相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用本技術(shù)要求向韓國(guó)知識(shí)產(chǎn)權(quán)局于2019年12月23日提交的kr?10-2019-0173414和于2020年5月22日提交的kr?10-2020-0061907的權(quán)益，其全部公開內(nèi)容通過引用并入本文。本公開涉及一種抗lilrb1抗體及其用途。更具體地，提供了一種抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段，及其用于癌癥治療的用途。

背景技術(shù)：

1、白細(xì)胞免疫球蛋白樣受體亞家族b成員1(lilrb1；也稱為ilt2、cd85j或lir-1)是一種抑制性受體，其在細(xì)胞例如b細(xì)胞、t細(xì)胞、nk細(xì)胞、樹突細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和其他免疫細(xì)胞中表達(dá)。lilrb1通過結(jié)合經(jīng)典和非經(jīng)典mhc?i類而參與抑制免疫細(xì)胞活性的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。

2、同時(shí)，據(jù)報(bào)道，各種癌細(xì)胞過表達(dá)mhc?i類如hla-g以進(jìn)行免疫逃逸。預(yù)期阻斷l(xiāng)ilrb1與mhc?i類的結(jié)合允許恢復(fù)受抑制的免疫細(xì)胞活性，從而表現(xiàn)出抗癌作用。

3、因此，需要開發(fā)與lilrb1結(jié)合并阻斷l(xiāng)ilrb1與mhc?i類的結(jié)合和/或lilrb1與mhci類之間的相互作用的新型藥劑。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、技術(shù)問題

2、本公開提供了與lilrb1結(jié)合、作用于表達(dá)lilrb1的免疫細(xì)胞、調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的活性并表現(xiàn)出抗癌作用的抗體，及其用于癌癥治療的用途。

3、一個(gè)實(shí)施方式提供了一種與lilrb1結(jié)合的抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段。所述抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段可具有阻斷l(xiāng)ilrb1與mhc?i類的結(jié)合和/或阻斷l(xiāng)ilrb1與mhc?i類之間的相互作用的活性。另外，所述抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段可以具有抑制癌細(xì)胞免疫逃逸的活性。此外，所述抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段可以具有抗癌作用。所述抗癌作用可以針對(duì)在細(xì)胞表面上表達(dá)或過表達(dá)mhc?i類的癌細(xì)胞。

4、另一個(gè)實(shí)施方式提供了一種用于治療和/或預(yù)防癌癥的藥物組合物，所述組合物包含抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段作為活性成分。

5、另一個(gè)實(shí)施方式提供了一種用于抑制lilrb1與mhc?i類的結(jié)合和/或阻斷l(xiāng)ilrb1與mhc?i類之間的相互作用的藥物組合物，所述組合物包含抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段作為活性成分。

6、另一個(gè)實(shí)施方式提供了一種用于抑制癌細(xì)胞免疫逃逸的藥物組合物，所述組合物包含抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段作為活性成分。

7、【技術(shù)解決方案】

8、一個(gè)實(shí)施方式提供了一種與lilrb1結(jié)合的抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段。所述抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段可以具有阻斷l(xiāng)ilrb1與mhc?i類的結(jié)合和/或阻斷l(xiāng)ilrb1與mhc?i類之間的相互作用的活性。另外，所述抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段可以具有抑制癌細(xì)胞免疫逃逸的活性。另外，所述抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段可以具有抗癌作用。

9、所述抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段可以包含以下互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)：

10、(1)基于根據(jù)kabat編號(hào)的cdr定義(kabat,e.a.,wu,t.t.,perry,h.,gottesman,k.和foeller,c.(1991)具有免疫意義的蛋白質(zhì)序列(sequences?of?proteins?ofimmunological?interest),第五版.nih出版號(hào)91-3242；http://www.abysis.org/)，

11、cdr-l1，其包含seq?id?no:1、7、13、19、25、31、37、43、49、55、61、67、73、79、85、91、97、103、109或115的氨基酸序列，

12、cdr-l2，其包含seq?id?no:2、8、14、20、26、32、38、44、50、56、62、68、74、80、86、92、98、104、110或116的氨基酸序列，

13、cdr-l3，其包含seq?id?no:3、9、15、21、27、33、39、45、51、57、63、69、75、81、87、93、99、105、111或117的氨基酸序列，

14、cdr-h1，其包含seq?id?no:4、10、16、22、28、34、40、46、52、58、64、70、76、82、88、94、100、106、112或118的氨基酸序列，

