本發(fā)明涉及一種益生菌及其應(yīng)用，屬于微生物領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

口臭是指呼吸時(shí)出現(xiàn)臭味的一種癥狀，是一種常見疾病，中國人的患病率在22％到50％以上不等?？诔艋颊卟桓遗c他人近距離交往，從而產(chǎn)生自卑心理，影響正常的人際、情感交流，令人十分苦惱。口臭主要由口腔內(nèi)細(xì)菌，尤其是由聚集在舌后1/3的革蘭陰性厭氧菌發(fā)酵產(chǎn)生的揮發(fā)性硫化物(volatilesulphurcompound，vsc)所引起。研究表明，vsc主要由牙齦卟啉單胞菌、福賽斯坦納菌、中間普雷沃菌和具核梭桿菌等細(xì)菌產(chǎn)生。kazor等運(yùn)用pcr對(duì)健康者和口臭者口腔內(nèi)細(xì)菌進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)口臭患者中具核梭桿菌(fusobacteriumperiodonticum)等檢出率較健康者高，說明這些細(xì)菌普遍存在于口臭患者口中；而唾液鏈球菌(streptococcussalivarius，s.salivarius)、粘滑羅氏菌(rothiamucilaginosa)和一種優(yōu)桿菌在健康者口腔中檢出率高，而在口臭者中檢出率明顯低于健康者。此結(jié)果提示，口臭與口腔菌群生態(tài)失調(diào)有關(guān)，產(chǎn)臭菌在口腔中過度增殖，影響了口腔正常菌群如唾液鏈球菌的生長。

已知口臭治療最基本的原理是減少產(chǎn)臭菌數(shù)量，降低vsc的濃度。目前治療方法主要有兩種：1)機(jī)械方法，包括清潔舌體、牙周潔治、清潔牙間隙及必要的刷牙和漱口等；2)生物化學(xué)方法，主要是指使用各種抗菌劑來抑制產(chǎn)臭菌的增殖，包括使用氯己定、金屬離子和西吡氯銨等。這些方法能短期改善口臭，但長期療效欠佳。而且使用生物化學(xué)方法因含有抗菌劑，長期使用還會(huì)導(dǎo)致口腔菌群失調(diào)。口臭治療后，各種細(xì)菌重新在口腔內(nèi)定植、生長、增殖，一旦產(chǎn)臭菌重新增殖為口腔中優(yōu)勢菌群，口臭即可復(fù)發(fā)，故有效地恢復(fù)口腔內(nèi)菌群正常的生態(tài)平衡是治療口臭的關(guān)鍵。很多學(xué)者報(bào)道了口臭及vscs水平可以通過刷牙、刷舌苔等治療而降低，但是這些方法持續(xù)時(shí)間短暫，停止使用后口臭會(huì)反彈。使用含有抗菌成分的漱口水在一段時(shí)間內(nèi)可有效降低口臭程度，但長期使用會(huì)產(chǎn)生耐藥性及口腔內(nèi)菌群失調(diào)，并且停藥后口腔內(nèi)的產(chǎn)臭菌將會(huì)重新聚集產(chǎn)生口臭。因此，近年來很多學(xué)者開始探索更有效地預(yù)防及治療口臭的方法，其中采用益生菌進(jìn)行口臭的治療已逐漸成為研究的熱點(diǎn)。

