述的清膽胺(Cholestyramine)和美國專利No3383281所述的Cholestipol是眾所周知的。當(dāng)給多數(shù)哺乳動(dòng)物口服該樹脂時(shí)，該樹脂在腸內(nèi)與膽汁酸軛合物形成配合物，并含有效阻斷從腸中再吸收膽汁酸。該樹脂和螯合的膽汁酸隨后以糞便形式從身體排出，因此增加從身體排出膽汁酸的速度。在其它因素相同的情況下，增加從身體排出膽汁酸的速度趨向可降低血漿的膽固醇含量，這是因?yàn)闉榱司S持恒定的膽汁酸量，膽固醇加速向膽汁酸轉(zhuǎn)化。通過從血漿中除去膽固醇可以提供一部分膽固醇用于增加的膽汁酸的合成。
膽汁酸螯合劑以各種形式口服。最通常是服用螯合劑與食物的混合物。
雖然用于膽汁酸的已知螯合劑的能力是這樣的，以致降低血漿膽固醇的有效劑量為10-15克/天，但仍該劑量可按要求達(dá)到約50克/天。粒狀膽汁螯合劑樹脂對(duì)咽下可能是令人不愉快的，尤其是要求大劑量時(shí)。在服用該樹脂的病人中間常見有不利的付作用，例如腫脹、氣體形成、便秘和腹瀉。
在本領(lǐng)域人們業(yè)已繼續(xù)努力開發(fā)螯合劑使服用治療上有效的膽汁酸螯合劑所引起的令人不愉快的付作用減至最小值，該螯合劑與消膽胺(Cholestyramine)的劑量和Cholestipol相比較具有較強(qiáng)的螯合膽汁酸能力，當(dāng)服用的劑量低于目前使用消膽胺(Cholestyramine)和Cholestipol所要求的劑量時(shí)，可有效降低血清膽固醇。
一種膽汁酸螯合劑已被公開，螯合劑含有交聯(lián)的聚合基體，其由伸長的基體單元和有效量的用以使螯合劑不溶于水的與該伸長基體單元交聯(lián)的交聯(lián)基體單元組成，螯合劑還含有連接在伸長基體單元上的支鏈單元。該伸長的基體單元和連接的支鏈單元是由重復(fù)單元的聚合物鏈形成的。該鏈包括具有如下結(jié)構(gòu)式的單元
其中R1是H或(C1-C8)烷基;
存在的每一個(gè)R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9分別選自H和(C1-C8)烷基，并且a是1-20的整數(shù);
b是1-10的整數(shù);
d是1-10的整數(shù);和e是1-5的整數(shù)。
該螯合劑含少于1.0%(重量)水可提取的聚合物鏈。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，螯合劑是具有下面結(jié)構(gòu)式的第一單體 其中R2是 每個(gè)R1、R3、R7、R8和R9分別是H或(C1-C8)烷基;和a是1-20的整數(shù);
和具有下列結(jié)構(gòu)式的第二單體的交聯(lián)聚合產(chǎn)物
F是亞苯基、(C1-C4)烷基亞苯基或苯三基;
存在的每個(gè)R10、R11、R12和R14分別選自H和(C1-C8)烷基;和f是2(如果F是亞苯基或(C1-C4)烷基亞苯基)，和f是3(如果F是苯三基);
g是1-20的整數(shù);
h是1-10的整數(shù);
i是1-10的整數(shù);和k是1-5的整數(shù)。
一種藥用組合物被披露。該組合物含治療有效量的上述螯合劑和藥物可接受的載體。
一種降低哺乳動(dòng)物血漿膽固醇含量的方法被披露。該方法包括給哺乳動(dòng)物口服治療有效量的本發(fā)明粒狀螯合劑。
附圖
示意性地表示了交聯(lián)的聚合物基體和載于該基體上的聚合物支鏈的一部分。
本發(fā)明的膽汁酸螯合劑包括具有連接的聚合物支鏈的交聯(lián)聚合物基體，該聚合物支鏈包括在基體上的具有氫的鍵合部位和離子的鍵合部位的支鏈。
附圖示意性地表示了該聚合物基體和連接的支鏈的微結(jié)構(gòu)。該交聯(lián)的聚合物基體2包括伸長的基體單元4和交聯(lián)基體單元6。該伸長的基體單元4和交聯(lián)基體單元6在結(jié)點(diǎn)8處相交連接，形成三維延伸的聚合網(wǎng)狀物，以便在聚合物基體2中確定隙間空間的互穿網(wǎng)絡(luò)。支鏈10支承在伸長的基體部分上。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，伸長的基體單元4和附著的支鏈單元10是通過包括具有如下結(jié)構(gòu)式(Ⅰ)單體單元的單體單元鏈形成的 其中R1是H或(C1-C8)烷基;
每個(gè)存在R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9分別選自H和(C1-C8)烷基;和a是1-20的整數(shù);
b是1-10的整數(shù);
d是1-10的整數(shù);和e是1-5的整數(shù)。
本文所用的術(shù)語“(C1-C8)烷基”意指具有1-8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、叔丁基、新戍基、叔戍基、己基、叔己基、庚基、辛基。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1是H或甲基;
R4是H;
每個(gè)R7和R8是甲基;和a是2-6的整數(shù)。
有優(yōu)選的實(shí)施方案中，交聯(lián)基體單元具有如下結(jié)構(gòu)式(Ⅱ)或(Ⅲ)
F是亞苯基、(C1-C4)烷基亞苯基或苯三基;
每個(gè)存在的R10、R11、R12和R14分別選自H和(C1-C8)烷基;和f是2[如果F是亞苯基或(C1-C4)烷基亞苯基]和f是3(如果F是苯三基);
g是1-20的整數(shù);
h是1-10的整數(shù);
i是1-10的整數(shù);和K是1-5的整數(shù)。
本文所用的術(shù)語“亞苯基(phenylene)”意指6個(gè)碳原子的二價(jià)芳環(huán)。
本文所用的術(shù)語“(C1-C4)烷基亞苯基”意指用1-4個(gè)碳原子取代的6個(gè)碳原子的二價(jià)芳環(huán)，并包括，例如甲基亞苯基和乙基亞苯基。
本文所用的術(shù)語“苯三基(benzenetriyl)”意指6個(gè)碳原子的三價(jià)芳環(huán)。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，交聯(lián)基體單元包括具有如下結(jié)構(gòu)式(Ⅱ)的單元;
其中D是(CHR11)9;
E是
R10是H或甲基;
每個(gè)R10和R14是H;和g是1-12的整數(shù)。
在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，R1H，或較優(yōu)選，甲基;
R4是H;
每個(gè)R7和R8是甲基;
a是2-6的整數(shù)，最優(yōu)選3;
該交聯(lián)單元具有如下結(jié)構(gòu)式(Ⅲ)，其中 R10是CH3;
每個(gè)R11和R14是H;和g是1-12的整數(shù)，最優(yōu)選6。
