本發(fā)明涉及生物材料技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種絲蛋白海綿及其制備方法。

背景技術(shù)：

絲蛋白優(yōu)異的生物相容性，力學(xué)性能，可降解性，易于成形以及能夠在水溶液中進(jìn)行處理等優(yōu)點(diǎn)，引發(fā)了研究者的廣泛興趣，并逐漸嘗試將其應(yīng)用于血管、神經(jīng)、皮膚、骨等多種組織修復(fù)以及藥物控釋領(lǐng)域。在不同形態(tài)的絲蛋白生物材料中，具有多孔結(jié)構(gòu)的海綿材料在組織修復(fù)領(lǐng)域具有極大的應(yīng)用潛力，成為絲蛋白生物材料研究的重要方向。

研究者開發(fā)了多種制備絲蛋白海綿的方法，主要包括鹽析法和冷凍干燥法；冷凍干燥法所制備的絲蛋白，盡管一般為非晶結(jié)構(gòu)，但其會(huì)在水中溶解，導(dǎo)致其無法應(yīng)用，只能通過醇處理、真空水處理來誘導(dǎo)形成beta-sheet，最終獲得不溶于水的海綿材料。因此，盡管有多種方法如添加高結(jié)晶絲蛋白誘導(dǎo)、利用酸來抑制結(jié)晶等降低海綿的結(jié)晶度，在保持海綿在水中穩(wěn)定性的基礎(chǔ)上來降低海綿的硬度，但絲蛋白多孔海綿水不溶性，力學(xué)性能以及晶體結(jié)構(gòu)之間的內(nèi)在矛盾仍然缺乏解決的方法。鹽析法是最早開發(fā)的制備絲蛋白多孔海綿的傳統(tǒng)方式，所制備絲蛋白具有較好的力學(xué)性能和相互貫通的孔結(jié)構(gòu)，同時(shí)也具有良好的組織和生物相容性。然而，隨著對生物材料要求的不斷提高，人們希望材料不僅具有貫通孔結(jié)構(gòu)，同時(shí)還應(yīng)該具有仿細(xì)胞外基質(zhì)的納米纖維結(jié)構(gòu)，從而更好的促進(jìn)細(xì)胞生長和組織修復(fù)，但傳統(tǒng)鹽析法難以對絲蛋白的納米結(jié)構(gòu)進(jìn)行調(diào)控，使其難以滿足目前生物材料發(fā)展的需求。

近年來，多個(gè)研究組發(fā)現(xiàn)絲蛋白在水溶液中能夠具有不同的納米結(jié)構(gòu)，且納米結(jié)構(gòu)可以通過調(diào)控其組裝過程進(jìn)行一定的控制。但絲蛋白在水中轉(zhuǎn)變成納米纖維的同時(shí)，也會(huì)形成beta-sheet，導(dǎo)致絲蛋白凝膠化，從而無法使用鹽析法制備多孔支架材料。白樹猛等的文獻(xiàn)表明通過一定的控制，可以在絲蛋白溶液態(tài)下獲得納米纖維，但此納米纖維不穩(wěn)定，同樣無法應(yīng)用于鹽析法制備多孔海綿材料。如何提高非晶納米纖維的穩(wěn)定性是以此為原料，通過鹽析法制備具有納米纖維-微孔復(fù)合結(jié)構(gòu)的絲蛋白海綿的關(guān)鍵。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明解決的技術(shù)問題在于提供一種多孔絲蛋白海綿及其制備方法，本申請制備的多孔絲蛋白海綿具有貫通的多孔結(jié)構(gòu)與納米纖維結(jié)構(gòu)，且在水中的穩(wěn)定性較好。

有鑒于此，本申請?zhí)峁┝艘环N絲蛋白海綿，所述絲蛋白海綿具有貫通的多孔結(jié)構(gòu)，孔徑為100～500μm；孔壁由納米纖維組成，所述納米纖維的直徑為10～50nm。

