本發(fā)明涉及生物中，用于鑒定甜瓜全兩性花系性狀的分子標記與試劑。

背景技術：

1、甜瓜在世界各地廣泛栽培，是中國最早作為果品的瓜類，也是重要的園藝作物，具有重要的經(jīng)濟價值。

2、目前商業(yè)栽培的甜瓜品種多為雄花兩性花同株，主枝開雄花、側枝低節(jié)位開兩性花。而雄花兩性花株甜瓜果實由兩性花發(fā)育形成，側枝兩性花數(shù)量有限，甜瓜開花后，又常受授粉、營養(yǎng)狀況等條件影響，甜瓜產(chǎn)量受到限制。因此改進以全兩性花系為主要栽培株，采用與全雄株混栽，利用熊蜂授粉的新型種植模式，對提高甜瓜坐果率，增加產(chǎn)量，降低甜瓜種植成本意義重大。甜瓜全兩性花株系的獲得和鑒定具有重要意義。

3、利用與目標基因緊密連鎖的分子標記，開展分子標記輔助選擇育種可以提高目標性狀的選育效率和準確性，加快育種進程，拓寬目標基因的應用范圍，是分子標記輔助選擇育種的必要條件。因此，開發(fā)與全兩性花性狀緊密連鎖的分子標記，對于提高培育全兩性花親本的效率，拓展全兩性花基因應用范圍，促進甜瓜產(chǎn)業(yè)的穩(wěn)固發(fā)展具有重要的實際價值。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術問題是如何鑒定甜瓜花性別性狀。

2、為解決上述技術問題，本發(fā)明首先提供了甜瓜花性別分子標記或檢測所述甜瓜花性別分子標記的物質(zhì)在鑒定或輔助鑒定甜瓜花性別性狀中的應用；

3、所述甜瓜花性別分子標記為甜瓜基因組中對應于序列表中seq?id?no.1的第30位核苷酸，所述甜瓜花性別分子標記為c或t。

4、上述應用中，所述檢測所述甜瓜花性別分子標記的物質(zhì)可包括能擴增含有所述甜瓜花性別分子標記的引物對，所述引物對由名稱分別為p1和p2的單鏈dna組成，所述p1為甜瓜基因組中與seq?id?no.1的第30位上游特異結合的單鏈dna，所述p2為甜瓜基因組中與seq?id?no.1的第30位下游反向特異結合的單鏈dna。

5、上述應用中，所述p1的序列可為序列表中seq?id?no.3；所述p2的序列可為序列表中seq?id?no.4。

6、上述應用中，所述檢測所述甜瓜花性別分子標記的物質(zhì)還可包括限制性內(nèi)切酶saci。

7、上述應用中，所述檢測所述甜瓜花性別分子標記的物質(zhì)可為所述引物對，還可由所述引物對與限制性內(nèi)切酶saci組成。

8、本發(fā)明還提供了檢測甜瓜花性別性狀的方法，所述方法包括：以待測甜瓜的基因組dna為模板，利用由序列表中seq?id?no.3和seq?id?no.4所示的兩條單鏈dna組成的引物對進行pcr擴增，將所得pcr產(chǎn)物利用限制性內(nèi)切酶saci酶切，檢測酶切產(chǎn)物的大小，酶切產(chǎn)物為29和166bp的兩條dna片段的純合甜瓜為或候選為主枝開雄花、側枝低節(jié)位開兩性花甜瓜，酶切產(chǎn)物為195bp的一條dna片段的純合甜瓜為或候選為主枝側枝全開兩性花甜瓜，酶切產(chǎn)物為29、166和195bp的三條dna片段的雜合甜瓜為或候選為主枝開雄花、側枝低節(jié)位開兩性花甜瓜。

