相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用本技術(shù)要求于2022年6月10日提交的韓國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第10-2022-0070914號(hào)、2022年9月5日提交的韓國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第10-2022-0112314號(hào)和2023年1月18日提交的韓國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)第10-2023-0007617號(hào)的權(quán)益和優(yōu)先權(quán)，其全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用并入本文。本公開(kāi)涉及包含與tigit特異性結(jié)合的抗tigit抗體或其抗原結(jié)合片段和白細(xì)胞介素-15(il-15)的融合蛋白，以及所述融合蛋白的藥物用途。

背景技術(shù)：

1、癌癥免疫治療是通過(guò)利用身體免疫應(yīng)答治療癌癥的方法，其被稱(chēng)為繼化學(xué)治療、手術(shù)治療和放射治療之后的第四種癌癥治療方法。癌癥免疫治療需要通過(guò)激活免疫系統(tǒng)來(lái)增強(qiáng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別和應(yīng)答的機(jī)制。免疫系統(tǒng)的激活涉及復(fù)雜的機(jī)制，其包括各種細(xì)胞的功能，所述細(xì)胞例如抗原呈遞細(xì)胞，其對(duì)開(kāi)始抗原特異性應(yīng)答至關(guān)重要，和效應(yīng)細(xì)胞，其負(fù)責(zé)破壞腫瘤細(xì)胞。

2、這些效應(yīng)細(xì)胞的代表性示例是細(xì)胞毒性t細(xì)胞。

3、tigit(t細(xì)胞免疫球蛋白和itim(免疫受體酪氨酸抑制基序)結(jié)構(gòu)域)也被稱(chēng)為wucam、vsig9或vstm3，是共抑制受體，其主要在nk細(xì)胞、cd8+t細(xì)胞和cd4+t細(xì)胞以及調(diào)節(jié)性t細(xì)胞(treg)中表達(dá)。tigit是跨膜蛋白，其包含itim結(jié)構(gòu)域、跨膜結(jié)構(gòu)域和免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域。

4、在例如腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(til)和感染的疾病環(huán)境中，tigit的表達(dá)增加。tigit的表達(dá)可以是耗竭t細(xì)胞的特征，與tigit陰性細(xì)胞相比，耗竭的t細(xì)胞表現(xiàn)出較低的效應(yīng)功能。此外，與tigit陰性的treg群體相比，表達(dá)tigit的treg細(xì)胞表現(xiàn)出增強(qiáng)的免疫抑制活性。

5、基于這些性質(zhì)，期望作為對(duì)tigit的拮抗劑的藥物(例如拮抗性抗tigit抗體)誘導(dǎo)免疫系統(tǒng)的激活，增強(qiáng)例如癌癥的疾病狀態(tài)中的免疫應(yīng)答，并從而對(duì)疾病治療具有有益影響。

6、公開(kāi)內(nèi)容

7、技術(shù)問(wèn)題

8、一方面，提供了融合蛋白，其包含：(1)抗tigit抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性識(shí)別tigit；和(2)il-15。

9、在根據(jù)實(shí)施方案的融合蛋白中，il-15可以通過(guò)接頭或不通過(guò)接頭直接與抗tigit抗體或其抗原結(jié)合片段的重鏈(重鏈可變區(qū)或重鏈恒定區(qū))或輕鏈(輕鏈可變區(qū)或輕鏈恒定區(qū))的c端和/或n端連接。

10、另一方面，提供了編碼融合蛋白的核酸分子。

11、另一方面，提供了攜帶編碼融合蛋白的核酸分子的重組載體。

12、另一方面，提供了在其處錨定核酸分子或重組載體的重組細(xì)胞。

13、另一方面，提供了免疫增強(qiáng)劑或免疫增強(qiáng)的藥物組合物，其包含至少一種選自融合蛋白、編碼融合蛋白的核酸分子、攜帶核酸分子的重組載體、和在其處錨定核酸分子或重組載體的重組細(xì)胞的物質(zhì)作為活性成分。

14、另一方面，提供了用于預(yù)防和/或治療免疫相關(guān)的疾病的藥物組合物，其包含至少一種選自融合蛋白、編碼融合蛋白的核酸分子、攜帶核酸分子的重組載體、和在其處錨定核酸分子或重組載體的重組細(xì)胞的物質(zhì)作為活性成分。

15、另一方面，提供了用于預(yù)防和/或治療癌癥的抗癌劑或藥物組合物，其包含至少一種選自融合蛋白、編碼融合蛋白的核酸分子、攜帶核酸分子的重組載體、和在其處錨定核酸分子或重組載體的重組細(xì)胞的物質(zhì)作為活性成分。

16、另一方面，提供了用于增強(qiáng)免疫的方法，所述方法包括將藥物上有效量的至少一種物質(zhì)施用于需要增強(qiáng)免疫的對(duì)象的步驟，所述物質(zhì)選自融合蛋白、編碼融合蛋白的核酸分子、攜帶核酸分子的重組載體、和在其處錨定核酸分子或重組載體的重組細(xì)胞。

17、另一方面，提供了用于預(yù)防和/或治療免疫相關(guān)的疾病的方法，所述方法包括將藥物上有效量的一種或多于一種物質(zhì)施用于需要預(yù)防和/或治療免疫相關(guān)的疾病的對(duì)象的步驟，所述物質(zhì)選自融合蛋白、編碼融合蛋白的核酸分子、攜帶核酸分子的重組載體、和包含核酸分子或重組載體的重組細(xì)胞。

18、另一方面，提供了用于預(yù)防和/或治療癌癥的方法，所述方法包括將藥物上有效量的至少一種物質(zhì)施用于需要預(yù)防和/或治療癌癥的對(duì)象的步驟，所述物質(zhì)選自融合蛋白、編碼融合蛋白的核酸分子、攜帶核酸分子的重組載體、和在其處錨定核酸分子或重組載體的重組細(xì)胞。

19、另一方面，提供了至少一種選自融合蛋白、編碼融合蛋白的核酸分子、攜帶核酸分子的重組載體、和在其處錨定核酸分子或重組載體的重組細(xì)胞的物質(zhì)用于增強(qiáng)免疫或用于制備免疫增強(qiáng)劑的用途。

20、另一方面，提供了至少一種選自融合蛋白、編碼融合蛋白的核酸分子、攜帶核酸分子的重組載體、和在其處錨定核酸分子或重組載體的重組細(xì)胞的物質(zhì)用于預(yù)防和/或治療免疫相關(guān)的疾病或用于制備用于預(yù)防和/或治療免疫相關(guān)的疾病的藥物的用途。

21、另一方面，提供了至少一種選自融合蛋白、編碼融合蛋白的核酸分子、攜帶核酸分子的重組載體、和在其處錨定核酸分子或重組載體的重組細(xì)胞的物質(zhì)用于預(yù)防和/或治療癌癥或用于制備用于預(yù)防和/或治療癌癥的藥物的用途。

22、技術(shù)解決方案

23、本文提供了融合蛋白，其包含：與tigit結(jié)合的抗tigit抗體或其抗原結(jié)合片段；和il-15，以及其藥物用途。融合蛋白表現(xiàn)出(1)通過(guò)抗tigit抗體或其抗原結(jié)合片段阻斷tigit功能的活性，從而激活免疫系統(tǒng)(例如增強(qiáng)效應(yīng)t細(xì)胞功能、調(diào)節(jié)treg活性、增加細(xì)胞因子分泌等)，和(2)由于il-15與受體的高結(jié)合親和力和低免疫原性的優(yōu)點(diǎn)，發(fā)現(xiàn)了其作為各種免疫活化劑和/或免疫治療劑的應(yīng)用。