本申請還提供了上述方案所述的絲蛋白海綿的制備方法，包括以下步驟：

a)，將絲蛋白溶液進(jìn)行濃縮，得到絲蛋白納米顆粒溶液；

b)，調(diào)整所述絲蛋白納米顆粒溶液的ph值和濃度，得到絲蛋白納米纖維溶液；

c)，將所述絲蛋白納米纖維溶液進(jìn)行鹽析，得到絲蛋白海綿。

優(yōu)選的，步驟a)中，所述絲蛋白溶液的濃度為2～7wt％；所述絲蛋白納米顆粒溶液的濃度為12～25wt％。

優(yōu)選的，步驟a)中，所述濃縮的溫度為25～70℃，所述濃縮的時(shí)間為8～48h。

優(yōu)選的，步驟b)中，所述ph值為2～5，調(diào)整所述絲蛋白納米顆粒溶液的濃度值4～10wt％。

優(yōu)選的，調(diào)整所述絲蛋白納米顆粒溶液的ph值與濃度的溶液為酸的水溶液，所述酸為鹽酸、甲酸或乙酸。

優(yōu)選的，所述鹽析的過程具體為：

將所述絲蛋白納米纖維溶液與氯化鈉顆?；旌?，靜置培育，將得到的復(fù)合物浸泡于純水中。

優(yōu)選的，所述氯化鈉顆粒的粒徑為200～900μm；以所述絲蛋白納米纖維溶液為基，所述氯化鈉顆粒的質(zhì)量為1～4g/ml。

優(yōu)選的，所述靜置培育的時(shí)間為24h，所述浸泡于純水中的時(shí)間為12～72h。

優(yōu)選的，所述鹽析后還包括：

將鹽析后的濕態(tài)的絲蛋白海綿進(jìn)行常溫干燥。

本申請?zhí)峁┝艘环N多孔絲蛋白海綿，其具有貫通的多孔結(jié)構(gòu)，孔徑為100～500μm；孔壁由納米纖維組成，納米纖維的直徑為10～50nm；由此本申請?zhí)峁┑慕z蛋白海綿同時(shí)具有貫通的多孔結(jié)構(gòu)與仿細(xì)胞外基質(zhì)的納米纖維結(jié)構(gòu)。為了得到上述多孔絲蛋白海綿，本申請還提供了所述絲蛋白海綿的制備方法，即通過將絲蛋白水溶液濃縮處理組裝成絲蛋白納米顆粒，隨后調(diào)控其ph值，誘導(dǎo)納米顆粒轉(zhuǎn)變成納米纖維溶液，最后鹽析法誘導(dǎo)絲蛋白納米纖維轉(zhuǎn)化成beta-sheet結(jié)構(gòu)，獲得具有納米纖維-微孔復(fù)合結(jié)構(gòu)的多孔海綿。本申請是將絲蛋白的可控組裝融入到鹽析法制備多孔絲蛋白海綿的過程，其使得絲蛋白在鹽析法作用前轉(zhuǎn)變成了納米纖維，并具有了更強(qiáng)的相互作用，結(jié)合鹽析法誘導(dǎo)絲蛋白結(jié)晶的特點(diǎn)，使得多孔絲蛋白海綿不僅具有納米纖維-多孔復(fù)合結(jié)構(gòu)，同時(shí)還具有穩(wěn)定性。

進(jìn)一步的，在制備絲蛋白海綿的過程中，絲蛋白的初始濃度、濃縮溫度、濃縮時(shí)間與ph值調(diào)整之間具有相互關(guān)聯(lián)的協(xié)同作用，只有根據(jù)絲蛋白在每個(gè)過程中的客觀狀態(tài)進(jìn)行動(dòng)態(tài)調(diào)整，才能獲得上述結(jié)構(gòu)的絲蛋白海綿。

附圖說明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例1制備絲蛋白海綿的過程中濃縮后的溶液中絲蛋白的納米結(jié)構(gòu)圖；

