本發(fā)明涉及一種有機(jī)菌肥，更具體的說涉及一種對青蒿幼苗有促生作用的哈茨木霉菌肥及其應(yīng)用。

技術(shù)背景

有機(jī)菌肥是將一種或多種有益微生物植入有機(jī)物中制備而成的一種新型肥料，多效有機(jī)菌肥的有機(jī)物既是肥力的基礎(chǔ)，又是有益微生物的培養(yǎng)基質(zhì)。這種新型肥料兼具促生長、抗病、改善土質(zhì)、無農(nóng)殘等多重優(yōu)點(diǎn)，目前已在國內(nèi)外得到大量應(yīng)用，且取得了顯著效果。

木霉(trichodermapers.exfr.)屬于半知菌亞門、絲孢綱、絲孢目的黏菌種類，廣泛存在于土壤、根際、葉面、種子和球莖等生態(tài)環(huán)境中。木霉菌落生長迅速，呈不定型棉絮狀或致密叢束狀。其表面的顏色多呈綠色。菌絲有隔分枝。厚垣孢子有或無。分生孢子梗是菌絲的短側(cè)枝。側(cè)枝上對稱或互生分枝，形成2級和3級分枝。分枝角度為銳角或近于直角，在分枝末端形成瓶狀小梗。分生孢子多為卵圓形。無色或綠色，簇生于小梗頂端。

自1932年weindling發(fā)現(xiàn)木素木霉(t.lignorum)寄生于多種植物病原真菌后，木霉菌作為一類生防菌顯示出巨大的應(yīng)用潛力。許多研究者觀察到在藻類、半知菌、子囊菌和擔(dān)子菌中有木霉寄生物。木霉菌能寄生的植物病原菌包括絲核菌屬(rhimetonia)、小核菌(selerolium)、核盤菌屬(sclerotinia)、長蠕孢屬(helminth)、鐮刀菌屬(fusarium)、毛盤孢屬(colletotriehum)、輪枝孢屬(yerticillium)、黑星菌屬(venturia)、內(nèi)座殼屬(endothia)、腐霉屬((pythium)、疫霉屬(phytophlhora)、聞座殼屬(diaporthe)和黑星孢屬(fusicladium)等。因此，木霉具有抗病害作用；由于它能產(chǎn)纖維素酶、葡聚糖酶、木聚糖酶、幾丁質(zhì)酶和蛋白酶等酶類化合物，又能合成核黃素、生產(chǎn)抗生素、轉(zhuǎn)化甾族化合物，所以它是重要工業(yè)制劑的生產(chǎn)菌；木霉具有很強(qiáng)的分解纖維素能力，有利于作物對土壤養(yǎng)分的吸收利用，具有促進(jìn)植物生長的作用；木霉還能降解農(nóng)藥，改善土質(zhì)；且對環(huán)境無危害性。目前發(fā)現(xiàn)的木霉多種多樣，包括侵占木霉(t.aggressivum)、棘孢木霉(t.asperellum)、深綠木霉(t.atroviride)、黃綠木霉(t.aureoviride)、短密木霉(t.brevicompactum)、蠟素木霉(t.cerinum)、綠孢木霉(t.chlorosporum)、橘綠木霉(t.citrinoviride)、致密木霉(t.compactum)、頂孢木霉(t.fertile)、鉤狀木霉(t.hamatum)、哈茨木霉(t.harzianum)、交織木霉(t.intricatum)康寧木霉(t.koningii)、擬康寧木霉(t.koningiopsis)、長枝木霉(t.longibranchiatum)、長毛木霉(t.longipile)等?？傊?，木霉是研發(fā)有機(jī)菌肥的優(yōu)質(zhì)菌種之一。

以綠色木霉為主要成分的利江牌微生物肥(綠色木霉)，是利江實(shí)業(yè)公司研制而成的一種木霉微生物肥料。該菌肥對黃瓜、芹菜、油菜等都有顯著的增產(chǎn)作用，并且能夠促進(jìn)早熟，改善作物品質(zhì)，還可抑制病蟲害的發(fā)生。

浙江大學(xué)研發(fā)的以哈茨木霉發(fā)酵液為主要成分的微生物多效有機(jī)菌肥，對作物增產(chǎn)效果顯著，并于1997年通過省級鑒定，獲肥料登記和國家專利。所登記的高效微生物態(tài)氮由哈茨木霉深層發(fā)酵液經(jīng)去渣減壓濃縮精制而成。其產(chǎn)品經(jīng)過大田試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)與使用傳統(tǒng)的尿素、廄肥相比，對白菜的增產(chǎn)效果明顯，且使用簡單，在蔬菜上具有廣闊的應(yīng)用前景。

浙江大學(xué)生物技術(shù)研究所研制推廣的威綠達(dá)(virida)菌肥以綠色木霉為主，毛殼菌、枯草芽孢桿菌為輔混配制成，主要應(yīng)用于綠色蔬菜生產(chǎn)、旱地作物、草地保護(hù)，也可以作花卉肥料。該生物制劑以城市生活垃圾為培養(yǎng)基質(zhì)生產(chǎn)而成，它既含有作物生長所需的有機(jī)和無機(jī)成分，又具有防病促進(jìn)生長的作用，并且可以改良土壤，是一種多功能的生物菌肥。

可見，以木霉為主要成分的微生物肥料具有多種效果，而且符合當(dāng)今農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)綠色環(huán)保無公害無農(nóng)殘及可持續(xù)發(fā)展的要求，具有廣闊的市場前景。

