發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及多核苷酸的組合物，設(shè)計、制備、制造和/或配制該多核苷酸的方法和工藝，該多核苷酸包括aav載體、小干擾rna(sirna)雙鏈體、shrna、微rna或其前體，其靶向超氧化物歧化酶1(sod1)基因或編碼靶向超氧化物歧化酶1(sod1)基因的分子，以干擾sod1基因表達(dá)和/或sod1酶生產(chǎn)。在一些實施方案中，多核苷酸被插入到重組腺相關(guān)病毒(aav)載體中。還公開了在患有神經(jīng)退行性疾病的受試者中抑制sod1基因表達(dá)的方法。該方法任選地將至少一種多核苷酸引入患有所述神經(jīng)退行性疾病的受試者中。特別地，該疾病是肌萎縮性側(cè)索硬化癥(als)。

背景技術(shù)：

0、發(fā)明背景

1、肌萎縮性側(cè)索硬化癥(als)，也稱為lou?gehrig病，是一種致命的進(jìn)行性神經(jīng)退行性疾病，其特征是主要運動皮層、腦干和脊髓中運動神經(jīng)元(mn)的大量喪失。運動神經(jīng)元的喪失破壞基本的基礎(chǔ)運動，例如呼吸，并且通常會導(dǎo)致患者在診斷后2至5年內(nèi)死亡。患者中運動功能的逐漸惡化嚴(yán)重破壞他們的呼吸能力，需要某種形式的呼吸輔助來使患者存活。其他癥狀還包括手、臂、腿或吞咽肌肉的肌無力。一些患者(例如ftd-als)也可能發(fā)展額顳葉癡呆。

2、根據(jù)als協(xié)會，美國每年約有5,600人被診斷出患有als。als的發(fā)病率是每10萬人2例，并且據(jù)估計，在任何給定時間，多達(dá)30,000名美國人可能患有該病。

3、已經(jīng)描述了兩種形式的als：一種是偶發(fā)性als(sals)，其是美國最常見的als形式，占診斷出的所有病例的90％至95％。另一個是家族性als(fals)，其主要發(fā)生在家族譜系中，具有顯性遺傳，并且僅占美國所有病例的約5％至10％。sals和fals在臨床上無法區(qū)分。

4、病理研究表明，在疾病發(fā)作后發(fā)生某些細(xì)胞過程，包括內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激增加、自由基(即活性氧物質(zhì)(ros))生成、線粒體功能障礙、蛋白質(zhì)聚集、細(xì)胞凋亡、炎癥和谷氨酸興奮性中毒，特別是在運動神經(jīng)元(mn)中。

5、als的病因復(fù)雜且多樣。通常，als被認(rèn)為是一種復(fù)雜的遺傳疾病，其中多個基因與環(huán)境暴露的結(jié)合使人易感。已發(fā)現(xiàn)與als相關(guān)的超過十幾種基因，包括sod-1(cu2+/zn2+超氧化物歧化酶)、tdp-43(tardbp，tar?dna結(jié)合蛋白-43)、fus(融合于肉瘤/在肉瘤中易位)、ang(血管生成素)、atxn2(ataxin-2)、含纈酪肽的蛋白(vcp)、optn(optineurin)和在9號染色體開放閱讀框72(c9orf72)中的非編碼ggggcc六核苷酸重復(fù)序列的擴增。但是，運動神經(jīng)元退化的確切機制仍然難以捉摸。

6、目前，沒有針對als的治愈性療法。唯一被fda批準(zhǔn)的藥物是利魯唑，其拮抗谷氨酸反應(yīng)，以減少als的病理發(fā)展。然而，僅報道了早期階段的als患者大約有三個月的壽命延長，而在晚期階段的als患者中未觀察到治療益處，這表明患者缺乏治療選擇(bensimon?g等人，j?neurol.2002年，249，609-615)。因此，仍然需要能夠有效預(yù)防該疾病進(jìn)展的新治療策略。

