本發(fā)明涉及環(huán)境微生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體而言，涉及一種微生物混合菌劑的制備方法、微生物混合菌劑及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：土壤是人類賴以生存的重要自然資源之一，也是人類生態(tài)環(huán)境的重要組成部分。隨著工業(yè)、城市污染的加劇和農(nóng)藥化肥的施用，含重金屬的污染物通過各種途徑進(jìn)入土壤，造成土壤中重金屬的累積。重金屬污染具有隱蔽性、長(zhǎng)期性和不可逆性的特點(diǎn)，我國(guó)環(huán)保部門和各級(jí)政府部門加大了對(duì)各地區(qū)環(huán)境中重金屬含量的現(xiàn)狀的統(tǒng)計(jì)和監(jiān)管，并針對(duì)各地區(qū)不同的情況，在重金屬污染產(chǎn)生的各個(gè)階段給予監(jiān)控，并選擇適合本地區(qū)的行之有效的修復(fù)措施。重金屬污染防治工作已經(jīng)成為我國(guó)環(huán)境保護(hù)工作的重中之重，黨和國(guó)家高度重視重金屬污染問題，2016年5月國(guó)務(wù)院頒發(fā)《土壤污染防治行動(dòng)計(jì)劃》(土十條)，開啟了我國(guó)修復(fù)治理農(nóng)田污染的新階段。因此，重金屬污染治理技術(shù)必將成為今后一段時(shí)期內(nèi)重金屬污染領(lǐng)域的熱點(diǎn)內(nèi)容。近年來，我國(guó)土壤重金屬污染進(jìn)入集中多發(fā)期，據(jù)農(nóng)業(yè)部進(jìn)行的全國(guó)污灌區(qū)調(diào)查，在約140萬公頃的污水灌區(qū)中，遭受重金屬污染的土地面積占污水灌區(qū)面積的64.8％，其中輕度污染的占46.7％，中度污染的占9.7％，嚴(yán)重污染的占8.4％。我國(guó)土壤重金屬污染狀況已經(jīng)影響到耕地質(zhì)量、食品安全甚至人的身體健康。目前，修復(fù)重金屬污染土壤主要有兩種途徑。一是利用超富集植物吸收土壤中的重金屬，收割植物從而減少土壤中重金屬含量；二是通過鈍化或固化改變土壤中重金屬的賦存形態(tài)，減少其在土壤中的遷移性和可利用性。利用超富集植物修復(fù)技術(shù)周期長(zhǎng)而且占用大量的農(nóng)田，不適宜在污染農(nóng)田大面積推廣?，F(xiàn)有的用于重金屬污染土壤處理的固化劑主要以磷酸鹽為主，磷酸鹽復(fù)合的固化劑穩(wěn)定效果一般，而且過量的磷酸鹽會(huì)引起土壤ph變化，以及富營(yíng)養(yǎng)化等環(huán)境問題。微生物修復(fù)技術(shù)引起了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注。微生物能夠通過自身的吸附、富集、分泌代謝產(chǎn)物如草酸、亞硫離子、磷酸鹽等會(huì)與重金屬形成沉淀，從而降低土壤中重金屬的生物可利用性。具有溶磷能力的微生物能夠?qū)⑼寥乐须y溶性磷酸鹽中的磷酸根離子釋放出來，可以很好地實(shí)現(xiàn)重金屬的固定。微生物修復(fù)技術(shù)不僅降低了修復(fù)成本，而且不會(huì)引起土壤ph變化造成金屬元素的淋溶和富營(yíng)養(yǎng)化等問題。但現(xiàn)有的微生物土壤修復(fù)劑中含有的微生物特性不明，在施用后不能適應(yīng)重金屬污染土壤的環(huán)境，從而存活率低，影響鈍化效果。其微生物的含量低，過半為有機(jī)料腐熟劑、磷石膏粉、草炭粉等制成的有機(jī)堆肥，制備方法復(fù)雜而且成本增加。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的在于提供一種微生物混合菌劑的制備方法，其從土壤浸提液中獲取，并通過重金屬離子的馴化，該制備方法操作簡(jiǎn)單、方便。