本發(fā)明涉及組織工程生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種組織模型的構(gòu)建方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)：

現(xiàn)行去細(xì)胞基質(zhì)的制備方法容易導(dǎo)致基質(zhì)成分和三維結(jié)構(gòu)容易被破壞，而且試劑殘留嚴(yán)重，植入組織中可能引起嚴(yán)重的免疫排異反應(yīng)。

現(xiàn)行組織去細(xì)胞基質(zhì)制備工藝，如cn201310376619.8所述的方法需要耗費(fèi)大量的時(shí)間才能讓化學(xué)去垢劑滲透至組織內(nèi)部，作用于細(xì)胞，除去組織中的細(xì)胞成分。

與此同時(shí),現(xiàn)行新藥研發(fā)流程中大量的時(shí)間和費(fèi)用都花費(fèi)于藥物的檢測(cè)和篩選中,構(gòu)建體外組織模型對(duì)于藥物的檢測(cè)和篩選,以及藥物的作用機(jī)理和治療效果的研究具有重要意義。

現(xiàn)行共培養(yǎng)組織模型，如cn201310008125.4中介紹的二維培養(yǎng)模型，不能準(zhǔn)確模擬體內(nèi)三維環(huán)境，限制了模型在藥物檢測(cè)和篩選中的應(yīng)用。

現(xiàn)行三維共培養(yǎng)組織模型，如cn201610830529.5中介紹的模型不包含天然生物組織的微脈管系統(tǒng)和生物因子等微環(huán)境，限制了模型在藥物檢測(cè)篩選中的應(yīng)用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種組織模型的構(gòu)建方法，該方法中用于與動(dòng)物細(xì)胞體外共培養(yǎng)的天然軟組織去細(xì)胞基質(zhì)中含有微脈管系統(tǒng)和生物因子等微環(huán)境，使得本發(fā)明方法得到的組織模型與其他共培養(yǎng)模型相比更接近人體組織。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于，提供通過(guò)本發(fā)明方法得到的組織模型的應(yīng)用。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種組織模型的構(gòu)建方法，包括將天然軟組織去細(xì)胞基質(zhì)與動(dòng)物細(xì)胞體外共培養(yǎng)得到所述組織模型。

優(yōu)選地，所述天然軟組織去細(xì)胞基質(zhì)通過(guò)預(yù)處理，消毒，脫脂，酶處理，去細(xì)胞，漂洗和滅菌步驟制得；制得的天然軟組織去細(xì)胞基質(zhì)含有微脈管系統(tǒng)和生物因子微環(huán)境；

所述脫脂步驟為將所述天然軟組織置于脫脂劑中2-12h；所述脫脂劑選自三氯甲烷，二氯甲烷，丙酮、二氯乙烷和乙醇中的一種或多種；所述脫脂劑的用量為所述組織體積的1-30倍；

所述酶處理步驟為將所述天然軟組織置于含有生物酶的生理鹽水或磷酸鹽緩沖溶液中；所述天然軟組織置于含有生物酶的生理鹽水或磷酸鹽緩沖溶液中的時(shí)間為1-48h；所述生物酶選自胰蛋白酶、胃蛋白酶或磷脂酶；所述生物酶的濃度為0.1-10wt％；

所述去細(xì)胞步驟為將所述天然軟組織置于含有化學(xué)去垢劑的生理鹽水或磷酸鹽緩沖溶液中。

優(yōu)選地，所述天然軟組織包括小腸組織，血管組織，肌肉組織，心臟組織，瓣膜組織，肺組織，脾臟組織，腎臟組織，肝臟組織，胃組織，膽囊組織，脂肪組織，軟骨組織，氣管組織，食道組織，膀胱組織，輸尿管組織，輸卵管組織或子宮組織；所述動(dòng)物細(xì)胞包括全能干細(xì)胞，多能干細(xì)胞，專(zhuān)能干細(xì)胞，免疫細(xì)胞，軟骨細(xì)胞，骨來(lái)源細(xì)胞，平滑肌細(xì)胞，骨骼肌細(xì)胞，心肌細(xì)胞，肝細(xì)胞，肝來(lái)源的干細(xì)胞或祖細(xì)胞，肝巨噬細(xì)胞，星狀細(xì)胞，上皮細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞，血管細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞或成纖維細(xì)胞。