7、i型cu2+/zn2+超氧化物歧化酶(sod1)基因的突變是fals的最常見原因，占所有fals病例的約20％至30％。最近的報道表明，在所有sals病例中也有約4％可能與sod1突變相關(guān)聯(lián)(robberecht和philip，nat.rev.neurosci.,2013，14，248-264)。與sod1關(guān)聯(lián)的fals十分可能不是由正常sod1活性的喪失引起，而是由毒性功能的獲得引起。與突變sod1關(guān)聯(lián)的fals毒性的假說之一提出，異常的sod1酶導(dǎo)致小分子，例如過氧亞硝酸鹽或過氧化氫產(chǎn)生破壞性自由基。突變sod1神經(jīng)毒性的其他假說包括蛋白酶體活性的抑制、線粒體損傷、rna加工的破壞和細(xì)胞內(nèi)聚集物的形成。als中突變型sod1變體和/或野生型sod1的異常積累形成被識別為病理包涵體的不溶性纖維狀聚集體。聚集的sod1蛋白可誘導(dǎo)線粒體應(yīng)激(vehvilainen?p等人，front?cell?neurosci.，2014，8，126)和對細(xì)胞特別是對運動神經(jīng)元的其他毒性。

8、這些發(fā)現(xiàn)表明，sod1可能是家族性和偶發(fā)性als的潛在治療靶標(biāo)?？梢詼p少als患者中樞神經(jīng)系統(tǒng)中產(chǎn)生的sod1蛋白(無論是野生型還是突變型)的療法可能減輕患者的als癥狀，例如運動神經(jīng)元退化、肌無力和萎縮。旨在防止野生型和/或突變型sod1蛋白聚集的試劑和方法可預(yù)防疾病進(jìn)展并改善als癥狀。rna干擾(rnai)介導(dǎo)的基因沉默近年來引起了研究人員的興趣。本領(lǐng)域已經(jīng)教導(dǎo)了靶向sod1基因的小雙鏈rna(小干擾rna)分子在治療als方面的潛力(參見，例如，美國專利號7,632,938和美國專利公開號20060229268)。

9、本發(fā)明開發(fā)了一種基于rna干擾或敲低的方法來抑制或預(yù)防als患者中sod1基因的表達(dá)，以治療該疾病。

10、本發(fā)明提供了新的多核苷酸，包括雙鏈rna(dsrna)構(gòu)建體和/或sirna構(gòu)建體、shrna構(gòu)建體和/或microrna構(gòu)建體及其設(shè)計方法。另外，這些sirna構(gòu)建體可以是在用于遞送至細(xì)胞中的表達(dá)載體(一條或兩條鏈)中編碼的合成分子。此類載體包括但不限于腺相關(guān)病毒載體，例如任何aav血清型的載體基因組或其他病毒遞送載體，例如慢病毒等。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供了編碼靶向sod1的多核苷酸以干擾sod1基因表達(dá)和/或sod1蛋白生產(chǎn)的aav載體及其使用方法。本發(fā)明還包括治療運動神經(jīng)元退行性疾病如肌萎縮性側(cè)索硬化癥的方法。

2、在一個實施方案中，與未治療的受試者相比，在用編碼靶向sod1的多核苷酸的aav治療的受試者中sod1被抑制30％?？梢砸灶A(yù)定劑量水平以輸注或推注(bolus)的形式給受試者施用aav。作為非限制性實例，在c1至l7腹角區(qū)域中見到抑制。

3、本發(fā)明涉及rna分子介導(dǎo)的對基因表達(dá)和蛋白生產(chǎn)的基因特異性干擾。本發(fā)明還包括治療運動神經(jīng)元退行性疾病如肌萎縮性側(cè)索硬化癥的方法。本文中特征性的組合物中包括的sirna包含具有反義鏈(反義鏈)的dsrna，該反義鏈具有長度為30個核苷酸或更少，通常19-24個核苷酸，且與sod1基因的mrna轉(zhuǎn)錄本的至少一部分基本互補的區(qū)域。

4、本發(fā)明提供靶向sod1?mrna以干擾sod1基因表達(dá)和/或sod1蛋白生產(chǎn)的短雙鏈rna分子，例如小干擾rna(sirna)雙鏈體。本發(fā)明的sirna雙鏈體可以干擾sod1基因的兩個等位基因，而不論sod1基因中的任何具體突變?yōu)楹?，并且可以特別地與在als疾病中發(fā)現(xiàn)的那些相互作用。

5、在一些實施方案中，將這樣的sirna分子或sirna分子的單鏈插入腺相關(guān)病毒載體中以引入細(xì)胞，特別是運動神經(jīng)元和/或中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的其他周圍細(xì)胞。

6、本發(fā)明的sirna雙鏈體包含反義鏈和有義鏈，兩者雜交在一起形成雙鏈體結(jié)構(gòu)，其中所述反義鏈與所靶向的sod1基因的核酸序列互補，并且其中所述有義鏈與所靶向的sod1基因的核酸序列同源。在一些方面，反義鏈的5'端具有5'磷酸基團，并且有義鏈的3'端包含3'羥基。在其他方面，在每條鏈的3'端沒有懸突或者具有一個或兩個核苷酸的突出。