本發(fā)明的整合劑中交聯(lián)的量是可以有效地使螯合劑不溶于水而同時(shí)維持膽汁酸螯合劑效率的任何量。優(yōu)選的交聯(lián)量是接近于使螯合劑不溶于水而同時(shí)維持膽汁酸螯合劑高效率的最小有效量。本發(fā)明的螯合劑當(dāng)浸在含水介質(zhì)中時(shí)受濕膨脹，測量該螯合劑樣品充分水化的濕度容量可得到該樣品的交聯(lián)程度的指數(shù)。本文所用的“濕度容量”意指通過將充分水化的螯合劑樣品在約105℃下干燥所顯示的重量損失，用水化螯合劑的重量百分比表示。優(yōu)選的測量本發(fā)明螯合劑的濕度容量的方法列在下面實(shí)放例27中。
優(yōu)選的本發(fā)明螯合劑的濕度容量大于約20%，比較優(yōu)選的為約50%，最優(yōu)選的約70%-約97%(重量)的水化螯合劑。
無交聯(lián)的聚(二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺)，雖然對(duì)降低血漿膽固醇具有高效率，但當(dāng)給鼠、猴子和狗口服時(shí)顯示出顯著的毒性。
本發(fā)明的交聯(lián)的膽汁酸螯合劑比起直鏈，即非交聯(lián)的聚(二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺)，來對(duì)哺乳動(dòng)物腸粘膜(mucosa)的毒性減小。
鑒于本發(fā)明的膽汁螯合劑的非交聯(lián)的類似物所呈現(xiàn)的毒性，本發(fā)明的螯合劑必須基本上沒有水可提取的非交聯(lián)聚合物或低聚體殘余物。優(yōu)選的螯合劑含少于約1%(重量)，比較優(yōu)選的含小于約0.5%(重量)的水可提取的非聯(lián)交聚合物或低聚體殘余物。
優(yōu)選的螯合劑基本不含水可提取的未反應(yīng)的單體殘余物。比較優(yōu)選的螯合劑含少于約50份/百萬(ppm)的水可提取的未反應(yīng)單體。最優(yōu)選的是，在螯合劑中殘余的水可提取的未反應(yīng)單體含量少于約10ppm。
優(yōu)選的本發(fā)明螯合劑具有的陰離子交換能力大于約3毫克當(dāng)量/克干聚合物(meq/g)，比較優(yōu)選的為，約4meq/g。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的螯合劑具有約5meq/h-6meq/g陰離子交換能力。
當(dāng)R2是氨基時(shí)，相對(duì)高比例，例如約55%-約80%的氨基總量在哺乳動(dòng)物腸道內(nèi)在7.2PH下就地質(zhì)子化，并且該質(zhì)子化的氨基載有一個(gè)穩(wěn)定的正電荷。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，螯合劑是粒狀形式。優(yōu)選的水化，即水溶脹的螯合劑粒子具有的平均粒子直徑約為10毫米-約400毫米。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，螯合劑的水化粒子具有的平均粒子直徑約為10毫米-約200毫米。
在優(yōu)選的方法中，本發(fā)明的膽汁酸螯合劑是用乙烯基不飽和單體的混合物的游離基引發(fā)的在水相的沉淀聚合制得。優(yōu)選的是，為減少沉淀的聚合物的溶脹，該含水相是鹽溶液。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的螯合劑由每分子具有一個(gè)乙烯基不飽和部位的第一單體和每分子具有二或二個(gè)以上乙烯基不飽和部位的第二單體的游離基共聚的交聯(lián)的反應(yīng)產(chǎn)物組成。伸長的基體單體和螯合劑連接的支鏈?zhǔn)怯蓙碜缘谝粏误w的重復(fù)單元的鏈形成，螯合劑的交聯(lián)單元是由第二單體衍生。
在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，第一單體具有如下結(jié)構(gòu)式(Ⅳ) 其中R1、R2、R3和a如上定義。
適用作本發(fā)明的第一單體的化合物包括氨基(C1-C8)烷基丙烯酰胺和氨基(C1-C20)烷基甲基丙烯酰胺，例如氨基甲基丙烯酰胺和氨基乙基甲基丙烯酰胺;(C1-C8)烷基氨基(C1-C20)烷基丙烯酰胺和(C1-C8)烷基氨基(C1-C20)烷基甲基丙烯酰胺，例如甲基氨基乙基丙烯酰胺和甲基氨基乙基甲基丙烯酰胺二(C1-C8)烷基氨基(C1-C20)烷基丙烯酰胺和二(C1-C8)烷基氨基(C1-C20)烷基甲基丙烯酰胺，例如二乙基氨基乙基丙烯酰胺、二乙基氨基丙基甲基丙烯酰胺、二甲基氨基乙基丙胺和二(C1-C8)烷基氨基(C1-C20)烷基甲基丙烯酰胺，例如二乙基氨基乙基丙烯酰胺、二乙基氨基丙基甲基丙烯氨酸、二甲基氨基乙基甲基丙烯酰胺、二甲基氨基丙基丙烯酰胺、二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺、二甲基氨基丁基丙烯酰胺、二甲基氨基丁基甲基丙烯酰胺、二甲基氨基戊基丙烯酰胺、二甲基氨基戊基甲基丙烯酰胺、二甲基氨基己基丙烯酰胺和二甲基氨基己基甲基丙烯酰胺和三(C1-C8)烷基氨(C1-C20)烷基丙烯酰胺和三(C1-C8)烷基氨(C1-C20)烷基甲基丙烯酰胺(methamide)，例如三甲基銨乙基丙烯酰胺和三甲基氨丙基甲基丙烯酰氨，及其混合物。
優(yōu)選的第一單體是二甲基氨基(C2-C6)烷基丙烯酰胺或二甲基氨基(C2-C6)烷基甲基丙烯酰胺，即選自二甲基氨基乙基丙烯酰胺、二甲基氨基乙基甲基丙烯酰胺、二甲基氨基丙基丙烯酰胺、二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺、二甲基氨基丁基丙烯酰胺、二甲基氨基丁基甲基丙烯酰胺、二甲基氨基戊基丙烯酰胺、二甲基氨基戊基甲基丙烯酰胺、二甲基氨基己基丙烯酰胺、二甲基氨基己基甲基丙烯酰胺及其混合物。
適用作本發(fā)明的第一單體的化合物，例如二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺，三甲基氨丙基甲基丙烯酰胺是商業(yè)上可得到的。適合作第一單體的商業(yè)上不可得到的化合物可通過普通的合成方法制備。氨基烷基丙烯酰胺和氨基烷基甲基丙烯酰胺可以，例如通過堿催化的丙烯酰胺和甲基丙烯酰胺的氨基烷基化來制備。烷基氨基烷基丙烯酰胺和烷基氨基烷基甲基丙烯酰胺可以通過烷基化相應(yīng)的氨基烷基丙烯胺?；虬被榛谆０分苽?。二烷基氨基烷基丙烯酰胺和二烷基氨基烷基甲基丙烯酰胺可以，例如采用吡啶作為HCl螯合劑通過用在二甲基甲酰胺中的烯丙酰氯或甲基丙烯酰氯處理二烷基氨基烷基胺制得。三烷基氨烷基丙烯酰胺和三烷基氨烷基甲基丙烯酰胺可以，例如通過用烷基鹵處理使得相應(yīng)的二烷基氨基烷基丙烯酰胺或二烷基氨基烷基甲基丙烯酰胺烷基化來制備。此外，含由二烷基氨基烷基丙烯酰胺或二烷基氨基烷基甲基丙烯酰胺衍生的單體的第一和第二單體的交聯(lián)反應(yīng)產(chǎn)物可以用烷基鹵處理形成相應(yīng)的三烷基氨化合物。
最優(yōu)選的第一單體是二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺。
在優(yōu)選的實(shí)施方案中，第二單體具有如下結(jié)構(gòu)式(Ⅴ)或(Ⅵ) 其中D、E、F、R10、R11、R12、R14、f、g、h、i和k如上定義。
具有結(jié)構(gòu)式(Ⅴ)的單體化合物包括，例如亞烷基甘醇二乙烯醚，例如二甘醇二乙烯醚、(C1-C20)亞烷基二(丙烯酰胺)和(C1-C20)亞烷基二(甲基丙烯酰胺)，例如N，N′-亞甲基二(甲基丙烯酰胺)、N，N′-亞乙基二(丙烯酰胺)和N，N′-六亞甲基二(甲基丙烯酰胺)。
