本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種腫瘤藥敏試驗方法。
背景技術(shù)：
腫瘤治療過程中，腫瘤會出現(xiàn)新的突變，最初能起到作用的藥物有可能慢慢失去藥效。因此，針對癌癥患者的資料方案需要不斷地調(diào)整。研究人員一直試圖通過腫瘤細(xì)胞體外化療藥敏感性檢測指導(dǎo)化療藥物的選擇。然而目前已有的各種腫瘤原代細(xì)胞體外藥敏試驗，與體內(nèi)藥效可能差異巨大，不宜進(jìn)入廣泛的臨床應(yīng)用。如果在腫瘤治療過程中，能夠?qū)崿F(xiàn)獲取更接近體內(nèi)腫瘤特性的體外培養(yǎng)體系，將為化療方案的設(shè)計提供更多的臨床依據(jù)。
腫瘤藥敏試驗已發(fā)展為體內(nèi)和體外多種常用方法。由于以上方法均須分離細(xì)胞，破壞了組織結(jié)構(gòu)的完整性，影響了腫瘤細(xì)胞之間的相互聯(lián)系，導(dǎo)致結(jié)果欠可靠。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的主要是提供一種腫瘤藥敏試驗方法。
本發(fā)明通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)：
一種腫瘤藥敏試驗方法，是將腫瘤組織以組織塊的形式進(jìn)行三維培養(yǎng)，然后加入化療藥物，計算組織塊對化療藥物的敏感性。
進(jìn)一步地，在加入化療藥物之前和加入化療藥物之后，分別采用無標(biāo)記動態(tài)細(xì)胞分析技術(shù)測定組織塊中癌細(xì)胞的數(shù)量及形狀變化。值得說明的是，無標(biāo)記動態(tài)細(xì)胞分析技術(shù)是通過微晶電極阻抗值的改變進(jìn)行癌細(xì)胞數(shù)量和形狀變化。
再進(jìn)一步地，對組織塊進(jìn)行培養(yǎng)的條件如下：O2含量在0.1～20%，C O2含量在0.1%～20%，壓力在0～5psi，溫度在25～45℃，濕度在0～85%。
更進(jìn)一步地，在進(jìn)行三維培養(yǎng)之前，培養(yǎng)標(biāo)本采用含有雙抗的無血清RPMI-1640培養(yǎng)液或者DMEM培養(yǎng)基進(jìn)行清洗，洗去組織表面的血液，并剔除血管和壞死成分。
另外，采用含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液或者DMEM培養(yǎng)基對組織進(jìn)行三維培養(yǎng)。
此外，組織塊的大小為1mm3。
本發(fā)明具有以下優(yōu)點及有益效果：
本發(fā)明可以使檢測方法標(biāo)準(zhǔn)化、商品化、極大地簡化操作程序，提高了檢測的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性，減少化療中的盲目性，指導(dǎo)臨床科學(xué)合理地用藥，提高化療的有效率。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的說明，但本發(fā)明的實施方式并不限于此。
實施例
一種腫瘤藥敏試驗方法，選擇壞死較少的部分腫瘤組織（標(biāo)本），放入培養(yǎng)液中并在4h內(nèi)在超凈工作臺進(jìn)行實驗操作。具體地，準(zhǔn)備滅菌的微孔培養(yǎng)板，每孔放入適量含10%小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液或者DMEM培養(yǎng)基。將選擇的標(biāo)本用含有雙抗的無血清RPMI-1640培養(yǎng)液或者DMEM進(jìn)行清洗三次，洗去組織表面的血液，并剔除血管和壞死成分，然后將標(biāo)本切割成1mm3大小的組織塊，最后將切割好的組織塊放入上述的多孔培養(yǎng)板中，每孔放1塊，培養(yǎng)板放入生理環(huán)境模擬培養(yǎng)系統(tǒng)培養(yǎng)箱中孵育，培養(yǎng)時的條件如下：O2含量在0.1～20%，C O2含量在0.1%～20%，壓力在0～5psi，溫度在25～45℃，濕度在0～85%。
第2天，取出微孔培養(yǎng)板，分別采用無標(biāo)記動態(tài)細(xì)胞分析技術(shù)測定組織塊中癌細(xì)胞的數(shù)量及形狀變化，然后向部分孔中加入化療藥物3μL作為實驗組，未加入化療藥物的作為對照組，每一個組織塊均選擇多種單藥及組合用藥?；熕幬锱c培養(yǎng)液充分混勻后，放入生理環(huán)境模擬培養(yǎng)系統(tǒng)培養(yǎng)箱中孵育72小時。
第5天，取出微孔培養(yǎng)板，分別采用無標(biāo)記動態(tài)細(xì)胞分析技術(shù)測定組織塊中癌細(xì)胞的數(shù)量及形狀變化，通過前后兩次測定的癌細(xì)胞數(shù)量及形狀變化來判定化療藥物敏感性。
值得說明的是，本發(fā)明的方法是保持了細(xì)胞間接觸，維持了組織心態(tài)和功能，更加接近機體實體瘤內(nèi)環(huán)境，臨床效果相關(guān)性好，非常適用于臨床應(yīng)用。同時本發(fā)明減少了操作步驟、提高了實驗的準(zhǔn)確性，降低了實驗成本并節(jié)約了試驗時間。
按照上述實施例，便可很好地實現(xiàn)本發(fā)明。值得說明的是，基于上述設(shè)計的前提下，為解決同樣的技術(shù)問題，即使在本發(fā)明上做出的一些無實質(zhì)性的改動或潤色，所采用的技術(shù)方案的實質(zhì)仍然與本發(fā)明一樣，故其也應(yīng)當(dāng)在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。