本發(fā)明具體涉及一種胃膜素和胃蛋白酶的聯合提取方法。

背景技術：

胃蛋白酶和胃膜素均是自豬胃粘膜中提取而得的兩種不同的物質；其中，胃蛋白酶的功能是將食物中的蛋白質分解為小的肽片段，目前主要作為一種助消化劑，用于治療消化不良、食欲補正及慢性胃炎等癥狀；而胃膜素是豬胃粘黏膜消化提取制得的一種粘蛋白，有抗胃蛋白酶分解和弱抗酸作用，能在胃內形成膜，覆蓋潰瘍面，減少胃酸的刺激，有利于潰瘍面的愈合，還可減少患者的痛苦。

然后，一般提取過程均為單一提取某一種成分，未進行綜合利用，另外，在提取過程中大量使用丙酮進行沉淀分離，由于丙酮具有易揮發(fā)、價格高昂、易燃、有毒等特性，使用丙酮進行分離，即提升了生產成本，又帶來了較高的安全隱患。

技術實現要素：

針對現有技術中的上述不足，本發(fā)明提供一種胃膜素和胃蛋白酶的聯合提取方法，可有效解決現有工藝生產成本高昂，且安全隱患高的問題。

一種胃膜素和胃蛋白酶的聯合提取方法，包括以下步驟：

（1）以料液比為1:1.55~1.65的比例，向豬胃黏膜中加入體積分數為4%~6%的鹽酸溶液，再加入50%~60%豬胃黏膜重量的苯甲酸鈉，40~45℃浸泡1~2h，過濾，收集濾液；

（2）向濾液中加入堿性脂肪酶，于32~35℃，ph值為9.0~9.2的條件下酶解0.5~1.5h，繼續(xù)加入中性脂肪酶，于32~35℃，ph值為7.0的條件下酶解0.5~1.5h，再將其濃縮為原濾液體積的1/3~1/2，冷卻至0~5℃；其中，堿性脂肪酶和中性脂肪酶與濾液的重量體積比均為0.02~0.05:1；

（3）調節(jié)上述濃縮液ph值為3.0~6.0，再緩慢加入等體積的0~5℃的丙酮，并在添加過程中迅速攪拌，靜置16~20h，過濾，分別收集胃膜素粗品和上清液，向胃膜素粗品中加入0~5℃的95%乙醇，洗滌2~3次，分離胃膜素和洗滌液，于70~80℃真空干燥胃膜素，得胃膜素精品；

（4）將步驟（3）中所述洗滌液與上清液合并，在快速攪拌過程中，緩慢加入1.5~2倍混合液體積的混合鹽溶液，調節(jié)溶液ph值為4.0~5.0，靜置20~28h，離心，再用90%乙醇洗滌沉淀物2~3次，得胃蛋白酶。

進一步地，步驟（1）中料液比為1:1.61。

進一步地，步驟（1）中鹽酸體積分數為5.4%。

進一步地，步驟（4）中所述混合鹽溶液包括硫酸銨溶液和氯化鈉溶液，兩者體積比為2~3:7~11。

本發(fā)明的有益效果為：

1、所用鹽酸體積為豬胃黏膜重量的1.61倍，在此鹽酸體積條件下，豬胃黏膜中的胃膜素和胃蛋白酶均具有最大得率，有利于減少后續(xù)丙酮的加入量，降低了生產成本，便于后續(xù)操作。

2、所用鹽酸溶液的體積分數為5.4%，在此條件下，豬胃黏膜中的胃膜素具有最大得率，可達5.64%，而現有方法得率一般為4.5%左右；如若鹽酸濃度過高，胃膜素則會被分解為蛋白質和多糖，加入鹽酸濃度過低，胃膜素的得率將會下降。

3、苯甲酸鈉具有干擾改變細胞膜通透性的作用，可使豬胃黏膜細胞膜對胃膜素和胃蛋白酶通透性增加，提升胃膜素和胃蛋白酶的得率。

4、本發(fā)明僅在胃膜素沉淀過程中使用丙酮，有效的降低了丙酮的使用量，降低了生產成本和安全隱患。

5、混合鹽溶液可有效提升鹽析后蛋白酶的酶活力，其中，硫酸銨溶液鹽析的酶活力最高為62.912u/ml，氯化鈉溶液鹽析的酶活力最高為65.722u/ml，而兩者混合后的鹽溶液鹽析的酶活力最高為133.116u/ml，而現有方法所得蛋白酶酶活一般為106u/ml左右。

具體實施方式

下面對本發(fā)明的具體實施方式進行描述，以便于本技術領域的技術人員理解本發(fā)明，但應該清楚，本發(fā)明不限于具體實施方式的范圍，對本技術領域的普通技術人員來講，只要各種變化在所附的權利要求限定和確定的本發(fā)明的精神和范圍內，這些變化是顯而易見的，一切利用本發(fā)明構思的發(fā)明創(chuàng)造均在保護之列。