24、下面將給出本公開(kāi)的具體實(shí)施方式。

25、術(shù)語(yǔ)的定義

26、本文所用的核酸分子(可與“多核苷酸”或“基因”交替使用)或多肽(可與“蛋白質(zhì)”交替使用)“包含特定的核酸序列或氨基酸序列”、“由特定的核酸序列或氨基酸序列組成”或“由特定的核酸序列或氨基酸序列表示”的短語(yǔ)，是指核酸分子或多肽基本上包含特定的核酸序列或氨基酸序列，并可以解釋為在特定的核酸序列或氨基酸序列中包含具有變化(例如缺失、置換、修飾和/或添加)的“基本等同的序列”(或者不排除特定的核酸序列或氨基酸序列的這些變化)，只要保持了核酸分子或多肽的原始功能和/或預(yù)期功能。

27、在實(shí)施方案中，本文提供的核酸序列或氨基酸序列可包含通過(guò)常規(guī)誘變方法，例如定向進(jìn)化或定點(diǎn)誘變獲得的突變體，只要突變體保留了序列的原始功能或預(yù)期功能。在實(shí)施方案中，當(dāng)核酸分子或多肽“包含或組成為特定的核酸序列或氨基酸序列”時(shí)，是指核酸分子或多肽(i)基本上包含特定的核酸序列或氨基酸序列，或(ii)基本上組成為或基本上包含氨基酸序列，其與特定的核酸序列或氨基酸序列具有60%或高于60%、70%或高于70%、80%或高于80%、85%或高于85%、90%或高于90%、91%或高于91%、92%或高于92%、93%或高于93%，94%或高于94%、95%或高于95%、96%或高于96%、97%或高于97%、98%或高于98%、99%或高于99%、99.5%或高于99.5%、或99.9%或高于99.9%的同源性，同時(shí)保留其原始功能和/或預(yù)期功能。

28、本文所述的核酸序列可在編碼區(qū)內(nèi)進(jìn)行各種修飾，以反映用于表達(dá)蛋白質(zhì)的微生物的密碼子偏好，只要表達(dá)蛋白質(zhì)的氨基酸序列和/或功能由于密碼子的簡(jiǎn)并而保持不變。

29、本文所用的術(shù)語(yǔ)“同源性”是指給定核酸序列或氨基酸序列與另一序列之間的相似程度，可由百分率(%)表示。核酸序列的同源性可通過(guò)例如blast或fasta的眾所周知的算法來(lái)確定，已經(jīng)基于blast算法開(kāi)發(fā)了例如blastn或blastx的程序(參見(jiàn)：http://www.ncbi.nlm.nih.gov)。

30、融合蛋白

31、根據(jù)其的一方面，本公開(kāi)提供了融合蛋白，其包含：(1)抗tigit抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性識(shí)別tigit；和(2)il-15。

32、在融合蛋白中，抗tigit抗體或其抗原結(jié)合片段可具有阻斷tigit功能的活性，以激活免疫系統(tǒng)(例如增強(qiáng)效應(yīng)t細(xì)胞功能、調(diào)節(jié)treg活性、增加細(xì)胞因子分泌等)。此外，il-15是安全的多肽，其具有與受體的高結(jié)合親和力和低免疫原性，提供了優(yōu)異的免疫增強(qiáng)效果，同時(shí)在體內(nèi)施用時(shí)最小化了免疫應(yīng)答將其識(shí)別為抗原的風(fēng)險(xiǎn)。因此，融合蛋白可用作各種免疫增強(qiáng)劑和/或免疫治療劑。

33、在根據(jù)實(shí)施方案的融合蛋白中，il-15可以通過(guò)接頭或不通過(guò)接頭直接與抗tigit抗體或其抗原結(jié)合片段的重鏈(重鏈可變區(qū)或重鏈恒定區(qū))或輕鏈(輕鏈可變區(qū)或輕鏈恒定區(qū))的c端和/或n端連接。

34、更具體而言，融合蛋白可包含：(1)抗tigit抗體(例如包含兩條重鏈和兩條輕鏈的igg型抗體)和(2)一個(gè)il-15，其中il-15通過(guò)肽接頭或不通過(guò)肽接頭直接與抗tigit抗體的兩條重鏈中的一條或兩條輕鏈中的一條的c端(恒定區(qū)c端)或n端連接。

35、在另一個(gè)實(shí)施方案中，融合蛋白可包含：(1)抗tigit抗體(例如包含兩條重鏈和兩條輕鏈的igg型抗體)；和(2)兩個(gè)il-15分子，其中每個(gè)il-15通過(guò)接頭或不通過(guò)接頭直接與抗tigit抗體的兩條重鏈中的一條或兩條輕鏈中的一條的c端或n端連接。

36、例如，在融合蛋白中：

37、(i)兩個(gè)il-15分子中的一個(gè)可通過(guò)接頭或不通過(guò)接頭直接與抗tigit抗體兩條重鏈中的一條的c端(即恒定區(qū)(例如fc)的c端)或n端(即可變區(qū)的n端)連接，另一個(gè)il-15分子可通過(guò)接頭或不通過(guò)接頭直接與抗tigit抗體另一條重鏈的c端(即恒定區(qū)(例如fc)的c端)或n端(即可變區(qū)的n端)連接，或

38、(ii)兩個(gè)il-15分子中的一個(gè)可通過(guò)接頭或不通過(guò)接頭直接與抗tigit抗體兩條輕鏈中的一條的c端(即恒定區(qū)的c端)或n端(即可變區(qū)的n端)連接，且另一個(gè)il-15分子可通過(guò)接頭或不通過(guò)接頭直接與抗tigit抗體另一條輕鏈的c端(即恒定區(qū)的c端)或n端(即可變區(qū)的n端)連接。

39、更具體而言，在融合蛋白中：

40、(i)兩個(gè)il-15分子中的一個(gè)可通過(guò)接頭或不通過(guò)接頭直接與抗tigit抗體兩條重鏈中的一個(gè)fc區(qū)的c端連接，另一個(gè)il-15分子可通過(guò)接頭或不通過(guò)接頭直接與抗tigit抗體另一個(gè)fc區(qū)的c端連接，或

41、(ii)兩個(gè)il-15分子中的一個(gè)可通過(guò)接頭或不通過(guò)接頭直接與抗tigit抗體兩條輕鏈中的一個(gè)的c端連接，另一個(gè)il-15分子可通過(guò)接頭或不通過(guò)接頭直接與抗tigit抗體另一個(gè)輕鏈的c端連接。

42、接頭可以是但不限于是剛性肽接頭(例如[eaaak]n，其中n是1至5的整數(shù))、柔性肽接頭(例如[(g)ms]l，其中m是1至5的整數(shù)，l是1至5的整數(shù))。

43、抗tigit抗體或其抗原結(jié)合片段

44、抗tigit抗體或其抗原結(jié)合片段可包含：

45、包含seq?id?no:?1、seq?id?no:?2或seq?id?no:?3的氨基酸序列的多肽(cdr-h1)、

46、包含seq?id?no:?4、seq?id?no:?5或seq?id?no:?6的氨基酸序列的多肽(cdr-h2)、

47、包含seq?id?no:?7、seq?id?no:?8或seq?id?no:?9的氨基酸序列的多肽(cdr-h3)、

48、包含seq?id?no:?10、seq?id?no:?13或seq?id?no:?14的氨基酸序列的多肽(cdr-l1)、

49、包含seq?id?no:?15、seq?id?no:?16或seq?id?no:?17的氨基酸序列的多肽(cdr-l2)、和

50、包含seq?id?no:?18、seq?id?no:?19或seq?id?no:?20的氨基酸序列的多肽(cdr-l3)。

51、包含seq?id?no:?10的氨基酸序列的多肽(cdr-l1)可包含seq?id?no:?11或seqid?no:?12的氨基酸序列。

52、在此，互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)是基于根據(jù)kabat系統(tǒng)的cdr定義確定的。

53、在實(shí)施方案中，可包含在抗tigit抗體或其抗原結(jié)合片段中的六個(gè)cdr(cdr-l1、cdr-l2、cdr-l3、cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3)如下表1所示：

