【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明屬于原兒茶酸制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用龍眼殼制備原兒茶酸的工藝。

背景技術(shù)：

1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑和1-乙基-3-甲基咪唑醋酸鹽溶液是在室溫或近室溫下完全由陰、陽離子組成的液體，由特定的、體積相對較大的、結(jié)構(gòu)不對稱的有機(jī)陽離子和體積相對較小的無機(jī)陰離子組成。以上兩種離子化合物中，陰陽離子之間的作用力為庫侖力，其大小與陰陽離子的電荷數(shù)量及半徑有關(guān)，離子半徑越大，它們之間的作用力越小，以至于熔點(diǎn)接近室溫。由于1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑和1-乙基-3-甲基咪唑醋酸鹽本身具有的許多傳統(tǒng)溶劑無法比擬的優(yōu)點(diǎn)，可將其作為綠色溶劑應(yīng)用于有效成分提取。利用1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑和1-乙基-3-甲基咪唑醋酸鹽提取揮發(fā)油，可避免傳統(tǒng)有機(jī)溶劑提取法提取率低，成本高，高溫破壞香氣成分的缺點(diǎn)。

龍眼殼是無患子科植物龍眼的成熟種子，除少量用于中藥外，大部分棄之未用，造成了環(huán)境污染和資源浪費(fèi)。現(xiàn)代臨床研究發(fā)現(xiàn)，從龍眼殼中可提取原兒茶酸，其單體呈白色至褐色結(jié)晶性粉末，現(xiàn)代藥理實驗表明，其對金色葡萄球菌、鏈球菌、肺炎雙球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、痢疾桿菌都有明顯的抑制作用，并有收斂和促進(jìn)傷面愈合的作用，故目前在臨床上用于燒傷、小兒肺炎、菌痢、急性盂腎炎、急性胰腺炎及某種潰瘍病的治療。同時其平喘、祛痰、解蛇毒等部分功效國內(nèi)亦有相關(guān)報道。原兒茶酸不僅應(yīng)用于醫(yī)藥中間體、染料等亦作為一種分析試劑。

目前從龍眼殼中提取原兒茶酸的報道文獻(xiàn)較少，因此如何開發(fā)提取龍眼殼中的原兒茶酸，減少龍眼殼造成的環(huán)境污染和資源浪費(fèi)，具有十分重要的意義。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供的一種利用龍眼殼制備原兒茶酸的工藝，以解決目前龍眼殼除少量用于中藥外，大部分棄之未用，造成環(huán)境污染和資源浪費(fèi)的問題。

為解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)工藝：

一種利用龍眼殼制備原兒茶酸的工藝，包括以下步驟：

s1：將龍眼殼進(jìn)行粉碎并過篩子，制得龍眼殼粉末；

s2：稱取步驟s1制得的龍眼殼粉末42-125份，利用低溫液氮打漿技術(shù)，在溫度小于-10℃條件下打漿，得龍眼殼漿液，將龍眼殼漿液與6-22份1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑、15-32份1-乙基-3-甲基咪唑醋酸鹽混合均勻，放入提取瓶中，在超聲波功率為300-450w，溫度為76-92℃條件下提取1.2-1.6h，制得提取液，調(diào)節(jié)提取液的ph值至4.2-5.3，溫度控制為45-52℃，通過活性炭脫色除雜，過濾后制得一次脫色液；

s3：將步驟s2制得的一次脫色液濃縮干燥，制得浸提膏，采用于浸提膏5-6.2倍體積的42-46℃的水進(jìn)行溶解，采用無水乙酸乙酯溶劑進(jìn)行萃取2-3次，繼續(xù)用無水乙酸乙酯進(jìn)行2-3次結(jié)晶處理，結(jié)晶過程中固液比為1:4.5-5(w/v)，制得結(jié)晶粗品；

s4：將步驟s3制得的粗晶經(jīng)65％-75％的乙醇溶解，調(diào)節(jié)溶液的ph值至4.5-5.8，溫度控制為45-58℃，通過活性炭脫色除雜，過濾后制得二次脫色液；

s5：將步驟s4制得的二次脫色液濃縮至每毫升中含化合物b3％-10％，采用大孔吸附樹脂分離提純制得化合物b的液體，條件為：解析劑為46％-58％的乙醇溶液，其用量是大孔吸附樹脂體積的1.8-3.2倍，水洗區(qū)為去離子水，大孔吸附樹脂吸附再生溶劑為2.8％-5.6％的koh溶液，吸附區(qū)流速6-10bv/h，解吸區(qū)流速10-20bv/h，水洗區(qū)流速20-25bv/h，再生區(qū)流速6-10bv/h，切換時間為700-750s，溫度為43-52℃，壓力為0.5-0.8mpa；

s6：將步驟s5制得的化合物b液體進(jìn)行濃縮后結(jié)晶，所得晶體在溫度為40-45℃下真空干燥，制得化合物b，經(jīng)hplc法分析測定化合物b為原兒茶酸。