15、cdr-h2，其包含seq?id?no:5、11、17、23、29、35、41、47、53、59、65、71、77、83、89、95、101、107、113或119的氨基酸序列，和

16、cdr-h3，其包含seq?id?no:6、12、18、24、30、36、42、48、54、60、66、72、78、84、90、96、102、108、114或120的氨基酸序列；或

17、(2)基于根據(jù)imgt編號(hào)的cdr定義(http://www.imgt.org/)，cdr-l1，其包含seqid?no:121、126、131、136、141、146、151、156、161、166、171、176、181、186、191、196、201、206、211或216的氨基酸序列，

18、cdr-l2，其包含seq?id?no:122、127、132、137、142、147、152、157、162、167、172、177、182、187、192、197、202、207、212或217的氨基酸序列，

19、cdr-l3，其包含seq?id?no:3、9、15、21、27、33、39、45、51、57、63、69、75、81、87、93、99、105、111或117的氨基酸序列，

20、cdr-h1，其包含seq?id?no:123、128、133、138、143、148、153、158、163、168、173、178、183、188、193、198、203、208、213或218的氨基酸序列，

21、cdr-h2，其包含seq?id?no:124、129、134、139、144、149、154、159、164、169、174、179、184、189、194、199、204、209、214或219的氨基酸序列，和

22、cdr-h3，其包含seq?id?no:125、130、135、140、145、150、155、160、165、170、175、180、185、190、195、200、205、210、215或220的氨基酸序列。

23、在一個(gè)具體實(shí)施方式中，可以包含在本公開提供的抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段中的6個(gè)cdr(cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3、cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3)的組合示于表1中：

24、【表1】

25、

26、

27、

28、

29、在一個(gè)實(shí)施方式中，所述抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段可以包含：

30、包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的輕鏈可變區(qū)，和

31、包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的重鏈可變區(qū)，

32、其中所述cdr如上所述。

33、更具體地，所述抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段可以包含：

34、輕鏈可變區(qū)，其包含seq?id?no:221、223、225、227、229、231、233、235、237、239、241、243、245、247、249、251、253、255、257、259或345的氨基酸序列，和

35、重鏈可變區(qū)，其包含seq?id?no:222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254、256、258或260的氨基酸序列。

36、在一個(gè)具體實(shí)施方式中，可以包含在本公開提供的抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段中的輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)的組合示于表2中：

37、【表2】

38、

39、

40、

41、在本公開中，表述“包含特定氨基酸序列、由特定氨基酸序列組成或由特定氨基酸序列表示的抗體或抗原結(jié)合片段(例如，cdr、可變區(qū)或重鏈/輕鏈)”可以指基本上由以下組成的抗原結(jié)合片段：(1)所述特定氨基酸序列或(2)其中在氨基酸序列(1)中引入非顯著性突變(例如，氨基酸殘基的取代、缺失和/或添加；導(dǎo)致對(duì)抗體活性沒有影響)的氨基酸序列。

42、當(dāng)通過表面等離子體共振(spr)測(cè)量時(shí)，本公開中提供的抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段可以具有10mm以下、5mm以下、1mm以下、0.5mm以下、0.2mm或0.15mm以下，例如0.001nm至10mm、0.005nm至10mm、0.01nm至10mm、0.05nm至10mm、0.1nm至10mm、0.5nm至10mm、1nm至10mm、0.001nm至5mm、0.005nm至5mm、0.01nm至5mm、0.05nm至5mm、0.1nm至5mm、0.5nm至5mm、1nm至5mm、0.001nm至1mm、0.005nm至1mm、0.01nm至1mm、0.05nm至1mm、0.1nm至1mm、0.5nm至1mm、1nm至1mm、0.001nm至0.5mm、0.005nm至0.5mm、0.01nm至0.5mm、0.05nm至0.5mm、0.1nm至0.5mm、0.5nm至0.5mm、1nm至0.5mm、0.001nm至0.2mm、0.005nm至0.2mm、0.01nm至0.2mm、0.05nm至0.2mm、0.1nm至0.2mm、0.5nm至0.2mm、1nm至0.2mm、0.001nm至0.15mm、0.005nm至0.15mm、0.01nm至0.15mm、0.05nm至0.15mm、0.1nm至0.15mm、0.5nm至0.15mm或1nm至0.15mm的與lilrb1(例如，人lilrb1)的結(jié)合親和力(kd)。