54、[表1]

55、

56、(在表1中，cdr-h1、cdr-h2和cdr-h3代表重鏈上的互補(bǔ)決定區(qū)，而cdr-l1、cdr-l2和cdr-l3代表輕鏈上的互補(bǔ)決定區(qū)。)

57、在實(shí)施方案中，抗tigit抗體或其抗原結(jié)合片段可包含：

58、其包含seq?id?no:?1、seq?id?no:?2或seq?id?no:?3的cdr-h1、seq?id?no:?4、seq?id?no:?5或seq?id?no:?6的cdr-h2、和seq?id?no:?7、seq?id?no:?8或seq?id?no:?9的cdr-h3的重鏈可變區(qū)；和

59、包含seq?id?no:?10(例如seq?id?no:?11或seq?id?no:?12)、seq?id?no:?13或seq?id?no:?14的cdr-l1、seq?id?no:?15、seq?id?no:?16或seq?id?no:?17的cdr-l2、和seq?id?no:?18、seq?id?no:?19或seq?id?no:?20的cdr-l3的輕鏈可變區(qū)。

60、更具體而言，抗tigit抗體或其抗原結(jié)合片段可包含：

61、包含seq?id?no:?21、seq?id?no:?22、seq?id?no:?23、seq?id?no:?24、seq?idno:?25、seq?id?no:?26、seq?id?no:?27或seq?id?no:?28的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)；和

62、包含seq?id?no:?29、seq?id?no:?30、seq?id?no:?31、seq?id?no:?32、seq?idno:?33、seq?id?no:?34、seq?id?no:?35或seq?id?no:?36的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)。

63、在某些情況下(例如重組構(gòu)建時(shí))，重鏈可變區(qū)和/或輕鏈可變區(qū)可在其n端還包含合適的信號(hào)序列。

64、下表2說(shuō)明了可包含在抗tigit抗體或其抗原結(jié)合片段中的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列：

65、[表2]

66、

67、

68、

69、(表2中，下劃線(xiàn)區(qū)域依次代表重鏈和輕鏈的cdr1、cdr2和cdr3。)

70、在實(shí)施方案中，本文提供的抗tigit抗體或其抗原結(jié)合片段可與選自人類(lèi)tigit蛋白殘基51至70(taqvtqvnweqqdqllaicn；seq?id?no:?37)的一個(gè)或多于一個(gè)氨基酸結(jié)合，例如但不限于人類(lèi)tigit蛋白(seq?id?no:?64；ncbi參考序列np_776160.2;?uniprotkb/swissprot?q495a1-1)。

71、[人類(lèi)tigit蛋白(uniprotkb/swissprot?q495a1-1)]

72、1?mrwcllliwa?qglrqaplas?gmmtgtiett?gnisaekggs?iilqchlsst?taqvtqvnwe

73、61?qqdqllaicn?adlgwhisps?fkdrvapgpg?lgltlqsltv?ndtgeyfciy?htypdgtytg

74、121?riflevless?vaehgarfqi?pllgamaatl?vvictavivv?valtrkkkal?rihsvegdlr

75、181?rksagqeews?psapsppgsc?vqaeaapagl?cgeqrgedca?elhdyfnvls?yrslgncsff

76、241?tetg

77、本文所用的術(shù)語(yǔ)“抗體”是指與特定的抗原特異性結(jié)合的蛋白質(zhì)。這種蛋白質(zhì)可以在免疫系統(tǒng)內(nèi)響應(yīng)抗原刺激而產(chǎn)生，也可以化學(xué)合成或重組產(chǎn)生，對(duì)其類(lèi)型沒(méi)有限制?？贵w可以是非天然產(chǎn)生的抗體，例如重組或合成生成的抗體。抗體可以是動(dòng)物抗體(例如小鼠抗體)、嵌合抗體、人源化抗體或人類(lèi)抗體?？贵w可以是單克隆抗體或多克隆抗體。

78、在本文提供的抗tigit抗體或其抗原結(jié)合片段中，除了所定義的的重鏈cdr區(qū)和輕鏈cdr區(qū)、或重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)以外的區(qū)域可源自任何亞型(例如iga、igd、ige、igg(igg1、igg2、igg3或igg4)、igm等)的免疫球蛋白。例如，其余區(qū)域可源自任何免疫球蛋白亞型的框架區(qū)和/或源自輕鏈和/或重鏈的恒定區(qū)。在實(shí)施方案中，本文提供的抗tigit抗體可以是人類(lèi)igg型抗體，例如但不限于igg1、igg2、igg3或igg4的形式。

79、完整的抗體(如igg型)具有包含兩條全長(zhǎng)輕鏈和兩條全長(zhǎng)重鏈的結(jié)構(gòu)，其中每條輕鏈通過(guò)二硫鍵與重鏈連接?？贵w的恒定區(qū)分為重鏈恒定區(qū)和輕鏈恒定區(qū)。重鏈恒定區(qū)具有g(shù)amma(γ)型、mu(μ)型、alpha(α)型、delta(δ)型和epsilon(ε)型，其中子類(lèi)包括gamma1(γ1)、gamma2(γ2)、gamma3(γ3)、gamma4(γ4)、alpha1(α1)和alpha2(α2)。輕鏈恒定區(qū)有kappa(κ)型和lambda(λ)型。

80、在實(shí)施方案中，本文提供的抗tigit抗體可包含但不限于包含作為重鏈恒定區(qū)的igg恒定區(qū)和作為輕鏈恒定區(qū)的κ恒定區(qū)。

81、在實(shí)施方案中，igg(如人類(lèi)igg1)的恒定區(qū)可以為野生型。在另一個(gè)實(shí)施方案中，igg的恒定區(qū)可以為變體，其包含選自s240d(240位的絲氨酸被天冬氨酸置換)、a331l、i333e、n298a、s299a、e334a、k335a、l235a、l236a、p330g和k478缺失(δk478)的一個(gè)或多于一個(gè)突變，并可包括例如以下突變：

82、(1)s240d、a331l和i333e；

83、(2)n298a；

84、(3)s299a、e334a和k335a；

85、(4)l235a、l236a和p330g；或

86、(5)k478缺失。

87、術(shù)語(yǔ)“重鏈”可理解為包括全長(zhǎng)重鏈及其片段，其包含含有足以賦予抗原特異性的氨基酸序列的可變區(qū)結(jié)構(gòu)域(vh)、以及三個(gè)恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域ch1、ch2和ch3以及鉸鏈。術(shù)語(yǔ)“輕鏈”可理解為包括全長(zhǎng)輕鏈及其片段，其包含含有足以賦予抗原特異性的氨基酸序列的可變區(qū)結(jié)構(gòu)域vl和恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域cl。

88、術(shù)語(yǔ)“互補(bǔ)決定區(qū)”(cdr)是指抗體中賦予抗原結(jié)合特異性的區(qū)域，其包含免疫球蛋白的重鏈高變區(qū)和輕鏈高變區(qū)的氨基酸序列。重鏈和輕鏈可能各含有三個(gè)cdr(cdrh1、cdrh2、cdrh3和cdrl1、cdrl2、cdrl3)。這些cdr可為抗體與抗原或表位結(jié)合提供關(guān)鍵的接觸殘基。本文所用的術(shù)語(yǔ)“特異性結(jié)合”或“特異性識(shí)別”是指導(dǎo)致免疫應(yīng)答的抗原與抗體之間的相互作用，這在本領(lǐng)域中是眾所周知的。

89、本文所述的互補(bǔ)決定區(qū)(cdr)是基于kabat系統(tǒng)定義的。

90、除非另有說(shuō)明，本文所用的術(shù)語(yǔ)“抗體”可理解為包括保留抗原結(jié)合能力的抗體的抗原結(jié)合片段。

91、術(shù)語(yǔ)“抗原結(jié)合片段”是指包含能與抗原結(jié)合的部分的任何形式的多肽(例如本文定義的六個(gè)cdr)。示例包括但不限于scfv、scfv-fc、(scfv)2、fab、fab’或f(ab’)2。