本發(fā)明的另一目的在于提供一種微生物混合菌劑，其能夠使土壤中的重金屬鈍化，使土壤中的有效態(tài)重金屬離子含量降低，降低種植的農(nóng)作物的重金屬含量；同時(shí)，能夠提高土壤中可溶性磷的含量，從而促使農(nóng)作物的生長(zhǎng)。本發(fā)明的第三目的在于提供上述微生物混合菌劑在修復(fù)重金屬污染土壤中的應(yīng)用，能夠使土壤中的重金屬鈍化，使土壤中的有效態(tài)重金屬離子含量降低，降低種植的農(nóng)作物的重金屬含量。本發(fā)明的第四目的在于提供上述微生物混合菌劑在溶解難溶性磷酸鹽方面的應(yīng)用，能夠提高土壤中可溶性磷的含量，從而促使農(nóng)作物的生長(zhǎng)。本發(fā)明是采用以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種微生物混合菌劑的制備方法，將土壤浸提液接種于lb培養(yǎng)基中得到微生物菌群，將微生物菌群接種于含有重金屬離子的有氮改良培養(yǎng)基中進(jìn)行馴化處理。一種微生物混合菌劑，由上述微生物混合菌劑的制備方法制得。上述微生物混合菌劑在修復(fù)重金屬污染土壤中的應(yīng)用。上述微生物混合菌劑在溶解難溶性磷酸鹽方面的應(yīng)用。本發(fā)明提供的微生物混合菌劑的制備方法、微生物混合菌劑及其應(yīng)用的有益效果為：在土壤浸提液中獲得，并通過了重金屬離子的馴化處理得到微生物混合菌劑，其制備方法簡(jiǎn)單，操作方便，需要的環(huán)境條件溫和，適于工業(yè)推廣和應(yīng)用。微生物混合菌劑能夠使土壤中的重金屬鈍化，使土壤中的有效態(tài)重金屬離子含量降低，降低種植的農(nóng)作物的重金屬含量；同時(shí)，能夠提高土壤中可溶性磷的含量，從而促使農(nóng)作物的生長(zhǎng)。具體實(shí)施方式為使本發(fā)明實(shí)施例的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市售購(gòu)買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。下面對(duì)本發(fā)明實(shí)施例的微生物混合菌劑的制備方法、微生物混合菌劑及其應(yīng)用進(jìn)行具體說明。微生物混合菌劑的制備方法為：將土壤浸提液接種于lb培養(yǎng)基中得到微生物菌群，微生物混合菌劑從土壤浸提液中獲取。其中，向重金屬污染土壤中加水后在震蕩速度為120-160r/min的條件下震蕩25-35min，取上層清液獲得土壤浸提液。土壤浸提液是在重金屬污染土壤中獲得，并經(jīng)過lb培養(yǎng)基培養(yǎng)以后獲得微生物菌群，說明微生物菌群中的菌株均能夠在重金屬污染的條件下存活。優(yōu)選地，取20g的重金屬污染土壤于裝有20ml無菌水的錐形瓶中，在震蕩速度為140r/min室溫條件下震蕩30min獲得土壤浸提液。土壤浸提液以1％-3％的比例接種至lb培養(yǎng)基中，在溫度為33-37℃、震蕩速度為120-160r/min的搖床培養(yǎng)20-30h得到微生物菌群。其中，lb培養(yǎng)基包括8-12g/l的胰蛋白胨、4-6g/l的酵母提取物和8-12g/l的氯化鈉，lb培養(yǎng)基的ph值為7.0-7.2，在溫度為115-125℃的條件下高溫濕熱滅菌15-25min。優(yōu)選地，lb培養(yǎng)基包括10g/l的胰蛋白胨、5g/l的酵母提取物和10g/l的氯化鈉，在121℃條件下高溫濕熱滅菌20min。將微生物菌群接種于含有重金屬離子的有氮改良培養(yǎng)基中進(jìn)行馴化處理得到微生物混合菌劑。微生物菌群經(jīng)過了重金屬離子的馴化處理，提高其在重金屬污染土壤中的存活能力。優(yōu)選地，將微生物菌群以任意順序依次接種于含有cd2+、zn2+、pb2+、ni2+、cr6+的有氮改良培養(yǎng)基中進(jìn)行馴化處理得到微生物混合菌劑。