43、另一個(gè)實(shí)施方式提供了一種包含抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段作為活性成分的藥物組合物。例如，所述藥物組合物可以是用于治療和/或預(yù)防癌癥的藥物組合物。所述藥物組合物可以具有抑制lilrb1與mhc?i類的結(jié)合和/或lilrb1與mhc?i類之間的相互作用的活性。所述癌癥可以是與lilrb1和mhc?i類之間的相互作用相關(guān)的癌癥。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述藥物組合物可以具有抑制癌細(xì)胞免疫逃逸的活性。所述癌細(xì)胞可以是在細(xì)胞表面上表達(dá)或過表達(dá)mhc?i類的細(xì)胞。

44、另一個(gè)實(shí)施方式提供了一種用于阻斷l(xiāng)ilrb1與mhc?i類的結(jié)合和/或lilrb1與mhci類之間的相互作用的組合物，所述組合物包含抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段作為活性成分。

45、另一個(gè)實(shí)施方式提供了一種用于抑制癌細(xì)胞免疫逃逸的組合物，所述組合物包含抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段作為活性成分。

46、另一個(gè)實(shí)施方式提供了一種治療和/或預(yù)防癌癥的方法，所述方法包括向需要治療和/或預(yù)防癌癥的受試者(例如，哺乳動(dòng)物，包括人)施用(口服或腸胃外)藥學(xué)有效量的抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段。

47、另一個(gè)實(shí)施方式提供了一種阻斷l(xiāng)ilrb1與mhc?i類的結(jié)合的方法和/或一種阻斷l(xiāng)ilrb1與mhc?i類之間的相互作用的方法，所述方法包括向需要抑制lilrb1與mhc?i類的結(jié)合和/或lilrb1與mhc?i類之間的相互作用的受試者(例如，哺乳動(dòng)物，包括人)施用(口服或腸胃外)藥學(xué)有效量的抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段。

48、另一個(gè)實(shí)施方式提供了一種抑制癌細(xì)胞免疫逃逸的方法，所述方法包括向需要抑制癌細(xì)胞免疫逃逸的受試者(例如，哺乳動(dòng)物，包括人)施用(口服或腸胃外)藥學(xué)有效量的抗lilrbl抗體或其抗原結(jié)合片段。

49、本公開中提供的方法還可以包括在施用步驟之前，鑒定需要治療和/或預(yù)防癌癥、抑制lilrb1與mhc?i類的結(jié)合和/或lilrb1與mhc?i類之間的相互作用、和/或抑制癌細(xì)胞免疫逃逸的受試者的步驟。

50、另一個(gè)實(shí)施方式提供了一種編碼至少一種多肽的核酸分子(多核苷酸)，所述多肽選自上述抗lilrb1抗體的cdr(cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3、cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3，cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的組合或cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的組合)，包含cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3的輕鏈可變區(qū)，包含cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3的重鏈可變區(qū)；包含所述輕鏈可變區(qū)的輕鏈，和包含所述重鏈可變區(qū)的重鏈。

51、另一個(gè)實(shí)施方式提供了一種包含所述核酸分子的重組載體。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述重組載體可以，分別地(例如，在兩個(gè)單獨(dú)的載體中)或全部一起(例如，在一個(gè)載體中)，包含編碼輕鏈可變區(qū)或輕鏈的核酸分子和編碼重鏈可變區(qū)或重鏈的核酸分子。所述重組載體可以用作表達(dá)載體。

52、另一個(gè)實(shí)施方式提供了一種包含所述核酸分子或所述重組載體的重組細(xì)胞。

53、另一個(gè)實(shí)施方式提供了一種制備抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段的方法，所述方法包括在細(xì)胞中表達(dá)核酸分子。表達(dá)核酸分子的步驟可以包括培養(yǎng)重組細(xì)胞。

54、如本文所述，抗lilrb1抗體的抗原結(jié)合片段可以指衍生自抗lilrb1抗體并保留所述抗體的抗原(lilrb1)結(jié)合親和力的片段。在一個(gè)實(shí)施方式中，抗原結(jié)合片段可以是包含如上所述的抗lilrb1抗體的6個(gè)cdr的多肽，并且例如可以是scfv、scfv-fc、scfv-ck(κ恒定區(qū))、scfv-cλ(λ恒定區(qū))、(scfv)2、fab、fab'或f(ab')2，但不限于此。在一個(gè)實(shí)施方式中，抗原結(jié)合片段可以是scfv；其中scfv與免疫球蛋白(例如，iga、igd、ige、igg(igg1、igg2、igg3、igg4)、igm等)的fc區(qū)融合的融合多肽(scfv-fc)；或其中scfv與輕鏈的恒定區(qū)(例如，κ或λ)融合的融合多肽(scfv-ck或scfv-cλ)。