具有結(jié)構(gòu)式(Ⅵ)的單體化合物包括，例如二乙烯基苯、三乙烯基苯、二乙烯基甲苯和二乙烯基乙苯。
優(yōu)選的第二單體是(C1-C12)亞烷基二(丙烯酰胺)或(C1-C12)亞烷基二(甲基丙烯酰胺)和，比較優(yōu)選的選自N，N′-亞丙基二(丙烯酰胺)、N，N′-亞丁基二(丙烯酰胺)、N，N′-五亞甲基二(丙烯酰胺)，N，N′-六亞甲基二(丙烯酰胺)、N，N′-七亞甲基二(丙烯酰胺)、N，N-八亞甲基二(丙烯酰胺)、N，N′-十亞甲基二(丙烯酰胺)、N，N′-十二亞甲基(丙烯酰胺)、N，N′-亞丙基二(甲基丙烯酰胺)、N，N′-亞丁基二(甲基丙烯酰胺)、N，N′-五亞甲基二(甲基丙烯酰胺)、N，N′-六亞甲基二(甲基丙烯酰胺)、N，N′-七亞甲基二(甲基丙烯酰胺)、N，N′-八亞甲基二(甲基丙烯酰胺)、N，N′-十亞甲基二(甲基丙烯酰胺)、N，N′-十二亞甲基二(甲基丙烯酰胺)及其混合物。
最優(yōu)選的第二單體是N，N′-六亞甲基二(甲基丙烯酰胺)。
適合作第二單體的單體，例如N，N′-六亞甲基二(甲基丙烯酰胺)是商業(yè)上可得到的。適合作第二單體的商業(yè)上不可得到的化合物可以用普通的合成方法制備。亞烷基二(丙烯酰胺)和亞烷基二(甲基丙烯酰胺)可以在有HCl螯合劑，例如吡啶的情況下，通過用在二甲基甲酰胺或水中的烯丙酰氯或甲基丙烯酰氯處理相應(yīng)的亞烷基二胺制備。
本發(fā)明的交聯(lián)共聚物可以任意地包括由第三單體衍生的單體單元，其中第三單體取代一部分第一單體;適合的第三單體是那些可以用第一單體和第二單體共聚合的單體。適合作第三單體的化合物包括，例如丙烯酰胺、甲基丙烯酰胺和乙基乙烯基苯。
優(yōu)選的本發(fā)明的共聚物包括0.5%(摩爾)-約20.0%(摩爾)的由交聯(lián)單體衍生的單體單元。比較優(yōu)選的為，約2.0%(摩爾)-約8.0%(摩爾)的共聚物的單體單元由交聯(lián)單體衍生的。
在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的螯合劑是＞94.0%(摩爾)-99.5%(摩爾)的二甲基氨基(C -C6)烷基甲基丙烯酰胺和0.5%(摩爾)～6.0%(摩爾)的(C8-C12)亞烷基二(甲基丙烯酰胺)的交聯(lián)的反應(yīng)產(chǎn)物。
在進(jìn)一步更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的螯合劑包括約95.6%(摩爾)二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺和約4.4%(摩爾)N，N′-六亞甲基二(甲基丙烯酰胺)的交聯(lián)的聚合產(chǎn)物。
將通過上述方法制得的交聯(lián)聚合粒子用去離子水洗滌以除去用于反應(yīng)混合物的鹽，除去粒子中未反應(yīng)的單體和除去粒子中水可提取的交聯(lián)的聚合物。例如可如同下面實(shí)施例1中充分描述的那樣，通過采用凝膠滲透色譜法分析該聚合物粒子的含水提取物測量水可提取的聚合物。
然后將洗滌的粒子在40-60℃，在真空(優(yōu)選低于1.0毫米汞柱)下干燥至干。
在另一種方法中，具有反應(yīng)活性部位的交聯(lián)的聚合基體的粒子通過使反應(yīng)活性部位與適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)試劑反應(yīng)被官能作用以在交聯(lián)基體上形成聚合物鏈。
在另一種方法的優(yōu)選實(shí)施方案中，二乙烯基苯交聯(lián)的聚(甲基丙烯酐)粒子是用過量的胺，例如二亞乙基三胺、三亞乙基四胺、二甲基氨基丙胺、二甲基氨基丁胺、亞乙基二胺的低聚物，通過加熱在該胺的含水溶液中的粒子混合物來處理。然后將這樣形成的螯合劑粒子洗滌，例如用水和醇溶液洗滌，基本上除去粒子中所有的殘余胺。
任意地將用上述二者中任何一個(gè)方法制得的粒子研磨，例如用高切削磨機(jī)研磨產(chǎn)生具有所要求的平均粒子直徑例如約10毫米-約400毫米的粒子。
本發(fā)明的螯合劑可以以游離堿或藥物上可接受的酸式鹽(即鹽的陰離子對(duì)服用該鹽的有機(jī)體在治療有效量時(shí)是無毒性的，形成使用。
本發(fā)明的螯合劑的藥物上可接受的鹽包括由無機(jī)酸，例如鹽酸和磷酸，或有機(jī)酸，例如乙酸、檸檬酸、乳酸和丙二酸衍生的那些鹽。本發(fā)明的螯合劑的鹽可以通過將酸溶于適合的溶劑，例如水或水溶液和醇的溶液，用該溶液處理游離堿或形成鹽，然后從溶液分離出不溶性鹽來制備。
本發(fā)明的螯合劑可以任何適合的方式口服。螯合劑可以例如以片劑、膠囊或粒劑，即丸劑或粉劑或以含水懸浮液的形式服用。在口服使用片劑的情況下，可加入通常所用的載體，包括，例如乳糖和玉米淀粉和潤滑劑，例如硬脂酸鎂。對(duì)于以膠囊形式口服，有用的稀釋劑包括，例如乳糖和干玉米淀粉。當(dāng)口服要求使用含水懸浮液時(shí)，活性組分應(yīng)與乳化劑和懸浮劑混合。如果需要，可以加入甜味劑和香料。粒劑形式的螯合劑可作為與食物，例如蘋果醬、燉過的水果、汁和禾谷類的混合物服用。
本發(fā)明螯合劑的最適合的劑量隨服用的形式，螯合劑的具體實(shí)例和服用螯合劑的宿主的生理特點(diǎn)而變化，根據(jù)用比哥獵狗作的生理研究(如下面實(shí)施例14所述)，人的治療劑量每天每千克體重約為2-約125毫克，即對(duì)于80千克的人來說每天劑量約為0.2克-約10克?？梢灶A(yù)料的是，更廣泛使用的劑量為每天每千克體重約33-50毫克，或?qū)τ?0千克的人來說，每天約2.5-4克。
本發(fā)明的螯合劑可以與其它用于降低血液膽固醇含量的療法結(jié)合使用。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的螯合劑可以與能有效抑制膽固醇生物合成的物質(zhì)結(jié)合使用。該試劑的例子包括，但不限于這些，HMG-CoA還原酶抑制劑、HMG-CoA合成酶抑制劑和鯊烯環(huán)氧酶抑制和鯊烯合成酶抑制劑。HMG-CoA還原酶抑制劑的說明性例子是lovastatin、simvatatin、pravastatin和fluvastatin。HMG-CoA合成酶抑制劑的例子是公開于美國專利4806564;4816477;4848271;和4，751，237的β-內(nèi)酯衍生物;公開于美國專利No4983597和5120709的β-內(nèi)酰胺衍生物;和公開于歐洲專利公開EP0411703的取代環(huán)氧丙烷類似物。鯊烯環(huán)氧酶抑制劑的用作說明的例子公開于歐洲專利公開EP0318860和日本專利公開J02169571A。鯊烯合成酶抑制劑的用作說公開于92年9月23日出版的歐洲專利公開EP0505135。其它可以服用的降低膽固醇的試劑包括煙酸、probucol、fibricacid(clofibrate和gemfibrozil)和LDL-受體基因誘導(dǎo)物。