圖2為本發(fā)明實(shí)施例1制備絲蛋白海綿的過程中ph值調(diào)整后的溶液中絲蛋白的納米結(jié)構(gòu)圖；

圖3為本發(fā)明實(shí)施例1制備的絲蛋白海綿的孔結(jié)構(gòu)圖；

圖4為本發(fā)明實(shí)施例1制備的絲蛋白海綿孔壁的微觀結(jié)構(gòu)圖；

圖5為本發(fā)明實(shí)施例1制備的絲蛋白海綿的xrd圖；

圖6為本發(fā)明對比例1制備的絲蛋白海綿的微觀結(jié)構(gòu)圖。

具體實(shí)施方式

為了進(jìn)一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方案進(jìn)行描述，但是應(yīng)當(dāng)理解，這些描述只是為進(jìn)一步說明本發(fā)明的特征和優(yōu)點(diǎn)，而不是對本發(fā)明權(quán)利要求的限制。

申請人通過研究表明：絲蛋白在酸性環(huán)境下能夠抑制其構(gòu)象向beta-sheet轉(zhuǎn)化，綜合目前研究的進(jìn)展，申請人認(rèn)為通過上述多個(gè)因素的協(xié)同調(diào)控，可以獲得具有一定穩(wěn)定性，適用于鹽析法的絲蛋白納米纖維溶液，從而實(shí)現(xiàn)利用傳統(tǒng)鹽析法制備具有納米纖維-微孔復(fù)合結(jié)構(gòu)的多孔海綿的突破。由此本申請?zhí)峁┝艘环N絲蛋白海綿與絲蛋白海綿的制備方法。

本發(fā)明提供了一種絲蛋白海綿，其具有貫通的多孔結(jié)構(gòu)，孔徑為100～500μm；孔壁由納米纖維組成，所述納米纖維的直徑為10～50nm。

本申請?zhí)峁┑慕z蛋白海綿不僅具有貫通的多孔結(jié)構(gòu)，還具有仿細(xì)胞外基質(zhì)的納米纖維結(jié)構(gòu)，從而使絲蛋白海綿具有較好的生物相容性；所述絲蛋白海綿主要為beta-sheet結(jié)構(gòu)；其孔徑的尺寸為100～500μm，孔壁由納米纖維組成，直徑為10～50nm，在制備條件改變的情況下，所述絲蛋白海綿的上述尺寸將發(fā)生改變。由此，本申請還提供了所述絲蛋白海綿的制備方法，包括以下步驟：

a)，將絲蛋白溶液進(jìn)行濃縮，得到絲蛋白納米顆粒溶液；

b)，調(diào)整所述絲蛋白納米顆粒溶液的ph值和濃度，得到絲蛋白納米纖維溶液；

c)，將所述絲蛋白納米纖維溶液進(jìn)行鹽析，得到絲蛋白海綿。

本申請是將絲蛋白的可控組裝融入到鹽析法制備多孔海綿的過程，使得絲蛋白在鹽析法作用前轉(zhuǎn)變成了納米纖維，并具有了更強(qiáng)的相互作用，再結(jié)合鹽析法誘導(dǎo)絲蛋白結(jié)晶的特點(diǎn)，使得多孔海綿不僅具有納米纖維-多孔復(fù)合結(jié)構(gòu)，同時(shí)還具有穩(wěn)定性。