92、在抗原結(jié)合片段中，fab具有包含輕鏈的可變區(qū)和重鏈的可變區(qū)、輕鏈的恒定區(qū)和重鏈的第一恒定區(qū)(ch1)的結(jié)構(gòu)，其具有單一的抗原結(jié)合位點(diǎn)。

93、fab’與fab的不同之處在于，前者在重鏈的ch1結(jié)構(gòu)域的c端包括含有一個(gè)或多于一個(gè)半胱氨酸殘基的鉸鏈區(qū)。

94、當(dāng)fab’的鉸鏈區(qū)的半胱氨酸殘基形成二硫鍵時(shí)，就會(huì)產(chǎn)生f(ab’)2抗體。fv是最小的抗體片段，其僅包含重鏈的可變區(qū)和輕鏈的可變區(qū)，生成fv片段的重組技術(shù)在本領(lǐng)域中是眾所周知的。

95、雙鏈fv包含重鏈的可變區(qū)和輕鏈的可變區(qū)，兩者之間為非共價(jià)連接，而單鏈fv(scfv)包含輕鏈的可變區(qū)和重鏈的可變區(qū)，兩者之間通常通過(guò)肽接頭共價(jià)連接或直接在c端處共價(jià)連接，形成類(lèi)似雙鏈fv的類(lèi)二聚體結(jié)構(gòu)。

96、抗原結(jié)合片段可使用蛋白水解酶獲得(例如，fab可通過(guò)用木瓜蛋白酶限制性消化整個(gè)抗體獲得，而f(ab’)2片段可通過(guò)用胃蛋白酶消化獲得)，或可通過(guò)重組dna技術(shù)產(chǎn)生。

97、術(shù)語(yǔ)“鉸鏈區(qū)”是指抗體的重鏈中區(qū)域，其位于ch1結(jié)構(gòu)域和ch2結(jié)構(gòu)域之間，其功能是為抗體中的抗原結(jié)合位點(diǎn)提供柔性。

98、本文提供的抗體可以是單克隆抗體。單克隆抗體可以通過(guò)本領(lǐng)域中眾所周知的方法產(chǎn)生。例如，可使用噬菌體展示技術(shù)產(chǎn)生單克隆抗體，或可使用傳統(tǒng)方法從動(dòng)物(例如小鼠)中生成單克隆抗體。

99、可以使用標(biāo)準(zhǔn)的elisa(酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))方法基于單獨(dú)的單克隆抗體與tigit受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域結(jié)合的能力對(duì)其進(jìn)行篩選。例如競(jìng)爭(zhēng)性elisa或基于細(xì)胞測(cè)定的功能測(cè)定可用于評(píng)估分子的相互作用和抑制活性。隨后可基于所選的具有強(qiáng)抑制活性的抗體評(píng)估每個(gè)單克隆抗體對(duì)tigit受體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的親和力(kd值)。

100、在最終選擇的抗體中，除了抗原結(jié)合位點(diǎn)以外的區(qū)域可以是人源化免疫球蛋白抗體或人類(lèi)免疫球蛋白抗體，產(chǎn)生人源化抗體的方法在本領(lǐng)域中是眾所周知的。

101、本文所提供的抗tigit抗體的抗原結(jié)合片段是指源自抗tigit抗體的保持與抗原(tigit)結(jié)合親和力的片段，其可以是包含上述抗tigit抗體的六個(gè)cdr的任何多肽，例如但不限于scfv、scfv-fc、scfv-cκ(kappa恒定區(qū))、scfv-cλ(lambda恒定區(qū))、(scfv)2、fab、fab’或f(ab’)2。在實(shí)施方案中，抗原結(jié)合片段可以但不限于是scfv或融合多肽，其中所述融合多肽中scfv與免疫球蛋白(如igg1、igg2、igg3、igg4等)的fc區(qū)(scfv-fc)或與輕鏈(例如kappa或lambda)的恒定區(qū)(scfv-cκ或scfv-cλ)融合。

102、本文所用的抗體(例如cdr、可變區(qū)或重鏈/輕鏈、抗原結(jié)合片段等)“包含特定的氨基酸序列”或“包含或組成為特定的氨基酸序列”的用語(yǔ)不僅包括抗體必要地包含特定的氨基酸序列的情況，還包括將不顯著影響抗體活性(例如抗原親和力、藥理活性等)的修飾(例如置換、缺失和/或添加)引入氨基酸序列的情況。

103、本文提供的抗tigit抗體或抗原結(jié)合片段具有通過(guò)表面等離子體共振(spr)測(cè)量的，例如，10mm或低于10mm、5mm或低于5mm、1mm或低于1mm、0.5mm或低于0.5mm、0.2mm或低于0.2mm、0.1mm或低于0.1mm、0.05mm或低于0.05mm、0.01mm或低于0.01mm、0.005mm或低于0.005mm、0.001mm或低于0.001mm的與tigit(例如人類(lèi)tigit)的結(jié)合親和力(kd)。具體而言，kd可以但不限于在0.0001nm至10mm、0.0005nm至10mm、0.001nm至10mm、0.005nm至10mm、0.01nm至10mm、0.05nm至10mm、0.1nm至10mm、0.5nm至10mm、1nm至10mm、0.0001nm至5mm、0.0005nm至5mm、0.001nm至5mm、0.005nm至5mm、0.01nm至5mm、0.05nm至5mm、0.1nm至5mm、0.5nm至5mm、1nm至5mm、0.0001nm至1mm、0.0005nm至1mm、0.001nm至1mm、0.005nm至1mm、0.01nm至1mm、0.05nm至1mm、0.1nm至1mm、0.5nm至1mm、1nm至1mm、0.0001nm至0.5mm、0.0005nm至0.5mm、0.001nm至0.5mm、0.005nm至0.5mm、0.01nm至0.5mm、0.05nm至0.5mm、0.1nm至0.5mm、0.5nm至0.5mm、1nm至0.5mm、0.0001nm至0.2mm、0.0005nm至0.2mm、0.001nm至0.2mm、0.005nm至0.2mm、0.01nm至0.2mm、0.05nm至0.2mm、0.1nm至0.2mm、0.5nm至0.2mm、1nm至0.2mm、0.0001nm至0.1mm、0.0005nm至0.1mm、0.001nm至0.1mm、0.005nm至0.1mm、0.01nm至0.1mm、0.05nm至0.1mm、0.1nm至0.1mm、0.5nm至0.1mm、1nm至0.1mm、0.0001nm至0.05mm、0.0005nm至0.05mm、0.001nm至0.05mm、0.005nm至0.05mm、0.01nm至0.05mm、0.05nm至0.05mm、0.1nm至0.05mm、0.5nm至0.05mm或1nm至0.05mm的范圍內(nèi)。

104、白細(xì)胞介素-15(il-15)

105、白細(xì)胞介素-15(il-15)可選自：

106、(1)野生型il-15多肽，

107、(2)與多肽(1)具有60%或多于60%、70%或多于70%、80%或多于80%、85%或多于85%、90%或多于90%、91%或多于91%、92%或多于92%、93%或多于93%、94%或多于94%、95%或多于95%、96%或多于96%、97%或多于97%、98%或多于98%、或99%或多于99%的同源性的多肽。

108、白細(xì)胞介素-15(il-15)具有與白細(xì)胞介素-2(il-2)相似的結(jié)構(gòu)，并與il-2/il-15受體beta鏈(cd122)和共用gamma鏈(gamma-c、cd132)絡(luò)合物結(jié)合，通過(guò)其參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在實(shí)施例中，il-15可源自人類(lèi)，例如但不限于ncbi登錄號(hào)np_000576.1(氨基酸殘基49至162)。