優(yōu)選地，步驟s1中所述篩子的目數(shù)為30-80。

優(yōu)選地，步驟s2中所述超聲波提取條件：功率為450w，溫度為92℃條件下提取1.2h。

優(yōu)選地，步驟s2中所述調(diào)節(jié)提取液的ph值至5.2。

優(yōu)選地，步驟s2中所述通過活性炭脫色除雜的時間為0.9-1.6h。

優(yōu)選地，步驟s4中所述通過活性炭脫色除雜的時間為0.6-1.2h。

優(yōu)選地，步驟s5中所述大孔吸附樹脂為h-103型大孔吸附樹脂。

優(yōu)選地，步驟s6中所述濃縮為真空減壓濃縮。

優(yōu)選地，步驟s6中所述結(jié)晶是在溫度為3-7℃下進(jìn)行的。

優(yōu)選地，步驟s6中所述晶體在溫度為40-43℃下真空干燥至含水率≤0.8％。

本發(fā)明具有以下有益效果：

(1)本發(fā)明的工藝制得的原兒茶酸的純度在99.21％以上，且能作為定性、定量的對照品；

(2)本發(fā)明的工藝可有效提取龍眼殼中的原兒茶酸，有利于減少龍眼殼造成的環(huán)境污染和資源浪費(fèi)。

【具體實施方式】

為便于更好地理解本發(fā)明，通過以下實施例加以說明，這些實施例屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍，但不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。

在實施例中，所述利用龍眼殼制備原兒茶酸的工藝，包括以下步驟：

s1：將龍眼殼進(jìn)行粉碎并過30-80目篩子，制得龍眼殼粉末；

s2：稱取步驟s1制得的龍眼殼粉末42-125份，利用低溫液氮打漿技術(shù)，在溫度小于-10℃條件下打漿，得龍眼殼漿液，將龍眼殼漿液與6-22份1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑、15-32份1-乙基-3-甲基咪唑醋酸鹽混合均勻，放入提取瓶中，在超聲波功率為300-450w，溫度為76-92℃條件下提取1.2-1.6h，制得提取液，調(diào)節(jié)提取液的ph值至4.2-5.3，溫度控制為45-52℃，通過活性炭脫色除雜0.9-1.6h，過濾后制得一次脫色液；

s3：將步驟s2制得的一次脫色液濃縮干燥，制得浸提膏，采用于浸提膏5-6.2倍體積的42-46℃的水進(jìn)行溶解，采用無水乙酸乙酯溶劑進(jìn)行萃取2-3次，繼續(xù)用無水乙酸乙酯進(jìn)行2-3次結(jié)晶處理，結(jié)晶過程中固液比為1:4.5-5(w/v)，制得結(jié)晶粗品；

s4：將步驟s3制得的粗晶經(jīng)65％-75％的乙醇溶解，調(diào)節(jié)溶液的ph值至4.5-5.8，溫度控制為45-58℃，通過活性炭脫色除雜0.6-1.2h，過濾后制得二次脫色液；

s5：將步驟s4制得的二次脫色液濃縮至每毫升中含化合物b3％-10％，采用h-103型大孔吸附樹脂分離提純制得化合物b的液體，條件為：解析劑為46％-58％的乙醇溶液，其用量是大孔吸附樹脂體積的1.8-3.2倍，水洗區(qū)為去離子水，大孔吸附樹脂吸附再生溶劑為2.8％-5.6％的koh溶液，吸附區(qū)流速6-10bv/h，解吸區(qū)流速10-20bv/h，水洗區(qū)流速20-25bv/h，再生區(qū)流速6-10bv/h，切換時間為700-750s，溫度為43-52℃，壓力為0.5-0.8mpa；

s6：將步驟s5制得的化合物b液體進(jìn)行真空減壓濃縮后，在溫度為3-7℃下進(jìn)行結(jié)晶，所得晶體在溫度為40-43℃下真空干燥至含水率≤0.8％，制得化合物b。

