本發(fā)明涉及抗體領(lǐng)域，具體涉及抗金黃色葡萄球菌鐵離子調(diào)節(jié)表面決定簇b蛋白的全人源單克隆抗體，還涉及抗體的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、金黃色葡萄球菌(簡稱金葡菌)是引起醫(yī)院和社區(qū)感染的一種重要致病菌，其致病性強，由金葡菌感染引起的膿毒血癥病死率高達(dá)20％，且呈多重耐藥、泛耐藥性傳播蔓延。近年來，抗生素耐藥使得金葡菌感染面臨“無藥可治”的嚴(yán)峻形勢，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(methicillin-resistant?staphylococcus?aureus,mrsa)的出現(xiàn)更是加劇了臨床治療的困境。在2022年《lancet》期刊上發(fā)表的一項研究中，對全球范圍內(nèi)與耐藥性細(xì)菌感染相關(guān)的死亡率進(jìn)行了統(tǒng)計分析。結(jié)果顯示，金葡菌感染位居首位，每年直接導(dǎo)致超過100萬人的死亡，其中超過50萬人的死亡是由感染引發(fā)的膿毒血癥所致。who將mrsa確定為對人類構(gòu)成致命威脅的12種“超級細(xì)菌”之一，呼吁各國出臺政策“高度優(yōu)先”開展新藥研發(fā)。因此迫切需要應(yīng)對金葡菌感染、防止抗生素耐藥的有效手段。

2、研究表明，基于抗體的免疫策略是治療金葡菌感染的有效手段，也是防止抗生素耐藥的重要替代療法。金葡菌毒力因子多，致病因素復(fù)雜。鐵離子調(diào)節(jié)表面決定簇b(ironsurface?determinant?b，isdb)為金葡菌廣泛表達(dá)的一種細(xì)胞壁錨蛋白，保守性良好，在細(xì)菌對營養(yǎng)物質(zhì)血紅素鐵攝取、代謝以及維持細(xì)菌正常的生長過程中具有重要的作用，以isdb為靶點的抗體治療在金葡菌感染小鼠模型中顯示了明顯的保護(hù)作用。

3、因此本發(fā)明基于上述背景，有必要開發(fā)一種抗金葡菌鐵離子調(diào)節(jié)表面決定簇b蛋白的全人源單克隆抗體。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于提供抗金黃色葡萄球菌鐵離子調(diào)節(jié)表面決定簇b蛋白的單克隆抗體；本發(fā)明的目的之二在于提供所述抗金黃色葡萄球菌鐵離子調(diào)節(jié)表面決定簇b蛋白的單克隆抗體在制備特異性結(jié)合金葡菌鐵離子調(diào)節(jié)表面決定簇b蛋白的試劑中的應(yīng)用；本發(fā)明的目的之三在于提供所述抗金黃色葡萄球菌鐵離子調(diào)節(jié)表面決定簇b蛋白的單克隆抗體在制備治療或預(yù)防金黃色葡萄球菌感染的藥物中的應(yīng)用。

2、為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

3、1.抗金黃色葡萄球菌鐵離子調(diào)節(jié)表面決定簇b蛋白的單克隆抗體，所述單克隆抗體識別的結(jié)構(gòu)域至少包括金黃色葡萄球菌鐵離子調(diào)節(jié)表面決定簇b蛋白341-458位的neat2結(jié)構(gòu)域，其氨基酸如seq?id?no.1所示。

4、kmtdlqdtkyvvyesvennesmmdafvkhpiktgmlngkkymvmettnddywkdfmv

5、egqrvrtiskdaknntrtiifpyvegktlydaivkvhvktidydgqyhv?rivdkeaftkan

6、本發(fā)明優(yōu)選的，所述單克隆抗體包括重鏈和輕鏈，所述重鏈包括可變區(qū)cdr1、cdr2和cdr3，其氨基酸序列如seq?id?no.2(ggslnkyy)、seq?id?no.3(iqdsgrt)、seq?id?no.4(ardrvdspysnswsrfdy)；所述輕鏈包括可變區(qū)cdr1、cdr2、cdr3，其氨基酸序列如seq?idno.5(nlgsks)、ddd和seq?id?no.6(qvwdstsdvvv)所示。

7、本發(fā)明優(yōu)選的，所述單克隆抗體的恒定區(qū)包括人源igm、iga或iga恒定區(qū)中的任意一種。

8、本發(fā)明優(yōu)選的，所述單克隆抗體的重鏈可變區(qū)氨基酸序列如seq?id?no.7；所述單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如seq?id?no.8。