使微生物混合菌劑可以在含有cd2+、zn2+、pb2+、ni2+、cr6+等重金屬離子的條件下存活。更佳地，將微生物菌群接種于含有cd2+的有氮改良培養(yǎng)基中進(jìn)行第一次馴化處理得到第一微生物菌群，將第一微生物菌群接種于含有zn2+的有氮改良培養(yǎng)基中進(jìn)行第二次馴化處理得到第二微生物菌群，將第二微生物菌群接種于含有pb2+的有氮改良培養(yǎng)基中進(jìn)行第三次馴化處理得到第三微生物菌群，將第三微生物菌群接種于含有ni2+的有氮改良培養(yǎng)基中進(jìn)行第四次馴化處理得到第四微生物菌群，將第四微生物菌群接種于含有cr6+的有氮改良培養(yǎng)基中進(jìn)行第五次馴化處理得到微生物混合菌劑。第一微生物菌群在cd2+重金屬污染的條件下有很強(qiáng)的生存能力，第二微生物菌群在cd2+和zn2+重金屬污染的條件下有很強(qiáng)的生存能力，第三微生物菌群在cd2+、zn2+和pb2+重金屬污染的條件下有很強(qiáng)的生存能力，第四微生物菌群在cd2+、zn2+、pb2+和ni2+重金屬污染的條件下有很強(qiáng)的生存能力，微生物混合菌劑在cd2+、zn2+、pb2+、ni2+和cr6+重金屬污染的條件下有很強(qiáng)的生存能力。微生物混合菌劑能夠承受各種重金屬離子，在多種重金屬離子污染的土壤中均能夠存活。類似的實(shí)施方式可以是：將微生物菌群接種于含有zn2+的有氮改良培養(yǎng)基中進(jìn)行第一次馴化處理得到第一微生物菌群，將第一微生物菌群接種于含有ni2+的有氮改良培養(yǎng)基中進(jìn)行第二次馴化處理得到第二微生物菌群，將第二微生物菌群接種于含有cd2+的有氮改良培養(yǎng)基中進(jìn)行第三次馴化處理得到第三微生物菌群，將第三微生物菌群接種于含有pb2+的有氮改良培養(yǎng)基中進(jìn)行第四次馴化處理得到第四微生物菌群，將第四微生物菌群接種于含有cr6+的有氮改良培養(yǎng)基中進(jìn)行第五次馴化處理得到微生物混合菌劑。其中：微生物菌群還可以按照其他順序依次接種于cd2+、zn2+、pb2+、ni2+和cr6+這五種重金屬離子的有氮改良培養(yǎng)基中進(jìn)行馴化處理。優(yōu)選地，將微生物菌群培養(yǎng)液以5％-15％的比例接種至含重金屬(cd2+、zn2+、pb2+、ni2+和cr6+)的有氮改良培養(yǎng)基中，在33-37℃震蕩速度為120-160r/min的條件下培養(yǎng)36-60h，并逐步提升培養(yǎng)基中重金屬的濃度至菌群的幾乎無法生長(zhǎng)。然后，將上述得到的經(jīng)cd2+馴化之后的微生物菌群繼續(xù)用其他的重金屬(zn2+、pb2+、ni2+和cr6+)進(jìn)行馴化。將經(jīng)過多種重金屬馴化的微生物菌群以10％的比例接種至含cd2+、zn2+、pb2+、ni2+和cr6+的有氮改良培養(yǎng)基中繼續(xù)馴化，并逐步提升重金屬的濃度至菌群幾乎無法生長(zhǎng)。能夠在培養(yǎng)基中生存的細(xì)菌即為耐受多種重金屬的細(xì)菌，即耐受重金屬的混合菌株，即為微生物混合菌劑。其中，有氮改良培養(yǎng)基包括8-12g/l的蔗糖、1-3g/l的磷酸氫二鉀、0.2-0.8g/l的硫酸鎂、0.5-1.5g/l的硫酸銨、0.05-0.15g/l的氯化鈉、0.2-0.8g/l的酵母膏和0.2-0.8g/l的碳酸鈣，其中，有氮改良培養(yǎng)基的ph值為7.0-7.2，在溫度為115-125℃的條件下高溫濕熱滅菌15-25min得到有氮改良培養(yǎng)基。優(yōu)選地，有氮改良培養(yǎng)基包括10g/l的蔗糖、2g/l的磷酸氫二鉀、0.5g/l的硫酸鎂、1g/l的硫酸銨、0.1g/l的氯化鈉、0.5g/l的酵母膏和0.5g/l的碳酸鈣，在121℃條件下高溫濕熱滅菌20min。