實施例1

一種利用龍眼殼制備原兒茶酸的工藝，包括以下步驟：

s1：將龍眼殼進(jìn)行粉碎并過60目篩子，制得龍眼殼粉末；

s2：稱取步驟s1制得的龍眼殼粉末85份，利用低溫液氮打漿技術(shù)，在溫度為-12℃條件下打漿，得龍眼殼漿液，將龍眼殼漿液與14份1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑、25份1-乙基-3-甲基咪唑醋酸鹽混合均勻，放入提取瓶中，在超聲波功率為400w，溫度為86℃條件下提取1.5h，制得提取液，調(diào)節(jié)提取液的ph值至4.6，溫度控制為50℃，通過活性炭脫色除雜1.3h，過濾后制得一次脫色液；

s3：將步驟s2制得的一次脫色液濃縮干燥，制得浸提膏，采用于浸提膏5.6倍體積的45℃的水進(jìn)行溶解，采用無水乙酸乙酯溶劑進(jìn)行萃取2次，繼續(xù)用無水乙酸乙酯進(jìn)行2次結(jié)晶處理，結(jié)晶過程中固液比為1:4.8w/v)，制得結(jié)晶粗品；

s4：將步驟s3制得的粗晶經(jīng)70％的乙醇溶解，調(diào)節(jié)溶液的ph值至5.2，溫度控制為53℃，通過活性炭脫色除雜0.9h，過濾后制得二次脫色液；

s5：將步驟s4制得的二次脫色液濃縮至每毫升中含化合物b7％，采用h-103型大孔吸附樹脂分離提純制得化合物b的液體，條件為：解析劑為52％的乙醇溶液，其用量是大孔吸附樹脂體積的2.5倍，水洗區(qū)為去離子水，大孔吸附樹脂吸附再生溶劑為4.2％的koh溶液，吸附區(qū)流速8bv/h，解吸區(qū)流速15bv/h，水洗區(qū)流速22bv/h，再生區(qū)流速8bv/h，切換時間為730s，溫度為48℃，壓力為0.7mpa；

s6：將步驟s5制得的化合物b液體進(jìn)行真空減壓濃縮后，在溫度為6℃下進(jìn)行結(jié)晶，所得晶體在溫度為42℃下真空干燥至含水率為0.8％，制得化合物b。

實施例2

一種利用龍眼殼制備原兒茶酸的工藝，包括以下步驟：

s1：將龍眼殼進(jìn)行粉碎并過30目篩子，制得龍眼殼粉末；

s2：稱取步驟s1制得的龍眼殼粉末43份，利用低溫液氮打漿技術(shù)，在溫度為-10℃條件下打漿，得龍眼殼漿液，將龍眼殼漿液與7份1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑、15份1-乙基-3-甲基咪唑醋酸鹽混合均勻，放入提取瓶中，在超聲波功率為300w，溫度為76℃條件下提取1.6h，制得提取液，調(diào)節(jié)提取液的ph值至4.2，溫度控制為46℃，通過活性炭脫色除雜1.6h，過濾后制得一次脫色液；

s3：將步驟s2制得的一次脫色液濃縮干燥，制得浸提膏，采用于浸提膏5倍體積的42℃的水進(jìn)行溶解，采用無水乙酸乙酯溶劑進(jìn)行萃取2次，繼續(xù)用無水乙酸乙酯進(jìn)行2次結(jié)晶處理，結(jié)晶過程中固液比為1:4.5(w/v)，制得結(jié)晶粗品；

s4：將步驟s3制得的粗晶經(jīng)65％的乙醇溶解，調(diào)節(jié)溶液的ph值至4.5，溫度控制為45℃，通過活性炭脫色除雜1.2h，過濾后制得二次脫色液；

s5：將步驟s4制得的二次脫色液濃縮至每毫升中含化合物b4％，采用h-103型大孔吸附樹脂分離提純制得化合物b的液體，條件為：解析劑為46％的乙醇溶液，其用量是大孔吸附樹脂體積的1.8倍，水洗區(qū)為去離子水，大孔吸附樹脂吸附再生溶劑為2.8％的koh溶液，吸附區(qū)流速6bv/h，解吸區(qū)流速10bv/h，水洗區(qū)流速20bv/h，再生區(qū)流速6bv/h，切換時間為750s，溫度為43℃，壓力為0.5mpa；

s6：將步驟s5制得的化合物b液體進(jìn)行真空減壓濃縮后，在溫度為3℃下進(jìn)行結(jié)晶，所得晶體在溫度為40℃下真空干燥至含水率為0.7％，制得化合物b。