7、根據(jù)本發(fā)明，靶向sod1基因的sirna雙鏈體的每條鏈的長度為約19-25個核苷酸，優(yōu)選長度約19個核苷酸、20個核苷酸、21個核苷酸、22個核苷酸、23個核苷酸、24個核苷酸或25個核苷酸。在一些方面，sirna可以是未修飾的rna分子。

8、在其他方面，sirna可包含至少一個修飾的核苷酸，例如堿基、糖或骨架修飾。

9、在一個實施方案中，sirna或dsrna包含至少兩條彼此互補的序列。dsrna包含具有第一序列的有義鏈和具有第二序列的反義鏈。反義鏈包含與編碼sod1的mrna的至少一部分基本上互補的核苷酸序列，并且互補區(qū)域長度為30個核苷酸或更少，且至少15個核苷酸。通常，dsrna的長度為19至24，例如19至21個核苷酸。在一些實施方案中，dsrna的長度為約15至約25個核苷酸，并且在其他實施方案中，dsrna的長度為約25至約30個核苷酸。

10、dsrna與表達(dá)sod1的細(xì)胞接觸或在表達(dá)sod1的細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)錄后，抑制或壓制sod1基因的表達(dá)至少10％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％或至少40％或更高，例如通過本文所述方法進(jìn)行測定時。