9、其中，主枝開雄花、側枝低節(jié)位開兩性花甜瓜是指側枝基部起第1-3節(jié)開兩性花，4節(jié)及以上開雄花。

10、本發(fā)明還提供了一種甜瓜育種方法，所述方法包括：以待測甜瓜的基因組dna為模板，利用由序列表中seq?id?no.3和seq?id?no.4所示的兩條單鏈dna組成的引物對進行pcr擴增，將所得pcr產(chǎn)物利用限制性內(nèi)切酶saci酶切，選擇酶切產(chǎn)物為195bp的一條dna片段的待測甜瓜作為親本進行育種。

11、本發(fā)明還提供了一種生產(chǎn)甜瓜的方法，所述方法包括：以待測甜瓜的基因組dna為模板，利用由序列表中seq?id?no.3和seq?id?no.4所示的兩條單鏈dna組成的引物對進行pcr擴增，將所得pcr產(chǎn)物利用限制性內(nèi)切酶saci酶切，選擇酶切產(chǎn)物為195bp的一條dna片段的待測甜瓜生產(chǎn)甜瓜。

12、上文中，利用由序列表中seq?id?no.3和seq?id?no.4所示的兩條單鏈dna組成的引物對進行pcr擴增的反應體系可為：2×gotaq?mix(promega，m712b)7μl，所述p1?1μl，所述p2?1μl，待測甜瓜的基因組dna，以無菌的超純水補足20μl。所述p1和所述p2在體系中的濃度均為0.5μm。

13、利用由序列表中seq?id?no.3和seq?id?no.4所示的兩條單鏈dna組成的引物對進行pcr擴增的反應條件可為：95℃預變性2min；94℃變性30s，58℃退火30s，72℃延伸15s，循環(huán)35次，72℃延伸5min。

14、所述檢測所述甜瓜花性別分子標記的物質(zhì)，也屬于本發(fā)明的保護范圍。

15、所述檢測所述甜瓜花性別分子標記的物質(zhì)在制備鑒定或輔助鑒定甜瓜花性別性狀產(chǎn)品中的應用，也屬于本發(fā)明的保護范圍。

16、所述檢測所述甜瓜花性別分子標記的物質(zhì)在甜瓜育種中的應用，也屬于本發(fā)明的保護范圍。

17、所述甜瓜花性別分子標記在鑒定或輔助鑒定甜瓜花性別性狀中的應用，也屬于本發(fā)明的保護范圍。

18、所述甜瓜花性別分子標記在甜瓜育種中的應用，也屬于本發(fā)明的保護范圍。

19、本發(fā)明中，所述甜瓜花性狀均為自然生長下的花的性狀。

20、實驗證明，本發(fā)明的甜瓜花性別分子標記可用于鑒定甜瓜花的性狀，可利用本發(fā)明的甜瓜花性別分子標記進行分子標記輔助育種，可對全兩性花的基因型進行選擇用于甜瓜的生產(chǎn)。本發(fā)明具有很好的應用前景。

21、下面結合具體實施方式對本發(fā)明進行進一步的詳細描述，給出的實施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。以下提供的實施例可作為本技術領域普通技術人員進行進一步改進的指南，并不以任何方式構成對本發(fā)明的限制。

22、生物材料保藏說明

23、保藏單位簡稱：cgmcc

24、保藏單位名稱：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心

25、保藏單位地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，郵政編碼：100101

26、保藏日期：2023年05月08日

27、保藏中心登記入冊編號：cgmcc?no.26394

28、分類命名：甜瓜(cucumis?melo)

29、植株編號：13c-wt

30、生物材料保藏說明

31、保藏單位簡稱：cgmcc

32、保藏單位名稱：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心

33、保藏單位地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，郵政編碼：100101

34、保藏日期：2023年05月08日

35、保藏中心登記入冊編號：cgmcc?no.26395

36、分類命名：甜瓜(cucumis?melo)