55、所述抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段可以對(duì)lilrb1蛋白具有調(diào)節(jié)活性，例如拮抗或激動(dòng)活性。另外，所述抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段可以具有阻斷l(xiāng)ilrb1與mhc?i類的結(jié)合和/或lilrb1與mhc?i類之間的相互作用的活性。另外，所述抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段可以具有抑制癌細(xì)胞免疫逃逸的活性。此外，所述抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段可以具有抗癌作用。

56、作為本公開中提供的抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段的抗原的蛋白質(zhì)lilrb1可以來源于哺乳動(dòng)物。例如，作為抗原的lilrb1可以是人lilrb1(例如，genbank登錄號(hào)aah15731.1(seq?id?no:348)、np_001265328.2、np_001265327.2、np_001075108.2、np_001075107.2、np_001075106.2、np_006660.4、nm_001081637.2、nm_001081638.3、nm_001081639.3、nm_001278398.2、nm_001278399.2等)，但不限于此。

57、mhc?i類可以是主要組織相容性復(fù)合物(mhc)分子中的一類。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述mhc?i類可以是人mhc?i類并且可以是選自hla(人白細(xì)胞抗原)-a、hla-b、hla-c、hla-e、hla-f和hla-g中的至少一種，但不限于此。

58、如本文所述，術(shù)語“抗體”可以指與特定抗原特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)，并且可以是通過免疫系統(tǒng)中的抗原刺激產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，或通過化學(xué)合成或重組產(chǎn)生而產(chǎn)生的蛋白質(zhì)，沒有具體限制。抗體可以是非天然存在的，例如，通過重組或合成產(chǎn)生而產(chǎn)生的?？贵w可以是動(dòng)物抗體(例如小鼠抗體等)、嵌合抗體、人源化抗體或人類抗體?？贵w可以是單克隆或多克隆抗體。

59、在本文提供的抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段中，除了如上定義的重鏈cdr和輕鏈cdr部分或重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)之外的部分可以衍生自免疫球蛋白的任何亞型(例如，iga、igd、ige、igg(igg1、igg2、igg3、igg4)、igm等)，并且例如衍生自框架部分和/或輕鏈恒定區(qū)和/或重鏈恒定區(qū)。在一個(gè)實(shí)施方式中，本公開中提供的抗lilrb1抗體可以是人igg形式的抗體，例如igg1、igg2、igg3或igg4，但不限于此。

60、完整抗體(例如igg型)具有含兩條全長(zhǎng)輕鏈和兩條全長(zhǎng)重鏈的結(jié)構(gòu)，其中每條輕鏈經(jīng)由二硫鍵連接到相應(yīng)的重鏈?？贵w的恒定區(qū)分為重鏈恒定區(qū)和輕鏈恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)為γ、μ、α、δ或ε型，并且具有γ1、γ2、γ3、γ4、α1或α2作為其子類。輕鏈恒定區(qū)具有κ或λ型。

61、如本文所用，術(shù)語“重鏈”可以旨在涵蓋全長(zhǎng)重鏈及其片段，其中所述全長(zhǎng)重鏈可以包含可變區(qū)vh(包括足以提供對(duì)抗原的特異性的氨基酸序列)，三個(gè)恒定區(qū)ch1、ch2和ch3，以及鉸鏈。術(shù)語“輕鏈”可以旨在涵蓋全長(zhǎng)輕鏈及其片段，其中所述全長(zhǎng)輕鏈可以包含可變區(qū)vl(包括足以提供對(duì)抗原的特異性的氨基酸序列)，和恒定區(qū)cl。

62、術(shù)語“互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)”可以指在抗體的可變區(qū)中賦予抗原結(jié)合特異性的部分，并且可以指在免疫球蛋白的重鏈或輕鏈的高可變區(qū)中發(fā)現(xiàn)的氨基酸序列。重鏈和輕鏈可以分別包括三個(gè)cdr(cdrh1、cdrh2和cdrh3；以及cdrl1、cdrl2和cdrl3)。所述cdr可以提供在抗體與其抗原或抗原表位的結(jié)合中起重要作用的接觸殘基。如本文所用，術(shù)語“特異性結(jié)合”和“特異性識(shí)別”可以具有與本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的相同的一般含義，并且表示抗體和抗原彼此特異性相互作用以導(dǎo)致免疫反應(yīng)。