109、在實(shí)施方案中，il-15可具有以下氨基酸序列(n端→c端)：

110、nwvnvisdlkkiedliqsmhidatlytesdvhpsckvtamkcfllelqvislesgdasihdtvenliilannslssngnvtesgckeceeleeknikeflqsfvhivqmfints(seq?id?no:?38)。

111、多肽(1)可包含用于其他目的的其他寡肽，所述目的例如但不限于以便于蛋白質(zhì)的純化，例如用于在n端處標(biāo)記的標(biāo)簽(例如maprrargcrtlglpalllllllrppatrgdykddddkiegr(seq?id?no:?76))。

112、由于白細(xì)胞介素-15的人類(lèi)來(lái)源，當(dāng)將其施用于人體時(shí)其特征為低免疫原性。

113、il-15可表現(xiàn)出對(duì)其受體的結(jié)合活性(例如，對(duì)il-2/il-15受體beta鏈(cd122)和/或il-2/il-15受體beta鏈(cd122)與普通gamma鏈(gamma-c，cd132)絡(luò)合物的結(jié)合活性)，和/或免疫細(xì)胞(例如t細(xì)胞(cd4+、cd8+)、nk細(xì)胞等)中細(xì)胞因子的產(chǎn)生活性和/或分泌活性。

114、在實(shí)施方案中，il-15可以選自：

115、(1)包含seq?id?no:?38氨基酸序列的多肽，

116、(2)與多肽(1)具有93%或多于93%、94%或多于94%、95%或多于95%、96%或多于96%、97%或多于97%、98%或多于98%、或99%或多于99%的同源性，并表現(xiàn)出對(duì)il-2/il-15受體的結(jié)合活性和/或免疫細(xì)胞中細(xì)胞因子的產(chǎn)生活性和/或分泌活性的多肽。il-15可表現(xiàn)出對(duì)il-2/il-15受體的更強(qiáng)的結(jié)合活性、和/或免疫細(xì)胞中細(xì)胞因子的產(chǎn)生活性和/或分泌活性、和/或抗癌活性(例如抑制癌細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡)。

117、接頭

118、接頭可以是肽接頭，例如但不限于[eaaak]n(n是1至5的整數(shù)，代表[eaaak](seqid?no:?77)的數(shù)量)、[(g)ms]l(m是1至5的整數(shù)，代表g殘基的數(shù)量，l是1至5的整數(shù)，代表[(g)ms]的數(shù)量)、a?eaaak?a(seq?id?no:78)、a?eaaak?eaaak?a(seq?id?no:?79)、a?eaaakeaaak?eaaak?a(seq?id?no:?80)、a?eaaak?eaaak?eaaak?eaaak?a(seq?id?no:?81)、aeaaak?eaaak?eaaak?eaaak?eaaak?a(seq?id?no:?82)、aeaaakeaaakag(seq?id?no:?83)、aeaaakeaaakags(seq?id?no:?84)、ggggg(seq?id?no:?85)、ggagg(seq?id?no:?86)、gggggggg(seq?id?no:?87)、gagagagaga(seq?id?no:?88)、rplsyrppfpfgfpsvrp(seq?idno:?89)、yprsiyirrrhpspsltt(seq?id?no:?90)、tpshlshilpsfglptfn(seq?id?no:?91)、rpvspftfprlsnswlpa(seq?id?no:?92)、spaahfprsiprpgpirt(seq?id?no:?93)、apgpsapshrslpsrafg(seq?id?no:?94)、prnsihflhpllvaplga(seq?id?no:?95)、mpslsgvlqvrylsppdl(seq?id?no:?96)、spqypspltltlpphpsl(seq?id?no:?97)、npslnppsylhrapsris(seq?id?no:?98)、lpwrtsllpslplrrrp(seq?id?no:?99)、pplfakgpvgllsrsfpp(seq?id?no:?100)、vppapvvslrsaharppy(seq?id?no:?101)、lrptpprvrsytccptp(seq?id?no:?102)、pnvahvlplltvpwdnlr(seq?id?no:?103)、cnpllplcarspavrtfp(seq?id?no:?104)、lgtptptptptgef(seq?id?no:?105)、edftrgkl(seq?id?no:?106)、l?eaaar?eaaar?eaaar?eaaar(seq?id?no:?107)、l?eaaar?eaaareaaar(seq?id?no:?108)、l?eaaar(seq?id?no:?109)、l?eaaar?eaaar(seq?id?no:?110)、eaaar?eaaar?eaaar?eaaar(seq?id?no:?111)、eaaar?eaaar?eaaar(seq?id?no:?112)、eaaar?eaaar(seq?id?no:?113)、eaaar(seq?id?no:?114)、lteeqqeggg(seq?id?no:?115)、teeqqeggg(seq?id?no:?116)、laklkqkteqlqdriaggg(seq?id?no:?117)、lelktplgdt(seqid?no:?118)、thtcprcpep(seq?id?no:?119)、kscdtpppcp(seq?id?no:?120)、rcpepkscdt(seq?id?no:?121)、pppcprcpep(seq?id?no:?122)、kscdtpppcp(seq?id?no:?123)、rcpgg(seq?id?no:?124)、和lepkssdkthtsppspgg(seq?id?no:?125)。在實(shí)施方案中，肽接頭可以是剛性接頭，例如但不限于[eaaak]n(其中n是1至5的整數(shù)，代表[eaaak]的數(shù)量)，或柔性接頭，例如但不限于[(g)ms]l(其中m是1至5的整數(shù)，代表g殘基的數(shù)量，l是1至5的整數(shù)，代表[(g)ms]的數(shù)量)。

119、核酸分子、重組載體和重組細(xì)胞

120、另一方面，提供了編碼融合蛋白的核酸分子。

121、另一方面，提供了攜帶核酸分子的重組載體。載體可用作核酸分子的表達(dá)載體。

122、另一方面，提供了錨定核酸分子或攜帶核酸分子的重組載體的重組細(xì)胞。細(xì)胞可用于產(chǎn)生融合蛋白。

123、另一方面，提供了用于產(chǎn)生融合蛋白的方法，所述方法包括在合適的宿主細(xì)胞中表達(dá)核酸分子的步驟。在合適的宿主細(xì)胞中表達(dá)核酸分子的步驟可包括在標(biāo)準(zhǔn)條件下培養(yǎng)上述重組細(xì)胞。

124、術(shù)語(yǔ)“載體”是指在宿主細(xì)胞中表達(dá)目的基因的手段。載體的示例包括質(zhì)粒載體、黏粒載體和病毒載體，例如噬菌體載體、腺病毒載體、反轉(zhuǎn)錄病毒載體和腺相關(guān)病毒載體?？捎米髦亟M載體的載體包括本領(lǐng)域常用的質(zhì)粒(例如psc101、pgv1106、pacyc177、cole1、pkt230、pme290、pbr322、puc8/9、puc6、pbd9、phc79、pij61、plafr1、phv14、pgex系列、pet系列和puc19)、噬菌體(例λgt4λb、λ-charon、λδz1和m13)或病毒(例如sv40)。

125、在重組載體中，編碼融合蛋白的核酸分子可以與啟動(dòng)子可操作連接。術(shù)語(yǔ)“可操作連接”是指核苷酸調(diào)控序列(例如啟動(dòng)子序列)和另一個(gè)核苷酸序列之間的功能連接。當(dāng)“可操作連接”時(shí)，調(diào)節(jié)序列控制其他核苷酸序列的轉(zhuǎn)錄和/或翻譯。

126、重組載體通?？梢詷?gòu)建為克隆載體或表達(dá)載體。表達(dá)載體可以是本領(lǐng)域用于在植物、動(dòng)物或微生物中表達(dá)外源蛋白質(zhì)的任何常規(guī)載體。重組載體可以使用本領(lǐng)域已知的各種方法構(gòu)建。