37、植株編號：13c-68

技術特征：

1.甜瓜花性別分子標記或檢測所述甜瓜花性別分子標記的物質(zhì)在鑒定或輔助鑒定甜瓜花性別性狀中的應用；

2.根據(jù)權利要求1所述的應用，其特征在于：所述檢測所述甜瓜花性別分子標記的物質(zhì)包括能擴增含有所述甜瓜花性別分子標記的引物對，所述引物對由名稱分別為p1和p2的單鏈dna組成，所述p1為甜瓜基因組中與seq?id?no.1的第30位上游特異結合的單鏈dna，所述p2為甜瓜基因組中與seq?id?no.1的第30位下游反向特異結合的單鏈dna。

3.根據(jù)權利要求2所述的應用，其特征在于：所述p1的序列為序列表中seq?id?no.3；所述p2的序列為序列表中seq?id?no.4。

4.根據(jù)權利要求2或3所述的應用，其特征在于：所述檢測所述甜瓜花性別分子標記的物質(zhì)還包括限制性內(nèi)切酶saci。

5.檢測甜瓜花性別性狀的方法，包括：以待測甜瓜的基因組dna為模板，利用由序列表中seq?id?no.3和seq?id?no.4所示的兩條單鏈dna組成的引物對進行pcr擴增，將所得pcr產(chǎn)物利用限制性內(nèi)切酶saci酶切，檢測酶切產(chǎn)物的大小，酶切產(chǎn)物為29和166bp的兩條dna片段的純合甜瓜為或候選為主枝開雄花、側枝低節(jié)位開兩性花甜瓜，酶切產(chǎn)物為195bp的一條dna片段的純合甜瓜為或候選為主枝側枝全開兩性花甜瓜，酶切產(chǎn)物為29、166和195bp的三條dna片段的雜合甜瓜為或候選為主枝開雄花、側枝低節(jié)位開兩性花甜瓜。

6.甜瓜育種方法，包括：以待測甜瓜的基因組dna為模板，利用由序列表中seq?id?no.3和seq?id?no.4所示的兩條單鏈dna組成的引物對進行pcr擴增，將所得pcr產(chǎn)物利用限制性內(nèi)切酶saci酶切，選擇酶切產(chǎn)物為195bp的一條dna片段的待測甜瓜作為親本進行育種。

7.一種生產(chǎn)甜瓜的方法，包括：以待測甜瓜的基因組dna為模板，利用由序列表中seqidno.3和seq?id?no.4所示的兩條單鏈dna組成的引物對進行pcr擴增，將所得pcr產(chǎn)物利用限制性內(nèi)切酶saci酶切，選擇酶切產(chǎn)物為195bp的一條dna片段的待測甜瓜生產(chǎn)甜瓜。

8.權利要求1-4中任一所述檢測所述甜瓜花性別分子標記的物質(zhì)。

9.權利要求1-4中任一所述檢測所述甜瓜花性別分子標記的物質(zhì)在制備鑒定或輔助鑒定甜瓜花性別性狀產(chǎn)品中的應用；

10.權利要求1中所述甜瓜花性別分子標記在鑒定或輔助鑒定甜瓜花性別性狀中的應用；

技術總結
本發(fā)明公開了用于鑒定甜瓜全兩性花系性狀的分子標記與試劑。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)甜瓜花性別分子標記與甜瓜花的性別有關，該甜瓜花性別分子標記為甜瓜基因組中對應于序列表中SEQ?ID?No.1的第30位核苷酸，其為C或T。實驗證明，本發(fā)明的甜瓜花性別分子標記可用于鑒定甜瓜花的性狀，可利用本發(fā)明的甜瓜花性別分子標記進行分子標記輔助育種，可對全兩性花的基因型進行選擇用于甜瓜的生產(chǎn)。本發(fā)明具有很好的應用前景。

技術研發(fā)人員：張忠華,孫進京,歐晴晴,柴森,李陽,國慧欣
受保護的技術使用者：青島農(nóng)業(yè)大學
技術研發(fā)日：
技術公布日：2025/1/2