按照本發(fā)明，首先將絲蛋白溶液進(jìn)行濃縮，得到絲蛋白納米顆粒溶液。此過程是將絲蛋白溶液中的絲蛋白轉(zhuǎn)變?yōu)榻z蛋白顆粒，同時(shí)在顆粒內(nèi)部形成納米纖維。在該步驟中，絲蛋白溶液的初始濃度、濃縮溫度和時(shí)間對獲得的絲蛋白納米顆粒的穩(wěn)定性以及二級構(gòu)象組成具有關(guān)鍵作用；在上述因素影響下，不僅絲蛋白具有合適的二級結(jié)構(gòu)，同時(shí)還在形成的絲蛋白顆粒內(nèi)部形成了納米纖維，因此才可能在后續(xù)調(diào)整ph值作用下顆粒破裂轉(zhuǎn)變成納米纖維，并具有合適的分子相互作用。所述絲蛋白溶液的濃度為2～7wt％，在具體實(shí)施例中，所述絲蛋白溶液的濃度為4～6wt％。所述濃縮的溫度為25～70℃，所述濃縮的時(shí)間為8～48h；在具體實(shí)施例中，所述濃縮的溫度為30～60℃，所述濃縮的時(shí)間為12～36h。所述絲蛋白納米顆粒溶液的濃度為12～25wt％，在具體實(shí)施例中，所述絲蛋白納米顆粒溶液的濃度為15～20wt％。所述絲蛋白溶液的初始濃度、濃縮溫度與濃縮時(shí)間過大，則會(huì)導(dǎo)致絲蛋白轉(zhuǎn)變成凝膠或者過于穩(wěn)定的顆粒，導(dǎo)致無法在ph作用下轉(zhuǎn)變成納米纖維，或者無法進(jìn)行鹽析法處理；而上述因素過小，則絲蛋白無法在顆粒內(nèi)部形成納米纖維，或者無法通過ph作用獲得納米纖維。

本申請然后調(diào)整所述絲蛋白納米顆粒溶液的ph值和濃度，得到絲蛋白納米纖維溶液；此過程是通過改變納米顆粒內(nèi)外作用力，誘導(dǎo)納米顆粒破裂，將納米纖維釋放出來，得到絲蛋白納米纖維。調(diào)整絲蛋白納米顆粒溶液的濃度與ph值實(shí)際上對納米顆粒的穩(wěn)定性具有決定作用。上步驟得到的絲蛋白納米顆粒處于亞穩(wěn)態(tài)，顆粒內(nèi)部具有電荷斥力，顆粒外部顆粒之間同樣具有電荷斥力，兩種作用力相互抵消，使得納米顆粒相互穩(wěn)定存在，濃度和ph值的變化都是改變顆粒之間的相互作用力，使得內(nèi)外作用平衡打破，顆粒破裂，納米纖維釋放出來，由此得到絲蛋白納米纖維。因此只有合適的濃度和ph值才能誘導(dǎo)顆粒破裂，納米纖維釋放，濃度過大或者過小均無法誘導(dǎo)顆粒破裂。本申請調(diào)整所述絲蛋白納米顆粒溶液的濃度至4～10wt％，ph值至2～5，在具體實(shí)施例中，調(diào)整所述絲蛋白納米顆粒溶液的濃度至5～8wt％，ph值至3～4。本申請采用酸的水溶液調(diào)整所述絲蛋白納米顆粒溶液的濃度與ph值，示例的，所述酸可選為鹽酸、甲酸或乙酸。

按照本發(fā)明，然后將所述絲蛋白納米纖維溶液進(jìn)行鹽析，得到絲蛋白海綿；此步驟采用鹽析法將納米纖維進(jìn)一步誘導(dǎo)形成不溶于水的多孔海綿，得到絲蛋白海綿。鹽析的過程具體為：

將所述絲蛋白纖維溶液與氯化鈉顆粒混合，靜置培育，將得到的復(fù)合物浸泡于純水中。

在上述鹽析過程中，氯化鈉顆粒具有兩種作用，首先氯化鈉溶解提供了高鹽環(huán)境，誘導(dǎo)絲蛋白向晶體結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)變，使得絲蛋白變成不溶于水的材料；同時(shí)不溶解的氯化鈉作為造孔劑決定孔的大小。因此氯化鈉顆粒的尺寸和加入量會(huì)決定絲蛋白海綿孔的大小和在水中的穩(wěn)定性。所述氯化鈉顆粒的粒徑為200～900μm，更具體的，所述氯化鈉顆粒的粒徑可以為200～400μm，可以為200～500μm，可以為500～700μm，還可以為600～900μm；以所述絲蛋白納米纖維溶液為基，所述氯化鈉顆粒的加入量為1～4g/ml。所述氯化鈉顆粒過少，絲蛋白納米纖維無法充分構(gòu)象轉(zhuǎn)化，無法獲得水不溶性；過多則會(huì)影響制備多孔海綿的孔結(jié)構(gòu)和完整性。所述靜置培育的時(shí)間為24h，所述浸泡于水中的時(shí)間為12～72h，在具體實(shí)施例中，所述浸泡于水中的時(shí)間為24～48h。