優(yōu)選地，該方法具體包括：

a.取滅菌后的天然軟組織去細(xì)胞基質(zhì)置于培養(yǎng)皿中；

b.將含有動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)基懸濁液注入培養(yǎng)皿中；

c.將培養(yǎng)皿放置于培養(yǎng)箱中3-6小時(shí)后，繼續(xù)添加培養(yǎng)基；

d.將動(dòng)物細(xì)胞與天然軟組織去細(xì)胞基質(zhì)共培養(yǎng)3-30天得到所述細(xì)胞組織模型，培養(yǎng)期間每48小時(shí)將培養(yǎng)基完全更換一次。

優(yōu)選地，步驟a中所述培養(yǎng)皿為24孔板；所述培養(yǎng)皿中預(yù)先涂覆纖維連接蛋白；所述天然軟組織去細(xì)胞基質(zhì)的厚度為0.05-2mm。

優(yōu)選地，所述步驟b中，所述動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)基懸濁液中動(dòng)物細(xì)胞的濃度為20000-500000個(gè)/ml；注入培養(yǎng)皿中的所述動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)基懸濁液的液面高度不小于所述天然軟組織去細(xì)胞基質(zhì)的厚度。

優(yōu)選地，注入培養(yǎng)皿中的所述動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)基懸濁液的液面高度等于所述天然軟組織去細(xì)胞基質(zhì)的厚度。

優(yōu)選地，步驟c中繼續(xù)添加的培養(yǎng)基的體積為步驟b中所述動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)基懸濁液體積的1-10倍。

上述的模型構(gòu)建方法構(gòu)建的組織模型為天然軟組織去細(xì)胞基質(zhì)與動(dòng)物細(xì)胞的體外共培養(yǎng)模型。

將上述的組織模型應(yīng)用在檢測(cè)藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)，吸收，和代謝中或檢測(cè)藥物功效和篩選藥物中。

本發(fā)明的有益效果如下：

1.本發(fā)明中的天然軟組織去細(xì)胞基質(zhì)作為細(xì)胞培養(yǎng)支架，含有微脈管系統(tǒng)和生物因子等微環(huán)境,有助于細(xì)胞培養(yǎng)支架在再細(xì)胞化過(guò)程中細(xì)胞獲取氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，以及細(xì)胞的增殖、遷移和分化。

2.本發(fā)明方法中的細(xì)胞體外共培養(yǎng)模型與其他共培養(yǎng)模型相比，在組織微觀(guān)結(jié)構(gòu)、細(xì)胞空間分布、特定細(xì)胞表型等方面更接近人體組織，因而可用于檢測(cè)藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)，吸收，和代謝或應(yīng)用在檢測(cè)藥物功效和篩選藥物中。

附圖說(shuō)明

圖1為實(shí)施例1中的去細(xì)胞心肌組織掃描電鏡圖；

圖2為實(shí)施例5中的共培養(yǎng)細(xì)胞掃電鏡圖；

圖3為實(shí)施例7中的間充質(zhì)干細(xì)胞與去細(xì)胞豬小腸黏膜組織共培養(yǎng)模型的組織染色圖。

具體實(shí)施方式

下面將結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實(shí)施例是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。

本發(fā)明的發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了一種對(duì)天然軟組織去細(xì)胞制備去細(xì)胞基質(zhì)的方法，該方法制備出的去細(xì)胞基質(zhì)可以保持去細(xì)胞基質(zhì)的三維結(jié)構(gòu)，而且通過(guò)該方法制備的去細(xì)胞基質(zhì)中的試劑殘留小，殘留少，避免了植入組織中可能引起的免疫排異反應(yīng)，而且，本方法制備去細(xì)胞基質(zhì)的時(shí)間短，效率高。

將本發(fā)明人制備出的天然軟組織去細(xì)胞基質(zhì)與動(dòng)物細(xì)胞進(jìn)行體外共培養(yǎng)構(gòu)建出細(xì)胞體外共培養(yǎng)模型，在組織微觀(guān)結(jié)構(gòu)、細(xì)胞空間分布、特定細(xì)胞表型等方面更接近人體組織。

將利用本發(fā)明方法構(gòu)建的細(xì)胞體外共培養(yǎng)模型用于檢測(cè)藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)，吸收，和代謝或應(yīng)用在檢測(cè)藥物功效和篩選藥物中，可得到更具代表性和可信度的試驗(yàn)結(jié)果。

本發(fā)明的天然軟組織去細(xì)胞基質(zhì)的制備方法，該方法包括：取材，預(yù)處理，消毒，脫脂，酶處理，去細(xì)胞，漂洗和滅菌步驟。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，取材，預(yù)處理步驟為將準(zhǔn)備脫細(xì)胞的天然軟組織用生理鹽水或磷酸鹽緩沖溶液進(jìn)行清洗，待用。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，消毒步驟為用過(guò)氧乙酸溶液、乙醇溶液、或新潔爾滅溶液中的一種或幾種溶液的混合液進(jìn)行浸泡，再用生理鹽水或磷酸鹽緩沖溶液漂洗。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，過(guò)氧乙酸溶液的濃度為0.01-0.3wt％；

