本發(fā)明涉及一種靈芝菌種復(fù)壯方法,特別是一種潔白度好的靈芝菌種復(fù)壯方法。
背景技術(shù):
:靈芝為多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子實體。靈芝是一種珍貴的藥用真菌,屬于擔(dān)子菌綱多孔菌科靈芝屬,在我國有兩千多年的藥用史。靈芝首載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,歷代醫(yī)家都認(rèn)為靈芝能治療多種疾病,是滋補強壯扶正固本的珍貴藥物。靈芝多糖是靈芝中最有效的成分之一,存在于靈芝的子實體、孢子粉和菌絲體中,具有抑制腫瘤、增強機體對自由基清除的能力,故能減少自由基對機體的損傷、有延緩衰老之功效,還可以提高免疫力、抗炎癥、降血脂、降血糖等作用。隨著靈芝的保健功效被人們廣泛的認(rèn)識和接受,野生靈芝已遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足人們的需求。培養(yǎng)基是靈芝賴以生存的條件,不同的培養(yǎng)原料和配方可對靈芝的菌絲生長、產(chǎn)量和活性成分等產(chǎn)生重要的影響。其中,復(fù)壯用培養(yǎng)基對后期的成品靈芝的質(zhì)量影響很大。現(xiàn)有復(fù)壯方法中所用的培養(yǎng)基大多數(shù)只含有葡萄糖、土豆、蛋白胨等。這樣制成的培養(yǎng)基營養(yǎng)不充足,使得復(fù)壯過程中菌絲生長狀態(tài)不好,得到的菌絲潔白度、緊密度和長勢不好。技術(shù)實現(xiàn)要素:本發(fā)明的目的,是提供一種潔白度好的靈芝菌種復(fù)壯方法。本發(fā)明方法進(jìn)行復(fù)壯,菌絲生長狀態(tài)好,得到的菌絲潔白度、緊密度和長勢好。本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的。一種潔白度好的靈芝菌種復(fù)壯方法,包括組織分裂、靈芝母種制備和培養(yǎng)。前述的潔白度好的靈芝菌種復(fù)壯方法,具體包括以下步驟:(1)組織分裂:取野生靈芝的子實體,用水沖洗干凈,切去菌柄,再消毒、洗凈后吸干水分,菌蓋切成兩半,在菌蓋和菌柄連接中央處割成1-3mm的菌肉組織片,置于無菌培養(yǎng)皿內(nèi),再將組織片接種于試管斜面培養(yǎng)基上,培養(yǎng),在26℃~28℃條件下培養(yǎng)5-7d,得組織分裂后的菌絲;(2)靈芝母種制備:試管用70-80%的酒精消毒后,擦拭干凈,置于100萬級超凈工作臺,用紫外燈消毒25-35min,裝入培養(yǎng)基,培養(yǎng)基的裝入量為試管體積的2/3,取組織分裂后的菌絲生長最前端1-2cm內(nèi)的菌絲小塊,放入培養(yǎng)基中,用培養(yǎng)基覆蓋菌絲小塊,覆蓋厚度為1-1.5cm,塞入試管塞,放入25-28℃的恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)5-7天,得靈芝母種;(3)靈芝菌種的制備:靈芝母種繼續(xù)培養(yǎng)10-15天,得靈芝菌種;(4)培養(yǎng):取玉米粉,加水拌濕使得玉米粉的含水量為50-60%的玉米粉培養(yǎng)基,將靈芝菌種置于裝有小米粉培養(yǎng)基的試管中,塞入試管塞,于25-28℃培養(yǎng),待菌絲生長滿試管時停止培養(yǎng),即可。