實(shí)施例1在用磁性攪拌的情況下，將六亞甲基二(甲基丙烯酰胺)、HMBMAM(27.7365克、純度87.11%)，采用高性能的液體色譜法;24.1613克純HMBMAM，0.0957(摩爾)加到在燒杯中的二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺，DMAPMAM(354.30克，純度為99.50%采用氣液色譜法;352.53克，2.071克摩爾純DMAPMAM)中，以致可聚合單體HMBMAM的摩爾百分比是4.42。在攪拌1小時(shí)后，作為HMBMAM加入的某些物質(zhì)仍不溶解。該不溶解的物質(zhì)很可能是HMBMAMA單體中最有可能是雜質(zhì)的聚合物。
將來自Aqualon，Wilmington，DE的Natrosol Plus HEC330 Grade的5.1271克纖維素分散劑，月桂基硫酸鈉(1.7104克)和無水硫酸鈉(340.20克，2.395摩爾)混合并用研缽一起研磨。在攪拌情況下，將所得的干粉用30分鐘通過逐漸加入使其溶于在五升的四頸園底反應(yīng)燒瓶中的2412.2克的去離子水(133.90摩爾)中。該反應(yīng)燒瓶配一個(gè)攪拌器軸承，一個(gè)固定在底部帶有新月型特氟隆攪拌槳的金屬攪拌軸(316不銹鋼)、一個(gè)添加漏斗、一個(gè)裝有溫度測量探頭的溫度計(jì)插孔和一個(gè)Claisen接合器，在它的一個(gè)開口上安裝Friedricks冷凝器，在另一開口上安裝用于引入氮?dú)獾倪M(jìn)氣口。該冷凝器用致冷設(shè)備冷卻到約-10℃的含水乙二醇冷卻。添加108克去離子水H2O(5.995摩爾)用于漂洗研缽使其無固體顆粒。在反應(yīng)期間，溫度測量探頭連接在調(diào)節(jié)溫度曲線的微機(jī)上。
單體HMBMAM和DMAPMAM的液體混合物在攪拌下轉(zhuǎn)移到反應(yīng)燒瓶中，用去離子水(550.0克，30.53摩爾)漂洗燒杯以使單體完全轉(zhuǎn)移。在反應(yīng)燒瓶中的去離子水的總量是3070.2克(170.42摩爾)。
在混合物以1.0℃/分的速度加熱至72℃期間，用氮?dú)鈬婌F液體以釋放系統(tǒng)的氧。在混濁的液體混合物達(dá)到72℃后再繼續(xù)噴霧氮?dú)膺_(dá)30分鐘。用比較慢的氮?dú)饬魉俣葒婌F以吹掃蒸汽空間，并將2.5928克(0.01044摩爾)2.2-偶氮二(2，4-二甲基戊腈)(Vazo52，DuPont)和1.0523克(0.005473摩爾)2，2′-偶氮二(2-甲基丁腈)(Vazo67，DuPont)在7.0508克丙酮中的溶液迅速地加入反應(yīng)燒瓶中以便不讓氧氣進(jìn)入，在加入引發(fā)劑之后，反應(yīng)混合物保持在72℃下達(dá)2.5小時(shí)。在72℃下2.5小時(shí)后，使溫度以每分鐘1.0℃的速度從72℃上升到90℃，在90℃保持3小時(shí)，隨后用3.0小時(shí)升至100℃。差不多在加入引發(fā)劑的同時(shí)，少量固體粒子的沉淀物開始形成。繼續(xù)生長交聯(lián)聚合物的沉淀過程，直至從含水相耗盡所有單體。時(shí)間-溫度曲線表明所有的引發(fā)劑完全分解，以致用檢測限度為0.1ppm的高性能液體色譜法在最終的聚合產(chǎn)物中不具有可檢測的含量。靜置該漿狀物使其分成二層，即頂層為聚合物粒子和底層為透明液體。
將直徑為50-約400毫米的漿狀細(xì)粒冷卻到室溫，并和去離子水洗滌七次。每次洗滌是通過加入2500克去離子水，攪拌含水漿狀物達(dá)15分鐘和虹吸出液體來完成。確定每次虹吸液的透明度和通過用氧化鋇溶液處理來確定所存在的硫酸根陰離子。虹吸液1-3(不包括母液虹吸液)是混濁的并對(duì)于硫酸陰離子試驗(yàn)為陰性。虹吸液4-6對(duì)于硫酸陰離子試驗(yàn)為陰性，然而是透明的。虹吸液7是透明的并且無硫酸陰離子。第8次洗滌是用2000克去離子水。將該漿狀物攪拌15分鐘，用Buchner漏斗過濾并通過真空吸入空氣經(jīng)過固體粒子的床來除去大部分水。為洗滌聚合物共使用19500克的去離子水。將稱重為1384.2克的水化固體放在對(duì)流爐中在65℃下干燥16小時(shí)，并將獲得的340.9克的空氣干燥的產(chǎn)物放在真空爐中進(jìn)一步干燥得到328.18克。將兩個(gè)為固體測量而取走的試樣的聚合物重量計(jì)算在內(nèi)，所得的真空干燥聚合物的總產(chǎn)率為329.83克，相當(dāng)于86.01%理論產(chǎn)率。
用凝膠滲透色譜法測量干的聚合物的含水提取物得到一個(gè)峰值，這表明少量直鏈聚合物仍存在于產(chǎn)物中。將在3000克去離子水中的48.1克干聚合物的漿狀物攪動(dòng)1小時(shí)，然后放置過夜。通過虹吸收出液體分離出聚合物，發(fā)現(xiàn)該聚合物的含水提取物在檢測限度為1%時(shí)不含有直鏈聚合物。
除了表1的若干方法不用月桂基硫酸鈉外，列于表1中的如實(shí)施例1的所有合成方法都按照本實(shí)施例描述的過程進(jìn)行。業(yè)已發(fā)現(xiàn)月桂基硫酸鈉無助于調(diào)節(jié)生長的沉淀的聚合物的粒度，但由于產(chǎn)生泡沫會(huì)使洗滌步驟更難進(jìn)行，因此應(yīng)從下一道工序中除去。
將如此形成的粒子用高切削研磨機(jī)(咖啡磨機(jī))研磨30秒，以致使該磨過的粒子當(dāng)水化時(shí)呈現(xiàn)出粒子分布為其中10%的粒子具有小于41微米的平均粒子，50%的粒子具有小于171微米的平均粒度和90%的粒子具有小于370微米的粒度。
實(shí)施例2將亞乙基二(丙烯酰胺)，EBAM(11.0166克，純度為80.9%，用氣液色譜法;8.9124克純EBAM，0.05299摩爾或3.00%(摩爾)的可聚合的單體)與二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺，DMAPMAM(292.67克，純度為99.67%，用氣液色譜法;291.31克，1.7110摩爾純DMAPMAM或97.00%(摩爾)的可聚合的單體)在燒杯中在攪拌下混合得到后懸浮固體的透明溶液。
將纖維素分散劑，(4.0508克的NatrosolPlusHEC、Grade330AqualonWilmington.DE)和270.0克(1.90摩爾)無水硫酸鈉用研鈦和研杵一起研磨，得到很細(xì)的白色粉末。將該白色粉末在攪拌下用30分鐘加到在5升、四頸園底反應(yīng)燒瓶中的去離子水(2328.7g;129.26摩爾)中，得到稍微混濁但均勻的液相。
該反應(yīng)燒瓶配備一個(gè)攪拌軸承、一個(gè)裝有新月型特氟隆攪拌槳的金屬攪拌桿(316不銹鋼)、一個(gè)添加漏斗、一個(gè)裝有可連接到微機(jī)上用于控制時(shí)間-溫度曲線的溫度測量探頭的溫度計(jì)插孔和一個(gè)裝有一個(gè)Friedricks冷凝器和一個(gè)氮?dú)膺M(jìn)口的Claisen接合器。氮?dú)庥脕硎狗磻?yīng)器的物料脫氧，F(xiàn)riedricks冷凝器是由被致冷設(shè)備冷卻到約-10℃的含水2-醇液體冷卻。
將EBAM和DMAPMAM單體的液體混合物轉(zhuǎn)移到反應(yīng)燒瓶中，將裝有液體的燒杯用444.5克(24.67摩爾)的去離子水洗滌以使單體完全轉(zhuǎn)移至反應(yīng)器。反應(yīng)器中的總水量是2424.6(134.58摩爾)。