實施例3

一種利用龍眼殼制備原兒茶酸的工藝，包括以下步驟：

s1：將龍眼殼進(jìn)行粉碎并過80目篩子，制得龍眼殼粉末；

s2：稱取步驟s1制得的龍眼殼粉末123份，利用低溫液氮打漿技術(shù)，在溫度為-15℃條件下打漿，得龍眼殼漿液，將龍眼殼漿液與20份1-烯丙基-3-甲基氯化咪唑、30份1-乙基-3-甲基咪唑醋酸鹽混合均勻，放入提取瓶中，在超聲波功率為450w，溫度為92℃條件下提取1.2h，制得提取液，調(diào)節(jié)提取液的ph值至5.3，溫度控制為52℃，通過活性炭脫色除雜0.9h，過濾后制得一次脫色液；

s3：將步驟s2制得的一次脫色液濃縮干燥，制得浸提膏，采用于浸提膏6.2倍體積的46℃的水進(jìn)行溶解，采用無水乙酸乙酯溶劑進(jìn)行萃取3次，繼續(xù)用無水乙酸乙酯進(jìn)行3次結(jié)晶處理，結(jié)晶過程中固液比為1:4.9(w/v)，制得結(jié)晶粗品；

s4：將步驟s3制得的粗晶經(jīng)75％的乙醇溶解，調(diào)節(jié)溶液的ph值至5.8，溫度控制為58℃，通過活性炭脫色除雜0.6h，過濾后制得二次脫色液；

s5：將步驟s4制得的二次脫色液濃縮至每毫升中含化合物b10％，采用h-103型大孔吸附樹脂分離提純制得化合物b的液體，條件為：解析劑為58％的乙醇溶液，其用量是大孔吸附樹脂體積的3.2倍，水洗區(qū)為去離子水，大孔吸附樹脂吸附再生溶劑為5.6％的koh溶液，吸附區(qū)流速10bv/h，解吸區(qū)流速20bv/h，水洗區(qū)流速25bv/h，再生區(qū)流速10bv/h，切換時間為700，溫度為52℃，壓力為0.8mpa；

s6：將步驟s5制得的化合物b液體進(jìn)行真空減壓濃縮后，在溫度為6℃下進(jìn)行結(jié)晶，所得晶體在溫度為43℃下真空干燥至含水率為0.6％，制得化合物b。

以下以實施例1為例，詳述對化合物b的測定工藝：

一、tlc法(薄層色譜法)：

(1)對照品溶液制備：精密稱取原兒茶酸對照品，其純度為99％以上，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。

(2)供試品溶液制備：取化合物b，加適量甲醇使溶解，作為供試品溶液。

(3)鑒別：參照中國藥典2005年版一部附錄ⅵb進(jìn)行試驗，吸取供試品溶液和對照品溶液各10μl，分別點(diǎn)上同一硅膠g薄層板上，以氯仿-丙酮-甲醇為6:1:1的比例配制的溶液作為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(256nm)下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜的相應(yīng)位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

(4)結(jié)果：薄層層析檢查測定化合物b為原兒茶酸。

二、hplc法(高效液相層析法)

(1)儀器與試劑

高效液相色譜儀：日本島津lc-6a，高效液相色譜柱：中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所產(chǎn)品，ф4.6×250mm，填料為nucleosil7c18，紫外256nm檢測。

(2)方法

1)色譜條件：高效液相色譜柱nucleosil7c18(ф4.6×250mm)，流動相為甲醇-1％冰醋酸溶液(8:95，v/v)，流速為1ml/min，柱溫為室溫，檢測波長256nm下檢測，理論板數(shù)原兒茶酸峰應(yīng)不低于4000。

2)對照品溶液和供試品溶液的制備同tlc法，在此不再贅述。

3)精密度實驗吸取對照品和供試品溶液各10μl，注入高效液相色譜儀，測定原兒茶酸的含量，測定化合物b為原兒茶酸。

(3)結(jié)果：經(jīng)hplc測定與原兒茶酸對照品保留的時間一致，白色晶體，熔點(diǎn)為200-202℃，根據(jù)數(shù)據(jù)分析與文獻(xiàn)結(jié)合，確定化合物b為原兒茶酸。

通過實施例1表明，本發(fā)明利用龍眼殼制備原兒茶酸的工藝，可靠，且提取純度高，以實施例2、3作同樣的試驗，也同樣達(dá)到相近的效果。

采用hplc法對實施例1-3制得的原兒茶酸的純度進(jìn)行檢測，結(jié)果如下表所示。

由以上表可知，本發(fā)明的工藝制得的原兒茶酸的純度在99.21％以上，且能作為定性、定量的對照品。

以上內(nèi)容是結(jié)合具體的優(yōu)選實施方式對本發(fā)明所作的進(jìn)一步詳細(xì)說明，不能認(rèn)定本發(fā)明的具體實施只局限于這些說明，對于所屬技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，都應(yīng)當(dāng)視為屬于本發(fā)明由所提交的權(quán)利要求書確定的專利保護(hù)范圍。