9、seq?id?no.7：

10、qvqlqesgpglvkpsetlsltctvsggslnkyywtwirqspnnglewigyiqdsgrtdsnp

11、slksrvsisldtstnqislkltsvaaadtaiyycardrvdspysnswsrfdywgqgklvtv

12、ss

13、seq?id?no.8：

14、qsvltqppsvpvapgrsavitcgghnlgsksvhwyqqkpgqapvlvvyddddrpsgipar

15、fsgstsertatltisrveagdeadyycqvwdstsdvvvfgggtklavl

16、2、所述抗金黃色葡萄球菌鐵離子調(diào)節(jié)表面決定簇b蛋白的單克隆抗體在制備特異性結(jié)合金葡菌鐵離子調(diào)節(jié)表面決定簇b蛋白的試劑中的應(yīng)用。

17、3、所述抗金黃色葡萄球菌鐵離子調(diào)節(jié)表面決定簇b蛋白的單克隆抗體在制備治療或預(yù)防金黃色葡萄球菌感染的藥物中的應(yīng)用。

18、本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明提供了抗金葡菌isdb?neat2結(jié)構(gòu)域蛋白的抗體，該抗體通過培養(yǎng)表達(dá)載體的宿主細(xì)胞來生成單克隆抗體，生成的單克隆抗體被分泌到上清液中，通過層析技術(shù)將其純化；獲得的抗體可以治療由金葡菌/mrsa感染引起的膿毒血癥，在預(yù)防和治療金黃色葡萄球菌感染方面有重要意義。

技術(shù)特征：

1.抗金黃色葡萄球菌鐵離子調(diào)節(jié)表面決定簇b蛋白的全人源單克隆抗體，其特征在于：所述單克隆抗體識別的結(jié)構(gòu)域至少包括金黃色葡萄球菌鐵離子調(diào)節(jié)表面決定簇b蛋白341-458位的neat2結(jié)構(gòu)域，其氨基酸如seq?id?no.1所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述抗金黃色葡萄球菌鐵離子調(diào)節(jié)表面決定簇b蛋白的全人源單克隆抗體，其特征在于：所述單克隆抗體包括重鏈和輕鏈，所述重鏈包括可變區(qū)cdr1、cdr2和cdr3，其氨基酸序列如seq?id?no.2、seq?id?no.3、seq?id?no.4；所述輕鏈包括可變區(qū)cdr1、cdr2、cdr3，其氨基酸序列如seq?id?no.5、ddd和seq?id?no.6所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述抗金黃色葡萄球菌鐵離子調(diào)節(jié)表面決定簇b蛋白的全人源單克隆抗體，其特征在于：所述單克隆抗體的恒定區(qū)包括人源igm、iga或iga恒定區(qū)中的任意一種。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述抗金黃色葡萄球菌鐵離子調(diào)節(jié)表面決定簇b蛋白的全人源單克隆抗體，其特征在于：所述單克隆抗體的重鏈可變區(qū)氨基酸序列如seq?id?no.7；所述單克隆抗體的輕鏈可變區(qū)氨基酸序列如seq?id?no.8。

5.權(quán)利要求1～4任一項所述抗金黃色葡萄球菌鐵離子調(diào)節(jié)表面決定簇b蛋白的全人源單克隆抗體在制備特異性結(jié)合金葡菌鐵離子調(diào)節(jié)表面決定簇b蛋白的試劑中的應(yīng)用。

6.權(quán)利要求1～4任一項所述抗金黃色葡萄球菌鐵離子調(diào)節(jié)表面決定簇b蛋白的全人源單克隆抗體在制備治療或預(yù)防金黃色葡萄球菌感染的藥物中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了抗金黃色葡萄球菌鐵離子調(diào)節(jié)表面決定簇B蛋白的單克隆抗體及應(yīng)用，單克隆抗體識別的結(jié)構(gòu)域的氨基酸如SEQ?ID?NO.1所示，通過培養(yǎng)表達(dá)載體的宿主細(xì)胞來生成單克隆抗體，生成的單克隆抗體被分泌到上清液中，通過層析技術(shù)將其純化；得到的抗體可以治療由金葡菌/MRSA感染引起的膿毒血癥，在預(yù)防和治療金黃色葡萄球菌感染方面有重要意義。

技術(shù)研發(fā)人員：曾浩,孫思,鄒全明,左瑜,楊赟,張成雯
受保護(hù)的技術(shù)使用者：中國人民解放軍陸軍軍醫(yī)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/1/6