本發(fā)明涉及一種新的達(dá)肝素鈉的制備工藝。

背景技術(shù)：

達(dá)肝素鈉是一種低分子肝素鈉鹽，主要用于治療急性深靜脈血栓。預(yù)防急性腎功能衰竭或慢性腎功能不全者進(jìn)行血液透析和血液過(guò)濾期間體外循環(huán)系統(tǒng)中發(fā)生凝血。治療不穩(wěn)定型冠狀動(dòng)脈疾病，如：不穩(wěn)定型心絞痛和非q波型心肌梗死。預(yù)防與手術(shù)有關(guān)的血栓形成。

與普通低分子肝素鈉相比，達(dá)肝素鈉具有如下明顯優(yōu)勢(shì)：更低的重均分子量(5600-6400)，更大的axa/aiia值(1.9-3.2)，更長(zhǎng)的半衰期(2.8-4.1h)，這些特點(diǎn)使達(dá)肝素鈉較普通低分子肝素鈉更為安全、有效。

目前，已有7篇專利報(bào)道的達(dá)肝素鈉制備工藝，其中有5篇已經(jīng)授權(quán)。

專利cn101942038a在肝素鈉溶液中加入含有甲基的溶劑，在特定穩(wěn)定和酸性條件下，與亞硝酸鈉反應(yīng)，硼氫化鈉還原，乙醇沉淀，紫外滅菌器照射，乙醇沉淀，過(guò)氧化氫氧化，乙醇沉淀，乙醇脫水，真空干燥得到達(dá)肝素鈉，在產(chǎn)品純化上采用乙醇分級(jí)沉淀。缺點(diǎn)是在制備過(guò)程中，加入了含有甲基的有機(jī)溶劑，導(dǎo)致在最終達(dá)肝素鈉成品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中需要加入有機(jī)殘留溶劑檢測(cè)，增加了檢測(cè)工作量和降低了產(chǎn)品的質(zhì)量。

專利cn102558393a采用的工藝是將肝素鈉溶于純化水中，鹽酸調(diào)節(jié)ph值，亞硝酸鈉降解，硼氫化鈉還原，乙醇沉淀，雙氧水氧化脫色，再用超濾膜超濾，凍干得到達(dá)肝素鈉，在產(chǎn)品純化上采用超濾膜超濾。缺點(diǎn)是使用了昂貴的分子量截流過(guò)濾膜，大量的使用截流過(guò)濾膜，增加了生產(chǎn)成本。

專利cn104045743a采用的工藝是肝素鈉溶于純化水中，用鹽酸或者醋酸調(diào)節(jié)ph值，亞硝酸鈉降解，硼氫化鈉還原，乙醇沉淀，超濾膜超濾，除菌，凍干得到達(dá)肝素鈉。缺點(diǎn)是本工藝沒(méi)有加入雙氧水氧化除雜脫色，降低了最終產(chǎn)品達(dá)肝素鈉的質(zhì)量，并且采用超濾膜超濾進(jìn)行純化，增加了生產(chǎn)成本。

專利cn104045744a采用的工藝是肝素鈉溶于純化水中，用醋酸調(diào)節(jié)ph值，亞硝酸鈉降解，硼氫化鈉還原，陰離子交換樹脂進(jìn)行層析，洗脫液用乙醇沉淀，除菌，凍干得到達(dá)肝素鈉。缺點(diǎn)是本工藝加入硼氫化鈉后，攪拌時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，延長(zhǎng)了整體工藝的時(shí)間，并且沒(méi)有加入雙氧水氧化除雜脫色，降低了最終產(chǎn)品達(dá)肝素鈉的質(zhì)量。

專利cn104098716a采用的工藝是以肝素鈉粗品為原料，通過(guò)降解、還原、乙醇沉淀得到低分子肝素鈉粗品，再通過(guò)氧化、除菌過(guò)濾、沉淀脫水得到達(dá)肝素鈉。缺點(diǎn)是本工藝以肝素鈉粗品為原料，延長(zhǎng)了生產(chǎn)時(shí)間，從氧化、除菌過(guò)濾、沉淀脫水實(shí)現(xiàn)了“一鍋煮”的工藝，不易于中間體的控制。

專利cn105884934a采用的工藝是肝素鈉溶于純化水中，用鹽酸調(diào)節(jié)ph值9.5～10.5，亞硝酸鈉降解，硼氫化鈉還原，乙醇沉淀，雙氧水氧化脫色，超濾膜超濾，除菌，凍干得到達(dá)肝素鈉。缺點(diǎn)是本工藝在降解時(shí)，用鹽酸調(diào)ph9.5～10.5，再加入亞硝酸鈉，這個(gè)操作是所有專利沒(méi)有提到過(guò)的，并且采用超濾膜超濾進(jìn)行純化，增加了生產(chǎn)成本。