前述的潔白度好的靈芝菌種復(fù)壯方法,所述培養(yǎng)基按重量份計算,主要由葡萄糖15-25份、酵母膏3-5份、土豆180-220份、蛋白胨1.5-2.5份、海藻粉15-25份、大蒜粉0.3-0.5份、苦蕎10-20份、黃連1-10份、蒼耳子1-10份和白術(shù)5-15份制成。前述的潔白度好的靈芝菌種復(fù)壯方法,所述培養(yǎng)基按重量份計算,主要由葡萄糖18-22份、酵母膏3-5份、土豆190-210份、蛋白胨1.8-2.2份、海藻粉18-22份、大蒜粉0.3-0.5份、苦蕎13-17份、黃連3-7份、蒼耳子3-7份和白術(shù)8-12份制成。前述的潔白度好的靈芝菌種復(fù)壯方法,所述培養(yǎng)基按重量份計算,主要由葡萄糖20份、酵母膏4份、土豆200份、蛋白胨2.0份、海藻粉20份、大蒜粉0.4份、苦蕎15份、黃連5份、蒼耳子5份和白術(shù)10份制成。前述的潔白度好的靈芝菌種復(fù)壯方法,所述培養(yǎng)基按下述步驟制備:(1)取苦蕎、黃連、蒼耳子和白術(shù),加6-8倍量水,煎煮2-3h,過濾,取濾渣烘干后,粉碎成細(xì)顆粒,得a品;(2)土豆切片,加5-7倍量水煮沸20-30分鐘,過濾,濾渣加5-7倍量水繼續(xù),加熱至50-60℃,得b品;(3)b品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、大蒜粉、a品和海藻粉,邊加邊攪拌,攪勻后,得c品;(4)c品分裝至180ml試管的1/5,硅膠塞密封,6-8支用報紙包好,120-122℃下滅菌20-30min后,冷卻至50-60℃,傾斜5-15度放置于20-35℃的烘箱中,放置24-48小時后,取出,即得。前述的潔白度好的靈芝菌種復(fù)壯方法,所述培養(yǎng)基按下述步驟制備:(1)取苦蕎、黃連、蒼耳子和白術(shù),加7倍量水,煎煮2.5h,過濾,取濾渣烘干后,粉碎成細(xì)顆粒,得a品;(2)土豆切片,加6倍量水煮沸25分鐘,過濾,濾渣加6倍量水繼續(xù),加熱至50-60℃,得b品;(3)b品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、大蒜粉、a品和海藻粉,邊加邊攪拌,攪勻后,得c品;(4)c品分裝至180ml試管的1/5,硅膠塞密封,7支用報紙包好,120-122℃下滅菌25min后,冷卻至50-60℃,傾斜10度放置于20-35℃的烘箱中,放置36小時后,取出,即得。申請人對靈芝復(fù)壯方法進(jìn)行了大量的研究,部分實驗如下:實驗例.菌絲生長情況考察1材料1.1靈芝:由山東省壽光市食用菌研究所提供。1.2對比培養(yǎng)基:原料:葡萄糖20kg、酵母膏4kg、土豆200kg、蛋白胨2.0kg、海藻粉20kg和大蒜粉0.4kg。制作工藝:(1)土豆切片,加6倍量水煮沸25分鐘,過濾,濾渣加6倍量水繼續(xù),加熱至50-60℃,得a品;(2)a品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、大蒜粉和海藻粉,邊加邊攪拌,攪勻后,得b品;(3)b品分裝至180ml試管的1/5,硅膠塞密封,7支用報紙包好,120-122℃下滅菌25min后,冷卻至50-60℃,傾斜10度放置于20-35℃的烘箱中,放置36小時后,取出,即得。2試驗方法和結(jié)果將靈芝分成2組,本發(fā)明組和對照組,本發(fā)明組按實施例1進(jìn)行復(fù)壯。對照組復(fù)壯方法同實施例1,但靈芝菌種的制備和二次培養(yǎng)時,所用的培養(yǎng)基為上述對比培養(yǎng)基。過程中觀察菌絲的生長情況,并作記錄。結(jié)果見表1和表2。