經(jīng)過鹽析后，得到的是濕態(tài)的絲蛋白多孔海綿，將其進(jìn)行常溫干燥，即得到多孔絲蛋白海綿。

本申請首先將絲蛋白溶液進(jìn)行濃縮，使得絲蛋白形成納米顆粒，同時(shí)在顆粒內(nèi)部形成納米纖維，再進(jìn)行濃度與ph值的調(diào)整，通過改變納米顆粒內(nèi)外作用力，誘導(dǎo)納米顆粒破裂，將納米纖維釋放出來，最后則通過鹽析法將納米纖維進(jìn)一步誘導(dǎo)形成不溶于水的多孔海綿，上述步驟是依次的結(jié)構(gòu)調(diào)控過程，只有前面的步驟完成，后一步驟才可能實(shí)現(xiàn)，是具有關(guān)聯(lián)的連續(xù)過程，不能進(jìn)行調(diào)整。

本發(fā)明提供了一種具有納米纖維-微孔復(fù)合結(jié)構(gòu)的絲蛋白海綿材料及其制備方法，所制備絲蛋白海綿在水中具有穩(wěn)定性，具有納米纖維-微孔復(fù)合結(jié)構(gòu)，孔徑可在100～500μm調(diào)控。本發(fā)明首先將絲蛋白溶液在特定溫度濃縮處理，獲得納米顆粒，隨后通過ph調(diào)整改變顆粒的相互作用，使其轉(zhuǎn)化成具有一定穩(wěn)定性的納米纖維，隨后結(jié)合傳統(tǒng)的鹽析法制備了具有復(fù)合結(jié)構(gòu)的多孔海綿。上述過程中，絲蛋白濃度、濃縮溫度、濃縮時(shí)間以及ph值調(diào)整之間具有相互關(guān)聯(lián)的協(xié)同作用，只有根據(jù)絲蛋白的客觀狀態(tài)進(jìn)行動(dòng)態(tài)調(diào)整，才可以獲得所期望的結(jié)構(gòu)，因此盡管上述的關(guān)鍵條件看似采用的常規(guī)技術(shù)，但其核心在于對絲蛋白納米纖維本身狀態(tài)和絲蛋白組裝過程的深入理解，以及不同參數(shù)的協(xié)同作用，不同的參數(shù)之間具有極高的關(guān)聯(lián)性，不考慮絲蛋白的本身狀態(tài)和不同因素對絲蛋白組裝影響，而機(jī)械套用上述參數(shù)并不會(huì)制備出具有不溶性的非晶海綿。

為了進(jìn)一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明供的絲蛋白海綿的制備方法，本發(fā)明的保護(hù)范圍不受以下實(shí)施例的限制。

實(shí)施例1

(1)將4wt％的絲蛋白溶液在50℃下，通過調(diào)整濃縮速率，將溶液濃縮24h，獲得濃度為25wt％的絲蛋白溶液，使絲蛋白轉(zhuǎn)變成納米顆粒；

(2)將濃縮后的絲蛋白溶液添加鹽酸水溶液，調(diào)整溶液ph值為5，同時(shí)調(diào)整絲蛋白濃度為7wt％，使絲蛋白轉(zhuǎn)變成納米纖維；