專利cn105440160a采用的工藝是肝素鈉溶于純化水中，用醋酸調(diào)節(jié)ph值至酸性，亞硝酸鈉降解，焦亞硫酸鈉還原，加入酶進(jìn)行酶解，乙醇沉淀，超濾膜超濾，乙醇沉淀，脫水干燥得到達(dá)肝素鈉。缺點(diǎn)是本工藝采用酶解操作復(fù)雜，酶降解產(chǎn)品末端有不飽和基團(tuán)，穩(wěn)定性差，成本高。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提出了一種新的達(dá)肝素鈉的制備工藝，得到重均分子量符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，高純度、高收率、高活性且質(zhì)量穩(wěn)定可控的達(dá)肝素鈉產(chǎn)品。

本發(fā)明針對(duì)專利cn104045744a的工藝準(zhǔn)要進(jìn)行了兩點(diǎn)的更改：

1、專利cn104045744a加入硼氫化鈉在50℃～60℃反應(yīng)24～48小時(shí)，反應(yīng)時(shí)間太長(zhǎng)，浪費(fèi)能源，本發(fā)明增加硼氫化鈉的加入量，反應(yīng)1～3小時(shí)，大大的縮短反應(yīng)時(shí)間，并且最終產(chǎn)品檢測(cè)硼含量符合要求。

2、專利cn104045744a沒(méi)有加入雙氧水氧化脫色，并且沒(méi)有給出加入雙氧水的任何技術(shù)啟示，本發(fā)明通過(guò)加入過(guò)氧化氫氧化除雜脫色，可以得到的高純度、高收率、高活性且質(zhì)量穩(wěn)定可控的達(dá)肝素鈉產(chǎn)品，產(chǎn)品質(zhì)量高于現(xiàn)行的ep藥典標(biāo)準(zhǔn)，本工藝操作簡(jiǎn)便，易于工業(yè)化大生產(chǎn)。

確定雙氧水加入量為肝素鈉的20％～40％,雙氧水濃度為30％。

本發(fā)明的制備工藝通過(guò)肝素鈉經(jīng)過(guò)亞硝酸鈉降解、硼氫化鈉還原、過(guò)氧化氫氧化脫色、陰離子交換樹脂的純化，得到重均分子量符合藥典標(biāo)準(zhǔn)，高純度、高收率、高活性且質(zhì)量穩(wěn)定可控的達(dá)肝素鈉產(chǎn)品，本方法有效除去有色雜質(zhì)，使達(dá)肝素鈉產(chǎn)品顏色更白。此外，本制備工藝操作簡(jiǎn)便，易于工業(yè)化大生產(chǎn)，具有重要的應(yīng)用前景。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。基于本發(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

實(shí)施例1

一種達(dá)肝素鈉制備工藝：①稱取4kg肝素鈉，加入18倍純化水中，在常溫下攪拌0.5小時(shí)后溶解。②用醋酸調(diào)節(jié)ph2.0，加入92g亞硝酸鈉，25℃攪拌反應(yīng)4小時(shí)。③用氫氧化鈉調(diào)節(jié)上述的降解液至ph8.0，加入240g硼氫化鈉，45℃攪拌反應(yīng)2小時(shí)，然后降至室溫，用醋酸調(diào)節(jié)ph3.5，攪拌反應(yīng)10分鐘，再用氫氧化鈉調(diào)節(jié)至ph6.8，加入1.6kg氯化鈉，攪拌溶解，得到還原液；④在上述還原液中加入2倍乙醇，靜置過(guò)夜，棄去上清液，得到還原沉淀物；⑤在上述還原沉淀物中加入16倍純化水，再加入1.6kg氯化鈉，攪拌溶解，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph9.8，室溫下加入30％1000ml雙氧水，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，再用鹽酸調(diào)節(jié)ph7.2，得到氧化液；⑥在上述氧化液中加入2倍乙醇，靜置過(guò)夜，棄去上清液，得到還原沉淀物；⑦采用陰離子交換樹脂，按40～60mg低分子肝素鈉上樣，溫度為室溫，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為uv254nm，上樣結(jié)束后，先用純化水洗滌，直至洗滌液為中性，再用2.5％氯化鈉溶液洗滌，洗滌的終點(diǎn)為254nm紫外吸收降至基線平穩(wěn)，再用2.3mol/l的氯化鈉溶液洗脫，洗脫的終點(diǎn)為254nm紫外吸收降至基線平穩(wěn)，收集洗脫液。⑧用鹽酸將洗脫液調(diào)節(jié)ph6.8，加入2倍乙醇，靜置過(guò)夜，棄去上清液，得到沉淀，在沉淀中加入一定量純化水溶解，得到溶解液。⑨將溶解液放入凍干機(jī)凍干，得到最終產(chǎn)品2.08kg。