將液體混合物按1.0℃/分的規(guī)定的加熱速度加熱至72℃，同時(shí)攪拌，并用氮?dú)鈬婌F以釋放系統(tǒng)的氧。在72℃下繼續(xù)緩慢噴霧氮?dú)膺_(dá)25分鐘以完成氧的除去。通過使氮?dú)馔ㄟ^反應(yīng)器的氣相空間，使氮?dú)鈬婌F變?yōu)榫徛祾?。將溶?.0克丙酮的兩種引發(fā)劑;2.1023(0.008464摩爾，每摩爾單體0.004798摩爾)的2，2-偶氮二(2，4-二甲基-戊腈)，Vazo52，Dupont和0.8244克(0.004288摩爾、每摩爾單體0.002431摩爾)的2，2′-偶氮二(2-甲基丁腈)，Vazo67，DuPont一起加到反應(yīng)混合物中。很細(xì)的固體聚合物在加入引發(fā)劑5分鐘之內(nèi)開始沉淀。將反應(yīng)混合物在72℃下在氮?dú)夥障聰嚢?.5小時(shí)，此后溫度以每分鐘1.0℃的速度(持續(xù)18分鐘)斜線上升至90℃。將混合物或漿狀物在90℃下攪拌3.0小時(shí)，接著讓溫度以1.0℃/分(持續(xù)10分鐘)的速度斜線上升至100℃，并保持在100℃下達(dá)3小時(shí)。該具有斜坡的三層溫度-時(shí)間曲線足以使兩種引發(fā)劑都完全地分解，以致用高性能液體色譜法分析在1ppm的檢測限度下，在最終洗滌的聚合物粒子中不含有痕量引發(fā)劑。
將在室溫下冷卻的漿狀物分成二層，即頂層的聚合物粒子的漿狀物和底層的透明的含水鹽溶液。用顯微鏡觀察聚合物粒子看出粒度為約50-300毫米直徑。將底層的溶液虹吸出并將固體粒子洗滌7次，每次洗滌平均用3133克去離子水。每次洗滌是通過將粒子在新鮮的去離子水中攪拌約30分鐘，然后虹吸含水的洗滌液，同時(shí)攪拌漿狀粒子進(jìn)行的。一天中的8小時(shí)要求洗滌5次。當(dāng)該鹽濃度在該漿狀物的液相中減小時(shí)，聚合物粒子膨脹并且粒子體積增加。體積的增加直接與在聚合物粒子中的交聯(lián)的單體的含量有關(guān)。
最初四次虹吸的洗滌液是混濁的;第五次的洗滌液是透明的;并且第七次的洗滌液是第一母液，其用硫酸鋇溶液處理化驗(yàn)硫酸陰離子為非陽性。在第七次洗滌以后將粒子用1500克去離子水成漿約30分鐘，并用Buchner漏斗分離。洗滌液的總重量是22822.2克。水化的固體聚合物粒子的重量是2337.48克;在對(duì)流爐中在60℃下干燥16小時(shí)后干的聚合物重量是330.0克。根據(jù)干的聚合物粒子測得的固體是81.7%，結(jié)果是無水聚合物的產(chǎn)率是289.4克或理論產(chǎn)率為94.63%(以305.85克理論值為基準(zhǔn))。在表中提供了這種聚合物的物理性質(zhì)和所測定的效果。
將如此形成的粒子用高剪切的磨機(jī)(咖啡磨機(jī))研磨30秒鐘，結(jié)果是該磨過的粒子當(dāng)水化時(shí)呈現(xiàn)出粒度分布，其中10%的粒子具有小于37毫米的平均粒度;50%的粒子具有小于240毫米的平均粒度分布和90%的粒子具有小于444毫米的平均粒度分布。
實(shí)施例3將六亞甲基二(甲基丙烯酰胺)，HMBMAM(25.5854克，用高性能的液體色譜法測得純度為87.1%22.285克純HMBMAM，0.0883摩爾)在用磁性攪拌棒攪拌下加到在燒杯中的二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺，DMAPMAM，(326.02克，純度為99.67%，用氣液色譜法;324.9克，1.908摩爾DMAPMAM)中。一些作為HMBMAM加入的物質(zhì)在攪拌1小時(shí)以上仍不溶解。該不溶性的物質(zhì)很可能是在HMBMAM單體中存在的最有可能是雜質(zhì)的聚合物。
將纖維素分散劑(4.7212克的NatrosolplusHMHEC330Grade)和硫酸鈉(314.6克，9.98%(重量)的含水相)混合并在研缽中一起研磨。將產(chǎn)生的混合物在攪拌情況下用30分鐘加到在5升，四頸園底反應(yīng)燒瓶中的去離子水(2123.5克)中。該反應(yīng)燒瓶裝備一個(gè)攪拌器，其帶有一個(gè)裝有新月型特氟隆攪拌槳的金屬攪拌軸(316不銹鋼)、一個(gè)添加漏斗、一個(gè)裝有溫度測量探頭的溫度計(jì)插孔、和一個(gè)配備Friedricks冷凝器的Claisen接器器。該Friedricks冷凝器用被致冷設(shè)備冷至約-10℃的含水乙二醇液體冷卻。溫度測量探頭連接到在反應(yīng)期間調(diào)節(jié)溫度曲線的微機(jī)上。
將HMBMAM和DMAPMAM的液體混合物轉(zhuǎn)移到反應(yīng)燒瓶中，用去離子水(708.0克)使不溶性HMBMAM完全轉(zhuǎn)移。
將反應(yīng)混合物在攪拌情況下以1℃/分的速度加熱至72℃，并用氮?dú)鈬婌F以釋放出系統(tǒng)的氧。在72℃再噴霧35分鐘以完全除去氧。將氮?dú)鈬婌F變?yōu)槁祾摺⑷苡诒囊l(fā)劑(2.4025克，0.009673摩爾的在5克丙酮中的2，2-偶氮二(2，4-二甲基戊腈))加到反應(yīng)燒瓶中。在加入引發(fā)劑后將反應(yīng)混合物在72℃下攪拌2.5小時(shí);然后將溫度以1℃/分的速度由72℃增加到90℃，并將很細(xì)的固體在液體中的混合物在90℃下維持3小時(shí)。在加入引發(fā)劑后不久開始形成小粒狀的沉淀物質(zhì)直至所有單體聚合。當(dāng)完成溫度曲線時(shí)，讓小顆粒的漿料(粒子直徑為50-300毫米)冷卻至室溫。經(jīng)過靜置漿料分成二層，即頂層的漿料和底層的含水鹽溶液。
將底層液體虹吸出，并將剩余的固體粒子洗滌10次，每次洗滌用2500克等分的去離子水處理。第7次洗滌的液體用硫酸鋇化驗(yàn)檢定為無硫酸根離子，并且是透明的而不是混濁的。第1到第5次的洗滌液的混濁度或霧狀降低，但硫酸根離子試驗(yàn)呈陽性。第6次的洗滌液是透明的但含有痕量硫酸根離子。第7次洗滌液是透明的并且無硫酸根離子。
干的聚合物的產(chǎn)率是332.7克或理論值的94.05%(包括引發(fā)劑片段的重量和在工藝過程期間除去的樣品的干重)。
實(shí)施例4實(shí)施例4的實(shí)驗(yàn)方法相同干實(shí)施例2的方法，除時(shí)間-溫度曲線不具有在100℃保持3小時(shí)的第三層之外。該合成過程僅出現(xiàn)二個(gè)溫度平頂，即在72℃保持2.5小時(shí)和在90℃時(shí)保持3小時(shí)。
實(shí)施例5-23實(shí)施例5-21的每一個(gè)螯合劑是如下面表1所示采用上述實(shí)施例1-4所列的方法中的一種制備的，除交聯(lián)單體組成和/或相對(duì)數(shù)量如表1所述改變之外。采用下列的交聯(lián)單體二乙烯基苯(DVB)、N，N′-亞甲基二(丙烯酰胺)(MBAM)，N，N′-亞甲基二(甲基丙烯酰胺)(MBMAM)、N，N′-亞乙基二(丙烯酰胺)(EBAM)、N，N′-六亞甲基二(甲基丙烯酰胺)(HMBMAM)、N，N′-八亞甲基二(丙烯酰胺)(DMBAM)和N，N′-十二亞甲基二(丙烯酰胺)(DDMBAM)。DVB單體包括作為雜質(zhì)的乙基乙烯基苯(EVB)，并且在每個(gè)DVB交聯(lián)的螯合劑中的摩爾%EVB附注在表1中在摩爾%DVB之后的括號(hào)中。