微生物混合菌劑由上述微生物混合菌劑的制備方法制得。將微生物混合菌劑和40wt％的甘油以1：1-1：1.5體積比進(jìn)行混合后，放置于-80℃的條件下進(jìn)行凍存。本發(fā)明實(shí)施例還提供了上述微生物混合菌劑在修復(fù)重金屬污染土壤中的應(yīng)用。其能夠使土壤中的重金屬鈍化，使土壤中的有效態(tài)重金屬離子含量降低，降低種植的農(nóng)作物的重金屬含量。重金屬為cd、zn、pb、ni和cr中的一種或幾種，微生物混合菌劑不僅能夠在含有重金屬的條件下生存，而且其聯(lián)合作用對(duì)cd、zn、pb、ni和cr都具有很好的鈍化效果，降低土壤內(nèi)的有效態(tài)重金屬的含量，從而降低農(nóng)作物對(duì)土壤內(nèi)的重金屬的吸收，提高種植的農(nóng)作物的品質(zhì)。其具體的方法為：在重金屬污染土壤中接種微生物混合菌劑，并加水，使重金屬污染土壤中的含水量為60wt％-70wt％并保持20-30天，使污染土壤中的重金屬鈍化。本發(fā)明實(shí)施例還提供了上述微生物混合菌劑在溶解難溶性磷酸鹽方面的應(yīng)用。能夠提高土壤中可溶性磷的含量，從而促使農(nóng)作物的生長(zhǎng)。土壤浸提液中的微生物會(huì)有一定的差異，但通過上述方法獲得的微生物混合菌劑中的菌株均能表現(xiàn)出較強(qiáng)的鈍化土壤中重金屬的能力，并具有一定的溶解難溶性磷酸鹽的能力。實(shí)施例1首先，將8g/l的胰蛋白胨、4g/l的酵母提取物和8g/l的氯化鈉，并在溫度為115℃、ph值為7.0的條件下高溫濕熱滅菌15min得到lb培養(yǎng)基。其次，將8g/l的蔗糖、1g/l的磷酸氫二鉀、0.2g/l的硫酸鎂、0.5g/l的硫酸銨、0.05g/l的氯化鈉、0.2g/l的酵母膏和0.2g/l的碳酸鈣，并在溫度為115℃、ph值為7.0的條件下高溫濕熱滅菌15min得到有氮改良培養(yǎng)基。取20g的重金屬污染土壤于裝有20ml無菌水的錐形瓶中，震蕩速度為120r/min的條件下震蕩25min獲得土壤浸提液。土壤浸提液以1％的比例接種至lb培養(yǎng)基中，在溫度為37℃、震蕩速度為140r/min的搖床培養(yǎng)24h得到微生物菌群。將微生物菌群以10％的比例接種于含有cd2+的有氮改良培養(yǎng)基中，在37℃震蕩速度為140r/min的條件下第一次馴化48h得到第一微生物菌群，將第一微生物菌群以10％的比例接種于含有zn2+的有氮改良培養(yǎng)基中，在37℃震蕩速度為140r/min的條件下第二次馴化處理48h得到第二微生物菌群，將第二微生物菌群以10％的比例接種于含有pb2+的有氮改良培養(yǎng)基中，在37℃震蕩速度為140r/min的條件下第三次馴化處理48h得到第三微生物菌群，將第三微生物菌群以10％的比例接種于含有ni2+的有氮改良培養(yǎng)基中，在37℃震蕩速度為140r/min的條件下第四次馴化處理48h得到第四微生物菌群，將第四微生物菌群以10％的比例接種于含有cr6+的有氮改良培養(yǎng)基中，在37℃震蕩速度為140r/min的條件下第五次馴化處理48h得到微生物混合菌劑。實(shí)施例2首先，將12g/l的胰蛋白胨、6g/l的酵母提取物和12g/l的氯化鈉，并在溫度為125℃、ph值為7.2的條件下高溫濕熱滅菌25min得到lb培養(yǎng)基。其次，將12g/l的蔗糖、3g/l的磷酸氫二鉀、0.8g/l的硫酸鎂、1.5g/l的硫酸銨、0.15g/l的氯化鈉、0.8g/l的酵母膏和0.8g/l的碳酸鈣，并在溫度為125℃、ph值為7.2的條件下高溫濕熱滅菌25min得到有氮改良培養(yǎng)基。取20g的重金屬污染土壤于裝有20ml無菌水的錐形瓶中，震蕩速度為160r/min的條件下震蕩35min獲得土壤浸提液。土壤浸提液以3％的比例接種至lb培養(yǎng)基中，在溫度為35℃、震蕩速度為120r/min的搖床培養(yǎng)20h得到微生物菌群。