實(shí)施例2

一種達(dá)肝素鈉制備工藝：①稱取4kg肝素鈉，加入18倍純化水中，在常溫下攪拌0.5小時(shí)后溶解。②用醋酸調(diào)節(jié)ph2.6，加入110g亞硝酸鈉，25℃攪拌反應(yīng)4小時(shí)。③用氫氧化鈉調(diào)節(jié)上述的降解液至ph7.1，加入200g硼氫化鈉，50℃攪拌反應(yīng)2小時(shí)，然后降至室溫，用醋酸調(diào)節(jié)ph3.2，攪拌反應(yīng)20分鐘，再用氫氧化鈉調(diào)節(jié)至ph6.0，加入1.6kg氯化鈉，攪拌溶解，得到還原液；④在上述還原液中加入2倍乙醇，靜置過(guò)夜，棄去上清液，得到還原沉淀物；⑤在上述還原沉淀物中加入16倍純化水，再加入1.6kg氯化鈉，攪拌溶解，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph10.1，室溫下加入800ml雙氧水，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，再用鹽酸調(diào)節(jié)ph6.9，得到氧化液；⑥在上述氧化液中加入2倍乙醇，靜置過(guò)夜，棄去上清液，得到還原沉淀物；⑦采用陰離子交換樹脂，按40～60mg低分子肝素鈉上樣，溫度為室溫，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為uv254nm，上樣結(jié)束后，先用純化水洗滌，直至洗滌液為中性，再用2.6％氯化鈉溶液洗滌，洗滌的終點(diǎn)為254nm紫外吸收降至基線平穩(wěn)，再用2.5mol/l的氯化鈉溶液洗脫，洗脫的終點(diǎn)為254nm紫外吸收降至基線平穩(wěn)，收集洗脫液。⑧用鹽酸將洗脫液調(diào)節(jié)ph6.7，加入2倍乙醇，靜置過(guò)夜，棄去上清液，得到沉淀，在沉淀中加入一定量純化水溶解，得到溶解液。⑨將溶解液放入凍干機(jī)凍干，得到最終產(chǎn)品2.01kg。

實(shí)施例3

一種達(dá)肝素鈉制備工藝：①稱取4kg肝素鈉，加入20倍純化水中，在常溫下攪拌0.5小時(shí)后溶解。②用醋酸調(diào)節(jié)ph2.9，加入140g亞硝酸鈉，20℃攪拌反應(yīng)4小時(shí)。③用氫氧化鈉調(diào)節(jié)上述的降解液至ph7.2，加入320g硼氫化鈉，55℃攪拌反應(yīng)3小時(shí)，然后降至室溫，用醋酸調(diào)節(jié)ph3.5，攪拌反應(yīng)20分鐘，再用氫氧化鈉調(diào)節(jié)至ph7..2，加入1.6kg氯化鈉，攪拌溶解，得到還原液；④在上述還原液中加入2倍乙醇，靜置過(guò)夜，棄去上清液，得到還原沉淀物；⑤在上述還原沉淀物中加入16倍純化水，再加入1.6kg氯化鈉，攪拌溶解，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph9.9，室溫下加入1200ml雙氧水，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，再用鹽酸調(diào)節(jié)ph6.6，得到氧化液；⑥在上述氧化液中加入2倍乙醇，靜置過(guò)夜，棄去上清液，得到還原沉淀物；⑦采用陰離子交換樹脂，按40～60mg低分子肝素鈉上樣，溫度為室溫，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為uv254nm，上樣結(jié)束后，先用純化水洗滌，直至洗滌液為中性，再用2.7％氯化鈉溶液洗滌，洗滌的終點(diǎn)為254nm紫外吸收降至基線平穩(wěn)，再用2.6mol/l的氯化鈉溶液洗脫，洗脫的終點(diǎn)為254nm紫外吸收降至基線平穩(wěn)，收集洗脫液。⑧用鹽酸將洗脫液調(diào)節(jié)ph6.7，加入2倍乙醇，靜置過(guò)夜，棄去上清液，得到沉淀，在沉淀中加入一定量純化水溶解，得到溶解液。⑨將溶解液放入凍干機(jī)凍干，得到最終產(chǎn)品1.94kg。