1907年，烏克蘭生物學(xué)家、諾貝爾獎(jiǎng)獲得者eliemetchnikoff首次提出益生菌的概念。who對(duì)益生菌的定義是以適當(dāng)劑量服用時(shí)，對(duì)宿主(人或動(dòng)物)健康有益的活體微生物制劑。益生菌包括雙歧桿菌族、乳酸桿菌族和鏈球菌族等。2001年，henker等人首次報(bào)道了應(yīng)用大腸桿菌(e.coli，nissle1917)成功治療口臭的病例，此外食竇魏斯氏菌(weissellacibaria)，體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)能有效地抑制具核梭桿菌的增值和抑制vscs產(chǎn)量，并且對(duì)于牙齦卟啉單胞菌、齒垢密螺旋體、洛氏普雷沃菌也有部分的抑制作用。唾液鏈球菌(streptococcussalivarius，s.salivarius)是在健康人群舌背細(xì)菌中數(shù)量最多的細(xì)菌，也是最早定植于口腔黏膜表面的細(xì)菌，s.salivariusk12是唾液鏈球菌的一個(gè)亞種，是tagg等從健康兒童口腔中分離提取到的。近年國外將這種細(xì)菌作為益生菌直接用于口腔治療鏈球菌性咽峽炎及口臭，取得了較滿意療效。研究人員提出s.salivariusk12可以作為口臭治療中一種有效的輔助治療手段，但是，需要長期階段性地?cái)z入含有s.salivariusk12的制劑才能起到抑制口腔產(chǎn)臭菌的作用。此外，唾液乳酸桿菌(lactobacillussalivarius，l.salivarius)屬是目前最為廣泛使用的益生菌發(fā)酵菌種，有研究指出，口服含有l(wèi).salivariuswb21益生菌的制劑，可以明顯改善吸煙者的牙周健康狀況，同時(shí)減少牙周病患者口腔內(nèi)齦上菌斑中的牙周致病菌，如牙齦卟啉單胞菌，中間普氏菌等，對(duì)于牙周健康有一定的益處，其抑菌作用與l.salivarius產(chǎn)生過氧化氫、乳酸等細(xì)菌素抑制致病菌之間相互作用有關(guān)。meurman提出乳桿菌還能刺激免疫細(xì)胞分泌炎癥和抗炎細(xì)胞因子，調(diào)節(jié)粘膜免疫，來抑制口臭。

對(duì)益生菌的應(yīng)用開拓了口腔醫(yī)學(xué)的一個(gè)新領(lǐng)域，但是益生菌在口腔疾病干預(yù)中的作用研究剛開始，我們需要更了解口腔細(xì)菌微生物的種類和分布特征。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

基于上述目的，本發(fā)明首先提供了一種口腔益生菌菌株，所述菌株的保藏號(hào)為cgmccno.12899，保藏日期為2016年8月23日，保藏分類命名為唾液鏈球菌(streptococcussalivarius)，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國科學(xué)院微生物研究所，郵政編碼：100101。

其次，本發(fā)明還提供了一種唾液鏈球菌(streptococcussalivarius)，所述菌株的16srrna的序列如seqidno：1所示。

再次，本發(fā)明提供了上述的菌株在制備去除口臭藥物中的應(yīng)用。

又次，本發(fā)明提供了上述的菌株在制備食品和/或保健品中的應(yīng)用。

最后，本發(fā)明提供了一種含有上述菌株的組合物。

在一個(gè)優(yōu)選的技術(shù)方案中，所述組合物被制備為漱口液制劑霧化劑、膠囊或者含片。

本發(fā)明通過選取250例無口臭的兒童，從唾液取樣，進(jìn)行菌群的分離和鑒定以及分子遺傳學(xué)分析。找出無口臭的兒童的優(yōu)勢菌群，分離國人口內(nèi)能抑制口臭的天然存在的益生菌，體外驗(yàn)證其對(duì)口臭菌具有顯著的抑制作用，能夠彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)在口臭治療上的不足，從而更好地解決口臭患者的需求。這為將來研發(fā)針對(duì)我國口臭患者的有效微生態(tài)制劑，去除口臭，構(gòu)建有益的口腔微生態(tài)環(huán)境，具有廣泛的應(yīng)用前景和價(jià)值。

附圖說明

圖1.優(yōu)勢菌的16srdna的pcr產(chǎn)物電泳圖譜；

圖2.具核梭菌和優(yōu)勢唾液鏈球菌的共聚作用觀察圖；

圖3.優(yōu)勢唾液鏈球菌抑制硫化氫產(chǎn)生的結(jié)果觀察圖；

圖4.具核梭菌單獨(dú)培養(yǎng)液硫化氫和甲硫醇hplc檢測圖；

圖5.優(yōu)勢唾液鏈球菌和具核梭菌共聚后硫化氫和甲硫醇hplc檢測圖

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)將會(huì)隨著描述而更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的，并不對(duì)本發(fā)明的保護(hù)范圍構(gòu)成任何限制。

實(shí)施例1菌株的篩選

實(shí)施目標(biāo)：通過從250例無口臭兒童的唾液中分離口腔優(yōu)勢菌群，進(jìn)行分解含硫化合物的檢測，尋找可抑制口臭的天然細(xì)菌。