(3)將絲蛋白納米纖維溶液注入模具，添加2g/ml粒徑為500μm～700μm的氯化鈉顆粒，靜置培育24h；

(4)將上述得到的復(fù)合物浸泡在純水中48h，使氯化鈉完全溶解，獲得濕態(tài)的絲蛋白多孔海綿；

(5)將濕態(tài)的絲蛋白多孔海綿常溫干燥，獲得最終的多孔絲蛋白海綿材料。

圖1為本發(fā)明實(shí)施例1制備絲蛋白海綿的過程中濃縮后的溶液中絲蛋白的納米結(jié)構(gòu)圖，由圖1可知，在經(jīng)過濃縮處理后，絲蛋白轉(zhuǎn)變成絲蛋白納米顆粒；圖2為本發(fā)明實(shí)施例1制備絲蛋白海綿的過程中ph值調(diào)整后的溶液中絲蛋白的納米結(jié)構(gòu)圖，由圖2可知，在調(diào)整ph值后，絲蛋白納米顆粒轉(zhuǎn)變成絲蛋白納米纖維。

圖3為本發(fā)明實(shí)施例1制備的絲蛋白海綿孔的結(jié)構(gòu)圖；圖4為本發(fā)明實(shí)施例1制備的絲蛋白海綿孔壁的微觀結(jié)構(gòu)圖；由圖3和圖4可知，本實(shí)施例1制備的絲蛋白海綿的孔徑為100～500μm，孔壁由納米纖維組成。

圖5為本發(fā)明實(shí)施例1制備的絲蛋白海綿的xrd圖，由圖5可知，本實(shí)施例制備的絲蛋白海綿主要為beta-sheet結(jié)構(gòu)。

將絲蛋白海綿放置到水中培育24小時(shí)后，干燥，稱量培育前后絲蛋白海綿的質(zhì)量變化，發(fā)現(xiàn)質(zhì)量損失低于5％，證明絲蛋白海綿具有良好的水穩(wěn)定性。

實(shí)施例2

(1)將6wt％的絲蛋白溶液在60℃下，通過調(diào)整濃縮速率，將溶液濃縮16h，獲得濃度為20wt％的絲蛋白溶液，使絲蛋白轉(zhuǎn)變成納米顆粒；

(2)將濃縮后的絲蛋白溶液添加甲酸水溶液，調(diào)整溶液ph值為3，同時(shí)調(diào)整絲蛋白濃度為4wt％，使絲蛋白轉(zhuǎn)變成納米纖維；

(3)將絲蛋白納米纖維溶液注入模具，添加4g/ml粒徑為200μm～500μm的氯化鈉顆粒，靜置培育24h；

(4)將上述得到的復(fù)合物浸泡在純水中72h，使氯化鈉完全溶解，獲得濕態(tài)的絲蛋白多孔海綿；

(5)將濕態(tài)的絲蛋白多孔海綿常溫干燥，獲得最終的多孔絲蛋白海綿材料。

實(shí)施例3

(1)將4wt％的絲蛋白溶液在30℃下，通過調(diào)整濃縮速率，將溶液濃縮48h，獲得濃度為15wt％的絲蛋白溶液，使絲蛋白轉(zhuǎn)變成納米顆粒；

(2)將濃縮后的絲蛋白溶液添加甲酸水溶液，調(diào)整溶液ph值為4，同時(shí)調(diào)整絲蛋白濃度為10wt％，使絲蛋白轉(zhuǎn)變成納米纖維；

(3)將絲蛋白納米纖維溶液注入模具，添加2g/ml粒徑為600μm～900μm的氯化鈉顆粒，靜置培育24h；

(4)將上述得到的復(fù)合物浸泡在純水中24h，使氯化鈉完全溶解，獲得濕態(tài)的絲蛋白多孔海綿；

(5)將濕態(tài)的絲蛋白多孔海綿常溫干燥，獲得最終的多孔海綿材料。

實(shí)施例4

(1)將6wt％的絲蛋白溶液在70℃下，通過調(diào)整濃縮速率，將溶液濃縮12h，獲得濃度為20wt％的絲蛋白溶液，使絲蛋白轉(zhuǎn)變成納米顆粒；

(2)將濃縮后的絲蛋白溶液添加乙酸水溶液，調(diào)整溶液ph值為2，同時(shí)調(diào)整絲蛋白濃度為4wt％，使絲蛋白轉(zhuǎn)變成納米纖維；