11、根據(jù)本發(fā)明，產(chǎn)生了包含編碼靶向sod1基因的sirna雙鏈體、所述sirna雙鏈體的一條鏈或dsrna的核酸的aav載體，所述aav載體的血清型可以是aav1、aav2、aav2g9、aav3、aav3a、aav3b、aav3-3、aav4、aav4-4、aav5、aav6、aav6.1、aav6.2、aav6.1.2、aav7、aav7.2、aav8、aav9、aav9.11、aav9.13、aav9.16、aav9.24、aav9.45、aav9.47、aav9.61、aav9.68、aav9.84、aav9.9、aav10、aav11、aav12、aav16.3、aav24.1、aav27.3、aav42.12、aav42-1b、aav42-2、aav42-3a、aav42-3b、aav42-4、aav42-5a、aav42-5b、aav42-6b、aav42-8、aav42-10、aav42-11、aav42-12、aav42-13、aav42-15、aav42-aa、aav43-1、aav43-12、aav43-20、aav43-21、aav43-23、aav43-25、aav43-5、aav44.1、aav44.2、aav44.5、aav223.1、aav223.2、aav223.4、aav223.5、aav223.6、aav223.7、aav1-7/rh.48、aav1-8/rh.49、aav2-15/rh.62、aav2-3/rh.61、aav2-4/rh.50、aav2-5/rh.51、aav3.1/hu.6、aav3.1/hu.9、aav3-9/rh.52、aav3-11/rh.53、aav4-8/r11.64、aav4-9/rh.54、aav4-19/rh.55、aav5-3/rh.57、aav5-22/rh.58、aav7.3/hu.7、aav16.8/hu.10、aav16.12/hu.11、aav29.3/bb.1、aav29.5/bb.2、aav106.1/hu.37、aav114.3/hu.40、aav127.2/hu.41、aav127.5/hu.42、aav128.3/hu.44、aav130.4/hu.48、aav145.1/hu.53、aav145.5/hu.54、aav145.6/hu.55、aav161.10/hu.60、aav161.6/hu.61、aav33.12/hu.17、aav33.4/hu.15、aav33.8/hu.16、aav52/hu.19、aav52.1/hu.20、aav58.2/hu.25、aava3.3、aava3.4、aava3.5、aava3.7、aavc1、aavc2、aavc5、aav-dj、aav-dj8、aavf3、aavf5、aavh2、aavrh.72、aavhu.8、aavrh.68、aavrh.70、aavpi.1、aavpi.3、aavpi.2、aavrh.60、aavrh.44、aavrh.65、aavrh.55、aavrh.47、aavrh.69、aavrh.45、aavrh.59、aavhu.12、aavh6、aavlk03、aavh-1/hu.1、aavh-5/hu.3、aavlg-10/rh.40、aavlg-4/rh.38、aavlg-9/hu.39、aavn721-8/rh.43、aavch.5、aavch.5r1、aavcy.2、aavcy.3、aavcy.4、aavcy.5、aavcy.5r1、aavcy.5r2、aavcy.5r3、aavcy.5r4、aavcy.6、aavhu.1、aavhu.2、aavhu.3、aavhu.4、aavhu.5、aavhu.6、aavhu.7、aavhu.9、aavhu.10、aavhu.11、aavhu.13、aavhu.15、aavhu.16、aavhu.17、aavhu.18、aavhu.20、aavhu.21、aavhu.22、aavhu.23.2、aavhu.24、aavhu.25、aavhu.27、aavhu.28、aavhu.29、aavhu.29r、aavhu.31、aavhu.32、aavhu.34、aavhu.35、aavhu.37、aavhu.39、aavhu.40、aavhu.41、aavhu.42、aavhu.43、aavhu.44、aavhu.44r1、aavhu.44r2、aavhu.44r3、aavhu.45、aavhu.46、aavhu.47、aavhu.48、aavhu.48r1、aavhu.48r2、aavhu.48r3、aavhu.49、aavhu.51、aavhu.52、aavhu.54、aavhu.55、aavhu.56、aavhu.57、aavhu.58、aavhu.60、aavhu.61、aavhu.63、aavhu.64、aavhu.66、aavhu.67、aavhu.14/9、aavhu.t19、aavrh.2、aavrh.2r、aavrh.8、aavrh.8r、aavrh.10、aavrh.12、aavrh.13、aavrh.13r、aavrh.14、aavrh.17、aavrh.18、aavrh.19、aavrh.20、aavrh.21、aavrh.22、aavrh.23、aavrh.24、aavrh.25、aavrh.31、aavrh.32、aavrh.33、aavrh.34、aavrh.35、aavrh.36、aavrh.37、aavrh.37r2、aavrh.38、aavrh.39、aavrh.40、aavrh.46、aavrh.48、aavrh.48.1、aavrh.48.1.2、aavrh.48.2、aavrh.49、aavrh.51、aavrh.52、aavrh.53、aavrh.54、aavrh.56、aavrh.57、aavrh.58、aavrh.61、aavrh.64、aavrh.64r1、aavrh.64r2、aavrh.67、aavrh.73、aavrh.74、aavrh8r、aavrh8r?a586r突變體、aavrh8r?r533a突變體、aaav、baav、羊aav、牛aav、aavhe1.1、aavher1.5、aavher1.14、aavher1.8、aavher1.16、aavher1.18、aavher1.35、aavher1.7、aavher1.36、aavher2.29、aavher2.4、aavher2.16、aavher2.30、aavher2.31、aavher2.36、aavher1.23、aavher3.1、aav2.5t、aav-paec、aav-lk01、aav-lk02、aav-lk03、aav-lk04、aav-lk05、aav-lk06、aav-lk07、aav-lk08、aav-lk09、aav-lk10、aav-lk11、aav-lk12、aav-lk13、aav-lk14、aav-lk15、aav-lk16、aav-lk17、aav-lk18、aav-lk19、aav-paec2、aav-paec4、aav-paec6、aav-paec7、aav-paec8、aav-paec11、aav-paec12、aav-2-pre-mirna-101、aav-8h、aav-8b、aav-h、aav-b、aav?sm?10-2、aav穿梭100-1、aav穿梭100-3、aav穿梭100-7、aav穿梭10-2、aav穿梭10-6、aav穿梭10-8、aav穿梭100-2、aav?sm10-1、aav?sm?10-8、aav?sm?100-3、aav?sm?100-10、bnp61?aav、bnp62?aav、bnp63?aav、aavrh.50、aavrh.43、aavrh.62、aavrh.48、aavhu.19、aavhu.11、aavhu.53、aav4-8/rh.64、aavlg-9/hu.39、aav54.5/hu.23、aav54.2/hu.22、aav54.7/hu.24、aav54.1/hu.21、aav54.4r/hu.27、aav46.2/hu.28、aav46.6/hu.29、aav128.1/hu.43、真型aav(ttaav)、upenn?aav?10、日本aav10血清型、aav?cbr-7.1、aav?cbr-7.10、aav?cbr-7.2、aav?cbr-7.3、aav?cbr-7.4、aav?cbr-7.5、aav?cbr-7.7、aav?cbr-7.8、aav?cbr-b7.3、aav?cbr-b7.4、aav?cbr-e1、aav?cbr-e2、aav?cbr-e3、aav?cbr-e4、aav?cbr-e5、aav?cbr-e5、aavcbr-e6、aav?cbr-e7、aav?cbr-e8、aav?cht-1、aav?cht-2、aav?cht-3、aav?cht-6.1、aavcht-6.10、aav?cht-6.5、aav?cht-6.6、aav?cht-6.7、aav?cht-6.8、aav?cht-p1、aav?cht-p2、aav?cht-p5、aav?cht-p6、aav?cht-p8、aav?cht-p9、aav?ckd-1、aav?ckd-10、aav?ckd-2、aav?ckd-3、aav?ckd-4、aav?ckd-6、aav?ckd-7、aav?ckd-8、aav?ckd-b1、aav?ckd-b2、aavckd-b3、aav?ckd-b4、aav?ckd-b5、aav?ckd-b6、aav?ckd-b7、aav?ckd-b8、aav?ckd-h1、aavckd-h2、aav?ckd-h3、aav?ckd-h4、aav?ckd-h5、aav?ckd-h6、aav?ckd-n3、aav?ckd-n4、aavckd-n9、aav?clg-f1、aav?clg-f2、aav?clg-f3、aav?clg-f4、aav?clg-f5、aav?clg-f6、aavclg-f7、aav?clg-f8、aav?clv-1、aav?clv1-1、aav?clv1-10、aav?clv1-2、aav?clv-12、aavclv1-3、aav?clv-13、aav?clv1-4、aav?clv1-7、aav?clv1-8、aav?clv1-9、aav?clv-2、aavclv-3、aav?clv-4、aav?clv-6、aav?clv-8、aav?clv-d1、aav?clv-d2、aav?clv-d3、aav?clv-d4、aav?clv-d5、aav?clv-d6、aav?clv-d7、aav?clv-d8、aav?clv-e1、aav?clv-k1、aav?clv-k3、aav?clv-k6、aav?clv-l4、aav?clv-l5、aav?clv-l6、aav?clv-m1、aav?clv-m11、aavclv-m2、aav?clv-m5、aav?clv-m6、aav?clv-m7、aav?clv-m8、aav?clv-m9、aav?clv-r1、aavclv-r2、aav?clv-r3、aav?clv-r4、aav?clv-r5、aav?clv-r6、aav?clv-r7、aav?clv-r8、aavclv-r9、aav?csp-1、aav?csp-10、aav?csp-11、aav?csp-2、aav?csp-3、aav?csp-4、aav?csp-6、aav?csp-7、aav?csp-8、aav?csp-8.10、aav?csp-8.2、aav?csp-8.4、aav?csp-8.5、aavcsp-8.6、aav?csp-8.7、aav?csp-8.8、aav?csp-8.9、aav?csp-9、aav.hu.48r3、aav.vr-355、aav3b、aav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12、根據(jù)本發(fā)明，靶向als中的sod1基因的sirna雙鏈體或dsrna選自表4中列出的sirna雙鏈體。優(yōu)選地，靶向als中的sod1基因的sirna雙鏈體或dsrna選自由sirna雙鏈體d-4000至d-4025組成的組。