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，乙醇溶液的濃度為1-10％；

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，新潔爾滅溶液的濃度為0.05-1wt％，

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，浸泡時(shí)間為0.5-3h；

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，生理鹽水的濃度為0.9wt％；

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，磷酸鹽緩沖溶液ph值為7.2-7.8，濃度為0.01m。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，脫脂步驟為將選擇的天然軟組織置于脫脂劑中2-12h；

本發(fā)明中，作為典型但非限制性的天然軟組織在脫脂劑中的放置時(shí)間為：2，2.5，3，3.5，4，4.5，5，5.5，6，6.5，7，7.5，8，8.5，9，9.5，10，10.5，11，11.5，12h。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，脫脂劑選自三氯甲烷，二氯甲烷，丙酮、二氯乙烷和乙醇中的一種或多種；

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，脫脂劑的用量為選擇的天然軟組織體積的1-30倍；

本發(fā)明中，作為典型但非限制性的脫脂劑的用量為選擇的天然軟組織體積的1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30倍。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，酶處理步驟為將脫脂后的天然軟組織置于含有生物酶的生理鹽水或磷酸鹽緩沖溶液中。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，天然軟組織置于含有生物酶的生理鹽水或磷酸鹽緩沖溶液中的時(shí)間為1-48h；

本發(fā)明中，作為典型但非限制性的天然軟組織置于含有生物酶的生理鹽水或磷酸鹽緩沖溶液中的時(shí)間可以為，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40h。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，生物酶選自胰蛋白酶、胃蛋白酶或磷脂酶；

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，生物酶的濃度為0.1-10wt％，

本發(fā)明中，作為典型但非限制性的生物酶的濃度，還可以為0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10wt％。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，去細(xì)胞為將天然軟組織置于含有化學(xué)去垢劑的生理鹽水或磷酸鹽緩沖溶液中。

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，化學(xué)去垢劑選自tritonx-100、tritonx-200、tween-20、tween-40、tween-60、脫氧膽酸鈉和十二烷基磺酸鈉中的一種或多種；化學(xué)去垢劑的濃度優(yōu)選為0.1-5wt％。

本發(fā)明的天然軟組織包括小腸組織，血管組織，肌肉組織，心臟組織，瓣膜組織，肺組織，脾臟組織，腎臟組織，肝臟組織，胃組織，膽囊組織，脂肪組織，軟骨組織，氣管組織，食道組織，膀胱組織，輸尿管組織，輸卵管組織或子宮組織。

本發(fā)明將天然軟組織去細(xì)胞基質(zhì)與動(dòng)物細(xì)胞體外共培養(yǎng)得到所述組織模型的構(gòu)建方法包括如下步驟：

a.取滅菌后的天然軟組織去細(xì)胞基質(zhì)置于培養(yǎng)皿中；

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，上述步驟中的培養(yǎng)皿為24孔板；培養(yǎng)皿中預(yù)先涂覆纖維連接蛋白再放置天然軟組織去細(xì)胞基質(zhì)；放置于培養(yǎng)皿中的天然軟組織去細(xì)胞基質(zhì)的厚度優(yōu)選為0.05-2mm；

b.將含有動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)基懸濁液注入培養(yǎng)皿中；

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，上述步驟中的動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)基懸濁液中動(dòng)物細(xì)胞的濃度為20000-500000個(gè)/ml；注入培養(yǎng)皿中的動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)基懸濁液的液面高度不小于所述天然軟組織去細(xì)胞基質(zhì)的厚度

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，上述步驟中注入培養(yǎng)皿中的動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)基懸濁液的液面高度等于天然軟組織去細(xì)胞基質(zhì)的厚度。

c.將培養(yǎng)皿放置于培養(yǎng)箱中3-6小時(shí)后，繼續(xù)添加培養(yǎng)基；

在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式中，上述步驟中的繼續(xù)添加的培養(yǎng)基的體積為步驟b中的最初注入培養(yǎng)皿中的動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)基懸濁液體積的1-10倍；

d.將動(dòng)物細(xì)胞與天然軟組織去細(xì)胞基質(zhì)共培養(yǎng)3-30天得到本發(fā)明的組織模型，優(yōu)選在共培養(yǎng)期間每48小時(shí)將培養(yǎng)基完全更換一次。