青蒿artemisiaannual.,又名黃花蒿,是菊科一年生藥用草本植物。是傳統(tǒng)中藥材，其提取物青蒿素對腦瘧疾和氯喹瘧疾具有高效低毒的抗瘧性能,who已經(jīng)認(rèn)定復(fù)方青蒿素成藥為目前最安全有效的抗瘧藥。目前青蒿素主要從青蒿植株中提取。青蒿原料主要來自人工栽培，因生產(chǎn)中長期大量施用化肥，導(dǎo)致土壤酸化，環(huán)境污染。亟待尋找綠色環(huán)保無農(nóng)殘的肥料進(jìn)行替代。而我們分離出一株哈茨木霉h2菌株的液體發(fā)酵菌絲體對青蒿幼苗生長具有顯著的促生作用。因此，用該菌株制作菌肥，可減少乃至完全替代青蒿幼苗生長時期化肥的施用，從而達(dá)到保護(hù)土壤和環(huán)境的目的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

為了解決青蒿幼苗生產(chǎn)中出現(xiàn)的化肥施用過多的問題，本發(fā)明提供了一種對青蒿幼苗有促生作用的哈茨木霉菌肥，所述哈茨木霉菌肥為哈茨木霉h2菌株的菌絲體懸浮液，哈茨木霉h2菌株的特征核苷酸序列為th101特異序列。

所述哈茨木霉菌h2菌株從羊肚菌栽培菌袋污染霉菌中分離得到。

對青蒿幼苗有促生作用的哈茨木霉菌肥的制備方法，包括以下步驟：

1)從多包羊肚菌栽培菌袋污染霉菌中分離出4株哈茨木霉菌；

2)從4株哈茨木霉菌中篩選出生長最旺盛h2菌株，作為哈茨木霉菌肥生產(chǎn)菌株

3)土豆200g切碎煮汁，汁水去渣后，加葡萄糖20g，定容至1升，高溫滅菌制成培養(yǎng)液；

4)在培養(yǎng)液中接種篩選出的哈茨木霉h2菌株試管種，25℃，135rpm，黑暗，振蕩培養(yǎng)，約5-7天，液體中長滿菌球后停止培養(yǎng)；

5)濾出菌球，攪拌機(jī)勻漿，加清水制作菌絲體懸浮液，每1ml菌懸液含有不低于0.5g菌絲體，得到哈茨木霉菌肥。

上述對青蒿幼苗有促生作用的哈茨木霉菌肥在青蒿幼苗種植中的應(yīng)用。

本發(fā)明的有益技術(shù)效果是：化肥造成土壤板結(jié)，污染水體，且會影響藥材的品質(zhì)；哈茨木霉菌肥具有改善土質(zhì)的作用，可提高藥材品質(zhì)；微生物肥不含重金屬，且對重金屬污染的土壤有修復(fù)作用；化肥降低作物根際菌群多樣性，增加病害發(fā)生率。哈茨木霉菌肥具有較強(qiáng)抑制病原菌的作用，可降低作物病害發(fā)生率；菌肥和化肥復(fù)配可提高化肥的利用效率，而單施化肥造成養(yǎng)分的流失和固定，利用率越來越低；采用菌肥生產(chǎn)過程無污染，可利用廢物，耗能較低。化肥生產(chǎn)過程污染嚴(yán)重，且高耗能耗資源。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1健壯哈茨木霉菌株的篩選

從羊肚菌菌袋污染霉菌中分離出的4株哈茨木霉菌株接種于pda平板培養(yǎng)基中央，25℃，黑暗培養(yǎng),每隔24h測量其菌落直徑,每個處理設(shè)3次重復(fù)。結(jié)果如表1所示。

表1不同哈茨木霉菌株菌落生長速度

從表1可見，哈茨木霉h2菌株生長速度最快，選取作為菌肥生產(chǎn)菌株，其菌株的特異性核苷酸序如核苷酸序列表th101特異序列所述。

實(shí)施例2哈茨木霉菌肥對青蒿幼苗的促生效果考察

1哈茨木霉菌肥制備

土豆200g切碎粒，煮汁過濾，濾液加葡萄糖20g，加水至1升，裝1升三角瓶，300-400ml/瓶。高溫高壓滅菌。接種實(shí)施例1篩選得到的哈茨木霉h2菌株試管種，25℃，135rpm，黑暗，振蕩培養(yǎng)。約5-7天，液體中長滿菌球后，停止培養(yǎng)。濾出菌球，攪拌器勻漿后加清水制作菌絲體懸浮液。

2菌肥施用

3月在育苗格中培養(yǎng)青蒿苗，間苗后留1株/格。4月下旬，青蒿苗長至15-20厘米左右時，施用步驟1制作的菌肥。在苗根際打洞，施用菌懸液約5ml/株，蓋土。部分幼苗在5月初第二次施用哈茨木霉菌肥。以施用氮磷鉀復(fù)合肥100mg/株和施用清水為對照。50-60株/處理。施肥約25天后，統(tǒng)計(jì)苗的各項(xiàng)生長指標(biāo)，比較不同處理的效果，結(jié)果如表2。

表2哈茨木霉菌肥對青蒿幼苗生長的影響

從以上結(jié)果可以看出，施用菌肥相對于清水對青蒿幼苗有顯著的促生長作用，且其增產(chǎn)效果和施用復(fù)合肥沒有顯著差別。施用兩次菌肥和一次菌肥的產(chǎn)量沒有顯著性差別，這一特點(diǎn)可節(jié)約肥料和人工。可見哈茨木霉菌肥可作為青蒿的苗肥，全部代替或部分代替化肥。

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<110>重慶市中藥研究院

<120>一種對青蒿幼苗有促進(jìn)作用的哈茨木霉菌肥及其應(yīng)用

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