13、本發(fā)明還提供了藥物組合物，其包含至少一種靶向sod1基因的sirna雙鏈體和藥學(xué)上可接受的載體。在一些方面，將編碼sirna雙鏈體的核酸序列插入aav載體。

14、在一些實施方案中，本發(fā)明提供了抑制/沉默細(xì)胞中sod1基因表達(dá)的方法。因此，sirna雙鏈體或dsrna可用于基本上抑制細(xì)胞，特別是運動神經(jīng)元中的sod1基因表達(dá)。在一些方面，sod1基因表達(dá)的抑制是指抑制至少約20％，優(yōu)選至少約30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％和100％。因此，所靶向基因的蛋白產(chǎn)物可以被抑制至少約20％，優(yōu)選地至少約30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％和100％。sod1基因可以是野生型基因或具有至少一個突變的突變型sod1基因。因此，sod1蛋白是野生型蛋白或具有至少一個突變的突變型多肽。

15、在一些實施方案中，本發(fā)明提供了在需要治療的受試者中治療或改善與異常sod1基因和/或sod1蛋白相關(guān)的肌萎縮性側(cè)索硬化癥的方法，該方法包括向該受試者施用藥學(xué)有效量的至少一種靶向sod1基因的sirna雙鏈體，將所述sirna雙鏈體遞送至靶細(xì)胞，抑制sod1基因表達(dá)和蛋白生產(chǎn)，并改善受試者中als的癥狀。