表1不同復(fù)壯培養(yǎng)基上菌絲爬壁情況表2生長形狀觀察結(jié)果組別菌絲潔白度緊密度菌絲長勢本發(fā)明組潔白緊密很旺盛對照組暗輝緊密旺盛由表可知,本發(fā)明方法進(jìn)行復(fù)壯后的靈芝菌絲長勢好,生長形狀優(yōu)于對照組進(jìn)行復(fù)壯得到的菌絲。與現(xiàn)有技術(shù)相比,用本發(fā)明方法進(jìn)行復(fù)壯,菌絲生長狀態(tài)好,得到的菌絲潔白度、緊密度和長勢好。具體實施方式實施例1。培養(yǎng)基原料:葡萄糖20kg、酵母膏4kg、土豆200kg、蛋白胨2.0kg、海藻粉20kg、大蒜粉0.4kg、苦蕎15kg、黃連5kg、蒼耳子5kg和白術(shù)10kg。培養(yǎng)基的制作方法:具體包括以下步驟:(1)取苦蕎、黃連、蒼耳子和白術(shù),加7倍量水,煎煮2.5h,過濾,取濾渣烘干后,粉碎成細(xì)顆粒,得a品;(2)土豆切片,加6倍量水煮沸25分鐘,過濾,濾渣加6倍量水繼續(xù),加熱至50-60℃,得b品;(3)b品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、大蒜粉、a品和海藻粉,邊加邊攪拌,攪勻后,得c品;(4)c品分裝至180ml試管的1/5,硅膠塞密封,7支用報紙包好,120-122℃下滅菌25min后,冷卻至50-60℃,傾斜10度放置于20-35℃的烘箱中,放置36小時后,取出,即得。菌種復(fù)壯方法:具體包括以下步驟:(1)組織分裂:取野生靈芝的子實體,用水沖洗干凈,切去菌柄,再消毒、洗凈后吸干水分,菌蓋切成兩半,在菌蓋和菌柄連接中央處割成1-3mm的菌肉組織片,置于無菌培養(yǎng)皿內(nèi),再將組織片接種于試管斜面培養(yǎng)基上,培養(yǎng),在26℃~28℃條件下培養(yǎng)6d,得組織分裂后的菌絲;(2)靈芝母種制備:試管用75%的酒精消毒后,擦拭干凈,置于100萬級超凈工作臺,用紫外燈消毒30min,裝入培養(yǎng)基,培養(yǎng)基的裝入量為試管體積的2/3,取組織分裂后的菌絲生長最前端1-2cm內(nèi)的菌絲小塊,放入培養(yǎng)基中,用培養(yǎng)基覆蓋菌絲小塊,覆蓋厚度為1-1.5cm,塞入試管塞,放入25-28℃的恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)6天,得靈芝母種;(3)靈芝菌種的制備:靈芝母種繼續(xù)培養(yǎng)13天,得靈芝菌種;(4)培養(yǎng):取玉米粉,加水拌濕使得玉米粉的含水量為55%的玉米粉培養(yǎng)基,將靈芝菌種置于裝有小米粉培養(yǎng)基的試管中,塞入試管塞,于25-28℃培養(yǎng),待菌絲生長滿試管時停止培養(yǎng),即可。實施例2.培養(yǎng)基原料:葡萄糖25kg、酵母膏5kg、土豆220kg、蛋白胨2.5kg、海藻粉25kg、大蒜粉0.5kg、苦蕎20kg、黃連10kg、蒼耳子10kg和白術(shù)15kg。培養(yǎng)基制作方法:(1)取苦蕎、黃連、蒼耳子和白術(shù),加8倍量水,煎煮3h,過濾,取濾渣烘干后,粉碎成細(xì)顆粒,得a品;(2)土豆切片,加7倍量水煮沸30分鐘,過濾,濾渣加7倍量水繼續(xù),加熱至50-60℃,得b品;(3)b品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、大蒜粉、a品和海藻粉,邊加邊攪拌,攪勻后,得c品;(4)c品分裝至180ml試管的1/5,硅膠塞密封,8支用報紙包好,120-122℃下滅菌30min后,冷卻至50-60℃,傾斜15度放置于20-35℃的烘箱中,放置48小時后,取出,即得。