實(shí)施例4

一種達(dá)肝素鈉制備工藝：①稱取4kg肝素鈉，加入20倍純化水中，在常溫下攪拌0.5小時(shí)后溶解。②用醋酸調(diào)節(jié)ph3.2，加入160g亞硝酸鈉，20℃攪拌反應(yīng)4小時(shí)。③用氫氧化鈉調(diào)節(jié)上述的降解液至ph6.9，加入460g硼氫化鈉，55℃攪拌反應(yīng)3小時(shí)，然后降至室溫，用醋酸調(diào)節(jié)ph3.5，攪拌反應(yīng)20分鐘，再用氫氧化鈉調(diào)節(jié)至ph6.8，加入1.6kg氯化鈉，攪拌溶解，得到還原液；④在上述還原液中加入2倍乙醇，靜置過(guò)夜，棄去上清液，得到還原沉淀物；⑤在上述還原沉淀物中加入16倍純化水，再加入1.6kg氯化鈉，攪拌溶解，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph10.5，室溫下加入1600ml雙氧水，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，再用鹽酸調(diào)節(jié)ph7.3，得到氧化液；⑥在上述氧化液中加入2倍乙醇，靜置過(guò)夜，棄去上清液，得到還原沉淀物；⑦采用陰離子交換樹脂，按40～60mg低分子肝素鈉上樣，溫度為室溫，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為uv254nm，上樣結(jié)束后，先用純化水洗滌，直至洗滌液為中性，再用2.7％氯化鈉溶液洗滌，洗滌的終點(diǎn)為254nm紫外吸收降至基線平穩(wěn)，再用2.7mol/l的氯化鈉溶液洗脫，洗脫的終點(diǎn)為254nm紫外吸收降至基線平穩(wěn)，收集洗脫液。⑧用鹽酸將洗脫液調(diào)節(jié)ph7.0，加入2倍乙醇，靜置過(guò)夜，棄去上清液，得到沉淀，在沉淀中加入一定量純化水溶解，得到溶解液。⑨將溶解液放入凍干機(jī)凍干，得到最終產(chǎn)品1.95kg。

實(shí)施例5

一種達(dá)肝素鈉制備工藝：①稱取4kg肝素鈉，加入22倍純化水中，在常溫下攪拌0.5小時(shí)后溶解。②用醋酸調(diào)節(jié)ph4.0，加入172g亞硝酸鈉，30℃攪拌反應(yīng)4小時(shí)。③用氫氧化鈉調(diào)節(jié)上述的降解液至ph6.8，加入600g硼氫化鈉，55℃攪拌反應(yīng)3小時(shí)，然后降至室溫，用醋酸調(diào)節(jié)ph3.6，攪拌反應(yīng)20分鐘，再用氫氧化鈉調(diào)節(jié)至ph6.8，加入1.6kg氯化鈉，攪拌溶解，得到還原液；④在上述還原液中加入2倍乙醇，靜置過(guò)夜，棄去上清液，得到還原沉淀物；⑤在上述還原沉淀物中加入16倍純化水，再加入1.6kg氯化鈉，攪拌溶解，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)ph10.4，室溫下加入1000ml雙氧水，攪拌反應(yīng)2小時(shí)，再用鹽酸調(diào)節(jié)ph6.9，得到氧化液；⑥在上述氧化液中加入2倍乙醇，靜置過(guò)夜，棄去上清液，得到還原沉淀物；⑦采用陰離子交換樹脂，按40～60mg低分子肝素鈉上樣，溫度為室溫，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為uv254nm，上樣結(jié)束后，先用純化水洗滌，直至洗滌液為中性，再用2.7％氯化鈉溶液洗滌，洗滌的終點(diǎn)為254nm紫外吸收降至基線平穩(wěn)，再用2.8mol/l的氯化鈉溶液洗脫，洗脫的終點(diǎn)為254nm紫外吸收降至基線平穩(wěn)，收集洗脫液。⑧用鹽酸將洗脫液調(diào)節(jié)ph7.2，加入2倍乙醇，靜置過(guò)夜，棄去上清液，得到沉淀，在沉淀中加入一定量純化水溶解，得到溶解液。⑨將溶解液放入凍干機(jī)凍干，得到最終產(chǎn)品1.86kg。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。