63、在本公開中，除非另有說明，否則術(shù)語“抗體”不僅可以涵蓋完整的抗體，而且還可以涵蓋具有抗原結(jié)合能力的抗體的抗原結(jié)合片段。

64、本文使用的術(shù)語“抗原結(jié)合片段”可以指任何類型的多肽，其包含能夠與抗原結(jié)合的部分(例如，如本文所述的6個(gè)cdr)，并且例如可以是scfv、(scfv)2、scfv-fc、fab、fab′或f(ab′)2，但不限于此。另外，如上所述，抗原結(jié)合片段可以是scfv，其中scfv與免疫球蛋白(例如，iga、igd、ige、igg(igg1、igg2、igg3、igg4)、igm等)的fc區(qū)或恒定區(qū)(例如κ或λ)融合的融合多肽。

65、在抗原結(jié)合片段中，fab包括輕鏈和重鏈可變區(qū)、輕鏈恒定區(qū)和第一重鏈恒定區(qū)ch1。

66、fab'與fab的不同之處在于：fab'包含鉸鏈區(qū)，所述鉸鏈區(qū)在ch1的c末端處具有至少一個(gè)半胱氨酸殘基。

67、f(ab')2抗體是通過fab'鉸鏈區(qū)中的半胱氨酸殘基的二硫鍵橋接形成的。

68、fv是僅由重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)組成的最小抗體片段。產(chǎn)生fv片段的重組技術(shù)在本領(lǐng)域中是眾所周知的。

69、雙鏈fv包含通過非共價(jià)鍵彼此連接的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)。單鏈fv通常包含重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)，它們?cè)赾末端經(jīng)由肽接頭通過共價(jià)鍵彼此連接或直接連接以具有類似雙鏈fv的二聚體結(jié)構(gòu)。

70、抗原結(jié)合片段可以使用蛋白酶獲得(例如，fab可以通過用木瓜蛋白酶限制性切割整個(gè)抗體獲得，并且f(ab′)2片段可以通過用胃蛋白酶切割獲得)，或者可以通過使用基因重組技術(shù)來制備。

71、術(shù)語“鉸鏈區(qū)”可以指抗體重鏈內(nèi)ch1和ch2結(jié)構(gòu)域之間的區(qū)域，其功能是為抗體中的抗原結(jié)合位點(diǎn)提供靈活性。

72、抗lilrb1抗體可以是單克隆抗體或多克隆抗體，并且例如是單克隆抗體?？梢允褂帽绢I(lǐng)域廣為人知的方法，例如使用噬菌體展示技術(shù)來制備單克隆抗體?；蛘撸筶ilrb1抗體可以通過常規(guī)方法以小鼠來源的單克隆抗體的形式構(gòu)建。

73、同時(shí)，基于對(duì)lilrb1的結(jié)合潛力，可以使用典型的elisa(酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定)形式篩選單個(gè)單克隆抗體。抑制活性可以通過功能分析(例如用于驗(yàn)證結(jié)合組件的分子相互作用的競(jìng)爭(zhēng)性elisa)或功能分析(例如基于細(xì)胞的測(cè)定)來驗(yàn)證。然后，對(duì)于基于其強(qiáng)抑制活性而選擇的單克隆抗體成員，可以各自驗(yàn)證它們與lilrb1的親和力(kd值)。

74、除了活性成分(抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段)之外，藥物組合物還可以包含藥學(xué)上可接受的載劑。所述藥學(xué)上可接受的載劑可以是選自通常用于抗體制劑的任何載劑。例如，藥學(xué)上可接受的載劑可以是選自乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯樹膠、磷酸鈣、藻酸鹽、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水、糖漿、甲基纖維素、羥基苯甲酸甲酯、羥基苯甲酸丙酯、滑石粉、硬脂酸鎂、礦物油等中的一種或多種，但不限于此。所述藥物組合物還可以包含選自常用于制造藥物組合物的稀釋劑、賦形劑、潤(rùn)滑劑、潤(rùn)濕劑、甜味劑、風(fēng)味增強(qiáng)劑、乳化劑、懸浮劑、防腐劑等中的一種或多種。