(3)將絲蛋白納米纖維溶液注入模具，添加1g/ml粒徑為200μm～400μm的氯化鈉顆粒，靜置培育24h；

(4)將上述得到的復(fù)合物浸泡在純水中48h，使氯化鈉完全溶解，獲得濕態(tài)的絲蛋白多孔海綿；

(5)將濕態(tài)的絲蛋白多孔海綿常溫干燥，獲得最終的多孔絲蛋白海綿材料。

對比例1

(1)將4wt％的絲蛋白溶液在30℃下，通過調(diào)整濃縮速率，將溶液濃縮48h，獲得濃度為15wt％的絲蛋白溶液，使絲蛋白轉(zhuǎn)變成納米顆粒；

(2)將濃縮后的絲蛋白溶液保持中性，不添加任何酸溶液，同時(shí)調(diào)整絲蛋白濃度為10wt％，則絲蛋白保持顆粒狀態(tài)而無法轉(zhuǎn)變成納米纖維；

(3)將絲蛋白溶液注入模具，添加2g/ml粒徑為600μm～900μm的氯化鈉顆粒，靜置培育24h；

(4)將上述得到的復(fù)合物浸泡在純水中24h，使氯化鈉完全溶解，獲得濕態(tài)的絲蛋白多孔海綿；

(5)將濕態(tài)的絲蛋白多孔海綿常溫干燥，獲得最終的多孔海綿材料，所獲得的海綿材料盡管具有多孔結(jié)構(gòu)，但孔壁并不存在仿細(xì)胞外基質(zhì)的納米纖維形態(tài)(如圖6所示)。

對比例2

(1)將6wt％的絲蛋白溶液利用peo置換濃縮的方法，在4℃條件下，獲得濃度為20wt％的絲蛋白溶液，濃縮后絲蛋白未轉(zhuǎn)變成納米顆粒；

(2)將濃縮后的絲蛋白溶液添加乙酸水溶液，調(diào)整溶液ph值為2，同時(shí)調(diào)整絲蛋白濃度為4wt％，未見納米顆粒形成；

(3)將絲蛋白溶液注入模具，添加1g/ml粒徑為200μm～400μm的氯化鈉顆粒，靜置培育24h；

(4)將上述得到的復(fù)合物浸泡在純水中48h，使氯化鈉完全溶解，獲得濕態(tài)的絲蛋白多孔海綿；

(5)將濕態(tài)的絲蛋白多孔海綿常溫干燥，獲得最終的多孔絲蛋白海綿材料，所獲得多孔海綿材料同樣無法獲得納米纖維的形態(tài)。

對比例1和對比例2分別將實(shí)施例3和4的其中一個(gè)參數(shù)進(jìn)行改變，而保持其它參數(shù)不變，所制備多孔海綿均無法獲得納米纖維多孔復(fù)合結(jié)構(gòu)，證明了不同因素之間的高度相關(guān)性。

以上實(shí)施例的說明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想。應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對本發(fā)明進(jìn)行若干改進(jìn)和修飾，這些改進(jìn)和修飾也落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。

對所公開的實(shí)施例的上述說明，使本領(lǐng)域?qū)I(yè)技術(shù)人員能夠?qū)崿F(xiàn)或使用本發(fā)明。對這些實(shí)施例的多種修改對本領(lǐng)域的專業(yè)技術(shù)人員來說將是顯而易見的，本文中所定義的一般原理可以在不脫離本發(fā)明的精神或范圍的情況下，在其它實(shí)施例中實(shí)現(xiàn)。因此，本發(fā)明將不會(huì)被限制于本文所示的這些實(shí)施例，而是要符合與本文所公開的原理和新穎特點(diǎn)相一致的最寬的范圍。