表1實(shí)施方法交聯(lián)的交聯(lián)單體的例號(hào)實(shí)施例號(hào)單體摩爾百分比5 2*DVB(EVB) 0.99(0.074)6 2*DVB(EVB) 2.99(0.223)7 2*DVB(EVB) 5.00(0.38)83MBMA5.093MBMA10.1表1(續(xù))實(shí)施方法交聯(lián)的交聯(lián)單體的例號(hào)實(shí)施例號(hào)單體摩爾百分比102MBMAM0.94112MBMAM2.03123MBMAM2.03
13 2*EBAM 0.99142EBAM1.99161HBMAM0.88171HBMAM1.77181HBMAM2.6519 2*HBMAM 3.47203HBMAM4.3921 1*HBMAM 4.40222OMBAM5.0232DDMDAM5.0＊在水相中無月桂基硫酸鈉。
實(shí)施例24制備含水溶液。將氯化鈉(300克)在50℃下溶于1350克去離子水中，并將57.57克氯化鈉與5.4克纖維素的分散劑(NatrosolPlusDECPype330，AqualonInc.)在研缽中研磨，形成均勻的混合物。然后將該磨過的混合物慢慢地加到鹽溶液中并在50℃下攪拌直至所有的固體都溶解。
通過將222.24克二甲基氨基-丙基甲基丙烯酰胺、11.76克高純(80%純)二乙烯基苯、1.18克二甘醇乙烯基醚、214.83克鄰二甲苯和2.335克2，2′-偶氮-(2，4-二甲基戊腈)(Vazo52，Dupont)混合制備有機(jī)混合物。
將含水的混合物放置在反應(yīng)容器中并在52℃下攪拌。有機(jī)混合物加入反應(yīng)容器，在52℃繼續(xù)攪拌拌20小時(shí)，結(jié)果形成球狀粒子。
將該粒子用去離子水洗滌以除去鹽和大部分鄰二甲苯。在102℃下通過用蒸汽吹掃蒸鎦從該顆粒中除去剩余的鄰二甲苯。
實(shí)施例25采用下列方法制備粒狀二乙烯基苯和甲基丙烯酸酐共聚物。
通過將0.889克纖維素分散劑(CulminalCMMC-2000)和0.059克月桂基硫酸鈉溶于691.644克去離子水中制備水溶液。
有機(jī)混合物是通過將在無氣味溶劑油(Lupersol188M75)中的0.691克75%α-枯基過氧新癸酸和1.037克二(4-叔丁基環(huán)己基)過氧碳酸氫鹽(Percadox16N)溶于32.997克甲基丙烯酸酐、18.855克二乙烯基苯(55%純度)和22.22克異辛烷的混合物中配制的。
將水溶液加到1升裝備有冷凝器、攪拌器和熱電偶的園底燒瓶中。將有機(jī)混合物加到水溶液中。將有機(jī)混合物和水溶液攪拌以便將有機(jī)混合物分散在水溶液中，然后以每分鐘0.5℃由25℃加熱至60℃。然后將分散液保持在60℃同時(shí)繼續(xù)攪拌20小時(shí)以形成具有平均粒度為175毫米的球狀共聚物粒子。
然后將共聚合物粒子用二甲基氨基丙胺官能化。將二甲基氨基丙胺(43.833克)溶于約500克去離子水中。將濕的共聚合物粒子(39.03克干重)加到水溶液中。攪拌混合物同時(shí)將溫度以每分1℃的速度由22℃加熱至50℃并保持在50℃達(dá)5小時(shí)。讓混合物冷卻、和從液體中分離出粒子并用甲醇/水(50/50)溶液洗滌。
實(shí)施例26將用上面實(shí)施例25所述的方法制得二乙烯基苯-交聯(lián)的聚(甲基丙烯酸酐)粒子通過用三亞乙基四胺(TETA)處理該粒子使其官能化。
將TETA(292.48克)溶于約300克去離子水中。然后將二乙烯基苯-交聯(lián)的聚(甲基丙烯酸酐)粒子(120克)在40℃情況加到水溶液中。然后將混合物攪拌，同時(shí)將溫度以每分鐘1℃的速度由40℃增加95℃，然后保持在95℃達(dá)5小時(shí)以產(chǎn)生TETA-宮能化的粒子。讓混合物冷卻并將粒子依次用水和甲醇洗滌以漂洗粒子使其無殘余的胺。這樣形成的粒子具有145毫米的平均粒度。
實(shí)施例27若干個(gè)上述典型的螯合劑的元素分析結(jié)果列于下面表2中。
表2實(shí)施例號(hào)%碳%氫%氮%氧160.83510.61015.55512.820760.19010.55014.90013.515857.53010.42015.09515.0401258.74010.48015.44514.8901761.6310.59515.88512.0351861.05510.56514.38512.8001958.71010.60014.79515.6202162.89010.64515.98511.6852561.68.615.4524.34采用凝膠滲透色譜法通過分析交聯(lián)的聚合物粒子的含水提取物來測定在若干個(gè)上述的典型的螯合劑中的水可提取的直鏈聚合物殘留物的量。
通過將交聯(lián)的粒子在0.1m Na2SO41%、1%乙酸和5ppm生物殺傷劑(Kathon 866)中的混合物在室溫下攪動(dòng)1小時(shí)，并使其通過一個(gè)0.45μm膜滬器(Millipore)過瀘制得含水提取物。該混合物含約50毫克(干重)交聯(lián)的粒子/1毫升水溶液。
采用4cm×6mmIDguard柱(PWXLProgel，TSKguard柱、Supelco、Inc.)、30cm×7.8mmID柱(G3000PWXL，ProgelTSK柱、Supelco、Inc.)、一個(gè)配備可變體積自動(dòng)取樣器(SpectraPhysisAS300)的泵(Waters501);和一個(gè)折射率檢測器(PerkinElmerLC30)，通過用凝膠滲透色譜法分析瀘液。
上述含水提取物可用作流動(dòng)相，該系統(tǒng)是在采用50μl環(huán)狀噴射，柱溫為30°和分析時(shí)間為23分鐘的情況下進(jìn)行運(yùn)行。
從4.75分至9.2分鐘對(duì)響應(yīng)峰值進(jìn)行積分。與用已知濃度的聚(二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺)水溶液所得的結(jié)果相比較來確定在樣品提取液中直鏈聚合物的量。
按照公式(Ⅰ)來計(jì)算在交聯(lián)的粒狀樣品中的直鏈聚合物的百含量 直鏈聚合物的峰值保持時(shí)間與聚(二甲基氨基甲基丙烯酰胺)樣品相比較也表明本直鏈聚合物具有小于約50000的MW。
上述的幾個(gè)典型螯合物的溫度容量是通過用下列方法測定的
a)將定量的螯合劑浸入去離子水中水化至少30分鐘;
b)在約700mmHg的真空下將水化的定量螯合劑用在Büchner漏斗中的中等的多孔過瀘紙過瀘達(dá)5分鐘使螯合劑脫水;
c)稱取3-5克脫水螯合劑的樣品，精確至0.001克;
d)將樣品在100℃-110℃下干燥至少16小時(shí);
e)將干的樣品稱重，精確到0.001克;和f)按照公式(2)計(jì)算螯合劑的濕度容量濕度容量(%)＝ ((脫水樣品的重量-干樣品的重量))/((脫水樣品的重量)) (2)在下面表3中列出了上述若干典型螯合劑的用公式1計(jì)算的用脫水的水化螯合劑的重量百分比表示的濕度容量(%)、用毫當(dāng)量/克螯合劑(meq/g)表示的陰離子交換能力和用公式2計(jì)算的、用所提取的螯合粒子的重量百分比表示的水可提取的聚合物量(%)。