16、在一些實施方案中，將包含編碼靶向sod1基因的至少一種sirna雙鏈體的核酸序列的aav載體施用于需要治療和/或改善als的受試者。aav載體血清型可以選自由以下組成的組：aav1、aav2、aav2g9、aav3、aav3a、aav3b、aav3-3、aav4、aav4-4、aav5、aav6、aav6.1、aav6.2、aav6.1.2、aav7、aav7.2、aav8、aav9、aav9.11、aav9.13、aav9.16、aav9.24、aav9.45、aav9.47、aav9.61、aav9.68、aav9.84、aav9.9、aav10、aav11、aav12、aav16.3、aav24.1、aav27.3、aav42.12、aav42-1b、aav42-2、aav42-3a、aav42-3b、aav42-4、aav42-5a、aav42-5b、aav42-6b、aav42-8、aav42-10、aav42-11、aav42-12、aav42-13、aav42-15、aav42-aa、aav43-1、aav43-12、aav43-20、aav43-21、aav43-23、aav43-25、aav43-5、aav44.1、aav44.2、aav44.5、aav223.1、aav223.2、aav223.4、aav223.5、aav223.6、aav223.7、aav1-7/rh.48、aav1-8/rh.49、aav2-15/rh.62、aav2-3/rh.61、aav2-4/rh.50、aav2-5/rh.51、aav3.1/hu.6、aav3.1/hu.9、aav3-9/rh.52、aav3-11/rh.53、aav4-8/r11.64、aav4-9/rh.54、aav4-19/rh.55、aav5-3/rh.57、aav5-22/rh.58、aav7.3/hu.7、aav16.8/hu.10、aav16.12/hu.11、aav29.3/bb.1、aav29.5/bb.2、aav106.1/hu.37、aav114.3/hu.40、aav127.2/hu.41、aav127.5/hu.42、aav128.3/hu.44、aav130.4/hu.48、aav145.1/hu.53、aav145.5/hu.54、aav145.6/hu.55、aav161.10/hu.60、aav161.6/hu.61、aav33.12/hu.17、aav33.4/hu.15、aav33.8/hu.16、aav52/hu.19、aav52.1/hu.20、aav58.2/hu.25、aava3.3、aava3.4、aava3.5、aava3.7、aavc1、aavc2、aavc5、aav-dj、aav-dj8、aavf3、aavf5、aavh2、aavrh.72、aavhu.8、aavrh.68、aavrh.70、aavpi.1、aavpi.3、aavpi.2、aavrh.60、aavrh.44、aavrh.65、aavrh.55、aavrh.47、aavrh.69、aavrh.45、aavrh.59、aavhu.12、aavh6、aavlk03、aavh-1/hu.1、aavh-5/hu.3、aavlg-10/rh.40、aavlg-4/rh.38、aavlg-9/hu.39、aavn721-8/rh.43、aavch.5、aavch.5r1、aavcy.2、aavcy.3、aavcy.4、aavcy.5、aavcy.5r1、aavcy.5r2、aavcy.5r3、aavcy.5r4、aavcy.6、aavhu.1、aavhu.2、aavhu.3、aavhu.4、aavhu.5、aavhu.6、aavhu.7、aavhu.9、aavhu.10、aavhu.11、aavhu.13、aavhu.15、aavhu.16、aavhu.17、aavhu.18、aavhu.20、aavhu.21、aavhu.22、aavhu.23.2、aavhu.24、aavhu.25、aavhu.27、aavhu.28、aavhu.29、aavhu.29r、aavhu.31、aavhu.32、aavhu.34、aavhu.35、aavhu.37、aavhu.39、aavhu.40、aavhu.41、aavhu.42、aavhu.43、aavhu.44、aavhu.44r1、aavhu.44r2、aavhu.44r3、aavhu.45、aavhu.46、aavhu.47、aavhu.48、aavhu.48r1、aavhu.48r2、aavhu.48r3、aavhu.49、aavhu.51、aavhu.52、aavhu.54、aavhu.55、aavhu.56、aavhu.57、aavhu.58、aavhu.60、aavhu.61、aavhu.63、aavhu.64、aavhu.66、aavhu.67、aavhu.14/9、aavhu.t19、aavrh.2、aavrh.2r、aavrh.8、aavrh.8r、aavrh.10、aavrh.12、aavrh.13、aavrh.13r、aavrh.14、aavrh.17、aavrh.18、aavrh.19、aavrh.20、aavrh.21、aavrh.22、aavrh.23、aavrh.24、aavrh.25、aavrh.31、aavrh.32、aavrh.33、aavrh.34、aavrh.35、aavrh.36、aavrh.37、aavrh.37r2、aavrh.38、aavrh.39、aavrh.40、aavrh.46、aavrh.48、aavrh.48.1、aavrh.48.1.2、aavrh.48.2、aavrh.49、aavrh.51、aavrh.52、aavrh.53、aavrh.54、aavrh.56、aavrh.57、aavrh.58、aavrh.61、aavrh.64、aavrh.64r1、aavrh.64r2、aavrh.67、aavrh.73、aavrh.74、aavrh8r、aavrh8r?a586r突變體、aavrh8r?r533a突變體、aaav、baav、羊aav、牛aav、aavhe1.1、aavher1.5、aavher1.14、aavher1.8、aavher1.16、aavher1.18、aavher1.35、aavher1.7、aavher1.36、aavher2.29、aavher2.4、aavher2.16、aavher2.30、aavher2.31、aavher2.36、aavher1.23、aavher3.1、aav2.5t、aav-paec、aav-lk01、aav-lk02