本發(fā)明的動(dòng)物細(xì)胞包括全能干細(xì)胞，多能干細(xì)胞，專(zhuān)能干細(xì)胞，免疫細(xì)胞，軟骨細(xì)胞，骨來(lái)源細(xì)胞，平滑肌細(xì)胞，骨骼肌細(xì)胞，心肌細(xì)胞，肝細(xì)胞，肝來(lái)源的干細(xì)胞或祖細(xì)胞，肝巨噬細(xì)胞，星狀細(xì)胞，上皮細(xì)胞，腫瘤細(xì)胞，神經(jīng)細(xì)胞，血管細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞或成纖維細(xì)胞。

實(shí)施例1

對(duì)天然軟組織進(jìn)行去細(xì)胞處理得到去細(xì)胞基質(zhì)，以小鼠心肌組織為例，包括如下步驟：

取材，預(yù)處理：取小鼠心肌組織，用濃度為0.9wt％的生理鹽水清洗干凈；

消毒：用含有0.02wt％過(guò)氧乙酸和5％乙醇的溶液浸泡清洗后的小鼠心肌組織1h，用濃度為0.9wt％生理鹽水漂洗；

脫脂：將消毒后的小鼠心肌組織置于脫脂試劑中2h，脫脂試劑選用三氯甲烷，二者的體積比為(1:2)，脫脂試劑總體積為小鼠心肌組織體積的30倍；

酶處理：將脫脂后的小鼠心肌組織置于含有胰蛋白酶的生理鹽水中12h，溶液濃度為0.25wt％，用濃度為0.9wt％生理鹽水漂洗；

去細(xì)胞：將酶處理后的小鼠心肌組織置于含有化學(xué)去垢劑十二烷基磺酸鈉的生理鹽水中24h，其中十二烷基磺酸鈉濃度為0.3wt％，用濃度為0.9wt％生理鹽水漂洗；

漂洗：用濃度為0.9wt％生理鹽水漂洗經(jīng)過(guò)上述各步驟處理后得到的去細(xì)胞小鼠心肌組織48h；

滅菌：將漂洗干凈后的去細(xì)胞小鼠心肌組織用γ射線(xiàn)進(jìn)行輻照，輻照劑量為25kgy。

所得到的去細(xì)胞小鼠心肌組織掃描電鏡顯微結(jié)構(gòu)圖如圖1所示，從圖1可見(jiàn)組織中的血管結(jié)構(gòu)得到了保留，此特征有助于去細(xì)胞心肌組織在再細(xì)胞化過(guò)程中細(xì)胞獲取氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)；亦有助于內(nèi)皮細(xì)胞的附著生長(zhǎng)或干細(xì)胞在血管處分化為內(nèi)皮細(xì)胞，即實(shí)現(xiàn)血管的再內(nèi)皮化。

將實(shí)施例1中的脫脂，酶處理，去細(xì)胞三個(gè)步驟中的酶處理步驟的時(shí)間及試劑進(jìn)行優(yōu)化，如下表1-3所示：

與實(shí)施例1的步驟和條件相同，不同的是脫脂步驟的時(shí)間，酶處理步驟的時(shí)間，去細(xì)胞步驟的時(shí)間和化學(xué)去垢劑濃度，具體情況如表1所示，

表1

與實(shí)施例1的步驟和條件相同，不同的是，脫脂步驟的時(shí)間，酶處理步驟的胰蛋白酶濃度和時(shí)間，去細(xì)胞步驟的時(shí)間，具體情況如表2所示，

表2

與實(shí)施例1的步驟和條件相同，不同的是，脫脂步驟的時(shí)間，酶處理步驟的時(shí)間，去細(xì)胞步驟的時(shí)間，化學(xué)去垢劑的選擇，具體情況如表3所示，

表3

實(shí)施例5

使用實(shí)施例1中的細(xì)胞小鼠心肌組織，構(gòu)建去細(xì)胞小鼠心肌組織與心臟干細(xì)胞體外共培養(yǎng)模型

包括如下步驟：

a.取滅菌后的去細(xì)胞小鼠心肌組織置于預(yù)先在內(nèi)壁涂覆纖維連接蛋白的24孔板中；置于24孔板的去細(xì)胞小鼠心肌組織的厚度為0.5mm；

b.將含有心臟干細(xì)胞，濃度為50000個(gè)/ml的培養(yǎng)基懸濁液注入24孔板中；注入24孔板中的心臟干細(xì)胞的培養(yǎng)基懸濁液體積為200μl，即懸濁液的液面高度等于1mm；

c.將24孔板放置于培養(yǎng)箱中4小時(shí)后，繼續(xù)添加培養(yǎng)基，新增加的培養(yǎng)基的量為最初注入24孔板中的含有心臟干細(xì)胞的培養(yǎng)基懸濁液體積的4倍，為800μl；

d.將心臟干細(xì)胞與去細(xì)胞小鼠心肌組織共培養(yǎng)7天得到本發(fā)明的組織模型，在共培養(yǎng)期間每48小時(shí)將培養(yǎng)基完全更換一次。