表3實(shí)施濕度容量陰離子交換能力水可提取的聚合物例號(hào)(%)(meq/g)(重量%)184.265.440.5420287.765.640.3550370.105.590.3670496.165.930.92125--0.6624
672.205.55-777.395.370.3886876.495.540.18579---1091.525.622.04081172.695.731.08501276.745.380.09811394.29-0.92961490.70-0.66781581.055.670.20581691.465.510.58251784.725.631.33891882.985.380.695819-5.801.35002070.705.440.31922172.12--2524.07--實(shí)施例28本發(fā)明的交聯(lián)共聚物，即是膽汁酸螯合劑的效果是用比哥獵狗評(píng)價(jià)。
給體重各為9-11公斤的比哥獵狗每天一次以可穩(wěn)定各條狗體重的量(200-300克/狗/天)喂給半合成、低膽固醇的食物。
半合成的食物包括32.01%無維生素酪蛋白43.14%右旋糖12.42%豬脂;2.39%鱈魚肝油;2.72%磷酸鈣;4.92%細(xì)胞粉末和2.39%hegsted維生素混合物No14。
通過喂給無膽汁酸螯合劑的半合成食物6個(gè)月并每星期取二次血液樣品測量血漿膽固醇含量來測定每條狗的基準(zhǔn)血漿膽固醇含量。
在確定基準(zhǔn)血清膽固醇含量后，將消膽胺膽汁酸螯合劑與食物(劑量為3.6-12克/狗/天)混合，用四個(gè)星期每周二次測得的血漿膽固醇含量來表示說明每條狗的消膽胺劑量與血清膽固醇含量的相互關(guān)系。
在得出劑量/響應(yīng)的相互關(guān)系之后，繼續(xù)給狗喂給12克消膽胺/狗/天，直至用本發(fā)明的共聚物以3克/狗/天或者6克/狗/天的劑量代替在食物中的消膽胺。給狗喂以本發(fā)明的共聚物并每天測量狗的血漿膽固醇含量達(dá)四個(gè)星期。
喂以膽汁酸螯合劑的狗的血清膽固醇含量穩(wěn)定在低于基準(zhǔn)含量。按照公式(3)通過計(jì)算效能因素(“EF”)用數(shù)量表示本發(fā)明的交聯(lián)共聚物的膽汁酸螯合劑和12克消膽胺/天的對(duì)照劑量的相對(duì)效能EF＝( (N-B)/(N-A) )( 12/(X) ) (3)其中EF＝效能因素N＝在無膽汁酸螯合劑的半合成飲食的情況下的血清膽固醇含量(毫克膽固醇/公升血清)A＝在含12克消膽胺/天的半合成食物情況下的血清膽固醇含量(mg/dl)
X＝包含在半合成飲食中的(本發(fā)明的膽汁酸螯合劑作為膽汁酸螯合劑的劑量克/天)B＝在服用含X克的本發(fā)明的交聯(lián)共聚合物的膽汁酸螯合劑的半合成飲食情況下的血清膽固醇含量(mg/dl)。
按照上述方法用比哥獵狗對(duì)每個(gè)實(shí)施例1-26的螯合劑和具有數(shù)均分子量為261，200和重均分子量為588400和模式分子量為477，000的比較例C1(聚一(二-甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺)作試驗(yàn)。對(duì)于每個(gè)試驗(yàn)的螯蟲劑按照公式3計(jì)算所得的結(jié)果EF連同以克(螯合劑)/狗/天(g/dog/day)表示的服用劑量和標(biāo)記服用該劑量的狗的號(hào)碼(狗No.)一起列在下面表4中。
表4實(shí)施例號(hào)狗號(hào)碼劑量(g/dog/day)EF130361.6120735.1329163.63-34.0430262.78520931.33530261.8620631.7620361.9720532.0679462.29
720733.04830562.2930331.31030064.381120261.21221262.98139262.291420162.11520362.891620963.821730562.21830462.41920734.62020462.942020635.202120163.82130534.42121234.512220932.142330132.672420761.34C120663.17C120763.342620431.55
實(shí)施例29制備在去離子水中的粒狀螯合劑的懸浮液。將該懸浮液連續(xù)地稀釋成無血清培養(yǎng)介質(zhì)。試驗(yàn)用的最濃的懸浮液是每毫升懸浮液含1000毫克螯合劑(μg/ml)。
用螯合劑稀釋液處理按指數(shù)律地生長的中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞培養(yǎng)基3小時(shí)。在處理期間將培養(yǎng)基放在震蕩器平臺(tái)輕輕地振動(dòng)以使懸浮液在整個(gè)處理期間在細(xì)胞上保持均勻。陰性對(duì)照物(即用無血清的培養(yǎng)介質(zhì)處理的CHO細(xì)胞培養(yǎng)基)和溶劑對(duì)照物(即用在無血清的培養(yǎng)介質(zhì)中的1%去離子水處理過的CHO細(xì)胞培養(yǎng)基)包括在內(nèi)。
通過用Dulbecco′s磷酸鹽緩沖鹽水二次洗滌培養(yǎng)基來完成處理，并讓細(xì)胞在含10%胎牛血清的McCoy′s5A介質(zhì)上復(fù)原0.5或21小時(shí)，即從處理開始時(shí)為起點(diǎn)計(jì)3，8或24小時(shí)。
用Trypsin-EDTA處理細(xì)胞并從培養(yǎng)基燒瓶中刮下細(xì)胞單層在2和24小時(shí)時(shí)收獲細(xì)胞。用Coulter計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)收獲的細(xì)胞，以測定細(xì)胞數(shù)的相對(duì)減少。在選擇的劑量情況下用血球計(jì)數(shù)器進(jìn)行Trypan蘭排除計(jì)數(shù)以測定細(xì)胞的生存率，以核以某些死亡的細(xì)胞可能被Coulter計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)的可能性。在8小時(shí)時(shí)不再作細(xì)胞計(jì)數(shù)，但在倒置細(xì)微鏡下發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基單層毒性的情況。
用上述方法對(duì)實(shí)施例4，15和20和比較例C1(在實(shí)施例28中描述)的每個(gè)螯合劑作細(xì)胞毒性試驗(yàn)。
每個(gè)試驗(yàn)的螯合劑的細(xì)胞的毒性試驗(yàn)的結(jié)果以ED50(μg/ml)列于下面表5中，其中ED50值表示在處理過的細(xì)胞培養(yǎng)基中每個(gè)螯合劑有效殺死50%細(xì)胞的劑量。
表5實(shí)施例號(hào) ED50(μg/ml)470015>100020500C110.0實(shí)施例30作為本發(fā)明化合的的口服組合物的具體實(shí)施方案，將1克實(shí)施例1的化合物與足夠的很細(xì)的乳糖混合以填充在適當(dāng)大小的硬性明膠膠囊中。