實(shí)施方案：

(1)采樣：4-7歲，無口臭，無口腔疾病的正常兒童250例，無家族遺傳疾病，無全身系統(tǒng)疾病，無長期服藥史。在唾液采集前，均向?qū)W校及家長講明實(shí)驗(yàn)?zāi)康募斑^程，并獲得同意。兒童在早餐后2h內(nèi)不能進(jìn)食、喝飲料。用15ml無菌樣品收集管，在不外界刺激唾液分泌的情況下，自然留取唾液約2ml，每個(gè)樣品分三管，分別用于pcr鑒定，細(xì)菌培養(yǎng)及保存。

(2)分離培養(yǎng)：將所有樣品進(jìn)行分離培養(yǎng)，用pbs對(duì)樣品稀釋，均勻的涂布于腦心浸液bhi培養(yǎng)皿，置于37℃，5％co2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。

(3)基質(zhì)輔助激光解析串聯(lián)飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(maldi-tofms)鑒定：

樣品處理方法：將基質(zhì)溶于含有0.1％(v/v)甲酸和0.01moll18-crown-6的1∶1∶1水、甲醇、乙腈溶液(基質(zhì)溶劑)中，革蘭氏陽性菌用cmbt基質(zhì)，革蘭氏陰性菌用chca基質(zhì)。將基質(zhì)溶液于混勻器上震蕩混勻獲得基質(zhì)的飽和溶液。標(biāo)準(zhǔn)肽與chca飽和溶液等比例混合獲得標(biāo)準(zhǔn)肽溶液。挑取細(xì)菌菌苔涂布于96孔樣品板上，每一種細(xì)菌涂12孔，占樣品板的一行。自然晾干1h后，用基質(zhì)溶液覆蓋菌苔，用標(biāo)準(zhǔn)肽溶液覆蓋校準(zhǔn)孔，每孔1μl。晾干5min后進(jìn)樣。

(4)16srna鑒定

1)dna提取

采用qiaampdnaminikit提取細(xì)菌dna，步驟嚴(yán)格按照說明書操作。

2)pcr擴(kuò)增

擴(kuò)增反應(yīng)體系：擴(kuò)增體積(50μl)：premixextaqtm25μl，模板dna10μl，引物各1μl，ddh2013μl。擴(kuò)增條件：94℃10min；(94℃30s，58℃30s，72℃1.5min)×30循環(huán)；72℃10min；4℃保存。

引物序列：

d88:gagagtttgatymtggctcag

e94:gaaggaggtgwtccarccgca；

3)純化pcr產(chǎn)物

取5μlpcr產(chǎn)物用1.5％瓊脂糖凝膠電泳(120v，30min)，凝膠成像儀判定結(jié)果。取40μlpcr產(chǎn)物用qiaquickpcrpurificationkit純化pcr產(chǎn)物。

4)測序及其結(jié)果分析

測序采用abi3730dna測序儀，測序試劑為bigdyeterminatorv3.1(上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司完成測序)。采用dnastarlasergenev7.1進(jìn)行序列拼接，將低質(zhì)量測序序列切除，然后將拼接好的序列直接在ncbi的blast進(jìn)行序列比對(duì)分析，核苷酸序列大于99％的相似度，被視為特異的細(xì)菌種類。

(5)具核梭菌培養(yǎng)

采用國際上通用的產(chǎn)生硫化氫復(fù)合物的口臭標(biāo)準(zhǔn)菌株f.nucleatum，購自美國菌種保藏中心(atcc)，菌號(hào)atcc10953。具核梭菌采用bhi腦心浸液(difcoenrichedwithyeastextract0.5％,haemin5mg/ml,menadione1mg/ml)，在厭氧培養(yǎng)箱(85％n2,10％h2,5％co2)，37℃培養(yǎng)。

(6)細(xì)菌共聚(co-aggregation)實(shí)驗(yàn)

將分離到的優(yōu)勢菌與口臭標(biāo)準(zhǔn)菌株(f.nucleatum)培養(yǎng)，厭氧環(huán)境，37℃，24-72h，bhi培養(yǎng)基。采用hardly的定量分光光度法，通過malvernzetasizernano-zs(malvern,worcestershire,uk)在液相表面檢測布朗運(yùn)動(dòng)的細(xì)菌顆粒大小，檢測細(xì)菌散射光，來檢測共聚細(xì)菌直徑大小。

具體流程如下：4000×g，15m離心細(xì)菌，收集共作用后的細(xì)胞，重懸于共作用的緩沖液(0.001mtris(hydroxymethyl)aminomethane調(diào)ph8.0，cacl21×10^–4m，mgcl21×10^–4m，nan30.02％，和nacl0.15m，ph6-7)，細(xì)菌濃度為109cells/ml，并與等量的具核梭菌混合，輕輕吹打10s，并在37℃，110×g孵育30分鐘。之后，將反應(yīng)物靜置3分鐘，采用分光光度計(jì)spectrophotometer(u2000,hitachi,nissei,japan)檢測，波長660nm。

