本發(fā)明涉及生物，具體而言，涉及一種生物素修飾捕獲探針的純化方法。

背景技術：

1、核酸雜交技術作為生物技術領域的一個重要分支，隨著重組dna技術的發(fā)展而取得了顯著進展。這種技術依賴于核酸探針與目標核酸序列之間的特異性結合，用于檢測和分析dna或rna的存在與表達。早期的技術主要依賴于放射性同位素標記的探針和放射自顯影技術，但由于放射性同位素的半衰期短和潛在的環(huán)境污染風險，這些方法的應用受到了限制。因此，非放射性標記探針的開發(fā)成為了該領域的一個迫切需求。

2、為了克服放射性標記探針的局限性，生物素標記的核酸雜交技術應運而生。生物素修飾的寡核苷酸能夠與鏈霉親和素蛋白緊密結合，這種結合可以通過熒光染料或中間結合物偶聯(lián)實現(xiàn)可視化檢測。這種技術已被廣泛應用于酶或蛋白質(zhì)檢測、細胞分離、核酸分離以及特異性雜交檢測dna/rna序列等多個領域。在高通量測序領域，生物素修飾的探針通過堿基互補配對實現(xiàn)靶dna或rna的特異性結合，利用鏈霉親和素標記的磁珠進行吸附和純化，有效分離目的片段和非目標片段，展示了其在靶標核酸獲取方面的優(yōu)勢。

3、盡管生物素標記的核酸雜交技術在非放射性分析和檢測領域取得了成功，但在捕獲探針的純化過程中仍存在一些挑戰(zhàn)。目前，主要的純化方法包括快速柱層析純化和高效液相色譜(hplc)純化?？焖僦鶎游黾兓軌蛲瑫r處理多個樣本，但其純化效率較低，探針的純度通常在60％到80％之間，這直接影響了后續(xù)測序的捕獲效率和比對率。此外，單次純化過程耗時較長，大約需要5到6小時，這限制了其在高通量應用中的實用性。

4、相比之下，hplc純化方法能夠提供更高的純度，純化后的捕獲探針純度可達到85％到95％。然而，這種方法的缺點在于其通量較低，一臺設備一次只能處理單個探針，且每條探針的純化時間大約需要20分鐘。對于需要大量探針純化的項目，hplc方法的時間成本較高，難以滿足客戶對快速貨期的需求。

5、總之，現(xiàn)有的捕獲探針純化技術在效率、純度和通量方面存在一定的局限性。快速柱層析純化雖然能夠處理多個樣本，但其純化效率和探針純度較低，影響后續(xù)應用的效果。而hplc純化雖然純度高，但其低通量和較長的單次處理時間限制了其在大規(guī)模應用中的可行性。這些缺陷表明，開發(fā)一種既高效又高純度的捕獲探針純化技術是該領域的一個重要需求。有鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的第一目的在于提供一種生物素修飾捕獲探針的純化方法，所述的純化方法減少了捕獲探針純化所需的時間、提高純化效率，降低了人力和物力成本。

2、為了實現(xiàn)本發(fā)明的上述目的，特采用以下技術方案：

3、第一方面，本發(fā)明提供一種生物素修飾捕獲探針的純化方法，通過聚丙烯酰胺凝膠電泳對多個等長度的待純化捕獲探針混合后組成的探針池進行分離得到純化后的捕獲探針樣品。