127、重組載體可以使用原核細(xì)胞或真核細(xì)胞作為宿主構(gòu)建。例如，當(dāng)載體是表達(dá)載體且使用原核細(xì)胞作為宿主時(shí)，載體通常包括能夠驅(qū)動(dòng)轉(zhuǎn)錄的強(qiáng)啟動(dòng)子(例如plλ啟動(dòng)子、cmv啟動(dòng)子、trp啟動(dòng)子、lac啟動(dòng)子、tac啟動(dòng)子、t7啟動(dòng)子等)、用于啟動(dòng)翻譯的核糖體結(jié)合位點(diǎn)以及轉(zhuǎn)錄/翻譯終止序列。當(dāng)使用真核細(xì)胞作為宿主時(shí)，載體可包括真核細(xì)胞來(lái)源的復(fù)制起點(diǎn)，例如但不限于f1起點(diǎn)、sv40起點(diǎn)、pmb1起點(diǎn)、腺病毒起點(diǎn)、aav起點(diǎn)和bbv起點(diǎn)。此外，載體可包括源自哺乳動(dòng)物基因組的啟動(dòng)子(例如金屬硫蛋白啟動(dòng)子)或源自哺乳動(dòng)物病毒的啟動(dòng)子(例如腺病毒晚期啟動(dòng)子、牛痘病毒7.5k啟動(dòng)子、sv40啟動(dòng)子、巨細(xì)胞病毒啟動(dòng)子和hsvtk啟動(dòng)子)，通常包括作為轉(zhuǎn)錄終止序列的多腺苷酸化序列。

128、重組細(xì)胞可通過(guò)將重組載體引入合適的宿主細(xì)胞獲得。只要是本領(lǐng)域已知的，任何能穩(wěn)定且連續(xù)地克隆或表達(dá)重組載體的宿主細(xì)胞都可以使用。例如，原核宿主細(xì)胞可包括大腸桿菌(e.?coli)jm109、大腸桿菌bl21、大腸桿菌rr1、大腸桿菌le392、大腸桿菌b、大腸桿菌x1776、大腸桿菌w3110、例如枯草桿菌(bacillus?subtilis)和蘇云金桿菌(bacillus?thuringiensis)的芽孢桿菌(bacillus?spp.)、和例如鼠傷寒沙門(mén)氏菌(salmonella?typhimurium)、黏質(zhì)沙雷菌(serratia?marcescens)的腸道細(xì)菌、和各種假單胞菌(pseudomonas)種。對(duì)于真核宿主細(xì)胞，轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞可包括酵母(釀酒酵母(saccharomyces?cerevisiae))、昆蟲(chóng)細(xì)胞、植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞，例如但不限于sp2/0細(xì)胞系、cho(中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢)k1細(xì)胞系、cho細(xì)胞系、dg44細(xì)胞系、per.c6細(xì)胞系、w138細(xì)胞系、bhk細(xì)胞系、cos-7細(xì)胞系、293細(xì)胞系、hepg2細(xì)胞系、huh7細(xì)胞系、3t3細(xì)胞系、rin細(xì)胞系、mdck細(xì)胞系。

129、將核酸分子或重組載體遞送(引入)進(jìn)宿主細(xì)胞可使用通常已知的方法進(jìn)行。例如，當(dāng)宿主細(xì)胞為原核細(xì)胞時(shí)，可使用例如但不限于cacl2法或電穿孔的方法；當(dāng)宿主細(xì)胞為真核細(xì)胞時(shí)，可使用例如但不限于顯微注射、磷酸鈣沉淀、電穿孔、脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染或基因轟擊的方法。

130、用于選擇轉(zhuǎn)化(引入重組載體的)宿主細(xì)胞的方法可以基于可選擇的標(biāo)志物表達(dá)的表型，使用本領(lǐng)域眾所周知的方法容易地進(jìn)行。例如，如果可選擇的標(biāo)志物是對(duì)特定抗生素具有抗性的基因，通過(guò)在含有抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)已引入重組載體的重組細(xì)胞可以容易地進(jìn)行選擇。

131、藥物用途

132、本文提供的融合蛋白中包含的抗tigit抗體或其抗原結(jié)合片段起到阻斷tigit的作用(例如tigit與其配體cd155(pvr)之間的相互作用)的功能，從而激活免疫系統(tǒng)(例如增強(qiáng)效應(yīng)t細(xì)胞功能、調(diào)節(jié)treg活性、增加細(xì)胞因子分泌)，其還表現(xiàn)出良好的抗癌效果(例如癌細(xì)胞凋亡、抑制癌細(xì)胞增殖)。此外，il-15具有與其受體(il-2/il-15受體)的高結(jié)合親和力和低免疫原性，因此在體內(nèi)施用時(shí)可增強(qiáng)免疫應(yīng)答，例如增加細(xì)胞因子分泌，同時(shí)通過(guò)最小化被識(shí)別為免疫原的風(fēng)險(xiǎn)而保持安全性。il-15還表現(xiàn)出優(yōu)異的抗癌效果(例如癌細(xì)胞凋亡、抑制癌細(xì)胞增殖)。因此，融合肽結(jié)合了抗tigit抗體或其抗原結(jié)合片段和il-15的優(yōu)點(diǎn)，并可有效應(yīng)用于免疫增強(qiáng)、預(yù)防和/或治療免疫相關(guān)的疾病，特別是用于預(yù)防和/或治療癌癥。

133、一方面，提供了免疫增強(qiáng)劑或用于免疫增強(qiáng)的藥物組合物，其包含至少一種選自融合蛋白、編碼融合蛋白的核酸分子、攜帶核酸分子的重組載體、和錨定核酸分子或重組載體的重組細(xì)胞的物質(zhì)作為活性成分。

134、另一方面，提供了用于預(yù)防和/或治療免疫相關(guān)的疾病的藥物組合物，其包含至少一種選自融合蛋白、編碼融合蛋白的核酸分子、攜帶核酸分子的重組載體、和錨定核酸分子或重組載體的重組細(xì)胞的物質(zhì)作為活性成分。

135、另一方面，提供了抗癌劑或用于預(yù)防和/或治療癌癥的藥物組合物，其包含至少一種選自融合蛋白、編碼融合蛋白的核酸分子、攜帶核酸分子的重組載體、和錨定核酸分子或重組載體的重組細(xì)胞的物質(zhì)作為活性成分。

136、另一方面，提供了用于增強(qiáng)免疫的方法，所述方法包括將藥物上有效量的至少一種物質(zhì)施用于需要增強(qiáng)免疫的對(duì)象的步驟，所述物質(zhì)選自融合蛋白、編碼融合蛋白的核酸分子、攜帶核酸分子的重組載體、和錨定核酸分子或重組載體的重組細(xì)胞。免疫增強(qiáng)方法還可包括在施用步驟之前識(shí)別需要免疫增強(qiáng)的對(duì)象的步驟。

137、另一方面，提供了用于預(yù)防和/或治療免疫相關(guān)的疾病的方法，所述方法包括將藥物上有效量的至少一種物質(zhì)施用于需要預(yù)防和/或治療免疫相關(guān)的疾病的對(duì)象的步驟，所述物質(zhì)選自融合蛋白、編碼融合蛋白的核酸分子、攜帶核酸分子的重組載體、和錨定核酸分子或重組載體的重組細(xì)胞。用于預(yù)防和/或治療免疫相關(guān)疾病的方法還可包括在施用步驟之前識(shí)別需要預(yù)防和/或治療免疫相關(guān)的疾病的對(duì)象的步驟。

138、另一方面，提供了用于預(yù)防和/或治療癌癥的方法，所述方法包括將藥物上有效量的至少一種物質(zhì)施用于需要預(yù)防和/或治療癌癥的對(duì)象的步驟，所述物質(zhì)選自融合蛋白、編碼融合蛋白的核酸分子、攜帶核酸分子的重組載體、和錨定核酸分子或重組載體的重組細(xì)胞。用于預(yù)防和/或治療癌癥的方法還可包括在施用步驟之前識(shí)別需要預(yù)防和/或治療癌癥的對(duì)象的步驟。