75、所述藥物組合物或所述抗體或其抗原結(jié)合片段可以藥學(xué)有效量口服或腸胃外施用。腸胃外施用可以是靜脈內(nèi)注射、皮下注射、肌肉注射、腹膜內(nèi)注射、皮內(nèi)施用、鼻內(nèi)施用、肺內(nèi)施用、直腸施用或病灶內(nèi)局部施用。由于蛋白質(zhì)或肽在口服施用時(shí)被消化，因此用于口服施用的組合物中的活性成分可以被包衣或配制成防止在胃中消化。另外，所述抗體或所述組合物可以使用能夠?qū)⒒钚猿煞诌f送至靶細(xì)胞(例如癌細(xì)胞)的任選裝置來施用。

76、所述抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段可以包含在藥物組合物中或以藥學(xué)有效量施用于受試者。如本文所用，術(shù)語“藥學(xué)有效量”可以指使活性成分(抗體或其片段)可以發(fā)揮所需作用(例如，抗癌作用)的活性成分量。藥學(xué)有效量可以多種方式規(guī)定，這取決于多種因素，例如受試者的年齡、體重、性別、病理狀況、飲食、排泄速度和/或反應(yīng)敏感性、制劑類型、施用時(shí)間、施用間隔、施用途徑、施用方式等。例如，抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段可以每天0.005ug/kg至1000mg/kg、0.005ug/kg至500mg/kg、0.005ug/kg至250mg/kg、0.005ug/kg至100mg/kg、0.005ug/kg至75mg/kg、0.005ug/kg至50mg/kg、0.01ug/kg至1000mg/kg、0.01ug/kg至500mg/kg、0.01ug/kg至250mg/kg、0.01ug/kg至100mg/kg、0.01ug/kg至75mg/kg、0.01ug/kg至50mg/kg、0.05ug/kg至1000mg/kg、0.05ug/kg至500mg/kg、0.05ug/kg至250mg/kg、0.05ug/kg至100mg/kg、0.05ug/kg至75mg/kg或0.05ug/kg至50mg/kg的量施用，但不限于此。日劑量可以配制成單位劑型的單一制劑或配制成適當(dāng)分開的劑型，或者它可以被制造成包含在多劑量容器中。

77、所述藥物組合物可以配制成在油或水性介質(zhì)中的溶液、懸浮液、糖漿、乳化溶液、提取物、粉末、顆粒劑、片劑或膠囊劑的形式，并且還可以包含用于配制的分散劑或穩(wěn)定劑。

78、應(yīng)用本公開中提供的抗體、藥物組合物或方法的受試者可以選自哺乳動(dòng)物，包括靈長(zhǎng)類動(dòng)物如人類和猴、嚙齒類動(dòng)物如大鼠和小鼠等。

79、癌癥可以是實(shí)體癌或血癌。癌癥可以是但不限于選自肺癌(例如，肺鱗狀細(xì)胞癌、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、肺腺癌)、腹膜癌、皮膚癌、鱗狀細(xì)胞癌、皮膚或眼球黑色素瘤、直腸癌、肛門附近癌癥、食道癌、小腸腫瘤、內(nèi)分泌腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、白血病(例如慢性或急性白血病)、淋巴細(xì)胞性淋巴瘤、肝癌、胃癌、胰腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝細(xì)胞腺瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌、大腸癌、子宮內(nèi)膜癌或子宮癌、唾液腺腫瘤、腎細(xì)胞癌、腎癌、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、頭頸癌、腦癌、膽道癌、膽囊癌、骨骼骨肉瘤等中的一種或多種。癌癥可以是原發(fā)性癌癥或轉(zhuǎn)移性癌癥。癌癥可以是特征在于在癌細(xì)胞表面上表達(dá)或過表達(dá)mhc?i類的癌癥，并且例如可以是結(jié)腸腺癌、小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、胰腺癌、惡性黑色素瘤、骨骼骨肉瘤、腎細(xì)胞癌或胃癌。mhc?i類的過表達(dá)可以指與正常細(xì)胞或?qū)γ庖忒煼o響應(yīng)或抗性的癌細(xì)胞相比的過表達(dá)，所述免疫療法例如t細(xì)胞(例如，細(xì)胞毒性t細(xì)胞)介導(dǎo)的免疫療法。

80、如本文所用，術(shù)語“癌癥治療”可以指預(yù)防、減輕或改善癌癥癥狀或者部分或完全消除癌癥的所有抗癌作用，例如癌細(xì)胞死亡、癌細(xì)胞增殖的抑制、癌癥轉(zhuǎn)移的抑制等。