(7)硫化鐵沉淀法檢測共培養(yǎng)物中，是否有硫化物氣體產(chǎn)生

在上述步驟(6)細(xì)菌共聚實(shí)驗(yàn)后，棄掉共聚緩沖液，每管中加入2ml硫化鐵檢測緩沖液(成分：bhi培養(yǎng)基，0.1％半胱氨酸，0.2％硫酸亞鐵，0.1m嗎啉乙磺酸(2-morpholinoethanesulphonicacid))，將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)入5ml無菌密閉的硅膠蓋的試管中，37℃，培養(yǎng)24h后，觀察試管內(nèi)顏色變化。

(8)氣相色譜儀法檢測硫化物的濃度

在5ml無菌試管中，將分離到的優(yōu)勢菌與口臭標(biāo)準(zhǔn)菌株(f.nucleatum)共培養(yǎng)，72h后，檢測培養(yǎng)液上方的氣體中硫化物的濃度。

1×10^-6(v/v)硫化物標(biāo)準(zhǔn)樣品氣，購自praxair公司(usa)。試驗(yàn)過程中所使用的低濃度硫化物樣品，均由在線稀釋系統(tǒng)配制所得。

氣相色譜儀(agilent7890a-5979c,santa,clara,usa)，色譜條件進(jìn)樣口：硫惰性化處理分流/不分流進(jìn)樣口(sulfinert@)進(jìn)樣模式：不分流，靜態(tài)進(jìn)樣與動(dòng)態(tài)進(jìn)樣樣品環(huán)體積：1ml爐溫：30℃(1.5rain)，15℃/min，200℃(3min)色譜柱：hp-1，60mx0.53mm×5um。

(9)篩選出具有分解硫化氫能力的優(yōu)勢菌，進(jìn)行全基因組測序

經(jīng)過上述實(shí)驗(yàn)，得到一株分解硫化氫能力最強(qiáng)的唾液鏈球菌。對(duì)該菌株進(jìn)行核酸提取和純化，使用wizaid全基因組dna純化試劑盒(promega)，按照操作說明進(jìn)行。

i細(xì)菌基因組dna純化

1)將1ml過夜菌培養(yǎng)物用加樣槍小心加入1.5ml離心管中。

2)選擇13,000～16,000×g離心2分鐘，移棄上清，收集純菌。

3)吸取50mmedta溶液480μl于離心管中，重懸菌液。

4)往重懸的菌液中加入200μl裂解酶溶液(濃度20mg/ml)，并小心地輕輕反復(fù)吸放混勻。此步驟能有效地削弱諾卡菌細(xì)胞壁，并達(dá)到細(xì)菌裂解的目的。