本實(shí)施例構(gòu)建的心臟干細(xì)胞與去細(xì)胞小鼠心肌組織體外共培養(yǎng)模型的掃面電鏡顯微細(xì)胞圖如圖2所示，從圖2可見(jiàn)細(xì)胞呈扁平狀生長(zhǎng)，為收縮性表型(contractilephenotype)，體現(xiàn)了在共培養(yǎng)模型中被誘導(dǎo)分化的趨勢(shì)。

實(shí)施例6

對(duì)天然軟組織進(jìn)行去細(xì)胞處理得到去細(xì)胞基質(zhì)，以豬小腸黏膜組織為例，包括如下步驟：

取材，預(yù)處理：取豬小腸黏膜組織，用濃度為0.9wt％的生理鹽水清洗干凈；

消毒：用含有0.02wt％過(guò)氧乙酸和5％乙醇的溶液浸泡清洗后的豬小腸黏膜組織1h，用濃度為0.9wt％生理鹽水漂洗；

脫脂：將消毒后的豬小腸黏膜組織置于脫脂試劑中12h，脫脂試劑選用三氯甲烷和乙醇的混合物，二者的體積比為(1:2)，脫脂試劑總體積為豬小腸黏膜組織體積的30倍；

酶處理：將脫脂后的豬小腸黏膜組織置于含有胃蛋白酶的生理鹽水中8h，溶液濃度為0.1wt％，用濃度為0.9wt％生理鹽水漂洗；

去細(xì)胞：將酶處理后的豬小腸黏膜組織置于含有化學(xué)去垢劑tritonx-100和十二烷基磺酸鈉的生理鹽水中24h，其中tritonx-100濃度為2wt％，十二烷基磺酸鈉濃度為0.5wt％，用濃度為0.9wt％生理鹽水漂洗；

漂洗：用濃度為0.9wt％生理鹽水漂洗經(jīng)過(guò)上述各步驟處理后得到的去細(xì)胞豬小腸黏膜組織48h；

滅菌：將漂洗干凈后的去細(xì)胞豬小腸黏膜組織用γ射線(xiàn)進(jìn)行輻照，輻照劑量為25kgy。

實(shí)施例7

使用實(shí)施例6中的去細(xì)胞豬小腸黏膜組織，構(gòu)建間充質(zhì)干細(xì)胞與去細(xì)胞豬小腸黏膜組織共培養(yǎng)模型

包括如下步驟：

a.取滅菌后的去細(xì)胞豬小腸黏膜組織置于預(yù)先在內(nèi)壁涂覆纖維連接蛋白的24孔板中；置于24孔板中的去細(xì)胞豬小腸黏膜組織的厚度為0.2mm；

b.將含有間充質(zhì)干細(xì)胞，濃度為300000個(gè)/ml的培養(yǎng)基懸濁液注入24孔板中；注入24孔板中的間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)基體積為50μl，即懸濁液的液面高度等于0.25mm；

c.將24孔板放置于培養(yǎng)箱中4小時(shí)后，繼續(xù)添加培養(yǎng)基，新增加的培養(yǎng)基的量為最初注入24孔板中的含有間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)基懸濁液體積的10倍，為500μl；

d.將間充質(zhì)干細(xì)胞與去細(xì)胞豬小腸黏膜組織共培養(yǎng)7天得到本實(shí)施例的細(xì)胞培養(yǎng)模型，在培養(yǎng)期間每48小時(shí)將培養(yǎng)基完全更換一次。

本實(shí)施例構(gòu)建的間充質(zhì)干細(xì)胞與去細(xì)胞豬小腸黏膜組織體外共培養(yǎng)模型如圖3所示，從圖3可見(jiàn)細(xì)胞向去細(xì)胞組織內(nèi)部的遷移，體現(xiàn)去細(xì)胞組織再細(xì)胞化進(jìn)展良好。

最后應(yīng)說(shuō)明的是：以上各實(shí)施例僅用以說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對(duì)其限制；盡管參照前述各實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解：其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分或者全部技術(shù)特征進(jìn)行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實(shí)施例技術(shù)方案的范圍。