將微生物菌群以5％的比例接種于含有zn2+的有氮改良培養(yǎng)基中，在33℃震蕩速度為120r/min的條件下第一次馴化36h得到第一微生物菌群，將第一微生物菌群以15％的比例接種于含有pb2+的有氮改良培養(yǎng)基中，在37℃震蕩速度為160r/min的條件下第二次馴化處理60h得到第二微生物菌群，將第二微生物菌群以10％的比例接種于含有ni2+的有氮改良培養(yǎng)基中，在35℃震蕩速度為140r/min的條件下第三次馴化處理48h得到第三微生物菌群，將第三微生物菌群以10％的比例接種于含有cr6+的有氮改良培養(yǎng)基中，在35℃震蕩速度為140r/min的條件下第四次馴化處理48h得到第四微生物菌群，將第四微生物菌群以10％的比例接種于含有cd2+的有氮改良培養(yǎng)基中，在37℃震蕩速度為140r/min的條件下第五次馴化處理48h得到微生物混合菌劑。實(shí)施例3首先，將10g/l的胰蛋白胨、5g/l的酵母提取物和10g/l的氯化鈉，并在溫度為120℃、ph值為7.1的條件下高溫濕熱滅菌20min得到lb培養(yǎng)基。其次，將10g/l的蔗糖、2g/l的磷酸氫二鉀、0.5g/l的硫酸鎂、1g/l的硫酸銨、0.1g/l的氯化鈉、0.5g/l的酵母膏和0.5g/l的碳酸鈣，并在溫度為120℃、ph值為7.1的條件下高溫濕熱滅菌20min得到有氮改良培養(yǎng)基。取20g的重金屬污染土壤于裝有20ml無菌水的錐形瓶中，震蕩速度為140r/min的條件下震蕩30min獲得土壤浸提液。土壤浸提液以2％的比例接種至lb培養(yǎng)基中，在溫度為37℃、震蕩速度為160r/min的搖床培養(yǎng)30h得到微生物菌群。將微生物菌群以10％的比例接種于含有pb2+的有氮改良培養(yǎng)基中，在35℃震蕩速度為140r/min的條件下第一次馴化48h得到第一微生物菌群，將第一微生物菌群以10％的比例接種于含有ni2+的有氮改良培養(yǎng)基中，在35℃震蕩速度為140r/min的條件下第二次馴化處理48h得到第二微生物菌群，將第二微生物菌群以5％的比例接種于含有cr6+的有氮改良培養(yǎng)基中，在33℃震蕩速度為120r/min的條件下第三次馴化處理36h得到第三微生物菌群，將第三微生物菌群以15％的比例接種于含有cd2+的有氮改良培養(yǎng)基中，在37℃震蕩速度為160r/min的條件下第四次馴化處理60h得到第四微生物菌群，將第四微生物菌群以10％的比例接種于含有zn2+的有氮改良培養(yǎng)基中，在37℃震蕩速度為140r/min的條件下第五次馴化處理48h得到微生物混合菌劑。實(shí)施例4首先，將10g/l的胰蛋白胨、5g/l的酵母提取物和10g/l的氯化鈉，并在溫度為120℃、ph值為7.1的條件下高溫濕熱滅菌20min得到lb培養(yǎng)基。其次，將10g/l的蔗糖、2g/l的磷酸氫二鉀、0.5g/l的硫酸鎂、1g/l的硫酸銨、0.1g/l的氯化鈉、0.5g/l的酵母膏和0.5g/l的碳酸鈣，并在溫度為120℃、ph值為7.1的條件下高溫濕熱滅菌20min得到有氮改良培養(yǎng)基。取20g的重金屬污染土壤于裝有20ml無菌水的錐形瓶中，震蕩速度為140r/min的條件下震蕩30min獲得土壤浸提液。土壤浸提液以1％的比例接種至lb培養(yǎng)基中，在溫度為35℃、震蕩速度為140r/min的搖床培養(yǎng)24h得到微生物菌群。將微生物菌群以15％的比例接種于含有ni2+的有氮改良培養(yǎng)基中，在37℃震蕩速度為160r/min的條件下第一次馴化60h得到第一微生物菌群，將第一微生物菌群以5％的比例接種于含有cr6+的有氮改良培養(yǎng)基中，在33℃震蕩速度為120r/min的條件下第二次馴化處理36h得到第二微生物菌群，將第二微生物菌群以15％的比例接種于含有cd2+的有氮改良培養(yǎng)基中，在37℃震蕩速度為160r/min的條件下第三次馴化處理60h得到第三微生物菌群，將第三微生物菌群以5％的比例接種于含有zn2+的有氮改良培養(yǎng)基中，在33℃震蕩速度為120r/min的條件下第四次馴化處理36h得到第四微生物菌群，將第四微生物菌群以10％的比例接種于含有pb2+的有氮改良培養(yǎng)基中，在37℃震蕩速度為140r/min的條件下第五次馴化處理48h得到微生物混合菌劑。