菌種復(fù)壯方法:具體包括以下步驟:(1)組織分裂:取野生靈芝的子實體,用水沖洗干凈,切去菌柄,再消毒、洗凈后吸干水分,菌蓋切成兩半,在菌蓋和菌柄連接中央處割成1-3mm的菌肉組織片,置于無菌培養(yǎng)皿內(nèi),再將組織片接種于試管斜面培養(yǎng)基上,培養(yǎng),在26℃~28℃條件下培養(yǎng)7d,得組織分裂后的菌絲;(2)靈芝母種制備:試管用80%的酒精消毒后,擦拭干凈,置于100萬級超凈工作臺,用紫外燈消毒35min,裝入培養(yǎng)基,培養(yǎng)基的裝入量為試管體積的2/3,取組織分裂后的菌絲生長最前端1-2cm內(nèi)的菌絲小塊,放入培養(yǎng)基中,用培養(yǎng)基覆蓋菌絲小塊,覆蓋厚度為1-1.5cm,塞入試管塞,放入25-28℃的恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)7天,得靈芝母種;(3)靈芝菌種的制備:靈芝母種繼續(xù)培養(yǎng)15天,得靈芝菌種;(4)培養(yǎng):取玉米粉,加水拌濕使得玉米粉的含水量為60%的玉米粉培養(yǎng)基,將靈芝菌種置于裝有小米粉培養(yǎng)基的試管中,塞入試管塞,于25-28℃培養(yǎng),待菌絲生長滿試管時停止培養(yǎng),即可。實施例3.培養(yǎng)基原料:葡萄糖15kg、酵母膏3kg、土豆180kg、蛋白胨1.5kg、海藻粉15kg、大蒜粉0.3kg、苦蕎10kg、黃連1kg、蒼耳子1kg和白術(shù)5kg。培養(yǎng)基制作方法:(1)取苦蕎、黃連、蒼耳子和白術(shù),加6倍量水,煎煮2h,過濾,取濾渣烘干后,粉碎成細(xì)顆粒,得a品;(2)土豆切片,加5倍量水煮沸20分鐘,過濾,濾渣加5倍量水繼續(xù),加熱至50-60℃,得b品;(3)b品中依次加入葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、大蒜粉、a品和海藻粉,邊加邊攪拌,攪勻后,得c品;(4)c品分裝至180ml試管的1/5,硅膠塞密封,6-8支用報紙包好,120-122℃下滅菌20min后,冷卻至50-60℃,傾斜5度放置于20-35℃的烘箱中,放置24小時后,取出,即得。菌種復(fù)壯方法:具體包括以下步驟:(1)組織分裂:取野生靈芝的子實體,用水沖洗干凈,切去菌柄,再消毒、洗凈后吸干水分,菌蓋切成兩半,在菌蓋和菌柄連接中央處割成1-3mm的菌肉組織片,置于無菌培養(yǎng)皿內(nèi),再將組織片接種于試管斜面培養(yǎng)基上,培養(yǎng),在26℃-28℃條件下培養(yǎng)5d,得組織分裂后的菌絲;(2)靈芝母種制備:試管用70%的酒精消毒后,擦拭干凈,置于100萬級超凈工作臺,用紫外燈消毒25min,裝入培養(yǎng)基,培養(yǎng)基的裝入量為試管體積的2/3,取組織分裂后的菌絲生長最前端1-2cm內(nèi)的菌絲小塊,放入培養(yǎng)基中,用培養(yǎng)基覆蓋菌絲小塊,覆蓋厚度為1-1.5cm,塞入試管塞,放入25-28℃的恒溫箱中進(jìn)行培養(yǎng)5天,得靈芝母種;(3)靈芝菌種的制備:靈芝母種繼續(xù)培養(yǎng)10天,得靈芝菌種;(4)培養(yǎng):取玉米粉,加水拌濕使得玉米粉的含水量為50%的玉米粉培養(yǎng)基,將靈芝菌種置于裝有小米粉培養(yǎng)基的試管中,塞入試管塞,于25-28℃培養(yǎng),待菌絲生長滿試管時停止培養(yǎng),即可。當(dāng)前第1頁12