5)于37℃恒溫水浴箱中孵育2小時(shí)。后13,000～16,000×g離心2分鐘，吸棄上清。

6)小心吸取600μl核裂解液于離心管，緩緩吹打直至細(xì)胞重懸。

7)于80℃恒溫水浴箱中孵育10分鐘裂解細(xì)胞，自然冷卻至室溫。注：此步驟為最關(guān)鍵的一步，孵育過程中觀察菌液裂解情況，酌情振蕩混勻。

8)向細(xì)菌裂解混合物中加入3μlrna酶溶液，輕輕顛倒離心管2～5次以混勻。

9)于37℃恒溫水浴箱中孵育30～40分鐘，自然冷卻到室溫。

10)加入蛋白沉淀液200μl于離心管中，使用渦旋振蕩器劇烈振蕩20秒鐘，使溶液與細(xì)胞裂解物充分混勻。

11)將離心管置于冰上5分鐘。

12)13,000～16,000×g離心3分鐘。

13)小心吸取含dna的上清于潔凈的已裝有600μl室溫異丙醇的1.5ml離心管中。為避免dna被蛋白污染，不要吸取得過于徹底，應(yīng)保留少許上清。

14)緩緩顛倒離心管，混勻溶液，至白色線狀物形成小塊狀沉淀，該沉淀為dna沉淀。

15)13,000～16,000×g離心2分鐘，若沉淀較少可適當(dāng)延長離心時(shí)間。

16)將上清棄去，倒置離心管于一干凈的吸水紙上。接著往離心管中加入室溫70％乙醇600μl，輕柔地將顛倒離心管數(shù)次，以清洗dna沉淀。

17)13,000～16,000×g離心2分鐘，小心吸走乙醇溶液(若沉淀較少可延長離心時(shí)間)。

18)將離心管倒置于潔凈的吸水紙上，自然干燥15分鐘左右。

19)向離心管中加入100μldna水合溶液，在65℃水浴鍋中孵育1小時(shí)以溶解dna沉淀，期間可輕彈管壁混勻溶液。在4℃冰箱孵育過夜。

iidna溶液檢測

1)利用美國nd1000型紫外分光光度計(jì)，檢測提取的dna溶液進(jìn)行濃度及純度，分別測定在230nm，260nm，280nm處的紫外光吸收值。軟件自動(dòng)計(jì)算dna溶液濃度，根據(jù)260/280和260/230的值評(píng)價(jià)dna樣本的純度。

2)取5μldna溶液和1μlloadingbuffer混勻，于150v的電壓條件下在1％瓊脂糖凝膠電泳30min，在讀膠儀中觀察條帶位置。驗(yàn)證所提取基因組dna的完整性。

優(yōu)勢唾液鏈球菌的技術(shù)效果：

(1)樣品中細(xì)菌的分離，找出優(yōu)勢的唾液鏈球菌

經(jīng)過maldi-tofms鑒定，發(fā)現(xiàn)健康兒童唾液樣品中的主要細(xì)菌有三種，包含：唾液鏈球菌(24.5％)，粘液羅氏菌(15.5％)和韋榮氏菌(11.0％)。此外，淺黃奈瑟菌和深黃奈瑟菌的比例均在10％以下。因此，可知，唾液鏈球菌在口腔健康兒童中是優(yōu)勢菌。

此外，通過16srdna測序法，提取優(yōu)勢菌的核酸，進(jìn)行pcr擴(kuò)增，測序，結(jié)果在genebank中比對(duì)，結(jié)果顯示16srdna的序列與唾液鏈球菌的吻合度達(dá)99％。進(jìn)一步證實(shí)了口腔健康兒童的優(yōu)勢菌為唾液鏈球菌(圖1)。圖1中，m：2000bk的dnamarker；泳道1-6為優(yōu)勢菌的16srdna擴(kuò)增產(chǎn)物；泳道7為陰性對(duì)照。

(2)優(yōu)勢菌唾液鏈球菌和具核梭菌的共聚作用，及優(yōu)勢唾液鏈球菌分解硫化氫的能力檢測。

i.共聚作用

在細(xì)菌共聚作用緩沖液的作用下，加入具核梭菌和優(yōu)勢唾液鏈球菌的試管出現(xiàn)了絮狀沉淀，表示具核梭菌和優(yōu)勢唾液鏈球菌發(fā)生了相互作用。而單獨(dú)的具核梭菌加入共聚作用緩沖液，沒有出現(xiàn)絮狀沉淀(圖2)。圖2中，a為具核梭菌和優(yōu)勢唾液鏈球菌，發(fā)生了共聚現(xiàn)象；b為具核梭菌，沒有出現(xiàn)共聚。

ii.硫化亞鐵沉淀檢測

通過與產(chǎn)生硫化氫的國際標(biāo)準(zhǔn)菌株具核梭菌相互作用，加入硫化亞鐵沉淀檢測試劑，反應(yīng)24-72h，可以觀察到只有具核梭菌的試管液體呈黑色的，表示有黑色硫化亞鐵產(chǎn)生，即試管中的具核梭菌產(chǎn)生了硫化氫。而同時(shí)加入具核梭菌和優(yōu)勢唾液鏈球菌的試管中培養(yǎng)液顏色沒有變?yōu)楹谏?，即試管中沒有明顯硫化氫，此外，空白對(duì)照的bhi細(xì)菌培養(yǎng)基的顏色正常。結(jié)果提示，單獨(dú)的具核梭菌產(chǎn)生了硫化氫，而加入了優(yōu)勢的唾液鏈球菌和具核梭菌共同聚合作用后，沒有產(chǎn)生明顯的硫化氫(圖3)。圖3中，1只有具核梭菌的培養(yǎng)液，培養(yǎng)液呈現(xiàn)了黑色；2、3、4具核梭菌和優(yōu)勢唾液鏈球菌的共聚合作用后，培養(yǎng)液沒有呈現(xiàn)黑色；5單獨(dú)的細(xì)菌培養(yǎng)液bhi，培養(yǎng)液沒有呈現(xiàn)黑色。