139、另一方面，提供了至少一種選自融合蛋白、編碼融合蛋白的核酸分子、攜帶核酸分子的重組載體、和錨定核酸分子或重組載體的重組細(xì)胞用于免疫增強(qiáng)、預(yù)防和/或治療免疫相關(guān)的疾病，和/或預(yù)防和/或治療癌癥、或用于制造用于免疫增強(qiáng)、預(yù)防和/或治療免疫相關(guān)的疾病、和/或預(yù)防和/或治療癌癥的藥物組合物的用途。

140、本文所用的術(shù)語(yǔ)“免疫增強(qiáng)(immune?enhancement)”是指誘導(dǎo)對(duì)抗原的初次免疫應(yīng)答或增加現(xiàn)有的免疫應(yīng)答，其可與例如免疫性增強(qiáng)作用(immunopotentiation)、免疫激活等術(shù)語(yǔ)互換使用。更具體而言，本文提供的融合蛋白的“免疫增強(qiáng)效果”可包括但不限于增強(qiáng)免疫細(xì)胞(例如nk細(xì)胞、nkt細(xì)胞、cd3+t細(xì)胞、效應(yīng)t細(xì)胞(cd4+t細(xì)胞)、細(xì)胞毒性t細(xì)胞(cd8+t細(xì)胞)等)的功能(激活)和/或增殖、調(diào)節(jié)性t(treg)細(xì)胞的活性抑制和/或消耗、增加免疫蛋白(例如細(xì)胞因子，如il-2、ifn-gamma等)的產(chǎn)生和/或分泌、和il-15受體(位于免疫細(xì)胞(nk細(xì)胞等)的表面)的激活(例如確認(rèn)為il2rb/il2rg二聚化等)。

141、本文所用的術(shù)語(yǔ)“免疫相關(guān)的疾病”旨在包括由免疫系統(tǒng)紊亂和/或激活不足引起的所有疾病，包括但不限于癌癥、傳染病、自身免疫病和炎癥性疾病。

142、癌癥可以是實(shí)體瘤或血癌，可以但不限于是至少一種選自鱗狀細(xì)胞癌、肺癌(例如，小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、肺腺癌、肺鱗狀細(xì)胞癌)、腹膜癌、皮膚癌、黑色素瘤(例如，皮膚黑色素瘤或眼部黑色素瘤)、直腸癌、食管癌、小腸癌、內(nèi)分泌腺癌、甲狀腺癌、甲狀旁腺癌、腎上腺癌、軟組織肉瘤、尿道癌、慢性白血病或急性白血病、淋巴細(xì)胞淋巴瘤、肝癌、胃癌、胰腺癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、宮頸癌、卵巢癌、膀胱癌、乳腺癌、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜癌或子宮癌、唾液腺癌、腎癌、前列腺癌、外陰癌、頭癌和頸癌、腦癌和骨肉瘤的癌癥。

143、癌癥的預(yù)防和/或治療效果不僅包括抑制癌細(xì)胞的出現(xiàn)和/或生長(zhǎng)，還包括抑制由遷移、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移引起的癌癥進(jìn)展。

144、傳染病、自身免疫病和炎癥性疾病可以是任何可通過(guò)前述免疫增強(qiáng)(例如，增強(qiáng)免疫細(xì)胞(例如nk細(xì)胞、nkt細(xì)胞、cd3+t細(xì)胞、效應(yīng)t細(xì)胞(cd4+t細(xì)胞)、細(xì)胞毒性t細(xì)胞(cd8+t細(xì)胞)等)的功能(激活)和/或增殖、調(diào)節(jié)性t(treg)細(xì)胞的活性抑制和/或消耗、增加免疫蛋白(例如細(xì)胞因子，如il-2、ifn-gamma等)的產(chǎn)生和/或分泌等)治療、減輕和/或預(yù)防的疾病。例如，傳染病是由傳播和侵入生物(例如動(dòng)物，包括人類(lèi))的病原體引起的疾病的總稱(chēng)，所述病原體例如病毒(例如流行性感冒病毒、冠狀病毒(例如嚴(yán)重急性呼吸綜合征(sars)病毒(sars-cov、sars-cov-2)、中東呼吸綜合癥(mers)病毒(mers-cov)、巨細(xì)胞病毒(cmv)、愛(ài)潑斯坦-巴爾病毒(ebv))、細(xì)菌、真菌或寄生蟲(chóng))，其可以包括選自病毒、細(xì)菌、真菌和寄生蟲(chóng)的至少一種病原體引起的感染以及由此導(dǎo)致的疾病。自身免疫病可包括但不限于類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、1型糖尿病、克羅恩病、潰瘍性結(jié)腸炎、白塞氏綜合征、狼瘡、干燥綜合征、重癥肌無(wú)力、硬皮病、甲狀腺功能減退、甲狀腺功能亢進(jìn)、銀屑病、白癜風(fēng)、多發(fā)性硬化、自身免疫性肝炎、自身免疫性腎炎、自身免疫性胰腺炎、自身免疫性腦炎和細(xì)胞因子風(fēng)暴。炎癥性疾病是炎癥(慢性炎癥或急性炎癥)或由炎癥引起的疾病的總稱(chēng)，可以但不限于是選自心臟炎癥(例如冠狀動(dòng)脈疾病、心絞痛(angina)、心肌梗死、心包炎、心肌炎)、血管炎癥(例如動(dòng)脈粥樣硬化、血管炎、彌散性血管內(nèi)凝血(dic)、免疫性血小板減少性紫癜(itp)、血栓性血小板減少性紫癜(ttp)、貧血)、上呼吸道炎癥(例如急性鼻咽炎、過(guò)敏性鼻炎、鼻竇炎、咽炎、扁桃體炎、喉炎)、下呼吸道炎癥和/或肺部炎癥(例如支氣管炎、支氣管擴(kuò)張、哮喘、慢性阻塞性肺病(copd)、肺炎、間質(zhì)性肺病、結(jié)核病)、上消化道炎癥(例如胃炎、食管炎)、下消化道炎癥(例如腸炎、潰瘍性結(jié)腸炎、克羅恩病、乳糜瀉、憩室炎、腸易激綜合征、闌尾炎、瘺管)、肝臟、膽管炎癥和/或胰腺炎癥(例如肝炎、脂肪肝、膽管炎、膽囊炎、胰腺炎、1型糖尿病)、腎臟(上泌尿道)炎癥(例如腎盂腎炎、腎小球腎炎、尿路感染)、下泌尿道炎癥(例如尿路感染、輸尿管炎、尿道炎、膀胱炎、前列腺炎/慢性盆腔疼痛綜合征)、甲狀腺炎癥和/或甲狀旁腺炎癥(例如甲狀腺炎、甲狀旁腺炎)、腎上腺炎癥(例如腎上腺炎)、生殖器官炎癥(例如盆腔炎、卵巢炎、睪丸炎、附睪炎)、骨炎癥和/或關(guān)節(jié)炎癥(例如骨性關(guān)節(jié)炎、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨髓炎、滑膜炎)、皮膚炎癥(例如蜂窩織炎、丹毒、癬、腳癬、痤瘡)、肌肉炎癥(例如肌炎)、腦部炎癥(例如腦炎、重型抑郁障礙)、神經(jīng)炎癥(例如眼睛或耳朵的不同部位的神經(jīng)炎、復(fù)雜性局部疼痛綜合征、吉蘭-巴雷綜合征)、眼部炎癥(例如瞼腺炎、葡萄膜炎、結(jié)膜炎)、耳部炎癥(例如中耳炎、乳突炎)、口腔炎癥(例如口炎、牙周炎、牙齦炎)、全身性炎癥(例如全身炎癥反應(yīng)綜合征(sirs)、代謝綜合征相關(guān)的疾病)、腹膜炎、再灌注損傷、移植排斥反應(yīng)和超敏反應(yīng)中的至少一種。