、aav-lk03、aav-lk04、aav-lk05、aav-lk06、aav-lk07、aav-lk08、aav-lk09、aav-lk10、aav-lk11、aav-lk12、aav-lk13、aav-lk14、aav-lk15、aav-lk16、aav-lk17、aav-lk18、aav-lk19、aav-paec2、aav-paec4、aav-paec6、aav-paec7、aav-paec8、aav-paec11、aav-paec12、aav-2-pre-mirna-101、aav-8h、aav-8b、aav-h、aav-b、aav?sm?10-2、aav穿梭100-1、aav穿梭100-3、aav穿梭100-7、aav穿梭10-2、aav穿梭10-6、aav穿梭10-8、aav穿梭100-2、aav?sm?10-1、aav?sm?10-8、aav?sm?100-3、aav?sm?100-10、bnp61?aav、bnp62?aav、bnp63?aav、aavrh.50、aavrh.43、aavrh.62、aavrh.48、aavhu.19、aavhu.11、aavhu.53、aav4-8/rh.64、aavlg-9/hu.39、aav54.5/hu.23、aav54.2/hu.22、aav54.7/hu.24、aav54.1/hu.21、aav54.4r/hu.27、aav46.2/hu.28、aav46.6/hu.29、aav128.1/hu.43、真型aav(ttaav)、upenn?aav?10、日本aav10血清型、aav?cbr-7.1、aav?cbr-7.10、aav?cbr-7.2、aavcbr-7.3、aav?cbr-7.4、aav?cbr-7.5、aav?cbr-7.7、aav?cbr-7.8、aav?cbr-b7.3、aav?cbr-b7.4、aav?cbr-e1、aav?cbr-e2、aav?cbr-e3、aav?cbr-e4、aav?cbr-e5、aav?cbr-e5、aavcbr-e6、aav?cbr-e7、aav?cbr-e8、aav?cht-1、aav?cht-2、aav?cht-3、aav?cht-6.1、aavcht-6.10、aav?cht-6.5、aav?cht-6.6、aav?cht-6.7、aav?cht-6.8、aav?cht-p1、aav?cht-p2、aav?cht-p5、aav?cht-p6、aav?cht-p8、aav?cht-p9、aav?ckd-1、aav?ckd-10、aav?ckd-2、aav?ckd-3、aav?ckd-4、aav?ckd-6、aav?ckd-7、aav?ckd-8、aav?ckd-b1、aav?ckd-b2、aavckd-b3、aav?ckd-b4、aav?ckd-b5、aav?ckd-b6、aav?ckd-b7、aav?ckd-b8、aav?ckd-h1、aavckd-h2、aav?ckd-h3、aav?ckd-h4、aav?ckd-h5、aav?ckd-h6、aav?ckd-n3、aav?ckd-n4、aavckd-n9、aav?clg-f1、aav?clg-f2、aav?clg-f3、aav?clg-f4、aav?clg-f5、aav?clg-f6、aavclg-f7、aav?clg-f8、aav?clv-1、aav?clv1-1、aav?clv1-10、aav?clv1-2、aav?clv-12、aavclv1-3、aav?clv-13、aav?clv1-4、aav?clv1-7、aav?clv1-8、aav?clv1-9、aav?clv-2、aavclv-3、aav?clv-4、aav?clv-6、aav?clv-8、aav?clv-d1、aav?clv-d2、aav?clv-d3、aav?clv-d4、aav?clv-d5、aav?clv-d6、aav?clv-d7、aav?clv-d8、aav?clv-e1、aav?clv-k1、aav?clv-k3、aav?clv-k6、aav?clv-l4、aav?clv-l5、aav?clv-l6、aav?clv-m1、aav?clv-m11、aavclv-m2、aav?clv-m5、aav?clv-m6、aav?clv-m7、aav?clv-m8、aav?clv-m9、aav?clv-r1、aavclv-r2、aav?clv-r3、aav?clv-r4、aav?clv-r5、aav?clv-r6、aav?clv-r7、aav?clv-r8、aavclv-r9、aav?csp-1、aav?csp-10、aav?csp-11、aav?csp-2、aav?csp-3、aav?csp-4、aav?csp-6、aav?csp-7、aav?csp-8、aav?csp-8.10、aav?csp-8.2、aav?csp-8.4、aav?csp-8.5、aavcsp-8.6、aav?csp-8.7、aav?csp-8.8、aav?csp-8.9、aav?csp-9、aav.hu.48r3、aav.vr-355、aav3b、aav4、aav5、aavf1/hsc1、aavf11/hsc11、aavf12/hsc12、aavf13/hsc13、aavf14/hsc14、aavf15/hsc15、aavf16/hsc16、aavf17/hsc17、aavf2/hsc2、aavf3/hsc3、aavf4/hsc4、aavf5/hsc5、aavf6/hsc6、aavf7/hsc7、aavf8/hsc8、aavf9/hsc9、aav-php.b、aav-php.a、g2b-26、g2b-13、th1.1-32、th1.1-35、aavphp.b2、aavphp.b3、aavphp.n/php.b-dgt、aavphp.b-est、aavphp.b-ggt、aavphp.b-atp、aavphp.b-att-t、aavphp.b-dgt-t、aavphp.b-ggt-t、aavphp.b-sgs、aavphp.b-aqp、aavphp.b-qqp、aavphp.b-snp(3)、aavphp.b-snp、aavphp.b-qgt、aavphp.b-nqt、aavphp.b-egs、aavphp.b-sgn、aavphp.b-egt、aavphp.b-dst、aavphp.b-dst、aavphp.b-stp、aavphp.b-pqp、aavphp.b-sqp、aavphp.b-qlp、aavphp.b-tmp、aavphp.b-ttp、aavphp.s/g2a12、aavg2a15/g2a3、aavg2b4、aavg2b5及其變體。