iii具核梭菌和優(yōu)勢唾液鏈球菌培養(yǎng)液上方氣體中硫化氫濃度檢測

采用氣相色譜法，將具核梭菌和優(yōu)勢唾液鏈球菌共同培養(yǎng)后的上方氣體進(jìn)行硫化氫和甲硫醇的含硫氣體濃度檢測。結(jié)果顯示，單獨(dú)的具核梭菌培養(yǎng)液上方氣體有較高濃度的硫化氫和甲硫醇(圖4)，而具核梭菌和優(yōu)勢唾液鏈球菌的共同培養(yǎng)物上方氣體中，硫化氫和甲硫醇的含量明顯降低(圖5)。這些結(jié)果提示，優(yōu)勢的唾液鏈球菌具有分解具核梭菌產(chǎn)生的硫化氫和甲硫醇的能力。

(3)優(yōu)勢唾液鏈球菌的命名、保藏和全基因組測序

將得到的分解硫化氫和甲硫醇能力最強(qiáng)的唾液鏈球菌株，命名為icdc1，并進(jìn)行保藏，所述菌株的保藏號(hào)為cgmccno.12899，保藏日期為2016年8月23日，保藏分類命名為唾液鏈球菌(streptococcussalivarius)，保藏單位為中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國科學(xué)院微生物研究所，郵政編碼：1001019。將該菌的全基因組dna提取，并送北京諾禾致源科技股份有限公司測序，采用三代測序pacbiorisii平臺(tái)技術(shù)。其16srrna的序列如seqidno：1所示

實(shí)施例2.菌株防治口臭的使用和效果

優(yōu)勢唾液鏈球菌對(duì)口臭標(biāo)準(zhǔn)菌株產(chǎn)生揮發(fā)性硫化物的分解能力檢測：

通過對(duì)具核梭菌和優(yōu)勢唾液鏈球菌共同培養(yǎng)液上方氣體中硫化氫和甲硫醇濃度的檢測。采用氣相色譜法，將具核梭菌和優(yōu)勢唾液鏈球菌共同培養(yǎng)后的上方氣體進(jìn)行硫化氫和甲硫醇的含硫氣體濃度檢測。結(jié)果顯示，單獨(dú)的具核梭菌培養(yǎng)液上方氣體有較高濃度的硫化氫和甲硫醇(圖4)，而具核梭菌和優(yōu)勢唾液鏈球菌的共同培養(yǎng)物上方氣體中，硫化氫的濃度降低了64.6％，甲硫醇的濃度降低了71.9％％(圖5)。

表1為具體檢測數(shù)值

表1.含硫氣體濃度的hplc檢測

這些結(jié)果提示，優(yōu)勢的唾液鏈球菌具有明顯的分解具核梭菌產(chǎn)生的硫化氫和甲硫醇的能力。

實(shí)施例3優(yōu)勢唾液鏈球菌的菌粉及含菌粉制劑的制備

將優(yōu)勢唾液鏈球菌接種于腦心浸液bhi的液體培養(yǎng)基，置于37℃，5％co2培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)12小時(shí)，收集細(xì)菌，離心、洗滌。采用10％的脫脂乳，1.5％的谷氨酸鈉，3％的甘油配置成為凍干劑，將優(yōu)勢唾液鏈球菌進(jìn)行真空凍干成為菌粉保存。

可以按照本領(lǐng)域的常規(guī)操作規(guī)程將優(yōu)勢唾液鏈球菌的菌粉配置成漱口液、霧化劑、膠囊或者含片等，這些制劑的配方中可以包括作為有效成分的菌粉、添加劑和用于此制劑形式的適宜的載體。例如在配制漱口液時(shí)，可以添加需要的木糖醇、甘油、香味劑、緩沖液、表面活性劑、著色劑等。制劑技術(shù)不是本發(fā)明的重點(diǎn)，可使用本領(lǐng)域常規(guī)技術(shù)，只要能保證優(yōu)勢唾液鏈球菌在制劑釋放后具有分解具核梭菌產(chǎn)生的硫化氫和甲硫醇的能力即可。

序列表

<110>中國疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所

<120>唾液鏈球菌cgmccno.12899及在制備去除口臭藥物中的應(yīng)用

<160>1

<170>patentinversion3.3

<210>1

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