試驗(yàn)例對(duì)實(shí)施例1-4提供的微生物混合菌劑吸附重金屬離子的能力進(jìn)行檢測(cè)：將微生物混合菌劑以1％的比例接種至lb液體培養(yǎng)基中，在37℃、震蕩速度為140r/min下培養(yǎng)14h進(jìn)行活化。將活化的微生物混合菌劑分別以2％的比例接種于濃度為50mg/l重金屬離子cd2+的lb液體培養(yǎng)基、濃度為50mg/l重金屬離子zn2+的lb液體培養(yǎng)基、濃度為50mg/l重金屬離子pb2+的lb液體培養(yǎng)基、濃度為50mg/l重金屬離子ni2+的lb液體培養(yǎng)基和濃度為50mg/l重金屬離子cr6+的lb液體培養(yǎng)基中，后在37℃下以140r/min的速度在搖床中培養(yǎng)3天，然后在室溫下以5000r/min的速度離心20min，收集上清液，利用火焰原子吸收光譜法對(duì)上清液中的重金屬濃度進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)以后得到表1。表1微生物混合菌劑吸附重金屬離子能力的測(cè)定結(jié)果從表1可以看出，溶液中的重金屬離子濃度下降了20-25％，說明微生物混合菌劑對(duì)重金屬離子具有鈍化效果。對(duì)實(shí)施例1-4提供的微生物混合菌劑的溶解難溶性磷酸鹽方面的檢測(cè)：首先準(zhǔn)備溶液，鉬銻貯存液的制備方法為：將153ml濃硫酸(分析純)，緩慢加入到400ml蒸餾水中，不斷攪拌，冷卻；稱取磨細(xì)的鉬酸銨((nh4)6mo7o2·4h2o)10g，溶于溫度約60℃的300ml水中，冷卻；將硫酸溶液緩慢倒入鉬酸銨溶液中，加入0.5％酒石酸銻鉀100ml，冷卻后定容至1000ml，貯存于棕色瓶中，此貯備液含鉬酸銨1％、硫酸2.75mol/l。鉬銻抗顯色劑：稱取1.5g抗壞血酸溶于100ml鉬銻貯存液，現(xiàn)配現(xiàn)用。nbrip液體培養(yǎng)基的制備方法為：將10g/l葡萄糖、5g/l磷酸三鈣/磷酸鋁、10g/l氯化鎂、0.25g/l七水硫酸鎂、0.2g/l氯化鉀和0.1g/l硫酸銨混合，其初始ph值為7.0，在115℃高溫濕熱滅菌30min得到。將實(shí)施例1-4提供的微生物混合菌劑以1％的比例接種至lb液體培養(yǎng)基中，在37℃、震蕩速度為140r/min下培養(yǎng)14h進(jìn)行活化。將活化的微生物混合菌劑分別以2％的比例接種至nbrip液體培養(yǎng)基中，添加等量無菌水作為對(duì)照組，28℃下以160r/min的速度振蕩培養(yǎng)5天，利用鉬銻抗顯色法對(duì)菌株的溶磷能力進(jìn)行檢測(cè)，得到表2。表2微生物混合菌劑的溶磷能力的測(cè)定結(jié)果對(duì)照組實(shí)施例1實(shí)施例2實(shí)施例3實(shí)施例4有效磷/mg/l1.37120.13125.72124.49129.58從表2可以看出，微生物混合菌劑具有很強(qiáng)的溶解難溶性磷酸鹽的能力，將其接種于土壤中，能夠提高土壤中可溶性磷的含量，從而促使農(nóng)作物的生長(zhǎng)發(fā)育。實(shí)施例1-4提供的微生物混合菌劑修復(fù)重金屬污染土壤的效果測(cè)定：將重金屬污染土壤自然風(fēng)干以后，充分混合均勻以后置于花盆中，微生物混合菌劑以1％的比例接種至lb液體培養(yǎng)基中，在37℃、震蕩速度為140r/min下培養(yǎng)14h進(jìn)行活化。