權(quán)利要求
1.膽汁酸螯合劑，包括一種交聯(lián)的聚合基體，它由伸長的基體單元與用于使螯合劑不溶于水的伸長的基體單元交聯(lián)的有效量交聯(lián)基體單元組成，和連接在伸長的基體單元上的支鏈單元，所述的伸長基體單元和連接的支鏈單元是由重復(fù)單元的聚合物形成的，所述的鏈包括具有下列結(jié)構(gòu)的單元 其中R1是H，-(C1-C8)-烷基；A是-(CHR4)-或 在每個(gè)R3、R4、R5、R6、R7、R8和R9分別選自H和(C1-C8)烷基；a是1-20的整數(shù)；b是1-10的整數(shù)；d雖1-10的整數(shù)；和e是1-5的整數(shù)；和其中交聯(lián)基體單元包括具有下面結(jié)構(gòu)式的交聯(lián)基體單元， F是亞苯基、(C1-C4)烷基亞苯基或苯三基；每個(gè)存在的R10、R11、R12和R14分別選自H和(C1-C8)烷基；和f是2(如果F是亞苯基或(C1-C4)烷基亞苯基)，和f是3(如果F是苯三基)；g是1-20的整數(shù)；h是1-10的整數(shù)；i是1-10的整數(shù)；和j是1-5的整數(shù)；及其藥物上可接受的鹽；所述的螯合劑含小于1.0%(重量)的水可提取的聚合物。
2.權(quán)利要求1的螯合劑，其中R1為H或甲基;A是 R2是 R4是H;每個(gè)R7和R8是甲基;a是2-6個(gè)整數(shù);交聯(lián)單元具有如下結(jié)構(gòu)式 其中 R10是H或甲基;每個(gè)R11和R14是H;和g是1-12的整數(shù)。
3.權(quán)利要求2的螯合劑，其中a是3和g是6。
4.權(quán)利要求1的螯合劑，其中交聯(lián)單元具有如下結(jié)構(gòu)式 其中F是亞苯基;和f是2。
5.權(quán)利要求1的螯合劑，其中交聯(lián)聚合物基體是粒狀形式。
6.權(quán)利要求1的螯合劑，其中螯合劑具有約10毫米-約400毫米的平均粒子直徑。
7.權(quán)利要求1的螯合劑，其中螯合劑具有的陰離子交換能力約為5毫當(dāng)量/克-約6毫當(dāng)量/克。
8.權(quán)利要求1的螯合劑，其中螯合劑具有濕度容量約為完全水化螯合劑的70%(重量)-97%(重量)。
9.一種膽汁酸螯合劑，其包括第一單體，所述的第一單體具有如下結(jié)構(gòu)式 其中R2是 R1、R3、R7、R8和R9每個(gè)分別是H或(C1-C8)烷基;和a是1-20的整數(shù);和第二單體的混合物的交聯(lián)聚合產(chǎn)物，所述的第二單體具有如下結(jié)構(gòu)式 其中 F是亞苯基、(C1-C4)烷基亞苯基或苯三基;每個(gè)存在的R10、R11、R12和R14分別選自H和(C1-C8))烷基;和f是2(如果F是亞苯基或(C1-C4)烷基亞苯基)和f是3(如果F是苯三基);g是1-20的整數(shù);h是1-10的整數(shù);i是1-10的整數(shù);和j是1-5的整數(shù);及其藥物上可接受的鹽，所述的螯合劑含＜1.0%(重量)的水可提取聚合物。
10.權(quán)利要求9的螯合劑，其中第一單體包括(C1-C8)烷基氨基(C1-C20)烷基丙烯酰胺或二(C1-C8)烷基氨基(C1-C20)烷基甲基丙烯酰胺。
11.權(quán)利要求10的螯合劑，其中第一單體選自二甲基氨基乙基丙烯酰胺、二甲基氨基乙基甲基丙烯酰胺、二甲基氨基戊基丙烯酰胺、二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺、二甲基氨基丁基丙烯酰胺、二甲基氨基丁基甲基丙烯酰胺、二甲基氨基戊基丙烯酰胺、二甲基氨基戊基甲基丙烯酰胺、二甲基氨基己基丙烯酰胺、二甲基氨基己基甲基丙烯酰胺及其混合物。
12.權(quán)利要求11的螯合劑，其中第一單體是二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺。
13.權(quán)利要求9的螯合劑，其中第二單體包括(C1-C20)亞烷基二(丙烯酰胺)或(C1-C20)亞烷基二(甲基丙烯酰胺)。
14.權(quán)利要求13的螯合劑，其中第二單體包括(C1-C12)亞烷基二(丙烯酰胺)或(C1-C12)亞烷基二(甲基丙烯酰胺)。
15.權(quán)利要求14的螯合劑，其中第二單體選自N，N′-亞丙基二(丙烯酰胺)、N，N′-亞丁基二(丙烯酰胺)、N，.N′-五亞甲基二(丙烯酰胺)、N，N′-六亞甲基二(丙烯酰胺)、N，N′-七亞甲基二(丙烯酰胺)、N，N′-八亞甲基二(丙烯酰胺)、N，N′-十亞甲基二(丙烯酰胺)、N，N′-十二亞甲基二(丙烯酰胺)、N，N-亞丙基二(甲基丙烯酰胺)、N，N′-亞丁基二(甲基丙烯胺)、N，N′-五亞甲基二(甲基丙烯酰胺)、N，N′-六亞甲基二(甲基丙烯酰胺)、N，N′七亞甲基二)甲基丙烯酰胺)、N，N′-八亞甲基二(甲基丙烯酰胺)、N，N′-十亞甲基二(甲基丙烯酰胺)、N，N′-十二亞甲基二(甲基丙烯酰胺)，及其混合物。
16.權(quán)利要求15的螯合劑，其中第二單體為N，N′-六亞甲基二(甲基丙烯酰胺)。
17.權(quán)利要求9的螯合劑，其中第二單體含二乙烯基苯。
18.權(quán)利要求9的螯合劑，其中螯合劑是第一單體和約0.5%(摩爾)-約20%(摩爾)的第二單體的混合物的聚合產(chǎn)物。
19.權(quán)利要求9的螯合劑，共中螯合劑是第一單體和約2%(摩爾)-約8%(摩爾)的第二單體的混合物的聚合產(chǎn)物。
20.權(quán)利要求9的螯合劑，其中螯合劑是＞94.0%(摩爾)的二甲基氨基(C2-C6)甲基丙烯酰胺和0.5-6%(摩爾)的(C3-C12)亞烷基二(甲基丙烯酰胺)的混合物的聚合產(chǎn)物。
21.權(quán)利要求20的螯合劑，其中螯合劑是約95.6%(摩爾)二甲基氨基丙基甲基丙烯酰胺和約4.4%(摩爾)的N，N′-六亞甲基二(甲基丙烯酰胺)的混合物的聚合產(chǎn)物。
22.一種藥物組合物，其包括治療有產(chǎn)量的權(quán)利要求1的螯合劑和藥物上可接受的載體。
23.權(quán)利要求22的組合物，其還包括治療有效量的抑制膽固醇生物合成的物質(zhì)。
24.權(quán)利要求23的組合物，其中抑制膽固醇合成的物質(zhì)是HMC-CoA還原酶抑制劑。
25.一種藥物組合物，其包括治療有效量的權(quán)利要求9的螯合劑和藥物上可接受的載體。
26.權(quán)利要求25的組合物，其還包括治療有效量的抑制膽固醇生物合成的物質(zhì)。
27.權(quán)利要求26的組合物，其中抑制膽固醇合成的物質(zhì)是HMC-CoA還原酶抑制劑。
全文摘要
本發(fā)明描述一種具有交聯(lián)聚合物基體和附在該聚合物基體的支鏈并提供可將膽汁酸共軛物鍵聯(lián)到螯合劑上的鍵合部位的膽汁酸螯合劑和含適用于治療血漿高膽固醇的螯合劑的藥物組合物。
文檔編號(hào)C08F220/60GK1103871SQ9311995
公開日1995年6月21日 申請(qǐng)日期1993年12月21日 優(yōu)先權(quán)日1992年12月21日
發(fā)明者R·L·阿爾布里特, E·C·比特斯, L·W·斯特菲爾 申請(qǐng)人:羅姆和哈斯公司