17、在一些方面，als是與sod1突變相關(guān)聯(lián)的家族性als。在其他方面，als是偶發(fā)性als，其特征在于sod1蛋白的異常聚集或sod1蛋白功能或定位的破壞，盡管不一定是基因突變的結(jié)果。通過本方法改善的als的癥狀可以包括運動神經(jīng)元退化、肌無力、肌肉僵硬、言語含糊和/或呼吸困難。

18、在一些實施方案中，靶向sod1基因的sirna雙鏈體或dsrna或包含編碼此類sirna的分子的aav載體可以直接引入受試者的中樞神經(jīng)系統(tǒng)，例如通過顱內(nèi)注射。

19、在一些實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物用作單獨療法。在其他實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物用于聯(lián)合療法。聯(lián)合療法可以與一種或多種神經(jīng)保護(hù)劑例如小分子化合物、生長因子和激素組合，所述神經(jīng)保護(hù)劑已經(jīng)被測試了它們對運動神經(jīng)元退化的神經(jīng)保護(hù)作用。

20、在一些實施方案中，本發(fā)明提供了通過向有需要的受試者施用治療有效量的本文所述的質(zhì)?；騛av載體來治療或改善肌萎縮性側(cè)索硬化癥(als)的方法。als可以是家族性als或偶發(fā)性als。

21、在一些實施方案中，本發(fā)明提供了通過向有需要的受試者施用治療有效量的本文所述的質(zhì)粒或aav載體來治療或改善犬類退行性脊髓病(dm)的方法。

22、在一些實施方案中，本發(fā)明提供了通過向有需要的受試者施用治療有效量的本文所述的質(zhì)粒或aav載體以降低受試者中神經(jīng)絲輕鏈(nf-l)水平來治療或改善肌萎縮性側(cè)索硬化癥(als)的方法。

23、在一些實施方案中，本發(fā)明提供了通過向有需要的受試者施用治療有效量的本文所述的質(zhì)?；騛av載體以降低受試者中神經(jīng)絲輕鏈(nf-l)水平來治療或改善犬類退行性脊髓病(dm)的方法。

24、在一些實施方案中，本發(fā)明提供了通過向有需要的受試者施用治療有效量的本文所述的質(zhì)粒或aav載體降低受試者中神經(jīng)絲輕鏈(nf-l)的水平的方法。