將活化的微生物混合菌劑按照5wt％的比例接種至花盆中，不接種微生物混合菌劑為對(duì)照組，充分混合均勻，并定期澆水，保持重金屬污染土壤的含水量為60wt％-70wt％，定期攪拌混合均勻并保持20天，取濕潤(rùn)土壤，利用tclp和cacl2法提取土壤中有效態(tài)的重金屬離子，利用火焰原子吸收光譜法測(cè)定其濃度，檢測(cè)以后得到表3。(其中，可以根據(jù)重金屬污染土壤中的重金屬含量適當(dāng)添加活化的微生物混合菌劑的接種比例至10wt％)表3微生物混合菌劑修復(fù)重金屬土壤的測(cè)定結(jié)果對(duì)照組實(shí)施例1實(shí)施例2實(shí)施例3實(shí)施例4cd2+/mg/kg0.390.2730.2640.2470.234zn2+/mg/kg20.3913.01814.27313.2812.234pb2+/mg/kg6.694.4214.0144.6834.218ni2+/mg/kg8.355.8455.6065.3685.01cr6+/mg/kg12.577.9428.3898.2718.485從表3可以看出，重金屬污染土壤中的有效態(tài)重金屬濃度下降了30-40％，說明微生物混合菌劑對(duì)重金屬污染土壤中的重金屬具有很好的鈍化效果，使重金屬污染土壤中的活性金屬降低。實(shí)施例1-4提供的微生物混合菌劑降低農(nóng)作物中重金屬的效果測(cè)定：將實(shí)施例1-4提供的微生物混合菌劑以1％的比例接種至lb液體培養(yǎng)基中，在37℃、震蕩速度為140r/min下培養(yǎng)14h進(jìn)行活化。將活化的微生物混合菌劑按5wt％的比例分別接種至含重金屬污染的供試土壤的花盆中，充分混勻，室溫放置一周，定期澆水，保持含水量為土壤持水量的60wt％-70wt％。還設(shè)置對(duì)照組，即不接種微生物混合菌劑，其他條件相同，選取大小均勻的油菜種子經(jīng)95％酒精和3％naclo溶液表面滅菌并用無菌水沖洗之后，將種子分別放入花盆中培育，每個(gè)花盆種植10株。定期澆水，保持光照時(shí)間為12-14小時(shí)，作物生長(zhǎng)40天后收獲，分別測(cè)定油菜的重量以及油菜莖的重金屬含量，并求其平均值，檢測(cè)以后得到表4。表4微生物混合菌劑降低油菜中重金屬的測(cè)定結(jié)果對(duì)照組實(shí)施例1實(shí)施例2實(shí)施例3實(shí)施例4cd2+/mg/kg0.930.5580.430.5410.372zn2+/mg/kg30.3416.86612.13618.20413.742pb2+/mg/kg3.451.381.611.842.07ni2+/mg/kg2.250.91.081.351.17cr6+/mg/kg16.739.0388.6929.3210.031油菜重量/g215240.8245.96243.38256.28從表4可以看出，與對(duì)照組相比，接種微生物混合菌劑后種植的油菜的重量均有不同程度的提升，且重金屬含量均低于對(duì)照組，油菜中重金屬含量與對(duì)照組相比降低了40-60％，說明微生物混合菌劑的使用能夠促進(jìn)從而促使油菜的生長(zhǎng)，降低油菜的重金屬含量，(其中，本發(fā)明的農(nóng)作物不僅是油菜，還可以是印度芥菜、豌豆、大白菜、蘿卜和黑麥草等)。以上所描述的實(shí)施例是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例。本發(fā)明的實(shí)施例的詳細(xì)描述并非旨在限制要求保護(hù)的本發(fā)明的范圍，而是僅僅表示本發(fā)明的選定實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有作出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。當(dāng)前第1頁12