145、施用本文提供的融合蛋白和/或藥物組合物的對(duì)象可以是任何動(dòng)物或任何細(xì)胞。例如，對(duì)象可以是選自哺乳動(dòng)物的動(dòng)物，包括人類(lèi)、例如猴子的靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物、例如大鼠和小鼠的嚙齒動(dòng)物，或源自(分離自)這些動(dòng)物的細(xì)胞、組織、體液(例如血清)或培養(yǎng)物，如來(lái)源自人類(lèi)的人類(lèi)細(xì)胞、人類(lèi)組織或人類(lèi)體液(例如血清)。

146、除了作為活性成分的融合蛋白、核酸分子、載體和/或細(xì)胞外，藥物組合物還可包括藥物上可接受的載體。載體可以是任何一種常用于配制蛋白質(zhì)藥物的載體，其可以但不限于選自乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯膠、磷酸鈣、褐藻膠、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、水、糖漿、甲基纖維素、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂和礦物油。藥物組合物還可包含常用于制備藥物組合物的至少一種選自稀釋劑、賦形劑、潤(rùn)滑劑、濕潤(rùn)劑、甜味劑、調(diào)味劑、乳化劑、助懸劑和防腐劑的物質(zhì)。

147、基于組合物的總重量，作為藥物組合物中活性成分的融合蛋白、核酸分子、載體和/或細(xì)胞的含量可以但不限于為0.00001重量%至99重量%、0.0001重量%至99重量%、0.001重量%至99重量%、0.01重量%至99重量%、0.1重量%至99重量%、1重量%至99重量%、10重量%至99重量%、15重量%至99重量%、20重量%至99重量%、25重量%至99重量%、30重量%至99重量%、35重量%至99重量%、40重量%至99重量%、45重量%至99重量%、或50重量%至99重量%。

148、可通過(guò)口服途徑或非口服途徑施用融合蛋白、核酸分子、載體、細(xì)胞和/或藥物組合物。非口服施用可包括靜脈注射、皮下注射、肌肉注射、腹腔內(nèi)注射、皮內(nèi)注射、局部應(yīng)用、鼻腔施用、肺部施用和直腸施用。對(duì)于口服施用，由于蛋白質(zhì)或肽會(huì)被消化，因此口服組合物應(yīng)配制為能保護(hù)活性劑不在胃中降解。

149、此外，融合蛋白、核酸分子、載體、細(xì)胞和/或藥物組合物可配制為油介質(zhì)或含水介質(zhì)中的溶液、混懸液、糖漿或乳液，也可配制為提取物、粉末、顆粒、片劑、膠囊或注射劑，還可包含用于配制的分散劑或穩(wěn)定劑。

150、藥物組合物中活性成分的含量可根據(jù)配制方法、施用途徑、患者的年齡、體重、性別、疾病狀態(tài)、飲食、施用時(shí)間、施用間隔、施用途徑、排泄率和反應(yīng)敏感性而變化?；诨钚猿煞?融合蛋白、核酸分子、載體、細(xì)胞)，藥物組合物的每日劑量可以但不限于為0.00001mg/kg至1000mg/kg、0.00001mg/kg至500mg/kg、0.00001mg/kg至100mg/kg、0.00001mg/kg至50mg/kg、0.0001mg/kg至1000mg/kg、0.0001mg/kg至500mg/kg、0.0001mg/kg至100mg/kg、0.0001mg/kg至50mg/kg、0.001mg/kg至1000mg/kg、0.001mg/kg至500mg/kg、0.001mg/kg至100mg/kg、0.001mg/kg至50mg/kg、0.01mg/kg至1000mg/kg、0.01mg/kg至500mg/kg、0.01mg/kg至100mg/kg、0.01mg/kg至50mg/kg、0.1mg/kg至1000mg/kg、0.1mg/kg至500mg/kg、0.1mg/kg至100mg/kg、或0.1mg/kg至50mg/kg。每日劑量可被配制為單一的單位劑量或合適的分裝、或制成多劑量容器。本文所用的術(shù)語(yǔ)“藥物上有效量”是指表現(xiàn)出所需藥物活性的活性成分的量，其可以在上述劑量范圍內(nèi)。

151、另一方面，提供了用于免疫增強(qiáng)或促進(jìn)新陳代謝的保健功能食品，所述組合物包含至少一種選自融合蛋白、編碼融合蛋白的核酸分子、攜帶核酸分子的重組載體、和錨定核酸分子或重組載體的重組細(xì)胞的物質(zhì)作為活性成分。

152、另一方面，提供了用于預(yù)防和/或改善免疫相關(guān)的疾病的保健功能食品，所述食品包含至少一種選自融合蛋白、編碼融合蛋白的核酸分子、攜帶核酸分子的重組載體、和錨定核酸分子或重組載體的重組細(xì)胞的物質(zhì)作為活性成分。

153、另一方面，提供了用于預(yù)防和/或改善癌癥的保健功能食品，所述食品包含至少一種選自融合蛋白、編碼融合蛋白的核酸分子、攜帶核酸分子的重組載體、和錨定核酸分子或重組載體的重組細(xì)胞的物質(zhì)作為活性成分。

154、本文所用的術(shù)語(yǔ)“保健功能食品”是指使用日常飲食中容易缺乏的營(yíng)養(yǎng)素或?qū)θ梭w有益的原料或成分(以下簡(jiǎn)稱(chēng)“功能原料”)制造(加工)的食品，其旨在包括所有有益于保持健康或預(yù)防和/或減輕某些疾病或癥狀的食品。對(duì)最終產(chǎn)品沒(méi)有具體限制。例如，保健功能食品可以但不限于選自各種食品、飲料和食品添加劑。

155、食品組合物可包含可接受的食品添加劑，并還可包含常用于生產(chǎn)保健功能食品的合適的載體、填料和稀釋劑。

156、當(dāng)用作食品添加劑時(shí)，可直接添加或與其他食品或食品成分一起使用食品組合物，并可通過(guò)常規(guī)方法合適地使用。

157、食品組合物中活性成分的含量可根據(jù)食品的形式、預(yù)期效果和目的合適地確定，所述活性成分可以但不限于為食品總重量的0.00001重量%至99重量%、0.0001重量%至99重量%、0.001重量%至99重量%、0.01重量%至99重量%、0.1重量%至99重量%、1重量%至99重量%或10重量%至99重量%。

158、有益效果

159、本文提供的融合蛋白中包含的抗tigit抗體或其抗原結(jié)合片段阻斷了tigit的作用(例如tigit與其配體cd155(pvr)之間的相互作用)，從而激活免疫系統(tǒng)(例如增強(qiáng)效應(yīng)t細(xì)胞功能、調(diào)節(jié)和/或消耗treg細(xì)胞、增加細(xì)胞因子分泌)并表現(xiàn)出良好的抗癌效果(例如癌細(xì)胞凋亡、抑制癌細(xì)胞增殖)。此外，il-15與其受體(il-2/il-15受體)具有高結(jié)合親和力和低免疫原性，導(dǎo)致具有較強(qiáng)的免疫增強(qiáng)效果，例如在體內(nèi)施用時(shí)細(xì)胞因子分泌增加，同時(shí)通過(guò)最小化引發(fā)作為免疫原的免疫響應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)而保持安全性。il-15還表現(xiàn)出優(yōu)異的抗癌效果(例如癌細(xì)胞凋亡、抑制癌細(xì)胞增殖)。因此，融合肽結(jié)合了抗tigit抗體或其抗原結(jié)合片段和il-15的益處，并可有效用于免疫增強(qiáng)、預(yù)防和/或治療免疫相關(guān)的疾病，特別是用于預(yù)防和/或治療癌癥。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路