實施例1

一種胃膜素和胃蛋白酶的聯合提取方法，包括以下步驟：

（1）以料液比為1:1.55的比例，向豬胃黏膜中加入體積分數為4%的鹽酸溶液，再加入50%豬胃黏膜重量的苯甲酸鈉，40℃浸泡2h，過濾，收集濾液；

（2）向濾液中加入堿性脂肪酶，于32℃，ph值為9.0的條件下酶解0.5h，繼續(xù)加入中性脂肪酶，于32℃，ph值為7.0的條件下酶解0.5h，再將其濃縮為原濾液體積的1/3，冷卻至5℃；其中，堿性脂肪酶和中性脂肪酶與濾液的重量體積比均為0.02:1；

（3）用鹽酸溶液調節(jié)上述濃縮液ph值為5.0，再緩慢加入等體積的4℃的丙酮，并在添加過程中迅速攪拌，靜置16h，過濾，分別收集胃膜素粗品和上清液，向胃膜素粗品中加入3℃的95%乙醇，洗滌2次，分離胃膜素和洗滌液，于80℃真空干燥胃膜素，得收率為5.32%，含總氨（n）9.6%，還原糖36.5%的胃膜素精品；

（4）將步驟（3）中所述洗滌液與上清液合并，在快速攪拌過程中，緩慢加入1.5倍混合液體積的混合鹽溶液；其中，混合鹽溶液包括體積比為2:7的硫酸銨溶液和氯化鈉溶液；用檸檬酸調節(jié)溶液ph值為4.0，靜置20h，離心，再用90%乙醇洗滌沉淀物2次，得酶活為132.859u/ml的胃蛋白酶。

實施例2

一種胃膜素和胃蛋白酶的聯合提取方法，包括以下步驟：

（1）以料液比為1:1.65的比例，向豬胃黏膜中加入體積分數為6%的鹽酸溶液，再加入60%豬胃黏膜重量的苯甲酸鈉，42℃浸泡2h，過濾，收集濾液；

（2）向濾液中加入堿性脂肪酶，于35℃，ph值為9.2的條件下酶解1.5h，繼續(xù)加入中性脂肪酶，于35℃，ph值為7.0的條件下酶解1.5h，再將其濃縮為原濾液體積的1/3，冷卻至2℃；其中，堿性脂肪酶和中性脂肪酶與濾液的重量體積比均為0.05:1；

（3）用鹽酸調節(jié)上述濃縮液ph值為6.0，再緩慢加入等體積的3℃的丙酮，并在添加過程中迅速攪拌，靜置20h，過濾，分別收集胃膜素粗品和上清液，向胃膜素粗品中加入3℃的95%乙醇，洗滌3次，分離胃膜素和洗滌液，于78℃真空干燥胃膜素，得收率為4.68%，含總氨（n）8.7%，還原糖32.5%的胃膜素精品；

（4）將步驟（3）中所述洗滌液與上清液合并，在快速攪拌過程中，緩慢加入2倍混合液體積的混合鹽溶液；其中，混合鹽溶液包括體積比為3:11的硫酸銨溶液和氯化鈉溶液；用檸檬酸調節(jié)溶液ph值為5.0，靜置28h，離心，再用90%乙醇洗滌沉淀物3次，得酶活為130.250u/ml的胃蛋白酶。

實施例3

一種胃膜素和胃蛋白酶的聯合提取方法，包括以下步驟：

（1）以料液比為1:1.61的比例，向豬胃黏膜中加入體積分數為5.4%的鹽酸溶液，再加入60%豬胃黏膜重量的苯甲酸鈉，43℃浸泡1.5h，過濾，收集濾液；

（2）向濾液中加入堿性脂肪酶，于32~35℃，ph值為9.0~9.2的條件下酶解0.5~1.5h，繼續(xù)加入中性脂肪酶，于32~35℃，ph值為7.0的條件下酶解0.5~1.5h，再將其濃縮為原濾液體積的1/3~1/2，冷卻至0~5℃；其中，堿性脂肪酶和中性脂肪酶與濾液的重量體積比均為0.034:1；

（3）用鹽酸調節(jié)上述濃縮液ph值為4.5，再緩慢加入等體積的4℃的丙酮，并在添加過程中迅速攪拌，靜置20h，過濾，分別收集胃膜素粗品和上清液，向胃膜素粗品中加入4℃的95%乙醇，洗滌3次，分離胃膜素和洗滌液，于72℃真空干燥胃膜素，得收率為5.64%，含總氨（n）8.9%，還原糖34.7%的胃膜素精品；

（4）將步驟（3）中所述洗滌液與上清液合并，在快速攪拌過程中，緩慢加入1.5~2倍混合液體積的混合鹽溶液；其中，混合鹽溶液包括體積比為2.8:9的硫酸銨溶液和氯化鈉溶液；用檸檬酸調節(jié)溶液ph值為5.0，靜置26h，離心，再用90%乙醇洗滌沉淀物3次，得酶活為132.231u/ml的胃蛋白酶。