4、在可選的實施方式中，包括：

5、將多個待純化捕獲探針進行混合，得到探針樣本混合物，作為所述探針池；

6、根據(jù)聚丙烯酰胺凝膠配制得到凝膠物質(zhì)；

7、將組成所述探針池的所述探針樣本混合物利用所述凝膠物質(zhì)進行電泳檢測，再經(jīng)染色處理和切膠回收處理，得到純化后的捕獲探針樣品。

8、在可選的實施方式中，所述凝膠物質(zhì)，是通過10％尿素變性的聚丙烯酰胺凝膠配制得到的。

9、在可選的實施方式中，所述染色處理，采用的是萬分之五的核酸染料進行染色。

10、在可選的實施方式中，所述電泳檢測的條件包括：

11、電泳壓力為80v～250v；

12、時間為90分鐘；

13、在可選的實施方式中，所述電泳壓力為120v。

14、在可選的實施方式中，所述凝膠物質(zhì)的上樣量為0.1od～5od；

15、在可選的實施方式中，所述凝膠物質(zhì)的上樣量為0.5od。

16、在可選的實施方式中，所述切膠回收處理，包括：

17、將目的條帶切割回收，加入page洗脫緩沖液，通過水浴升溫和震蕩處理使膠塊中的dna擴散到所述page洗脫緩沖液中，得到濃縮浸泡液；

18、在可選的實施方式中，所述震蕩處理為每間隔10分鐘震蕩一次；

19、在可選的實施方式中，所述水浴升溫的溫度為55℃。

20、在可選的實施方式中，所述通過水浴升溫和震蕩處理使膠塊中的dna擴散到所述page洗脫緩沖液中之后，還包括：

21、將所述濃縮浸泡液進行干燥處理，再加水溶解，經(jīng)過醇沉離心處理，棄上清，得到回收沉淀物。

22、在可選的實施方式中，所述將所述濃縮浸泡液進行干燥處理，再加水溶解，經(jīng)過醇沉離心處理，棄上清，得到回收沉淀物之后，還包括：

23、用水溶解所述回收沉淀物，利用所述凝膠物質(zhì)進行電泳分析，得到分析結果。

24、在可選的實施方式中，所述加入page洗脫緩沖液，是每100mg的膠塊加入50μl～1000μl的page洗脫緩沖液；

25、在可選的實施方式中，每100mg的膠塊加入200μl的page洗脫緩沖液。

26、與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果為：

27、本發(fā)明提供一種生物素修飾捕獲探針的純化方法，能夠簡便、準確、快速、高效地一次性批量進行混合純化多條等長生物素修飾捕獲探針，既可以保證產(chǎn)物純度，又可顯著降低純化所需物料、時間和人工成本，提高了純化效率和探針純度，不影響后續(xù)應用的效果，且大大縮短了春華時間。該方法能夠滿足方法驗證過程中重復性、批間差和人員操作誤差等方面的要求，對于高通量測序方法的開發(fā)及后續(xù)基因組學研究、疾病診斷和預測、進化生物學研究、腫瘤學研究等領域都具有重要的意義；此外，本發(fā)明操作簡單，能廣泛應用到生產(chǎn)實踐中。

技術特征：

1.一種生物素修飾捕獲探針的純化方法，其特征在于，通過聚丙烯酰胺凝膠電泳對多個等長度的待純化捕獲探針混合后組成的探針池進行分離得到純化后的捕獲探針樣品。

2.如權利要求1所述生物素修飾捕獲探針的純化方法，其特征在于，包括：

3.如權利要求2所述生物素修飾捕獲探針的純化方法，其特征在于，所述凝膠物質(zhì)，是通過10％尿素變性的聚丙烯酰胺凝膠配制得到的。

4.如權利要求2所述生物素修飾捕獲探針的純化方法，其特征在于，所述染色處理，采用的是萬分之五的核酸染料進行染色。

5.如權利要求2所述生物素修飾捕獲探針的純化方法，其特征在于，所述電泳檢測的條件包括：

6.如權利要求2所述生物素修飾捕獲探針的純化方法，其特征在于，所述凝膠物質(zhì)的上樣量為0.1od～5od；

7.如權利要求2所述生物素修飾捕獲探針的純化方法，其特征在于，所述切膠回收處理，包括：

8.如權利要求7所述生物素修飾捕獲探針的純化方法，其特征在于，所述通過水浴升溫和震蕩處理使膠塊中的dna擴散到所述page洗脫緩沖液中之后，還包括：

9.如權利要求8所述生物素修飾捕獲探針的純化方法，其特征在于，所述將所述濃縮浸泡液進行干燥處理，再加水溶解，經(jīng)過醇沉離心處理，棄上清，得到回收沉淀物之后，還包括：

10.如權利要求8所述生物素修飾捕獲探針的純化方法，其特征在于，所述加入page洗脫緩沖液，是每100mg的膠塊加入50μl～1000μl的page洗脫緩沖液；

技術總結
本發(fā)明提供一種生物素修飾捕獲探針的純化方法，涉及生物技術領域。所述純化方法通過聚丙烯酰胺凝膠電泳對多個等長度的待純化捕獲探針混合后組成的探針池進行分離得到純化后的捕獲探針樣品。本發(fā)明提供的純化方法能夠簡便、準確、快速、高效地一次性批量純化多條等長生物素修飾捕獲探針，減少了捕獲探針純化所需的時間、提高純化效率，降低了人力和物力成本。

技術研發(fā)人員：賈德臣,程壽玲,余紀尖,夏雨欣,唐享
受保護的技術使用者：生工生物工程（上海）股份有限公司
技術研發(fā)日：
技術公布日：2024/12/30