81、本公開中提供的抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段可以與另一種藥物共同施用，所述另一種藥物例如選自常規(guī)使用的免疫治療劑、抗癌劑、細(xì)胞毒劑等中的至少一種。因此，一個(gè)實(shí)施方式提供了一種用于治療和/或預(yù)防癌癥的組合施用的藥物組合物，其包含(1)抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段，和(2)選自免疫治療劑、抗癌劑、細(xì)胞毒劑等中的至少一種。另一個(gè)實(shí)施方式提供了一種治療和/或預(yù)防癌癥的方法，所述方法包括向需要治療和/或預(yù)防癌癥的受試者施用(1)抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段，和(2)選自免疫治療劑、抗癌劑、細(xì)胞毒劑等中的至少一種。所述免疫治療劑、抗癌劑和細(xì)胞毒劑可以包括常規(guī)用于癌癥治療和/或具有細(xì)胞毒性活性的任何藥物，并且例如，它們可以是選自蛋白質(zhì)如抗體、核酸分子如sirna和/或小分子化學(xué)品如紫杉醇(paclitaxel)、多西他賽(docetaxel)等中的至少一種，但不限于此。

82、另一個(gè)實(shí)施方式提供了一種包含如上所述的抗lilrb1抗體的重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3或其組合)、輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3或其組合)、其組合；或重鏈可變區(qū)、輕鏈可變區(qū)或其組合的多肽分子。多肽分子可作為抗體的前體用于制備抗體，或作為組分包含在具有抗體樣結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)支架(例如肽體)、雙特異性抗體或多特異性抗體中。在另一個(gè)實(shí)施方式中，多肽分子可以在用于靶標(biāo)療法的細(xì)胞治療劑如car-t中用作靶(抗原)識(shí)別結(jié)構(gòu)域或分泌抗體。在另一個(gè)實(shí)施方式中，多肽分子可以用于構(gòu)建抗lilrb1抗體分泌細(xì)胞作為細(xì)胞治療劑。

83、另一個(gè)實(shí)施方式提供了一種編碼抗lilrb1抗體的重鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdr-h1、cdr-h2、cdr-h3或其組合)、重鏈可變區(qū)或重鏈的核酸分子。

84、另一個(gè)實(shí)施方式提供了一種編碼抗lilrb1抗體的輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)(cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3或其組合)、輕鏈可變區(qū)或輕鏈的核酸分子。

85、另一個(gè)實(shí)施方式提供了一種重組載體，其分別在兩個(gè)單獨(dú)的載體中或全部一起在一個(gè)載體中，包含編碼抗lilrb1抗體的重鏈可變區(qū)或重鏈以及抗lilrb1抗體的輕鏈可變區(qū)或輕鏈的核酸分子。

86、另一個(gè)實(shí)施方式提供了一種包含核酸分子或重組載體的重組細(xì)胞。

87、術(shù)語“載體”是指用于在宿主細(xì)胞中表達(dá)靶基因的工具，例如質(zhì)粒載體、粘粒載體和病毒載體如噬菌體載體、慢病毒載體、腺病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和腺相關(guān)病毒載體。重組載體可以由以下構(gòu)建或通過操縱以下來構(gòu)建：質(zhì)粒(例如，psc101、pgv1106、pacyc177、cole1、pkt230、pme290、pbr322、puc8/9、puc6、pbd9、phc79、pij61、plafr1、phv14、pgex系列、pet系列、puc19等)、噬菌體(例如，λgt4λb、λ-charon、λδz1、m13等)或病毒載體(例如，sv40等)，這是本領(lǐng)域中常用的。

88、在重組載體中，核酸分子可以與啟動(dòng)子可操作地連接。術(shù)語“可操作地連接”旨在涉及目標(biāo)核苷酸序列與表達(dá)調(diào)控序列(例如，啟動(dòng)子序列)之間的功能連接。當(dāng)“可操作地連接”時(shí)，調(diào)控元件可以控制目標(biāo)多核苷酸的轉(zhuǎn)錄和/或翻譯。

89、重組載體通?？梢詷?gòu)建為克隆載體或表達(dá)載體。對(duì)于重組表達(dá)載體，可以使用相關(guān)領(lǐng)域中通常可獲得的用于在植物、動(dòng)物或微生物細(xì)胞中表達(dá)外來蛋白質(zhì)的載體。本領(lǐng)域中眾所周知的各種方法可以用于構(gòu)建重組載體。

90、為了在宿主例如原核或真核細(xì)胞中使用，可以相應(yīng)地構(gòu)建重組載體。例如，當(dāng)構(gòu)建載體作為用于原核宿主的表達(dá)載體時(shí)，所述載體通常包括用于轉(zhuǎn)錄的強(qiáng)啟動(dòng)子(例如，plλ啟動(dòng)子、cmv啟動(dòng)子、trp啟動(dòng)子、lac啟動(dòng)子、tac啟動(dòng)子、t7啟動(dòng)子等)、用于啟動(dòng)翻譯的核糖體結(jié)合位點(diǎn)和轉(zhuǎn)錄/翻譯終止序列。另一方面，用于真核宿主的表達(dá)載體包括可在真核細(xì)胞中操作的復(fù)制起點(diǎn)，例如f1復(fù)制起點(diǎn)、sv40復(fù)制起點(diǎn)、pmb1復(fù)制起點(diǎn)、腺病毒復(fù)制起點(diǎn)、aav復(fù)制起點(diǎn)和bbv復(fù)制起點(diǎn)，但不限于此。另外，表達(dá)載體通常包括源自哺乳動(dòng)物細(xì)胞基因組的啟動(dòng)子(例如金屬硫蛋白啟動(dòng)子)或源自哺乳動(dòng)物病毒的啟動(dòng)子(例如腺病毒晚期啟動(dòng)子、牛痘病毒7.5k啟動(dòng)子、sv40啟動(dòng)子、巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子、hsv的tk啟動(dòng)子等)，以及作為轉(zhuǎn)錄終止序列的多聚腺苷酸化序列。

91、可以通過將重組載體引入合適的宿主細(xì)胞來制備重組細(xì)胞。本領(lǐng)域已知的任何宿主細(xì)胞都可以用于本公開中，只要它允許重組載體以穩(wěn)定的方式連續(xù)克隆和表達(dá)。可用于本公開的原核宿主細(xì)胞的實(shí)例可以選自大腸桿菌(e.coli)如大腸桿菌jm109、大腸桿菌bl21、大腸桿菌rr1、大腸桿菌le392、大腸桿菌b、大腸桿菌x?1776、大腸桿菌w3110，芽孢桿菌屬菌種如枯草芽孢桿菌(bacillus?subtilis)和蘇云金芽孢桿菌(bacillusthuringiensis)，以及腸桿菌科菌株，例如鼠傷寒沙門氏菌(salmonella?typhimurium)、粘質(zhì)沙雷氏菌(serratia?marcescens)和各種假單胞菌菌種。可用于轉(zhuǎn)化的真核宿主細(xì)胞可以選自但不限于釀酒酵母(saccharomyces?cerevisiae)、昆蟲細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞，例如sp2/0、cho(中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢)k1、cho?dg44、cho?s、cho?dxb11、cho?gs-ko、per.c6、w138、bhk、cos-7、293、hepg2、huh7、3t3、rin、mdck等。

92、可以使用相關(guān)領(lǐng)域中眾所周知的方法將核酸分子或攜帶核酸分子的重組載體引入(轉(zhuǎn)染)到宿主細(xì)胞中。例如，當(dāng)宿主細(xì)胞是原核細(xì)胞時(shí)，可以使用cacl2或電穿孔方法進(jìn)行這種轉(zhuǎn)染。對(duì)于真核宿主細(xì)胞，可以使用但不限于顯微注射、磷酸鈣沉淀、電穿孔、脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染或粒子轟擊來實(shí)現(xiàn)基因引入。

93、為了選擇轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞，可以根據(jù)本領(lǐng)域中眾所周知的方法利用與選擇標(biāo)志物相關(guān)的表型。例如，當(dāng)所述選擇標(biāo)志物是賦予某些抗生素抗性的基因時(shí)，宿主細(xì)胞可以在存在抗生素的情況下在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)以選擇目標(biāo)轉(zhuǎn)化體。

94、另一個(gè)實(shí)施方式提供了一種制備抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段的方法，所述方法包括在宿主細(xì)胞中表達(dá)核酸分子或重組載體。表達(dá)步驟可以通過在允許核酸分子表達(dá)的條件下培養(yǎng)包含核酸分子(例如，在重組載體中)的重組細(xì)胞來進(jìn)行。所述方法還可以包括在表達(dá)或培養(yǎng)步驟之后從細(xì)胞培養(yǎng)物中分離和/或純化所述抗體或其片段。

95、有益效果

96、本公開中提供的抗lilrb1抗體或其抗原結(jié)合片段可以通過抑制癌細(xì)胞的免疫逃逸機(jī)制從而使免疫細(xì)胞可以表現(xiàn)出其抗癌作用而具有高抗癌作用。